酶活测定

摘要： 利用农业剩余物栽培食用菌已经成为食用菌产业发展的必然趋势。运用单纯型格子法,优化出可替代木屑和棉籽壳进行秀珍菇菌丝培养的“农业剩余物”配方。利用小麦秸秆、玉米秸秆和大豆秸秆三种农业剩余物做主料培养秀珍菇菌丝,测定菌丝生长速率和各种酶活数据,运用SPSS和Design-Expert软件分析各主料交互作用对秀珍菇菌丝生长的影响,并最终优化出一个适合秀珍菇菌丝生长的农业剩余物配方。研究结果表明,在农业剩余物配方中,秀珍菇在小麦秸秆基质的菌丝生长速率最大,纤维素酶活性最高;在小麦秸秆和玉米秸秆各50%做主料的基质中,漆酶和多酚氧化酶活性最高;小麦秸秆最适合秀珍菇菌丝生长,其次是玉米秸秆和大豆秸秆。配方优化得到一个适合秀珍菇菌丝生长的农业剩余物配方:小麦秸秆61.4%,玉米秸秆17.6%,麦麸20.0%,石灰1.0%。小麦秸秆和玉米秸秆可以替代木屑和棉籽壳进行秀珍菇菌丝的培养,为秀珍菇进行“木腐菌草腐化”设施化生产提供理论依据。

摘要： 从林下腐熟土壤中筛选可降解纤维素的天然微生物,经过初筛、复筛得到降解能力较强的菌株DT13,革兰氏染色和分子生物学鉴定结果显示该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis DT13)。以羧甲基纤维素酶活性(Carboxymethyl Cellulase Activity,CMCA)为指标,设计单因素试验与正交试验对菌株DT13产纤维素酶条件进行优化,确定其最佳产酶条件为初始pH值7.0、发酵温度40°C、发酵时间96 h。

摘要： 【目的】明确草地贪夜蛾幼虫肠道细菌的种类和功能,以诠释肠道细菌对草地贪夜蛾寄主植物适应性的影响,为揭示草地贪夜蛾的寄主适应机制及进一步预测其寄主谱扩张趋势提供依据。【方法】采用传统的微生物分离纯化方法对草地贪夜蛾肠道细菌进行分离纯化,对分离获得的细菌菌株进行16S rRNA序列同源性分析鉴定;利用筛选培养基对产生纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶及对苯酚有代谢能力的菌株进行初筛,并进一步用DNS法测定相关菌株产纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶的酶活性,用含苯酚的无机盐培养基培养菌株,检测菌株的苯酚降解效率。【结果】共分离获得45株细菌菌株,经同源序列比对分析,45株细菌菌株分属于3门5属8种,分别是厚壁菌门(Firmicutes)的葡萄球菌属(Staphylococcus)和芽孢杆菌属(Bacillus),变形菌门(Proteobacteria)的克雷伯氏菌属(Klebsiella)和不动杆菌属(Acinetobacter),放线菌门(Acinobacteria)的短杆菌属(Curtobacterium),其中克雷伯氏菌属的丰度最高。45株菌株中有产纤维素酶菌株11株,酶活力最高的是变栖克雷伯氏菌菌株K3,为0.105±0.007 U/mL;产木聚糖酶菌株10株,酶活力最高的是枯草芽孢杆菌菌株B9,为1.090±0.468 U/mL;产果胶酶菌株5株,酶活力最高的是变栖克雷伯氏菌菌株K27,为0.193±0.047 U/mL;降解苯酚的菌株9株,降解速率最高的是沙福芽孢杆菌菌株B8,为(0.347±0.042)%。【结论】草地贪夜蛾幼虫肠道细菌的产酶菌株多样性较高,推测这是导致草地贪夜蛾寄主谱广,对寄主为害严重的原因之一。

摘要： 收集吉林省人参主产区锈腐病病样,对其进行病原菌的分离鉴定,确定优势病原菌。采用菌丝生长速率法、孢子萌发法、菌丝干质量测量法3种方法相结合,测定Rg1不同质量浓度条件下对人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)的致病力影响。通过测定施加不同质量浓度Rg1后人参粗壮柱孢菌(I.robusta)侵染相关酶活力测定试验确定最佳Rg1添加量。开展了Rg1最适质量浓度条件下,pH值以及碳氮源对人参锈腐病菌菌丝生长的影响。研究结果表明,当Rg1质量浓度为2 mg/L时对粗壮柱孢菌的生长具有较强的促进作用。在此条件下,病原菌最适生长pH值为5.0,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为硝酸钾。明确了Rg1对人参锈腐病菌(I.robusta)具有明显的趋化性。

摘要： 为规范强化大曲的生产,适应西凤酒扩能及数字化生产需求,通过对强化霉菌的优筛、复壮及性能测试,获得优良的强化菌种,继而优化强化菌种的配比方案,使大曲性能更优.结果表明:(1)通过糖化力培养基筛选及菌株酶活测定,共筛选出6株强化霉菌,分别是黑曲霉M004-2、黑曲霉C556-22、酯化红曲霉-16、红曲霉C462-11、根霉S和根霉5,对其进行重新保藏;(2)对筛选出的菌株进行不同比例混合固态发酵试验,通过不同理化指标进行比较分析,得出红曲霉:黑曲霉:根霉=3:1:2的配比组合为最优组合.

摘要： 应用酶反应动力学原理对海藻酸钠裂解酶酶活测定反应体系和反应条件进行系统研究,以改进海藻酸钠裂解酶的测定方法.本实验采用紫外吸收法测定酶活,改良后的酶活测定方法为:300 μL底物溶液(海藻酸钠2.2％,KCl 5 mmol/L,0.1 mol/L Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液,pH7.0)加入50 μL 稀释至2.4～30 U/mL 的酶液,于37°C水浴静置反应20 min后用冰浴终止反应,反应液稀释20倍后在235 nm处测定吸光度.每份底物溶液均需用新枪头移取以提高精密度,使移液误差小于2％.本酶活测定方法的相对标准偏差小于5％.

摘要： 利用常压室温等离子体诱变真姬菇(Hypsizygus marmoreus)原生质体,以期获得产量较高的菌株.单因素筛选试验得到原生质体的最佳酶解条件为,酶解温度32°C、酶解时间3.5 h、渗稳剂为0.6 mol·L-1甘露醇、溶壁酶浓度为20 mg·mL-1.ARTP诱变结果表明,真姬菇原生质体最佳诱变时间为100 s,诱变共获得288株双核菌株.通过平板筛选试验获得产纤维素酶能力强的菌株7株,产漆酶能力强的菌株4株,其中诱变菌株M-50的产纤维素酶及漆酶的能力均较优;研究进一步通过LBL脱色试验筛选得到预期结实性较好的菌株3个,分别为M-212、M-96、M-50.通过测定真姬菇栽培过程后熟期58 d栽培料中的酶活力大小,进一步验证了平板筛选结果.诱变菌株M-212、M-50表现出较强的产漆酶、纤维素酶及木聚糖酶能力,菌株M-96产漆酶和木聚糖酶的能力较强,产纤维素酶的能力较弱.

摘要： 以10个蛹虫草品种为试材,进行虫草生齿梗孢菌和蛹虫草菌拮抗作用的测定,并对2种菌丝接触位置菌丝进行显微镜观察,同时测定接种虫草生齿梗孢前后的不同蛹虫草品种抗病相关酶几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性,以期为蛹虫草白毛病抗病育种提供参考依据.结果 表明:野生蛹虫草品种01(4)-4F1、D01-1对白毛病具有较好抗性.

摘要： [目的]研究了光叶铁仔(Myrsine stolonifera(Koidz.)E.Walker)提取物对家蝇(Musca domestica L.)成虫杀虫活性、酶活性,以及亚致死剂量对其幼虫生长发育和繁殖的影响.[方法]采用胃毒法.[结果]光叶铁仔乙醇提取物对家蝇成虫在48 h和72 h的毒力LC50值分别为7.52 mg/g和0.77 mg/g,而甲醇提取物LC50值分别为2.02 mg/g、0.39 mg/g;两种提取物对家蝇成虫谷胱甘肽S-转移酶有显著的抑制作用;甲醇提取物对家蝇幼虫体重抑制率为96.06％,化蛹率和羽化率分别为38.43％和74.33％,幼虫期和蛹期明显增长,且与其余两个处理差异显著.[结论]光叶铁仔甲醇提取物对家蝇表现出较好的杀虫活性,其杀虫活性成分值得进一步研究.

摘要： 脂肪细胞分化除甘油三酷大量沉积外还伴随着线粒体的大量增殖及氧化呼吸功能的增强，但这一现象在前体脂肪细胞分化过程中的意义尚不明确，线粒体发育规律还不明晰。PGC-1p是转录辅助活化因子PGC-1家族中的成员。PGC-1日在抵抗高脂日粮诱导的肥胖，肝脏脂肪合成以及肌肉细胞、肝细胞和棕色脂肪细胞线粒体生物合成等方面发挥着重要作用。研究表明，无论在白色还是棕色脂肪细胞分化过程中，PGC-1p表达均明显升高，这提示PGC-Ip与线粒体发育及脂肪细胞的分化之间存在着潜在的联系。但PGC-1p在白色脂肪细胞线粒体发育及脂肪细胞分化中的作用及其机理的研究尚未见报道。本文分离培养18日龄SD雄性大鼠前体脂肪细胞，采用荧光免疫组化、流式细胞术、酶活测定、SQ RT-PCR,电镜及HPLC技术等方法研究了细胞分化过程中线粒体的发育规律及PGC-1家族和线粒体氧化呼吸相关基因的时序表达变化;采用油红O染色及提取法、Western blotting, SQ RT-PCR,超表达、化学合成、脂质体转染等技术检测了超表达和沉默PGC-1p基因后对前体脂肪细胞线粒体发育相关基因及ATP生成、分化转录因子和关键基因及甘油三酯合成的影响。

摘要： 非淀粉多糖是饲料中的主要抗营养因子之一,不能被单胃动物自身分泌的内源酶降解,同时增加肠道内食糜的黏度,降低饲料养分的消化利用率。非淀粉多糖酶对于改善饲料品质、消除抗营养因子的影响及提高动物生产性能都有重要意义。本文就非淀粉多糖的多样性,非淀粉多糖酶的种类、来源及酶活测定方法等进行了综述,并介绍了影响非淀粉多糖酶应用的因素及其在畜禽业中的应用进展。

摘要： 本文根据黑曲霉phyA基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从黑曲霉总RNA中反转录后扩增得到phyA基因,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYDl-phyA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％(w/v)的半乳糖诱导36h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于黑曲霉的植酸酶phyA展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析.

摘要： 本文根据黑曲霉phyA基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从黑曲霉总RNA中反转录后扩增得到phyA基因,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYDl-phyA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％(w/v)的半乳糖诱导36h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于黑曲霉的植酸酶phyA展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析.

摘要： 本文根据黑曲霉phyA基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从黑曲霉总RNA中反转录后扩增得到phyA基因,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYDl-phyA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％(w/v)的半乳糖诱导36h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于黑曲霉的植酸酶phyA展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析.

摘要： 本文根据黑曲霉phyA基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从黑曲霉总RNA中反转录后扩增得到phyA基因,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYDl-phyA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％(w/v)的半乳糖诱导36h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于黑曲霉的植酸酶phyA展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析.

摘要： 本文根据黑曲霉phyA基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从黑曲霉总RNA中反转录后扩增得到phyA基因,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYDl-phyA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％(w/v)的半乳糖诱导36h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于黑曲霉的植酸酶phyA展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析.

摘要： 本文根据黑曲霉phyA基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从黑曲霉总RNA中反转录后扩增得到phyA基因,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYDl-phyA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％(w/v)的半乳糖诱导36h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于黑曲霉的植酸酶phyA展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析.

摘要： [目的]克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx,并在大肠杆菌和哺乳动物细胞中进行表达分析。[方法]通过RT-PCR的方法,从福寿螺胃组织total RNA中克隆福寿螺多功能纤维素酶egx基因序列,连接到克隆载体Pmd18-T,再通过EcoRⅠ和NotⅠ两个酶切位点分别与表达载体Pet-32a,(+)及pcDNA3.1(+)连接,构建原核、真核表达载体,并在Ecoli BL-21(DE3)和猪肾细胞PK15中进行表达,最后采用DNS法测定表达产物酶学活性。[结果]测序结果表明,RT-PCR扩增得到1326 bp的序列,包括1185 bp的编码序列和部分侧翼序列,编码序列与已报道的福寿螺多功能纤维素酶基因Cdna序列相似性为99%,氨基酸序列相似性为100%。原核细胞表达产物经包涵体复性后,对羧甲基纤维素钠、2-羟乙基纤维素、羟乙基纤维素、微晶纤维素、木聚糖的水解活性分别为:24.78U/mg、15.67U/mg、18.42U/mg、600.91U/mg、175.43U/mg;而在PK15细胞中重组酶对以上五种底物的活性分别为:0.84U/Ml、0.78U/Ml、1.01U/Ml、14.62U/Ml、4.23U/Ml。[结论]克隆了福寿螺多功能纤维素酶基因,并成功在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达,为福寿螺多功能纤维素酶的深入研究及广泛应用奠定了基础。

摘要： [目的]克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx,并在大肠杆菌和哺乳动物细胞中进行表达分析。[方法]通过RT-PCR的方法,从福寿螺胃组织total RNA中克隆福寿螺多功能纤维素酶egx基因序列,连接到克隆载体Pmd18-T,再通过EcoRⅠ和NotⅠ两个酶切位点分别与表达载体Pet-32a,(+)及pcDNA3.1(+)连接,构建原核、真核表达载体,并在Ecoli BL-21(DE3)和猪肾细胞PK15中进行表达,最后采用DNS法测定表达产物酶学活性。[结果]测序结果表明,RT-PCR扩增得到1326 bp的序列,包括1185 bp的编码序列和部分侧翼序列,编码序列与已报道的福寿螺多功能纤维素酶基因Cdna序列相似性为99%,氨基酸序列相似性为100%。原核细胞表达产物经包涵体复性后,对羧甲基纤维素钠、2-羟乙基纤维素、羟乙基纤维素、微晶纤维素、木聚糖的水解活性分别为:24.78U/mg、15.67U/mg、18.42U/mg、600.91U/mg、175.43U/mg;而在PK15细胞中重组酶对以上五种底物的活性分别为:0.84U/Ml、0.78U/Ml、1.01U/Ml、14.62U/Ml、4.23U/Ml。[结论]克隆了福寿螺多功能纤维素酶基因,并成功在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达,为福寿螺多功能纤维素酶的深入研究及广泛应用奠定了基础。

摘要： 本发明属于土壤学和环境科学领域，具体涉及一种测定土壤中漆酶酶活的方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)土壤的预处理；(2)反胶束体系的制备；(3)求解ABTS自由基浓度和吸光度关系的线性方程；(4)ABTS比色法测定漆酶酶活。本发明采用反胶束提取土壤中的漆酶，反胶束适合生物大分子的提纯，且当漆酶与反胶束接触时漆酶会进入反胶束的“水池”内，能够有效的保证提取过程中漆酶的活性，本发明用醋酸‑醋酸钠缓冲液反萃取反胶束中的漆酶，缓冲溶液能够使漆酶保持在一个相对稳定的环境中且使漆酶的酶活达到最适宜的程度，此外本发明使用的漆酶酶活检测技术简便快速且使用的反胶束溶液能够重复使用，适合批量检测。

摘要： 本发明提供活化部分凝血活酶时间测定方法。此方法包括：将被检血浆和含活化剂及25μg/mL以上的磷脂酰甘油的第1试剂混合的第1混合步骤,将第1混合步骤中得到的样品和含钙盐的第2试剂混合的第2混合步骤，和测定第2混合步骤中得到的样品的凝固时间的步骤。

摘要： 本发明提供一种快速测定脯氨酸消旋酶酶活的方法，包括以下步骤：步骤一：利用脯氨酸消旋酶对L‑脯氨酸进行消旋反应；步骤二：将消旋反应产物与显色剂混合，在水浴锅中反应一定时间，吸取反应液来测定脯氨酸消旋酶酶活。本发明提供的方法操作简便，能有效减少反应时间，通过颜色变化直接观察酶的催化活性，使用简单的仪器测定吸光值后就可计算酶活，操作简便快捷。

摘要： 本发明公开了一种抗右旋糖酐单克隆抗体D24及其在测定糖产品中右旋糖酐酶酶活中的应用，属于制糖技术领域。本发明所述的抗右旋糖酐单克隆抗体D24，由保藏编号为：CGMCC No.21002的葡聚糖杂交瘤细胞株D24产生。该抗右旋糖酐单克隆抗体D24能够用于测定糖产品中右旋糖酐酶酶活。本发明提供了一种测定糖产品中右旋糖酐酶酶活的方法，该方法操作简单，检出限低。

摘要： 本发明公开了一种饲料用葡萄糖氧化酶复配酶体系及其酶活测定方法及用途，属于酶制剂检测和应用领域。本发明提供的复配酶由葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶按照酶活配比(5.0‑11.0)：1组成。本发明通过上述两种酶的特殊配比，并配合葡萄糖氧化酶酶活测定方法中延长预热时间、改变反应温度、采用双指标判定反应终点，显著增加了葡萄糖氧化酶酶活检测方法的准确度和可重复性。同时本发明将葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶应用于饲料中，可有效去除反应过程中生成的过氧化氢，从而提高葡萄糖氧化酶活力，进而保障反应的连续顺利进行，显著提高了干物质消化率。本发明的酶活配比在葡萄糖氧化酶酶活测定和饲料应用领域中具有广泛的应用前景和较高的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种M‑MLV逆转录酶的酶活测定组合物及测定方法，我们采用荧光定量的方法进行M‑MLV逆转录酶活测定，在37‑42°C条件下等温延伸反应。SYBR染料结合cDNA双链发出荧光，Oligreen染料与单链结合发出荧光，本发明设计了测定酶活的反应体系，利用荧光染料结合DNA发出荧光的原理，设计了M‑MLV逆转录酶的酶活测定方法，相比于传统测定方法，耗时短、操作简单、重复性好。

摘要： 本发明公开了一种UDG酶的酶活测定组合物及测定方法，该测定组合物包括含U碱基的UDGA荧光探针和UDG酶测活缓冲液，利用现有的已精确标定酶活的商品化的UDG酶和含U碱基的荧光探针系统反应，用荧光定量PCR仪设定条件进行反应后，以荧光量和UDGA探针不同浓度得到标准曲线，求出K值，然后获得待测酶合适的稀释倍数以便荧光量可以落在标准曲线范围内，然后用待测酶的荧光量除以K值，在根据倍数换算得到的酶活。本发明变异系数在11.03％以内，实验偏差为在0.74％以内。所以我们认为UDG酶测活方法可行，从而将极大的克服现在行业内普遍存在的UDG酶活测定灵敏度偏低，损耗时间长，操作繁琐等缺点。

摘要： 本发明公开了一种饲料用葡萄糖氧化酶复配酶体系及其酶活测定方法及用途，属于酶制剂检测和应用领域。本发明提供的复配酶由葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶按照酶活配比(5.0‑11.0)：1组成。本发明通过上述两种酶的特殊配比，并配合葡萄糖氧化酶酶活测定方法中延长预热时间、改变反应温度、采用双指标判定反应终点，显著增加了葡萄糖氧化酶酶活检测方法的准确度和可重复性。同时本发明将葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶应用于饲料中，可有效去除反应过程中生成的过氧化氢，从而提高葡萄糖氧化酶活力，进而保障反应的连续顺利进行，显著提高了干物质消化率。本发明的酶活配比在葡萄糖氧化酶酶活测定和饲料应用领域中具有广泛的应用前景和较高的应用价值。

摘要： 本发明提供了一种DNA连接酶的酶活测定方法，包括：(1)提供RNA单链及与之互补的受体DNA单链和供体DNA单链；(2)退火获得DNA/RNA杂合双链，受体DNA单链的3’端羟基与供体DNA单链的5’端磷酸基团相邻但存在缺刻，该杂合双链的荧光基团产生荧光；(3)以待测DNA连接酶处理DNA/RNA杂合双链，获得缺刻处连接的完整DNA/RNA杂合双链，该杂合双链的荧光基团保持荧光；(4)对完整DNA/RNA杂合双链直接或加热变性后以核糖核酸酶消化，留下DNA连接产物，根据其荧光强度进行定量，确定待测DNA连接酶酶活。本发明的方法定量准确，操作过程简便、快速，不涉及放射性物质的运用。同时，本发明也优化设计了适用于酶活测定、灵敏度高的具体检测序列。

摘要： 本发明公开了一种快速稳定的Tn5转座酶酶活测定方法，包括以下步骤：（1）测活底物同转座酶和反应缓冲液混合（2）进行转座反应（3）加入变性剂（如SDS、盐酸胍等）使转座酶变性，分离转座酶和DNA片段（4）加入够识别底物标记的介质，结合未反应的底物（5）通过选择性手段（如离心、过滤、浓缩等）去除结合了底物的介质（6）检测释放出的带标记的DNA的含量，同标准数值比较，得到Tn5转座酶的活性。该测活方法操作简便、快速，结果重复性好，十分适合于大批量生产中Tn5转座酶的酶活检测。