逆转录病毒
逆转录病毒的相关文献在1981年到2022年内共计1006篇,主要集中在基础医学、肿瘤学、分子生物学
等领域,其中期刊论文797篇、会议论文33篇、专利文献59830篇;相关期刊385种,包括生物技术通报、生物技术通讯、中国实验血液学杂志等;
相关会议33种,包括广东省职业健康协会第三届学术交流会、中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会、第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会等;逆转录病毒的相关文献由2354位作者贡献,包括陈诗书、D·P·格特曼、G·A·德克雷辛佐等。
逆转录病毒—发文量
专利文献>
论文:59830篇
占比:98.63%
总计:60660篇
逆转录病毒
-研究学者
- 陈诗书
- D·P·格特曼
- G·A·德克雷辛佐
- J·J·麦多那尔德
- J·N·弗雷斯科斯
- M·L·瓦奎兹
- B·德瓦达斯
- D·L·布朗恩
- J·A·思科尔斯基
- 张玉勤
- 惠宏襄
- 赵亚刚
- H·瓦林
- N·-G·约翰松
- S·那加拉雅
- 刘为池
- 叶钢
- 吴军
- 周晓雄
- 张学光
- 张学庸
- 徐荣臻
- 曹广文
- 曾毅
- 等
- 陈子兴
- A·伯尔曼
- C·奎兰特
- D·古塔尔德
- F·克拉维尔
- J·H·M·库翰
- J·当约恩迪萨恩特马丁
- L·蒙塔格尼尔
- P·查尼恩
- 刘春生
- 姚秀娟
- 巩鹏
- 张荣贵
- 易绍萱
- 杨铁虹
- 林言箴
- 王忠裕
- 王洪江
- 王玉茂
- 王玮
- 珍尼特·惠特科姆
- 相洪琴
- 解丽华
- 谭广
- 贾敏
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李荣荣;
李苏楠;
Iqbal Ahmad;
郑永辉
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摘要:
为研究不同马传染性贫血病毒(EIAV)编码的S2蛋白拮抗宿主限制因子丝氨酸整合蛋白5(Ser5)的机制,本研究利用HIV-1野生型(WT)和HIV-1ΔNef前病毒质粒包装两种HIV-1假病毒,通过测定细胞上清中病毒粒子含量和靶细胞中荧光素酶活性检测病毒相对感染性,分析pSPEIAV19编码的S2蛋白(S2)和中国EIAV弱毒疫苗编码的S2蛋白(HRB-S2)对Ser5抗病毒活性的影响,结果显示S2和HRB-S2蛋白均能拮抗宿主Ser5的抗病毒活性,且S2拮抗Ser5的能力比HRB-S2强。将表达Ser5和野生型HRB-S2及其突变体的质粒共转染293T细胞,检测HRB-S2对Ser5表达的影响,结果显示HRB-S2能显著降解Ser5蛋白,并且HRB-S2降解Ser5的关键氨基酸位点是L^(26)。将表达Ser5和野生型HRB-S2及其突变体的质粒共转染Hela细胞,通过激光共聚焦试验检测HRB-S2对细胞内Ser5定位的影响,结果显示HRB-S2将位于细胞膜表面的Ser5表达下调并内化至细胞浆内,而L^(26)突变后HRB-S2下调Ser5的能力降低。将表达Ser5、HRB-S2、AP-2、Rab7和Rab11的质粒共转染293T细胞,检测AP-2、Rab7和Rab11在HRB-S2降解Ser5中的作用,结果发现三者在HRB-S2降解Ser5中均发挥重要的作用。将与VC或者VN融合表达的Ser5、HRB-S2、S2的质粒共转染Hela细胞,检测三者在细胞内的共定位情况,结果发现HRB-S2存在二聚体,而S2则不会形成二聚体。将表达Ser5、HRB-S2、S2的质粒共转染293T细胞,转染24 h后加入不同降解通路的抑制剂,检测S2降解Ser5的不同通路,结果显示HRB-S2可以通过蛋白酶体通路和溶酶体通路降解Ser5;而S2蛋白只通过溶酶体途径降解Ser5。本研究结果首次表明不同EIAV编码的S2蛋白均能通过降解Ser5蛋白而拮抗其抗病毒活性,其中S2拮抗Ser5的能力比HRB-S2强,HRB-S2蛋白的二聚体化可能会影响其对Ser5的敏感性。本研究阐明了不同EIAV S2蛋白拮抗Ser5的差异及机制,为抗逆转录病毒如HIV-1抗病毒制剂的开发提供参考依据。
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葛震;
吴远博;
毛琦淇;
李宏
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摘要:
近年来,嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法发展迅速,特别是在血液恶性肿瘤的治疗中。CAR-T指将患者自身外周血中T细胞分离出来并采集,然后将可与肿瘤相关抗原(TAA)识别的单链抗体片段(scFv)通过病毒等载体转导至T细胞并利用MLV逆转录病毒和piggy Bac转座子等特殊的载体设计将其整合于细胞内基因组中,使T细胞表面表达嵌合抗原受(CAR)。CAR-T细胞与TAA识别并结合后.
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摘要:
新冠病毒基因会嵌入人类基因吗?麻省理工学院干细胞生物学家Rudolf Jaenisch和基因调控专家Richard Young共同研究发现,人类细胞中的一种酶可能会将新冠病毒的序列复制到DNA中,让病毒基因嵌入人类的染色体。在极少数情况下,人类细胞中的酶,即逆转录酶,由逆转录转座子LINE-1编码。这些序列散落在17%的人类基因组中,代表了由逆转录病毒引起的原始感染。研究人员提供了试管证据,表明当添加了额外的逆转录转座子LINE-1的人类细胞被新冠病毒感染时,新冠病毒序列的DNA版本嵌入了人类细胞的染色体。然而,许多专门研究逆转录转座子LINE-1和其他逆转录转座子的研究人员认为,这些数据过于单薄,无法支持这种说法。
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逄育波
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摘要:
牛白血病病毒(BLV)已经在20多个国家被根除.但由于缺乏有效的防控该病在美国和许多其他国家的流行率正在上升.与其他逆转录病毒一样,BLV似乎会造成多种免疫系统的紊乱,影响细胞免疫和体液免疫,这很可能是越来越多的文献证明的牛乳制品产量下降和生产能力下降的原因.这些经济损失增加了人们对通过防控技术控制BLV的期望.在许多国家,通过传统的抗体检测和屠宰方法控制BLV在经济上是不可行的,因为这些国家的平均牛群抗体流行率正迅速接近50%.对牛的ELIISA筛查,通过qPCR对前病毒载量进行跟踪检测,有助于筛选出最具传染性的牛进行分离或扑杀.培育抗BLV的牛也是一种解决该病的重要方法.
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李爽;
郭浩然;
魏伟
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摘要:
目的 :探讨不同灵长类动物限制因子不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(SAM HD1)的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素(IFN)产生信号通路等作用,为灵长类动物SAM HD1的研究提供依据.方法 :构建稳定表达不同灵长类动物SAM HD1蛋白的U937细胞系,以空载体构建的细胞作为阴性对照组,以稳定表达不同灵长类动物SAM HD1蛋白的U937细胞系为实验组.经佛波酯(PMA)刺激分化成巨噬样细胞后,流式细胞术分析各组HIV-1病毒感染率.以单独转染SAMHD1表达质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染SAM HD1与HIV-2/SIV Vpx表达质粒的细胞为实验组,转染后48 h收获细胞,采用Western blotting法检测SAM HD1蛋白表达水平,免疫荧光检测法观察不同SAM HD1蛋白的细胞内定位.以单独转染LINE-1-GFP报告质粒的HEK293T细胞作为对照组,以共同转染LINE-1-GFP与SAM HD1表达质粒的细胞为实验组,采用流式细胞术检测GFP阳性细胞率,代表SAM HD1对LINE-1转座子的活性.以单独转染IFN-luc报告质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染IFN-luc和SAM HD1表达质粒的细胞为实验组,采用化学发光仪检测HEK293T细胞中荧光素酶的表达水平.结果 :与阴性对照组比较,灵长类动物SAM HD1稳定表达的实验组HIV-1病毒感染率明显降低(P<0.01).与对照组比较,实验组灵长类动物SAMHD1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01).免疫荧光检测,灵长类动物SAMHD1蛋白均定位于细胞核中.与对照组比较,实验组GFP阳性细胞率明显降低,即SAMHD1对LINE-1转座子活性降低(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,实验组灵长类动物HEK293T细胞中荧光素酶表达水平明显降低(P<0.05).结论 :不同灵长类动物SAM HD1蛋白具有抵抗HIV-1病毒感染、抑制逆转录转座子LINE-1以及拮抗天然免疫系统产生IFN的作用.
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Yu Fei;
Sheng Guannan;
Chen Guannan;
Wang Nannan;
Ning Lili;
Wang Yupeng;
Qu Bo
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摘要:
目的:构建迁移诱导基因(migration inducing gene 7,MIG7)的逆转录病毒表达载体并测序,初步建立其包装细胞株.方法:根据MIG7已知序列设计合成所需脱氧寡核苷酸序列,并与线性RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体连接.PCR扩增热转化后的连接产物,检测和挑取阳性克隆和阳性菌落,提取质粒后测序,与Gen-Bank中特异性MIG7-shRNA基因序列对比.包装并获取MIG7-shRNA重组逆转录病毒,qRT-PCR测定MIG7-shRNA重组逆转录病毒滴度并转染MHCC-97H细胞株.结果:构建的MIG7-shRNA表达载体与设计的完全一致,成功获得MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体质粒CTC698-1-1和CTC698-2N-1转染的PT67细胞克隆株,pSIREN-M1病毒和pSIREN-MN病毒颗粒数约为1.0×108v.p/ml,能高效转染MHCC-97H细胞株.结论:成功构建了MIG7的逆转录病毒表达载体并建立其包装细胞株.
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王峰;
李娜娜;
王永玲;
侯软玲;
王璐;
张利彬;
李成长;
张煜;
程远;
尹雅玲;
常连生
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摘要:
目的:制备载胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的逆转录病毒超声微泡MpLXSN-GDNF,探讨MpLXSN-GDNF联合超声开放血脑屏障对帕金森病(PD)模型大鼠的治疗作用。方法:制备载逆转录病毒载体pLXSN-GDNF、pLXSN-EGFP微泡造影剂。将SD大鼠分为4组:(1)Normal组,为未进行处理的正常大鼠;(2)U+MpLXSN-EGFP组,尾静脉注射4×10~7载pLXSN-EGFP微泡并用超声照射受损脑区;(3)U+MpLXSN-GDNF组,尾静脉注射4×10~7载pLXSN-GDNF微泡并用超声照射受损脑区;(4)U+M+pLXSN-GDNF组,尾静脉注射4×10~7微泡及pLXSN-GDNF病毒并用超声照射受损脑区。MRI实时引导聚焦超声联合载GDNF或EGFP基因的逆转录病毒的微泡辐照大鼠颅脑纹状体开放血脑屏障,促逆转录病毒透过血脑屏障转染该区域的神经元细胞而增加目的基因表达。免疫印迹法检测各组大鼠脑组织GDNF表达,旋转实验评价颅内GDNF表达增加对大鼠行为学的影响,免疫组化法测定脑组织酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元细胞数目。结果:免疫印迹检测脑组织GDNF蛋白表达显示,U+MpLXSN-EGFP组、U+M+pLXSN-GDNF组与Normal组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。旋转实验显示,处理8周后U+M+pLXSN-GDNF组大鼠旋转症状较治疗前明显好转(P<0.05)。免疫组化法检测各组大鼠脑内TH阳性神经元细胞数量显示,U+MpLXSN-EGFP组、U+M+pLXSN-GDNF组、U+MpLXSN-GDNF组较Normal组均显著降低,而U+MpLXSN-GDNF组较U+M+pLXSN-GDNF组显著增加(均P<0.05)。结论:超声联合载GDNF病毒微泡可以增加脑内神经细胞的转染效率,并高表达外源基因GDNF,从而对PD模型大鼠起到治疗作用。
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刘月;
刘淑英;
张宇飞;
孙晓林
- 《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会》
| 2014年
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摘要:
绵羊肺腺瘤逆转录病毒囊膜蛋白是绵羊肺腺瘤逆转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染宿主细胞的主要分子,在病毒吸附和侵入宿主细胞中发挥重要作用.为了获得特异性抗绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的单克隆抗体,参照本实验室登录到Genbank中的JSRV-NM株env基因序列(登录号:JQ837489),应用Gamier-Robson方法、SOPMA方法和网络服务器PSIPRED、Predictprotein预测JSRV-NM株囊膜蛋白二级结构,用Kyte-Doolittle方法预测蛋白质的疏水区和亲水区,用Emini方法预测蛋白质表面可能性,以Jamson-Wolf方法预测蛋白的抗原指数,利用Bcepred,IEDB,ABCpred网络服务器预测囊膜蛋白的抗原性,然后综合评价囊膜蛋白的B细胞抗原优势表位.
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童光东;
魏春山;
唐海鸿;
王宏艳
- 《世界中联第五届肝病国际学术大会》
| 2013年
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摘要:
目的:构建血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)逆转录病毒载体,并使其在HepG2入肝癌细胞内稳定表达。方法:采用PCR技术扩增VEGFR3片段,克隆至逆转录病毒载体质粒pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-puro-VEGFR3,经PCR、酶切、测序验证后,体外将重组质粒与PIK包装质粒共同转染人胚胎肾上皮细胞系293FT细胞,包装获得携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒,感染人肝癌HepG2细胞,获得转入VEGFR3的HepC2细胞,通过QPCR和Western blot进一步验证VEGFR3在HepG2细胞内的表达。结果:(1)成功获得携带VEGFR3基因的重组质粒pBABE-puro-VEGFR3和人肝癌细胞株HepG2-pBABE-puro-VEGFR3;(2)QPCR和Western blot分别检测到VEGFR3在靶细胞HepG2-pBABE-puro-VEGFR3中的表达。结论:成功构建了携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒载体,携带VEGFR3的靶细胞(HepG2-pBABE-puro-VEGFR3)能够稳定表达VEGFR3蛋白。
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杨国红;
周欣;
姬文婕;
毕莹;
郭兆增;
姜铁民;
李玉明
- 《中华医学会第十五次全国心血管病学大会》
| 2013年
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摘要:
目的:拟通过逆转录病毒载体在基因水平双向调节TonEBP/VEGF-C通路的激活,探讨这一通路在高盐摄入诱导的高血压性左心室重塑中的作用。方法:设计大鼠模型,对其进行相应处理,进行临床观察。结果:HS+VC组血压显著低于HS组和HS+Ctr组,而HS+VRg组血压则显著增高;HS+VC组左心室肥大程度显著低于HS+VRg组,而左心室功能较HS+VRg组也有显著改善。HS+VC组左心室舒张末期压显著低于HS+VRg组;Western blot结果显示,Prox-1蛋白表达水平与其mRNA表达水平有相同的变化趋势。与HS组和HS+Ctr组相比,HS+VC组心肌细胞横截面积显著减小,心肌间质和血管周纤维化程度显著减轻,CD68阳性MPS细胞浸润程度显著减低,并伴有显著的淋巴管增生。而HS+VRg组则表现出与HS+VC组相反的变化趋势。结论:VCEF-C使VEGF-C/VEGFR-3信号通路过度激活,在促进淋巴管增生的同时显著减轻了心肌间质的MPS细胞浸润,改善了左心室的收缩、舒张功能,减轻了长期高盐负荷导致的高血压性左心室重塑,提示VEGF-C可能是高血压及高血压性左心室重塑的一个新的治疗靶点。
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王静;
龚萍;
李世军;
俸艳萍;
彭秀丽;
龚炎长
- 《第十六次全国家禽学术讨论会》
| 2013年
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摘要:
本文通过对鸡的试验研究,PCR扩增得到918bp产物,测序结果经BLAST分析与NCBI上鸡FOXL2基因序列一致,将已获得的FOXL2序列连接到已连有报告基因GFP的pSLAX13载体上,再将FOXL2-GFP片段连接到RCASBP(B) ,测序证明连接方向正确,与目的序列一致,说明逆转录病毒介导的FOXL2超表达载体构建成功,可以用于后续实验。转染细胞后在荧光显微镜下观察,发现转染24h后就有绿色荧光的表达,随着传代及转染时间的延长,绿色荧光的表达越强,且主要集中表达在细胞核中。Q-PCR检测发现,FOXL2在DF-1细胞中没有本底表达,在超表达组极显著上调,SOX9在两组细胞中均无表达,CYP19A1表达无显著差异。本研究通过基因重组技术构建了逆转录病毒RCASBP(B)介导的FOXL2超表达载体,在转染后发现随着细胞生长荧光表达越来越强,说明逆转录病毒成功在DF-1细胞中包装形成成熟的病毒感染周围细胞,这与MaicolmLogan等(1998)对RCASBP(B)的研究结果一致。
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尹鑫;
胡哲;
谷勤雍;
吴星亮;
魏萍;
郑永辉;
王晓钧
- 《第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议》
| 2013年
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摘要:
机体内存在一些先天免疫因子,具有抑制病毒复制和防止病毒跨种间传播的作用,这些因子被称为"宿主限制因子".在对人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)等的研究中发现,细胞内至少有四种不同蛋白(APOBEC3G、Trim5α、Tetherin和SAMHD1)可干扰病毒生命周期的不同阶段,有效地限制逆转录病毒感染,从而形成宿主抵抗病毒的天然屏障.这种病毒-宿主之间的相互作用存在种间特异性,人Tetherin是一种受干扰素调节的膜蛋白,可以限制逆转录病毒释放,而病毒在长期适应宿主过程中通过编码的蛋白克服了这种限制.如HIV-1编码的vpu可对抗人的tetherin的限制,而猴艾滋病病毒SIV却不能克服这种限制.目前,有关马先天性免疫限制因子以及这些因子与同为逆转录病毒慢病毒属的EIAV相互作用的研究还是一项空白.rn 本研究克隆马tetherin基因,研究其免疫学活性,揭示其抗逆转录病毒感染的功能。从马血浆中提取总RNA,通过RT-PCR扩增tetherin基因,克隆到带有HA标签的pcDNA3.l(+)真核表达载体上,在293T细胞或驴胎皮肤细胞上表达,顺时共转染EfAV感染性克隆和不同种属的Tetherin或直接感染EIAV等慢病毒,采用Western Blotting和间接免疫荧光试验检测Tetherin的表达以及病毒的释放。结果显示,马Tetherin在体外培养细胞中可以得到良好表达,讨量表达Tetherin可以呈计量依赖性地限制EIAV,HIV,SIV等逆转录病毒的释放,并将逆转录病毒限制在细胞膜的表面。E1AV的Env蛋白可以中和马Tetherin的限制作用。马Tetherin基因的克隆及其抗病毒活性的研究为进一步探索马Tetherin的免疫学活性、揭示马Tetherin与逆转录病毒相互作用的机制奠定了基础,为发现其他马属动物宿主细胞限制因子和抗病毒的相关研究提供了依据。
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葛怡琛;
曾丽海;
殷霄;
陆丰荣;
黄金城;
任雪峰
- 《广东省职业健康协会第三届学术交流会》
| 2015年
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摘要:
目的:rn 构建人源三价砷甲基转移酶(AS3MT)的基因逆转录病毒表达载体,转导UROtsa细胞,建立稳定表达的细胞系.rn 方法:rn 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),从人源HEK293细胞基因库中扩增出AS3MT基因,将AS3MT基因克隆到逆转录病毒表达载体pRetroX-IRES-ZsGreen1中,经病毒包装后,转导UROtsa细胞,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,采用流式细胞仪筛选阳性克隆,半定量RT-PCR法检测AS3MTmRNA表达水平,免疫印迹法检测其蛋白表达水平.rn 结果:rn 经RT-PCR扩增AS3MT基因、限制性双酶切及基因测序鉴定,证实AS3MT基因正确插入逆转录病毒表达载体.以该载体转染病毒包装细胞RetroPack PT67后获得的病毒液滴度>106 cfu/mL.将病毒转导UROtsa细胞,转导效率达50.00%.经3次流式细胞分选仪筛选,所有细胞均可见绿色荧光;半定量RT-PCR和免疫印迹检测结果均表明所转导的AS3MT基因在UROtsa细胞中成功表达.rn 结论:rn 成功构建高水平稳定表达AS3MT基因的UROtsa细胞系,为研究AS3MT在砷的代谢、毒性和致癌性中的作用机制奠定基础.
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马荣
- 《中国中医科学院2013年博士生学术年会》
| 2013年
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摘要:
重组融合蛋白常用的表达载体是中国仓鼠卵巢细胞(CHO).已知CHO细胞中存在内源性逆转录病毒.虽然该病毒对于人类不具感染性,但对于人用药的安全仍有一定风险.因此,CHO细胞来源的药用蛋白的生产必须具备灭活工艺.低pH孵放法一般用于包膜病毒的灭活.来源于CHO细胞的逆转录病毒属于具有包膜的γ型逆转录病毒。在灭活验证试验中,以异嗜性小鼠白血病病毒(Xenotropic Murine Leukemia Virus X-MulV)作为CHO细胞内源性逆转录病毒的指示病毒(又称作模拟病毒、替代病毒),以人重组融合肿瘤坏死因子a作为待验证样本,进行病毒的灭活验证试验。以CHO细胞作为X-MulV的传代载体,培养7天,获得的X-MulV病毒悬液,其病毒滴度能够达到7.0log10PFU以上。采用pH 3.60,25°C,4h灭活重组融合TNF-a蛋白药物中指示病毒X-MulV,能够实现有效灭活,其病毒滴度降低大于4.0 log10PFU;此灭活条件下,TNF-α生物学活性良好;低pH影响包膜基因env 3'-末端1626-1930位点,X-MulV能够被有效灭活可能与该位点有关。
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刘月;
张宇飞;
张亚坤;
孙晓林;
刘淑英
- 《2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会》
| 2013年
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摘要:
以本实验室构建好的pCDNA3.1-exJSRV-env质粒为模板,PCR扩增env基因1 320bp片段,对应的exJSRV全长基因位置为5498~6529bp。定向克隆到pET32a(+)表达载体中,通过PCR,酶切,测序,鉴定筛选出阳性克隆菌并提质粒转化到Transetta(DE3)表达菌中,用终浓度为1mmol/L的IPTG , 37°C诱导6h后取1mL菌液,取菌体超声后离心,分别取上清和沉淀进行SDS-PAGE检测目的蛋白表达。改变IPTG浓度,诱导的时间和温度,确定最佳诱导表达条件。经western-blot鉴定重组蛋白后用镍柱亲和层析的方法纯化重组蛋白。测定纯化的重组蛋白浓度后,免疫新西兰大耳白兔制备抗血清,用间接ELISA,western-blot法检测抗血清效价,用感染JSRV绵羊的肺脏做免疫组化检测抗血清的特异性。结果表明,成功构建了ex-JSRV-env基因的截短原核表达质粒,并成功的表达了带有His标签的重组融合蛋白。重组蛋白主要以包涵体形式表达,最佳表达条件是终浓度为1mmol/L的IPTG,在37°C诱导6h,重组蛋白可达到最高表达量,诱导6h后再延长诱导时间,重组蛋白的表达量不会随时间延长而增加。在变性的条件下用镍柱亲和层析的方法纯化重组蛋白,经缓慢透析去除尿素使蛋白复性,用超滤离心法浓缩透析后的重组蛋白,用BCA法测定蛋白浓度为0.9 mg/mL,免疫新西兰大耳白兔制备的抗血清效价为1:25 600,western效价为1:2000,感染JSRV的绵羊肺脏免疫组化的阳性信号主要在肺泡Ⅱ型细胞和肺泡侵润的淋巴细胞中,说明表达的重组蛋白具有良好的抗原性,免疫原性和特异性,可用于JSRV诊断试剂的研究。
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曹鸿国;
孙雪萍;
殷慧群;
张运海;
刘亚;
李运生;
陶勇;
章孝荣
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》
| 2013年
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摘要:
为了诱导形成牛iPS细胞用于深入研究和应用,试验直接采用慢病毒作为诱导材料感染牛胎儿成纤维细胞,并对诱导形成的细胞集落进行检测分析.结果显示,慢病毒介导的EGFP在牛胎儿成纤维细胞中稳定和高效表达,在含有LIF和bFGF的DMEM细胞培养液中,部分牛胎儿成纤维细胞逐渐改变纤维状形态,并形成圆形细胞,细胞逐步增殖形成细胞集落,接种细胞集落于饲养层上,细胞集落生长迅速,集落与饲养层间界限明显,集落生长稳定,集落内细胞具有正常核型,细胞集落碱性磷酸酶染色为阳性,表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog和SSEA1,在体外能够形成拟胚体,在体内分化形成包含三个生殖层的畸胎瘤.结果证实慢病毒能够直接使牛胎儿成纤维细胞转变成iPS细胞.