构建血管内皮生长因子受体3逆转录病毒载体

摘要

目的:构建血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)逆转录病毒载体,并使其在HepG2入肝癌细胞内稳定表达。方法:采用PCR技术扩增VEGFR3片段,克隆至逆转录病毒载体质粒pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-puro-VEGFR3,经PCR、酶切、测序验证后,体外将重组质粒与PIK包装质粒共同转染人胚胎肾上皮细胞系293FT细胞,包装获得携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒,感染人肝癌HepG2细胞,获得转入VEGFR3的HepC2细胞,通过QPCR和Western blot进一步验证VEGFR3在HepG2细胞内的表达。结果:(1)成功获得携带VEGFR3基因的重组质粒pBABE-puro-VEGFR3和人肝癌细胞株HepG2-pBABE-puro-VEGFR3;(2)QPCR和Western blot分别检测到VEGFR3在靶细胞HepG2-pBABE-puro-VEGFR3中的表达。结论:成功构建了携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒载体,携带VEGFR3的靶细胞(HepG2-pBABE-puro-VEGFR3)能够稳定表达VEGFR3蛋白。