前体脂肪细胞

摘要： 旨在建立牦牛皮下和肌内前体脂肪细胞的体外研究模型,并检测两部位前体脂肪细胞分化过程中关键基因表达量差异,为研究牦牛不同部位脂肪沉积的分子机制提供试验材料和理论依据。本研究通过采取5头18~22月龄健康麦洼公牦牛的皮下脂肪组织和背最长肌组织,利用胶原酶消化,分离皮下和肌内前体脂肪细胞,随后根据细胞来源将细胞分为肌内组和皮下组,对其进行免疫荧光鉴定、生长曲线绘制、脂肪细胞油红O鉴定以及使用实时荧光定量技术检测分化关键基因PPARγ、C/EBPα、FASN、HSL的表达。结果表明,牦牛皮下和肌内前体脂肪细胞分离培养1 d时大部分为圆形,随培养时间增加,形态变为梭形;CCK-8结果显示生长曲线为正常的S型,并且皮下前体脂肪细胞在第4天生长速度显著高于肌内前体脂肪细胞;免疫荧光结果表明,PREF-1表达为阳性,表明分离的细胞确为前体脂肪细胞;分化后形成含有圆形大脂滴的成熟脂肪细胞,脂滴经油红O染色呈红色,且检测关键基因均有表达;PPARγ、FASN、HSL表达量在皮下和肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达量随分化时间的增加而显著增加(P<0.05),肌内与皮下前体脂肪细胞中C/EBPα表达量在分化前期逐渐增加(P<0.05),在分化后期表达量出现下降,肌内前体脂肪细胞FASN和HSL表达量在第3天显著增加,而皮下前体脂肪细胞在第6天才显著增加。综上所述,本试验成功分离了牦牛皮下和肌内前体脂肪细胞,并成功诱导分化至成熟脂肪细胞,发现成脂分化关键基因PPARγ、HSL、FASN表达量在9 d分化期内均呈现上升趋势,C/EBPα表达量在分化第6天之后显著下降,为进一步研究牦牛皮下和肌内脂肪沉积的分子规律提供了参考。

摘要： 本研究旨在探究m^(6)A RNA甲基化酶METTL3和WTAP在牦牛(Bos grunniens)不同组织、前体脂肪细胞增殖与分化过程中的表达模式和前体脂肪细胞分化过程mRNA m^(6)A的变化水平。采用qRT-PCR检测牦牛皮下脂肪、肌肉、心、肝、脾、肺、肾和皮下脂肪不同时期(18和30月龄)METTL3及WTAP的mRNA表达水平。应用I型胶原酶消化法获取牦牛前体脂肪细胞,油红O染色和脂肪分化标志基因的检测建立牦牛前体脂肪细胞分化模型,以及qRTPCR检测前体脂肪细胞增殖分化阶段METTL3和WTAP的mRNA表达水平。结果表明,肝脏组织中METTL3表达最高(P<0.05),皮下脂肪组织表达量最低(P<0.05);WTAP在皮下脂肪组织中的表达最为丰富,脾脏中的表达量最低(P<0.05)。30月龄皮下脂肪组织中METTL3和WTAP mRNA表达量高于18月龄。前体脂肪细胞诱导分化12 d时,细胞中出现多而密的脂环,脂肪细胞分化特异性标志基因FABP4、C/EBPα和PPARγ第12天的表达量显著高于第0天(P<0.05)。METTL3和WTAP的表达量在细胞增殖阶段(24、48和72 h)呈现“下降-上升”的表达趋势(P<0.05)。在牦牛前体脂肪细胞分化阶段(0、4、8和12 d),METTL3表达量呈现“上升-下降-上升”的趋势,WTAP呈现“上升-下降”的趋势。细胞分化阶段mRNA m^(6)A水平呈现逐渐上升的趋势,在分化12 d时细胞内RNA的m^(6)A丰度最高(P<0.05)。本研究获得METTL3和WTAP在牦牛不同组织和前体脂肪细胞增殖分化阶段的变化规律及细胞分化过程中mRNA m^(6)A水平变化,初步揭示WTAP和METTL3对牦牛脂代谢具有重要的调控作用。

摘要： 为了探索不同浓度葡萄糖对实验用小型猪前体脂肪细胞增殖和分化的影响,本文采用胶原酶消化法分离皮下前体脂肪细胞,采用高浓度葡萄糖(4500mg/L)和低浓度葡萄糖(1000mg/L)DMEM培养基对细胞进行培养和体外诱导成脂分化,结果表明,与低浓度组相比,高浓度葡萄糖可显著促进实验用小型猪前体脂肪细胞的增殖,体外诱导分化后脂滴数量和甘油三酯含量显著上升,成脂标志基因PPARγ、C/EBPα表达显著上调(P<0.05)。证明葡萄糖浓度对实验用小型猪前体脂肪细胞的增殖和分化具有显著影响。

摘要： 旨在明确和盈黑鸡Kruppel样因子15(KLF15)的组织、细胞表达模式,阐明干扰KLF15对和盈黑鸡前体脂肪细胞增殖分化的影响。本研究采用RT-qPCR技术检测KLF15在各组织中表达分布、在腹脂组织的发育性表达规律以及在成脂诱导分化不同时期细胞中的表达水平;干扰KLF15后,采用CCK-8和EdU法检测细胞增殖,利用油红O染色、甘油三酯含量分析以及脂肪细胞分化标志基因(PPARγ、C/EBPa和FAS)的检测,分别从细胞形态学和分子生物学等角度明确干扰KLF15对和盈黑鸡前体脂肪细胞成脂分化的影响。研究结果表明,KLF15在和盈黑鸡各组织中存在广泛表达,在肝、腿肌和腹脂组织中表达量较高;KLF15在公、母鸡腹脂中分别呈“L”和“U”型表达趋势,表达高峰均出现在1日龄;KLF15 mRNA在细胞分化前期缓慢升高,表达高峰出现在细胞分化后期;细胞增殖检测发现,CCK-8和EdU结果趋势一致,干扰KLF15极显著抑制了前体脂肪细胞的增殖(P<0.01);明显减少了前体脂肪细胞的脂滴积聚,极显著降低了甘油三酯含量(P<0.01),且脂肪细胞分化标志基因PPARγ和C/EBPa mRNA水平极显著下调(P<0.01),FAS mRNA水平显著下调(P<0.05)。本研究揭示了和盈黑鸡KLF15的表达模式,验证了干扰KLF15能够抑制前体脂肪细胞的增殖分化,推测KLF15是前体脂肪细胞的负调控因子,可能是通过调控PPARγ、C/EBPa和FAS等分化关键基因的表达来实现的。

摘要： 试验旨在探索lncRNA NONSUST004358.1在猪前体脂肪细胞分化过程中的表达规律以及在脂肪细胞分化过程中的作用。分离培养5日龄从江香猪原代前体脂肪细胞,检测AMP活化蛋白激酶a1(PRKAA1)和lncRNA NONSUST004358.1在诱导分化过程中的表达规律,构建pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1重组真核表达载体,转染猪前体脂肪细胞,检测脂肪沉积相关基因PRKAA1、脂肪酸合成酶(FAS)、激素敏感脂酶(HSL)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的相对表达量和蛋白表达量,同时测定甘油三酯和胆固醇含量。结果显示:PRKAA1与lncRNA NONSUST004358.1在肌内和皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中呈先上升后下降的表达模式,均在48~96 h表达量较高。过表达lncRNA NONSUST004358.1后,肌内前体脂肪细胞中PRKAA1和FAS的相对表达量与蛋白表达量高于对照组(P<0.01),PPARγ相对表达量高于对照组(P<0.01),HSL蛋白表达量低于对照组(P<0.01);皮下前体脂肪细胞中PPARγ相对表达量(P<0.05)与蛋白表达量(P<0.01)高于对照组,FAS相对表达量与蛋白表达量低于对照组(P<0.01)。肌内前体脂肪细胞中,过表达lncRNA NONSUST004358.1后胆固醇含量高于对照组(P<0.01),皮下前体脂肪细胞中胆固醇含量高于对照组(P<0.05);皮下和肌内前体脂肪细胞中甘油三酯含量均高于对照组(P<0.05)。综上可知,lncRNA NONSUST004358.1能调控脂肪沉积相关基因PRKAA1、FAS、HSL、PPARγ的表达,影响脂肪细胞中油三酯和胆固醇含量,为后续探究lncRNA NONSUST004358.1在脂肪细胞分化中的作用理提供了理论支撑。

摘要： 旨在分析miR-138在牦牛前体脂肪细胞分化过程中的调控作用。本研究设计合成miR-138 mimics和inhibitor以对细胞进行miR-138过表达及抑制表达,并通过油红O染色分析miR-138对牦牛肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响;利用CCK-8、划痕和流式细胞技术分析miR-138对细胞增殖的影响;通过对bta-miR-138进行生物信息学分析,筛选其在脂质沉积过程中的相关潜在靶基因;利用RT-qPCR测定miR-138潜在靶基因mRNA表达水平,并通过双荧光素酶报告试验确定靶向关系。结果显示,过表达miR-138后,细胞内脂滴沉积水平显著低于对照(NC)组(P<0.01),而抑制miR-138表达则显著增强脂肪细胞脂质沉积(P<0.01);RT-qPCR结果表明,过表达miR-138可显著抑制脂肪分化标志基因PPARγ和c/EBPα的表达(P<0.01),抑制miR-138则上调PPARγ和c/EBPα表达水平(P<0.05);此外,过表达miR-138后,潜在靶基因PTPN11、CREB1和ADCYAP1R1表达水平显著下调(P<0.05),而PGC-1α和SNAP25表达极显著下调(P<0.01);抑制miR-138后MXLIP和SNAP25表达显著上调(P<0.05),PGC-1α和PTPN11表达极显著上调(P<0.01);CCK-8和划痕试验结果表明,过表达miR-138后24~36 h,细胞增殖活性显著低于对照组(P<0.05),而抑制miR-138则表现为细胞增殖活性增强;流式分析结果显示过表达miR-138后,细胞出现G1-S期阻滞,细胞周期相关基因CCND1、CCNB1和增殖标志基因Ki67的mRNA表达显著降低;生物信息学分析预测获得263个miR-138公共靶基因,KEGG富集结果显示靶基因主要参与“轴突导引”、“胰岛素抵抗”、“胰岛素分泌”及“RNA降解”等通路,GO分析主要富集于“RNA聚合酶Ⅱ启动子对转录的正向调控”、“核染色质”、“染色质DNA结合”和“I型肺细胞分化”等功能;双荧光素酶报告试验结果显示,共转染miR-138 mimics和PGC-1α-Wt-PGL3-basic可显著降低细胞荧光强度(P<0.01)。以上结果表明,miR-138可通过靶向结合PGC-1α3′UTR序列,降低PGC-1α的mRNA表达水平,抑制牦牛肌内前体脂肪细胞分化和脂质沉积,降低细胞增殖活性。本研究为阐明牦牛肉质性状的潜在分子机制提供参考。

摘要： 探究参与m^(6)A修饰的相关酶基因包括m^(6)A甲基转移酶METTL3、METTL14、WTAP和m^(6)A去甲基化酶FTO、ALKBH5,在牛不同组织以及前体脂肪细胞增殖和分化过程中的表达水平,为阐明m^(6)A修饰在脂生成中的功能研究提供参考。使用实时荧光定量PCR技术检测基因在新生和成年秦川肉牛不同组织,以及在前体脂肪细胞中的表达;采用CCK-8和油红O染色检测前体脂肪细胞的生长曲线及其成脂分化中的脂滴形成情况。5个基因均在骨骼肌中低表达,其余组织中高表达,而在成年牛脂肪组织的表达水平均显著高于新生牛(P<0.05)。分离的前体脂肪细胞具有良好的生长状态且可正常成脂分化。在牛前体脂肪细胞增殖期,METTL3、METTL14和WTAP的表达在前期下降,之后有所上升但仍维持较低的表达水平。FTO的表达呈缓慢上升趋势。ALKBH5在增殖前期上升,中期下降,在第4天后不断增加(P<0.01)。在前体脂肪细胞分化过程中,METTL3、METTL14和FTO的表达模式基本一致,在分化前期下降,中期高表达,随后降低。而WTAP和ALKBH5的表达随分化进行逐渐增加。结果表明m^(6)A修饰对秦川牛脂肪发育和沉积具有潜在的重要作用,且m^(6)A甲基化酶可能在体外调控牛前体脂肪细胞的脂生成。

摘要： 旨在获得山羊Kruppel样因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)CDS序列,明确其组织及在皮下脂肪细胞分化过程中的表达模式.利用RT-PCR技术克隆山羊KLF6基因序列,利用生物学软件及在线网站对获得的KLF6基因进行序列分析.利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)技术检测KLF6在山羊各组织中的表达丰度及成脂诱导分化不同阶段皮下脂肪细胞中的表达水平.结果显示,获得山羊KLF6基因全长序列1233 bp,其中包括CDS区957 bp,编码318个氨基酸残基,与牛和绵羊的亲缘关系最近.KLF6基因在山羊各个组织中都有广泛表达,且在脂肪组织中高表达,极显著高于其他组织(P<0.01).KLF6在诱导分化60 h的山羊皮下脂肪细胞中的表达量极显著高于在前体脂肪细胞中的表达水平(P<0.01).获得山羊KLF6基因序列并明确其分子特征,发现其在脂肪组织中存在高表达,且在分化后表达水平显著高于分化前的表达水平,为最终揭示KLF6调控山羊脂肪细胞分化提供重要数据.

摘要： 本实验旨在研究miR-18b-3p及其靶基因SCD调控绵羊前体脂肪细胞分化的作用机制.采集3日龄公羊背最长肌,培养绵羊前体脂肪细胞并进行诱导分化,采用油红O染色检测细胞分化情况;通过TargetScan预测miR-18b-3p的靶基因,通过qRT-PCR测定miR-18b-3p、靶基因SCD以及分化标志基因PPARγ、CEBPα在分化过程中的时序性表达;分别转染miR-18b-3p过表达载体(mimics)或抑制载体(inhibitor)及阴性对照至前体脂肪细胞后,通过qRT-PCR及Western blot检测miR-18b-3p对SCD以及分化标志基因表达量的作用;采用双荧光素酶证明miR-18b-3p是否靶向SCD基因.结果表明:miR-18b-3p在分化过程中的表达量先上升后下降,在第6天表达量最高;SCD表达量低于阴性对照组(P<0.01),PPARγ及CEBPα基因表达量均低于阴性对照组(P<0.05),SCD蛋白表达量低于阴性对照组(P<0.01),油红O染色面积减少(P<0.05);转染miR-18b-3p inhibitor后,SCD、CEBPα基因表达量均高于阴性对照组(P<0.01),PPARγ基因表达量高于阴性对照组(P<0.05),SCD蛋白表达量高于阴性对照组(P<0.01),油红O染色面积增加(P<0.05);miR-18b-3p对SCD基因具有直接靶向作用.本实验首次在绵羊上证明miR-18b-3p可以通过靶向SCD抑制前体脂肪细胞分化,为绵羊选育给予分子育种技术支撑.

摘要： 试验旨在对小尾寒羊特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)基因进行克隆和序列分析,并研究SP1基因对前体脂肪细胞分化的影响.选取1月龄小尾寒羊尾部脂肪组织进行前体脂肪细胞的分离、培养和诱导分化;用重叠PCR法克隆SP1基因编码区(coding DNA sequence,CDS);用生物信息学软件分析SP1基因CDS,并对其编码蛋白的结构、功能结构域、亚细胞定位、翻译后修饰进行预测;用慢病毒包装SP1基因过表达、干扰及对照质粒转染293T细胞后,收取病毒液感染小尾寒羊前体脂肪细胞;用油红O染色检测脂滴沉积能力;用实时荧光定量PCR检测SP1基因和成脂标志基因的mRNA表达量.结果表明,小尾寒羊SP1基因CDS全长2 340 bp,编码779个氨基酸;序列相似性分析显示,小尾寒羊SP1基因CDS及其编码序列与绵羊、山羊的相似性最高,其次是牛、马、猪、人、小鼠、大鼠,与鸡的相似性最低,系统进化分析结果与之相符;SP1蛋白定位于细胞核,有109个磷酸化位点,其二级结构由α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链4种结构组成,所占比例分别为16.94％、8.60％、54.17％和20.28％,二级结构和三级结构均存在3个锌指结构域;过表达、干扰及对照质粒转染293T细胞,每组细胞皆出现较强绿色荧光,载体成功转染至293T细胞;病毒液感染小尾寒羊前体脂肪细胞并分化12 d后,过表达组SP1基因表达量极显著高于对照组(P＜0.01),干扰组SP1基因表达量极显著低于对照组(P＜0.01);过表达SP1基因极显著上调成脂标志基因mRNA的表达量(P＜0.01),产生更多脂滴;干扰SP1基因则结果相反.因此,SP1基因对小尾寒羊尾部前体脂肪细胞分化具有正向调控的作用.

摘要： 脂肪细胞的离体培养开始于20世纪60年代初,而且国内已经在小鼠、牛、羊等动物上获得了成功,但猪前体脂肪细胞培养还鲜有报道,对猪前体脂肪细胞进行长期离体培养研究脂肪代谢还需要解决细胞培养技术上的难题.我国地方品种猪的主要缺点是沉积脂肪能力强,瘦肉率低,严重影响其经济价值和肉用品质.因此,摸索建立猪前体脂肪细胞培养体系,研究其脂肪沉积与组织发育机理,具有重要的理论与实践意义.成功分离培养前体脂肪细胞涉及的因素较多，各个实验室选用的方法各不相同，在消化时间上，本研究采用37°C消化1h，王竹晨等用的是37°C消化15h;离心力上，白亮等采用的是2000 r/min 5min，本研究采用1200 r/min 10 min，获得的细胞较多，贴壁良好。细胞汇合后(d0)进行诱导分化，本试验d0在完全培养基中添加0.5 mM异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX),1μM地塞米松(DEX),1μg/ml胰岛素(INS)进行诱导培养，d6换为只含1μg/ml胰岛素(INS)的完全培养基，每72h或48h换液，发现细胞在第3天开始有脂滴，10天后形成大脂滴，分化率高。

摘要： 建立体外牛前体脂肪细胞培养的模型,探究Chemerin对牛前体脂肪细胞增殖与分化的影响.实验分Chemerin处理组与对照组,分别对其进行分化诱导处理,利用CCK-8检测细胞的增殖情况,油红O染色,超声波破碎细胞检测细胞TG、TCH含量的变化,RT-qPCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)和脂肪细胞分化和决定因子-1(ADD1)的基因表达.结果显示,Chemerin能够促进脂肪细胞的增殖,并呈一定的浓度依赖性;通过对TG、TCH含量变化的检测,Chmerin对脂肪细胞成脂分化具有显著促进作用(P＜0.05);RT-qPCR结果显示,在分化第8天,处理组的PPARγ、C/EBPα与ADD1基因表达量显著升高(P＜0.05).可见,Chemerin在动物脂肪细胞分化中起着非常重要的作用.

摘要： 建立牛前体脂肪细胞的体外分离培养方法,研究牛前体脂肪细胞的生物学特性和分化特征.采用Ⅰ型胶原酶消化法自新生牛脂肪组织中获得前体脂肪细胞,对培养的前体脂肪细胞进行形态学观察、生长曲线测定、油红O染色及脂肪细胞标志基因LPL、PPAR-r和脂联素等的表达研究.80％的牛前体脂肪细胞接种后12h开始贴壁,4d后开始向脂肪细胞转化,10d后绝大部分细胞脂滴融合,细胞脂肪含量增加;分离的前体脂肪细胞接种后1～2 d生长缓慢,3～8 d进入对数生长期,9d后进入平台期,之后细胞数目开始下降.经胰岛素诱导分化过程中,LPL在分化的早期开始表达,PPAR-γ在分化的中期开始高度表达,而脂联素在前体脂肪细胞分化的前期未检测到,在细胞分化后期高度表达.用Ⅰ型胶原酶消化法可获得大量的牛前体脂肪细胞.培养的牛前体脂肪细胞成分均一,生长旺盛,经胰岛素诱导后能稳定的向脂肪细胞分化.

摘要： 建立牛前体脂肪细胞的体外分离培养方法,研究牛前体脂肪细胞的生物学特性和分化特征.采用Ⅰ型胶原酶消化法自新生牛脂肪组织中获得前体脂肪细胞,对培养的前体脂肪细胞进行形态学观察、生长曲线测定、油红O染色及脂肪细胞标志基因LPL、PPAR-r和脂联素等的表达研究.80％的牛前体脂肪细胞接种后12h开始贴壁,4d后开始向脂肪细胞转化,10d后绝大部分细胞脂滴融合,细胞脂肪含量增加;分离的前体脂肪细胞接种后1～2d生长缓慢,3～8d进入对数生长期,9d后进入平台期,接着细胞数目开始下降.经胰岛素诱导分化过程中,LPL在分化的早期开始表达,PPAR-γ在分化的中期开始高度表达,而脂联素在前体脂肪细胞分化的前期未检测到,在细胞分化后期高度表达.用Ⅰ型胶原酶消化法可获得大量的牛前体脂肪细胞.培养的牛前体脂肪细胞成分均一,生长旺盛,经胰岛素诱导后能稳定的向脂肪细胞分化。

摘要： 本试验旨在探讨共轭亚油酸对离体培养猪前体脂肪细胞增殖与分化的影响.于仔猪前体脂肪细胞培养液中分别添加50、100、150、200、250、300、350、400μmol/L的4种脂肪酸:顺9,反11-共轭亚油酸(c9,t11-CLA)、反10,顺12-共轭亚油酸(t10,c12-CLA)、共轭亚油酸混合体(CLA-M)和亚油酸(LA),培养10d.结果表明,50～400 μ mol/L三种共轭亚油酸形式(CLAs)处理前体脂肪细胞2d大多数浓度抑制细胞增殖和分化,4～10 d 50～350 μ mol/L促进细胞增殖和分化,整个试验过程中CLAs在400 μ mol/L显著抑制细胞增殖(P＜0.05),显著促进细胞分化(P＜0.05).添加CLAs可以促进脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(aP2) mRNA表达,添加100和200 μ mol/L CLAs促进脂蛋白脂肪酶(LPL) mRNA表达,400 μmol/L时c9,t11-CLA显著促进LPL mRNA表达(P＜0.05),t10,c12-CLA和CLA-M抑制LPL mRNA表达(P＞0.05).CLAs可能是通过高浓度下抑制脂肪细胞增殖以及LPL mRNA表达来降低机体脂肪沉积.

摘要： 本研究观察人前体脂肪细胞诱导分化过程中NYGGF4基因mRNA表达水平的变化,探讨TNFα,对成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用。

摘要： 脂肪细胞分化除甘油三酷大量沉积外还伴随着线粒体的大量增殖及氧化呼吸功能的增强，但这一现象在前体脂肪细胞分化过程中的意义尚不明确，线粒体发育规律还不明晰。PGC-1p是转录辅助活化因子PGC-1家族中的成员。PGC-1日在抵抗高脂日粮诱导的肥胖，肝脏脂肪合成以及肌肉细胞、肝细胞和棕色脂肪细胞线粒体生物合成等方面发挥着重要作用。研究表明，无论在白色还是棕色脂肪细胞分化过程中，PGC-1p表达均明显升高，这提示PGC-Ip与线粒体发育及脂肪细胞的分化之间存在着潜在的联系。但PGC-1p在白色脂肪细胞线粒体发育及脂肪细胞分化中的作用及其机理的研究尚未见报道。本文分离培养18日龄SD雄性大鼠前体脂肪细胞，采用荧光免疫组化、流式细胞术、酶活测定、SQ RT-PCR,电镜及HPLC技术等方法研究了细胞分化过程中线粒体的发育规律及PGC-1家族和线粒体氧化呼吸相关基因的时序表达变化;采用油红O染色及提取法、Western blotting, SQ RT-PCR,超表达、化学合成、脂质体转染等技术检测了超表达和沉默PGC-1p基因后对前体脂肪细胞线粒体发育相关基因及ATP生成、分化转录因子和关键基因及甘油三酯合成的影响。

摘要： 体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用1μM混合FFA、30ng/ml人重组IL-6干预成熟脂肪细胞6小时、24小时,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测干预后成熟脂肪细胞中的NYGGF4基因mRNA表达水平。观察FFA、IL-6对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用。

摘要： 本发明涉及一种高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法，包括将鸡胸肌组织剪成肉糜，用I型胶原酶消化后离心；吸取上层成熟肌内脂肪细胞，接种于培养瓶，去分化处理，最终获得鸡前体肌内脂肪细胞；将离心后下层细胞沉淀重悬，差速贴壁纯化细胞，得到高纯度的肌卫星细胞，将前体肌内脂肪细胞和肌卫星细胞分别接种于transwell小室或配套的培养板，构建共培养体系。该发明方法突破了一直以来无法单独分离纯化鸡前体肌内脂肪细胞的技术瓶颈，可应用于量化模拟鸡肌肉组织，体外精准研究鸡肌内脂肪细胞与肌细胞之间的相互影响关系及分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发。

摘要： 提供作为裸藻提取物新使用方法的新的脂肪细胞分化抑制剂、PPARγ表达抑制剂、C/EBPα表达抑制剂、用于抑制脂肪细胞分化的食品组合物以及用于抑制脂肪细胞的化妆材料组合物。新的脂肪细胞分化抑制剂、PPARγ表达抑制剂、C/EBPα表达抑制剂、用于抑制脂肪细胞分化的食品组合物以及用于抑制脂肪细胞分化的化妆材料组合物含有裸藻水性溶剂提取物作为活性成分。裸藻水性溶剂提取物可以是例如裸藻水提取物或热水提取物。

摘要： 本发明涉及一种纯化脂肪细胞及其前体细胞的方法，从人体或哺乳动物的脂肪组织块中，通过红细胞裂解液和DMEM F/12的混合溶液清洗后，采用组织消化液进行消化，离心、过滤处理等步骤后，可从微量脂肪组织中，高效分离获得高纯度和高活性的脂肪源前体细胞，分离获得的脂肪源前体细胞培养液，具备较高浓度的不同类型的细胞营养因子，所获得的脂肪源前体细胞及其产物可以用于组织修复。

摘要： 本发明涉及一种高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法，包括将鸡胸肌组织剪成肉糜，用I型胶原酶消化后离心；吸取上层成熟肌内脂肪细胞，接种于培养瓶，去分化处理，最终获得鸡前体肌内脂肪细胞；将离心后下层细胞沉淀重悬，差速贴壁纯化细胞，得到高纯度的肌卫星细胞，将前体肌内脂肪细胞和肌卫星细胞分别接种于transwell小室或配套的培养板，构建共培养体系。该发明方法突破了一直以来无法单独分离纯化鸡前体肌内脂肪细胞的技术瓶颈，可应用于量化模拟鸡肌肉组织，体外精准研究鸡肌内脂肪细胞与肌细胞之间的相互影响关系及分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发。

摘要： 本发明提供了一种抑制猪前体脂肪细胞分化的提取物，属于猪育种技术领域。本发明从小青叶蝉中提取出一种小青叶蝉寡肽，本发明所制备的小青叶蝉寡肽能够显著的抑制猪前体脂肪细胞的脂滴形成和成脂分化相关蛋白PPARγ和C/EBPα的表达，因此可将其用于制备抑制猪前体脂肪细胞成脂分化的抑制剂或药物。同时，可将其用于瘦肉猪育种来筛选脂肪沉积少的瘦肉猪。

摘要： 本发明公开了一种猪成熟脂肪细胞快速去分化为前体脂肪细胞的培养方法，包括以下步骤：a.猪成熟脂肪细胞的分离；b.天花板培养法去分化猪成熟脂肪细胞；c.去分化脂肪细胞的传代培养。本发明提供的方法能够廉价、快速而高效的获得大量去分化的脂肪细胞，所使用的培养基价格低廉，去分化的代价较低，可以大范围的推广使用。

摘要： 本发明涉及对牦牛前体脂肪细胞进行体外培养及诱导的方法，属于细胞与组织工程技术领域。本发明在现有技术的基础上，将出生一周内犊牦牛肾周和皮下脂肪在体外通过I型胶原酶消化法进行原代培养，低浓度胰酶消化和显微镜观察结合物理震荡进行传代培养，改良诱导分化培养基进行诱导分化培养，继而获得成熟的牦牛脂肪细胞。建立了牦牛前体脂肪细胞体外培养及诱导分化的新方法。本发明工艺先进高效、培养基配制科学合理，节省了人力和物力，且获得细胞形态良好，细胞增殖快，诱导分化处理高效，是一种更为有效的前体脂肪细胞培养方法，为研究牦牛体脂沉积的分子机理提供必要的载体。

摘要： 本发明涉及一种永生化的羊前体脂肪细胞构建方法，分离培养羊前体脂肪细胞，使用表达人端粒酶的慢病毒感染获得永生化细胞，利用永生化细胞分化研究其对羊乳腺上皮细胞生长的调控作用。本发明提高了羊脂肪前体细胞传代次数，完善了羊脂肪细胞的分化体系，降低了羊前体脂肪细胞的培养成本，将加快脂肪细胞分化在肌肉和乳腺发育等研究的进展，在畜牧业的基础研究中具有重要应用前景。

摘要： 本发明提供了一种抑制猪前体脂肪细胞分化的提取物，属于猪育种技术领域。本发明从小青叶蝉中提取出一种小青叶蝉寡肽，本发明所制备的小青叶蝉寡肽能够显著的抑制猪前体脂肪细胞的脂滴形成和成脂分化相关蛋白PPARγ和C/EBPα的表达，因此可将其用于制备抑制猪前体脂肪细胞成脂分化的抑制剂或药物。同时，可将其用于瘦肉猪育种来筛选脂肪沉积少的瘦肉猪。

摘要： 一种高纯度的鸭肌内前体脂肪细胞分离方法，属于细胞学技术领域，通过将樱桃谷鸭浸泡、放血浸泡、采集鸭胸肌组织样、清洗组织、去除筋膜、胸肌剪碎消化、终止消化、得到细胞、弃上清、吹打混匀、胸肌培养等步骤，可以快速获得大量的肌内前体脂肪细胞，突破长期以来获得该细胞难度的障碍，对研究家禽脂肪沉积及肉品质具有重要的理论价值，为开展后续实验研究奠定基础。