逆转录病毒介导的鸡FOXL2在DF-1细胞中的超表达

摘要

本文通过对鸡的试验研究，PCR扩增得到918bp产物，测序结果经BLAST分析与NCBI上鸡FOXL2基因序列一致，将已获得的FOXL2序列连接到已连有报告基因GFP的pSLAX13载体上，再将FOXL2-GFP片段连接到RCASBP(B) ,测序证明连接方向正确，与目的序列一致，说明逆转录病毒介导的FOXL2超表达载体构建成功，可以用于后续实验。转染细胞后在荧光显微镜下观察，发现转染24h后就有绿色荧光的表达，随着传代及转染时间的延长，绿色荧光的表达越强，且主要集中表达在细胞核中。Q-PCR检测发现，FOXL2在DF-1细胞中没有本底表达，在超表达组极显著上调，SOX9在两组细胞中均无表达，CYP19A1表达无显著差异。本研究通过基因重组技术构建了逆转录病毒RCASBP(B)介导的FOXL2超表达载体，在转染后发现随着细胞生长荧光表达越来越强，说明逆转录病毒成功在DF-1细胞中包装形成成熟的病毒感染周围细胞，这与MaicolmLogan等(1998)对RCASBP(B)的研究结果一致。