基因转染

摘要： 目的探索腺相关病毒载体Anc80L65对正常和不同程度损伤的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮的转染特性。方法将6周龄小鼠分为以下三组。1)正常对照组:将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的Anc80L65病毒液(Anc80L65-GFP),经后半规管注射途径导入小鼠内耳;2)中度损伤组:行水平半规管注射导入150μg链霉素,术后2周通过后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液;3)重度损伤组:行水平半规管注射导入400μg链霉素,术后2周行后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液。导入病毒后4周取椭圆囊行免疫荧光染色,观察椭圆囊的形态及GFP在椭圆囊感觉上皮的表达情况。结果正常对照组:Anc80L65-GFP病毒液注射后,正常椭圆囊毛细胞无明显缺失,纤毛形态正常,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。中度损伤组:椭圆囊前庭毛细胞数量明显减少,支持细胞仍存活,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。高倍镜下见前庭支持细胞和毛细胞被转染。重度损伤组:椭圆囊的前庭毛细胞和支持细胞均被损伤,前庭感觉上皮演化为细胞大小不一、形态不规则的扁平上皮结构。在前庭扁平上皮中,GFP阳性细胞数量与对照组及中度损伤组相比明显减少。结论Anc80L65能高效转染正常和中度损伤后的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮,但对重度损伤后形成的前庭扁平上皮的转染效率较低,这可能与其细胞属性发生改变有关。在未来的前庭基因治疗研究中,须根据前庭感觉上皮的不同损伤程度来选择合适的载体。

摘要： 目的:研究鱼藤素(De)诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的其作用机制。方法:运用CCK-8细胞活力检测法考察不同浓度(10、20、40、60、80、100 mol/L)鱼藤素作用24、48 h对SGC-7901胃癌细胞的细胞毒性;将SGC-7901胃癌细胞分为对照组及20、40 mol/L鱼藤素药物组,给药作用24 h后,蛋白质印迹法检测p-AKT Thr308、叉头框蛋白O1(FoxO1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)等蛋白的表达水平;运用蛋白激酶B(AKT)基因转染使SGC-7901胃癌细胞中AKT过表达,然后给予20、40 mol/L鱼藤素给药作用24 h,以未用AKT基因转染的SGC-7901胃癌细胞作为对照组蛋白质印迹法检测p-AKT Thr308、FoxO1、Bcl-2等蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FoxO1、Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果:不同浓度的鱼藤素对SGC-7901胃癌细胞均具有一定的细胞毒性;20、40 mol/L鱼藤素给药作用24 h能够显著降低SGC-7901胃癌细胞中p-AKT Thr308、Bcl-2等蛋白的表达水平,升高FoxO1的表达水平;与对照组比较,AKT基因转染后,SGC-7901胃癌细胞中p-AKT Thr308、Bcl-2等蛋白表达水平升高,FoxO1蛋白表达降低,与模型组比较,20、40 mol/L鱼藤素给药作用后能够降低p-AKT Thr308、Bcl-2等蛋白的表达水平,降低Bcl-2 mRNA的表达水平,升高FoxO1及Bax的表达水平。结论:鱼藤素能够通过作用于AKT/FoxO1信号通路诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。

摘要： 目的:对siRNA抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞LOXL2的表达进行研究,探讨LOXL2基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)增殖、凋亡、侵袭能力的影响及机制。方法:分离、培养瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞,使用qRT-PCR技术检测瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)与正常皮肤成纤维细胞(NFs)中LOXL2基因的表达。将si-NC,si-LOXL2基因转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,并将其分为3组,KFs组,LOXL2阴性对照组(si-NC),LOXL2抑制表达组(si-LOXL2)。转染48h后,Western blot技术检测转染效率,CCK-8法检测成纤维细胞的增殖情况,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测成纤维细胞的细胞凋亡情况,Transwell小室检测成纤维细胞的细胞侵袭情况。结果:LOXL2基因在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达显著高于正常皮肤软组织成纤维细胞(P<0.05)。三组瘢痕疙瘩成纤维细胞中LOXL2 mRNA和蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.05),si-LOXL2组低于其他两组(P<0.05)。三组细胞凋亡、增殖、迁移情况差异具有统计学意义(P<0.05),si-LOXL2组增殖减少,迁移率降低,凋亡增加(P<0.05)。结论:抑制LOXL2基因表达可影响瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭能力。

摘要： 目的 探讨过表达线粒体融合蛋白2(Mfn2)对阿霉素(Dox)诱导下血管内皮祖细胞(EPCs)衰老及凋亡的影响.方法 抽取SD雄性大鼠外周动脉血,分离培养EPCs,进一步分为,正常EPCs组、空载体组、Mfn2过表达组,经0.2μmol/L和2.0μmol/L Dox诱导,通过激光共聚焦显微镜观察线粒体分裂情况;通过β-半乳糖苷酶活性检测、原位末端标记法(TUNEL)染色,检测细胞衰老和凋亡情况;蛋白印迹法检测细胞衰老标志蛋白多肿瘤抑制基因1 (p16INK4A)的表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及血管性血友病因子(vWF)的表达.多组间均数比较采用单因素方差分析.结果 在0.2 μmol/L和2.0μmol/L Dox处理下,Mfn2过表达组[(5.83±1.71)％、(6.72±0.57)％]线粒体分裂的细胞比例低于正常EPCs组[(19.16±0.82)％、(68.56±5.31)％]和空载体组[(17.53±2.86)％、(66.54±2.86)％,F=40.403、302.725,P＜0.05],差异均有统计学意义;在0.2μmol/L Dox处理下,Mfn2过表达组[(15.0±0.33)％]β-半乳糖苷酶活性升高的细胞比例低于正常EPCs组[(35.0±0.61)％]和空载体组[(36.0±1.23)％,F=637.291,P＜0.05],差异均有统计学意义;在2μmol/L Dox处理下,Mfn2过表达组[(11.90±0.50)％]TUNEL+细胞的比例低于正常EPCs组[(34.50±0.80)％]和空载体组[(35.20±1.60)％,F =458.327,P＜0.05],差异均有统计学意义;在0.2μmol/L Dox处理条件下,Mfn2过表达组eNOS mRNA(0.65±0.02)和vWF mRNA(0.65±0.01)的相对表达高于正常EPCs组(0.43±0.03、0.50±0.02)以及空载体组(0.34±0.02、0.48±0.02,F=134.643、71.646,P＜0.05),差异均有统计学意义;在2.0 μmol/L Dox处理条件下,Mfn2过表达组eNOS mRNA(0.71±0.02)和vWFmRNA (0.66±0.03)的表达高于正常EPCs组(0.33±0.02、0.28±0.02)以及空载体组(0.38±0.03、0.35±0.01,F=225.712、262.934,P＜0.05),差异均有统计学意义.结论 过表达Mfn2可以抑制线粒体分裂,拮抗Dox诱导下EPCs的衰老及凋亡,恢复EPCs的功能.

摘要： 设计合成了三种罗丹明B修饰的树枝状分子核酸递送载体GR-1、GR-2和GR-3,并通过核磁共振氢谱分析了树枝状分子表面连接的罗丹明B的数目.琼脂糖凝胶电泳实验表明,树枝状分子表面的罗丹明B数目越少,对RNA的浓缩效果越好.在三种核酸递送材料中,GR-3对Antagomir-138-5p的递送效率最高,基因沉默效率70％左右,高于商业化的转染试剂Lipofectamine 2000.

摘要： 目的 分离、培养并鉴定尿源干细胞(USCs),评估慢病毒载体介导胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因感染USCs的安全性及有效性,探究IGF-1对USCs增殖、迁移能力的影响,为后续USCs-基因联合移植治疗勃起功能障碍(ED)动物模型提供可靠的体外实验证据.方法 采用差速贴壁法分离培养原代USCs并鉴定.慢病毒载体介导IGF-1转染USCs,采用Western blot和PCR检测IGF-1表达情况,采用CCK-8实验、Transwell小室分析IGF-1对USCs的增殖及迁移能力影响.结果 成功分离人USCs并传代培养.成骨、成脂分化后,茜素红S、油红O染色阳性;流式细胞技术检测结果显示,USCs表达间充质干细胞标志物CD44、CD73、CD90、CD146,不表达造血干细胞标志物CD31、CD45.重组USCs能稳定持续高表达IGF-1蛋白;重组USCs增殖、迁移能力显著高于对照组USCs(P0.05).结论 USCs取材简便且无创,分化和增殖能力强;慢病毒载体介导IGF-1转染USCs安全有效,IGF-1能够促进USCs增殖、迁移,为后续USCs-基因联合移植治疗ED奠定基础.

摘要： 本研究主要探讨负载人肝癌相关抗原SMP30和HSP70L1的树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在肝癌荷瘤裸鼠体内抗肝癌效应。用SMP30-HSP70L1、SMP30、HSP70L1重组慢病毒和空载慢病毒、肝癌组织总蛋白(SMP30、HSP70L1均有表达)分别致敏HLA-A2^(+)健康成人DC,诱生自体CTL。建立BALB/c裸鼠人肝癌SMMC-7721皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分组后输注CTL,测量裸鼠的瘤体体积和体重;剥离裸鼠瘤体称重计算肿瘤抑制率,HE染色观察移植瘤和肝肾脏形态;ELISA检测裸鼠血清中IFN-γ和TNF-ɑ的浓度。

摘要： 基质介导基因转染是以材料基质作为基因的承载平台,将基因/载体复合物通过物理吸附、静电相互作用、自组装等方式固定在基质表面.与传统转染方法相比,基质介导基因转染可实现基因在细胞周围环境的浓缩,具有细胞毒性小,时空可控性等优点,因此在基因治疗及基因功能研究领域有广阔的应用前景.选择具有光电效应的硅片作为固定基因的基质，希望利用可见光场作用下空穴对吸附在P区表面正电性的阳离子脂质体/基因的复合物的静电排斥作用促进基因的释放，从而增强基质介导基因转染。

摘要： 目的：探讨Latexin(Lxn)基因转染对CD133+Miapaca-2胰腺癌干细胞增殖的影响. 方法：通过磁珠分选的方法从miapaca-2胰腺癌细胞株中分选出CD133+胰腺癌细胞,在无血清培养基中观察CD133+Miapaca-2胰腺癌细胞自我更新能力及动物移植瘤成瘤能力.阳离子脂质体介导法将含Lxn基因质粒转染CD133+Miapaca-2胰腺癌细胞.RT-PCR及Westen-blot法检测转染后Lxn表达量.CCK8检测Lxn基因转染后对CD133+Miapaca-2胰腺癌细胞增殖的影响. 结果：成功分离CD133+Miapaca-2胰腺癌细胞,CD133+Miapaca-2胰腺癌细胞具有自我更新能力及高成瘤能力.RT-PCR及Westen-blot结果显示转染后Lxn在CD133+Miapaca-2胰腺癌细胞中的表达量明显增加(P＜0.05),且有明显的转染剂量依赖性;CCK8结果显示Lxn基因转染后CD133+Miapaca-2胰腺癌细胞增殖活性受到抑制,且抑制作用有明显Lxn转染浓度依赖性(P＜0.05). 结论：CD133+miapaca-2胰腺癌细胞具有肿瘤干细胞部分特性,Lxn基因转染对CD133+Miapaca-2胰腺癌干细胞增殖具有抑制作用.

摘要： 阳离子树形高分子广泛地用作非病毒基因载体,但目前,转染效率总是与细胞毒性相关联.在本研究中,通过一种简单易行的超分子策略,以低代数树形高分子为基础,设计高效、低毒的基因载体.利用三聚氰酸与DAT之间的特异性相互作用显著提高低代数树形高分子的基因转染效果,为设计高效低毒的非病毒基因载体提出了一种新的理念.

摘要： 目的：探讨超声靶向微泡破坏(UTMD)对小鼠骨骼肌基因转染的有效性,比较不同给药途径及报告质粒转染效率的差异.rn 方法：实验随机分为单纯质粒注射组(P)、质粒+微泡组(P+MB)、质粒+超声辐照组(P+US)、质粒+微泡+超声辐照组(P+UTMD)4组.将绿色荧光蛋白(GFP)质粒或红色荧光蛋白(RFP)质粒分别与微泡(或生理盐水对照)混合,将混合物分别予以局部注射(单侧鼠胫骨前肌)和尾静脉注射,进行或不进行超声辐照,辐照频率为3 MHz、声强为1.0 W/cm2,辐照2 min,7d后处死小鼠,分别取各组小鼠的肝、心、骨骼肌组织制备冰冻切片.应用激光共聚焦显微镜检测各组小鼠骨骼肌组织荧光蛋白质粒GFP、RFP的转染效率;分析P+UTMD组小鼠肝脏、心脏组织中的荧光素酶活性;苏木精-伊红(HE)染色观察P+UTMD组小鼠肝、心、骨骼肌组织的病理学改变;对比P+UTMD组小鼠局部肌肉注射和尾静脉注射时不同的给药途径下肝、心、骨骼肌组织基因转染的效果.rn 结果：单纯质粒注射组骨骼肌组织每个视野只有少数细胞表达RFP和GFP,表达率为(1.83±1.21)％、 (1.18±0.25)％,P+MB组和P+US组的RFP、GFP表达率与单纯质粒注射效果相当[(2.33±1.39)％、(3.42±1.09)％和(3.48±0.18)％、(2.52±0.33)％];而P+UTMD组RFP、GFP的表达率为(23.96±2.13)％和(25.69±1.98)％,显著高于其他三组(P＜0.05).P+UTMD组小鼠部分肝脏和心脏中均有较微弱的荧光表达,HE染色未发现UTMD对肝、心、骨骼肌组织造成明显的损伤,完整性良好,无感染、出血、水肿及细胞死亡.直接肌肉局部注射质粒联合UTMD能显著增强小鼠骨骼肌局部的基因转染,显著优于尾静脉注射(P＜0.05).rn 结论：UTMD可有效促进基因转移,局部注射联合UTMD能显著增强骨骼肌局部基因转染,是一种安全、高效的基因转染新技术.

摘要： 目的:探讨超声联合携抗ICAM-1阳离子微泡介导SDF-1α基因转染受损内细胞的效果.rn 方法:构建携SDF-1α基因-ICAM-1抗体-阳离子微泡的靶向微泡基因载体,实验分组:A组,靶向微泡基因载体组;B组:单纯阳离子微泡基因组;C组:单纯SDF-1α基因组;D组为空白对照.体外实验:人白细胞介素-1β刺激制备大量表达ICAM-1的血管内皮细胞模型,各组联合超声辐照介导基因转染后流式细胞仪测定基因转染率,PCR检测基因表达和Western Blot检测SDF-1α蛋白表达情况.体内实验:结扎冠状动脉前降支制备兔心肌梗死模型,超声辐照介导基因转染后取心肌组织石蜡切片,免疫组化染色,观察心肌组织SDF-1α的表达情况,Western Blot检测各组心肌SDF-1α蛋白表达,RT-PCR检测各组SDF-1αmRNA的表达.rn 结果:体外实验中流式细胞仪测得携SDF-1α基因-ICAM-1抗体-阳离子微泡的A组基因转染率26％,明显高于其他各组.在体内外实验中,A组:携SDF-1α基因-ICAM-1抗体-阳离子微泡组超声辐照介导基因转染后的hSDF-1α基因mRNA表达和hSDF-1α蛋白表达情况均高于其他各组,差异有统计学意义.rn 结论:当心肌梗死时,受损的微血管内皮细胞大量表达ICAM-1,而正常组织几乎不表达ICAM-1,所以用携抗ICAM-1的靶向微泡可特异识别且大量聚集黏附于受损内皮细胞上.联合超声的辐照使载基因微泡因"空化效应"而发生破裂,通过"声致孔隙"作用增加细胞膜通透性,加速细胞的内吞作用,将目的基因释放到被超声照射的靶组织中,促进基因转染.因此超声联合携抗ICAM-1阳离子微泡能增强SDF-1α基因转染受损内皮细胞.

摘要： 目的:通过超声靶向破坏阳离子微泡介导基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)基因转染治疗家兔心肌梗死并以声诺维微泡作为对照,探讨阳离子微泡对提高基因体内转染效率的价值.rn 方法:紫外分光光度法检测阳离子与声诺维微泡在体外的基因携带效率.构建家兔急性心肌梗死模型并分组:阳离子微泡组(超声靶向破坏携SDF-1α基因的阳离子微泡进行转染)、声诺维微泡组(超声靶向破坏携SDF-1α基因的声诺维微泡进行转染)和对照组(不转染).转染后3天从三组中各取3只家兔处死,ELISA检测目的基因蛋白表达情况;转染后4周行超声心动图和心肌超声造影检测三组家兔心功能及心肌灌注情况,之后处死动物,免疫组化检测心肌血管新生效应.rn 结果:1显微镜下阳离子及声诺维微泡均呈较为均一的圆形,平均直径分别为3.3μm和2.5μm;Malvem表面电位检测仪测量阳离子和声诺维微泡平均表面电位分别为+27mV和-31mV;2紫外分光光度计法计算阳离子和声诺维微泡携基因率分别为32％和3％,前者是后者的11倍;3阳离子微泡转染组、声诺维微泡转染组和对照组SDF-1α蛋白表达量分别为6.25±1.02ng/ml,1.55±0.66ng/ml,0.71±0.30ng/ml,阳离子微泡转染组SDF-1α蛋白表达量是声诺维组的4倍,对照组的9倍;4免疫组化结果显示阳离子微泡组CD31阳性染色明显高于声诺维组和对照组;5心梗模型建立后,三组家兔心功能均明显减低,三组之间无显著差异.与声诺维微泡组比较,治疗后4周阳离子微泡组较声诺维组及对照组左室容积减小,射血分数增高,差异有统计学意义(均P＜0.05).治疗4周后心肌声学造影显示阳离子微泡组梗死及周边区平均声强度亦高于声诺维微泡组和对照组,差异有统计学意义(均P＜0.05).rn 结论:本研究通过比较阳离子微泡与声诺维微泡介导基因转染发现阳离子微泡可更高效地将SDF-1α质粒携带至受损的心肌组织,提高基因的转染效率,促进血管新生,改善心功能,为超声微泡介导的基因治疗提供一种高效的微泡载体.

摘要： 目的:应用BMSCs构建的软骨组织经体内长期移植后逐渐出现血管侵入、矿化、形成骨组织.本研究观察了血管生成抑制因子ChM-I BMSCs体内构建软骨血管化的作用,为改善和提高BMSCs来源的软骨组织的表型稳定性提供新的方法.rn 方法:用RT-PCR的方法比较ChM-I基因在BMSCs和关节软骨细胞之间的表达差异.用RT-PCR的方法从兔的关节软骨组织中获得ChM-I基因克隆并构建高滴度的重组腺病毒Ad5-ChM-I.将转染重组腺病毒Ad5-ChM-I的BMSCs与珊瑚材料复合物移植到裸鼠皮下1～2个月后,通过大体标本、组织学观察研究体内构建的软骨组织的血管化的程度,分析软骨表型的变化.rn 结果:实验结果表明ChM-I在BMSCs中几乎不表达，而在软骨细胞中高表达，此外，两种细胞之间Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达也存在显著的差异;转染Ad5-ChM-I的BMSCs在体内形成的软骨组织的血管化程度很低，而BMSCs在体内形成的软骨组织逐渐出现血管化、骨化;免疫荧光结果显示，ChM-I在转染后的BMSCs形成的软骨组织中有一定的表达分布，而在未转染细胞形成的组织中无表达。rn 结论: ChM-I基因转染可以抑制BMSCs构建组织工程软骨的血管化，有益于维持软骨组织表型的稳定。

摘要： Bola型两亲性分子是指两个亲水头部基团连接在一条疏水链两端的一类分子.该结构能够在水溶液中自组装形成具有优良的稳定性和生物相容性的单分子层状的纳米囊泡.这种纳米结构可以有效地压缩基因大分子或囊封疏水药物小分子,使得这种Bola型的载体从纳米材料的合成到基因或药物传输都受到了越来越广泛的关注.细胞流式和共聚焦实验结果表明最高的细胞摄取效率和最强的内涵体逃逸能力是Lys-His高转染效率的主要原因。此外，这些两亲性分子单独自组装成的纳米囊泡可以有效地囊封疏水药物阿霉素(DOX)，并寻DOX运输到细胞内并释放，最终在细胞核周围以及细胞核内聚集（图1），从而诱导癌细胞的凋亡。Lys-His在基因转染和药物传输过程中都展现出最佳的性能，这类Bola型两亲性分子作为基因以及药物或二者共载的纳米载体有着良好的应用潜力。

摘要： 目的：探讨9型腺相关病毒介导血小板源性生长因子-BB(Platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)基因转染乳鼠心肌细胞的可行性、安全性及抗凋亡功能,以及评估该基因转染治疗急性心肌梗死的效果。方法：分离、培养及鉴定乳鼠心肌细胞，利用携带增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的9型腺相关病毒转染心肌细胞，通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测评估心肌细胞的转染表达高峰期及转染效率，并用AlamarBlue法评估AAV9-eGFP对心肌细胞的毒性作用。选用雄性C57BL/6小鼠90只，随机分成3组，其中正常对照组(25只)、单纯心梗组(35只)、基因转染治疗组(30只)，分别于心梗术后3天及6周，通过对各组心肌细胞的凋亡相关情况、心梗面积、血管密度、心功能等检测，以评估经AA V 9-PDGF-B B转染的疗效。结果：(1) AAV9-eGFP/AAV9-PDGF-BB转染心肌细胞后第5-6天基因表达高峰，转染效率约82.4±2.6%;Alamar Blue法显示不同时间点的各组心肌细胞的还原比率均接近于1.0。(2)经AA V 9-PDGF-B B转染的心肌细胞或心脏组织，可上调抗凋亡相关蛋白P-Akt, Bcl-2的表达，减少凋亡蛋白Bad, Bax及Caspase-3的活化表达;同时双氧水诱导凋亡或心梗后3天，经基因转染组的凋亡率明显低于对照组。结论：9型腺相关病毒可有效、安全地转染心肌细胞;经AA V 9-PDGF-B B转染的心肌细胞可减少双氧水诱导的细胞凋亡;经基因转染治疗后减少心梗面积、改善梗死后心脏的功能，可能与增加梗死后心肌细胞的存活、提高心脏的血管密度等有关。

摘要： 阳离子脂质体作为非病毒药物载体具有安全性好,可高效将多种药物(核酸、生长因子等活性分子)转入细胞中使其生物学活性不被破坏等优点.丝素蛋白生物相容性好且来源广泛,是药物缓释与组织再生支架的最佳原材料之一.本文旨在采用绿色环保的水溶液电纺技术制备具有强大诱导功能的丝素蛋白/脂质体复合超细纤维支架,以期应用于各种组织再生研究.利用静电纺丝技术制备出载有脂质体(包裹EGFP表达质粒)的丝素蛋白超细纤维,以扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)进行表征.通过本实验室首创的75％(v/v)乙醇蒸汽法对制备的丝素蛋白/脂质体超细纤维膜支架进行后处理,使丝素蛋白纳米纤维由亲水的无规卷曲结构转变为疏水的β-折叠结构.经无菌PBS清洗(以除去残余的酒精)的纤维膜支架置于24孔培养板,按1.5×104/孔接种MC3T3-E1细胞悬液于支架上培养36小时后,以MTT法和SEM考察察细胞的生长情况,激光共聚焦显微镜观察EGFP转染细胞的效果.通过脂质体技术和静电纺技术相结合的方式成功制备出丝素蛋白/脂质体超细纤维膜支架，该支架不仅具有优良的生物相容性，而且具有较高的药物递送效率，有望在基因转染与组织再生等领域获得较好的应用效果。

摘要： 本发明提供了一种转染NK细胞的基因和转染载体，属于基因工程技术领域，将ICasp9基因、T2A基因、IL15基因、T2A基因、NGFR基因、T2A基因和目的基因顺次串联。将本发明提供的转染NK细胞的基因连接到pCMV载体中，得到转染NK细胞的载体，将所述载体转染NK细胞后再经过药物筛选和流式筛选，得到表达目的基因的NK细胞，表达目的基因的NK细胞可以同时表达开关结构，在诱导物添加时即可引起自杀反应，防止了表达IL‑15的NK细胞长期存在，也可以在915NGFR细胞出现副作用时进行干预。

摘要： 本发明提供利用体内基因表达蛋白系统的转染剂进行体外转染的方法，包括如下步骤：第一步，对细胞进行接种，加完全培养基培养过夜；第二步，以体积比为1：3的比例将具有待表达的蛋白基因序列质粒和壳聚糖多聚赖氨酸聚合物混合，充分混匀；第三步，向第二步的混合液中加入培养基，充分混匀；第四步，将第三步中的混合液加入到第一步中细胞培养体系中，培养24h；第五步，更换培养基，持续观察48h至培养完毕。本发明的有益效果是：利用壳聚糖和多聚赖氨酸两者的特性，设计出来壳聚糖多聚赖氨酸共聚物，可以将DNA的细胞转染效率维持在80％左右，并且细胞保持一定的活率(98％)，转染试剂效率高，毒性小。

摘要： 本发明提供了一种转染NK细胞的基因和转染载体，属于基因工程技术领域，将ICasp9基因、T2A基因、IL15基因、T2A基因、NGFR基因、T2A基因和目的基因顺次串联。将本发明提供的转染NK细胞的基因连接到pCMV载体中，得到转染NK细胞的载体，将所述载体转染NK细胞后再经过药物筛选和流式筛选，得到表达目的基因的NK细胞，表达目的基因的NK细胞可以同时表达开关结构，在诱导物添加时即可引起自杀反应，防止了表达IL‑15的NK细胞长期存在，也可以在915NGFR细胞出现副作用时进行干预。

摘要： 本发明属于生物医用高分子材料领域，公开了一种细胞毒性低、转染效率高的非病毒基因转染载体材料及其制备方法与应用。本发明载体材料结构如通式(1)所示：

摘要： 本发明涉及一种利用精蛋白硫酸盐提高基因转染猪皮转染效率的方法，包括如下步骤：1)制备待转染的猪皮肤；2)使用浓度为500-10000μg/ml精蛋白硫酸盐对108PFU/ml Ad5重组腺病毒载体进行震荡混合，孵育后制备成转染液；3)将步骤2)制备的转染液对步骤1)制备的猪皮肤进行转染。本发明中精蛋白硫酸盐与Ad5重组腺病毒载体混合后转染猪皮肤细胞时，其携带的阳离子可中和腺病毒载体和细胞表面的阴离子，降低了腺病毒载体和细胞表面之间的静电排斥力，从而增加腺病毒载体与猪皮肤细胞的相互接触，提高腺病毒载体对猪皮肤的转染效率。

摘要： 本发明实施例公开了一种基因转染方法和基因转染装置，属于细胞生物学领域。本发明公开了一种基因转染方法，包括以下过程：提供超声发生器件和热发生器件，所述超声发生器件能发出超声波，所述热发生器件能直接对待转染生物体系加热；所述超声波和所述热发生器件同时激励所述待转染生物体系。本发明通过设置超声发生器件和热发生器件，使超声波和热量复合作用在待转染生物体系上，对待转染生物体系产生包括力学效应、空化效应、微流体效应等多种效应的复合作用，进一步缩短细胞转染所需的时间，对细胞造成更少的伤害，从而提高其转染后的存活率。

摘要： 本申请提供一种基因转染器和基因转染方法，该基因转染器具有：衬底；盖体，其以与所述衬底表面之间具有间隔而设置，所述盖体与所述衬底表面之间形成液体流动通道，所述液体流动通道用于使含有靶细胞和外源基因的溶液流动；加热单元，其形成于所述衬底表面，用于对所述液体流动通道中流动的所述溶液进行加热；其中，所述盖体具有开口，所述开口与所述加热单元的位置对应，所述开口供经所述加热单元加热后的所述溶液流出。根据本申请，能够提高基因转染的效率，并且降低基因转染的成本。

摘要： 本发明属于生物医药技术领域，通过使用一种通过细胞释放的纳米粒子NONPs来提高基因转染效率。该种纳米粒子广泛存在于生物体系以及细胞外的循环系统中，例如支气管肺泡灌洗液、体液、血液、唾液、牛奶或者尿液中。本发明将上述纳米粒子掺入非病毒基因转染载体，可以显著增加基因转染载体的DNA负载能力，同时又不会增加细胞毒性。经实验结果表明，从牛奶中提取的NONPs，掺入PEI基因转染载体，可在几乎不增加细胞毒性的情况下，显著提高基因转染效率。本发明的主要用途为基因转染试剂，可用于细胞生物学研究、生产基因转染制剂以及基因疗法等。

摘要： 本发明提供了一种提高基因载体转染效率和/或转染精度的转染辅助试剂及其应用，所述转染辅助试剂包括聚乙二醇和/或其衍生物。本发明创造性地利用聚乙二醇作为辅助试剂进行基因转染，发现：(1)聚乙二醇或其衍生物可显著提高基因载体对体外细胞的转染效率，其中包括一些基因载体无法转染的细胞；(2)聚乙二醇或其衍生物可显著提高基因载体对活体组织的转染效率，并促进基因载体在活体组织中局域表达，从而在目标组织中实现高效、精准转基因表达；(3)聚乙二醇或其衍生物可长期促进基因载体高效、精准转染活体组织，并不会在活体组织中引发显著的副作用，例如细胞凋亡、严重的免疫反应、动物行为功能显著改变。

摘要： 本发明属于生物医用高分子材料领域，公开了一种细胞毒性低、转染效率高的非病毒基因转染载体材料及其制备方法与应用。本发明载体材料结构如通式(1)所示：