副溶血弧菌

摘要： 近几年,鱼类人工养殖已经形成规模化和集约化的养殖模式。在银鲫养殖中,细菌性疾病已成为常见疾病,其发生概率逐年增高,严重影响银鲫的经济效益。银鲫养殖中常见的病原菌主要有荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌和副溶血弧菌等。鱼菌清主要的成分为盐酸环丙沙星盐酸小檗碱预混剂,对革兰氏阴性菌和球菌均有效,包括铜绿假单胞杆菌、克雷伯氏菌、大肠杆菌、耶尔森氏菌、沙雷氏菌和弧菌等多数菌株。分别采用体外抑菌和体内治疗的方法,以验证鱼菌清对银鲫细菌性疾病的治疗效果,为银鲫细菌性疾病的综合防控提供参考依据。

摘要： 以副溶血弧菌的群体感应(quorum sensing,QS)为靶标,研究戊糖乳杆菌DF9的乙酸乙酯提取物作为群体感应抑制剂(QS inhibitor,QSI)对其的淬灭效果。在确定DF9-QSI对副溶血弧菌和哈维氏弧菌BB170生长影响的基础上,探讨亚抑菌浓度的DF9-QSI对副溶血弧菌QS信号分子AI-2的活性、动力(群集、泳动和蹭行)、生物被膜形成和胞外多糖合成的影响。结果表明,当DF9-QSI≤0.8 mg/mL时,其不影响副溶血弧菌的生长,且可有效降低其AI-2活性,抑制副溶血弧菌的运动、生物被膜形成及胞外多糖的产生,呈现浓度依赖性。三种显微结果(光学显微镜、扫描电镜和激光共聚焦显微镜)联合表明DF9-QSI对副溶血弧菌生物被膜的破坏作用。因此,本研究发现DF9-QSI具有良好的AI-2类QS淬灭活性,为开发一种新型、有效的乳酸菌源QSIs提供理论依据,也为控制副溶血弧菌QS系统提供潜在的微生物资源。

摘要： 抗菌肽是无脊椎动物非特异性免疫系统中重要的免疫因子,抗菌肽具有良好且广谱的抗菌活性,并且不易产生耐药性,有望替代传统抗生素药物发挥功能。甲壳素(Crustin)是目前甲壳类动物中研究比较广泛的一类抗菌肽家族。研究鉴定了来自克氏原螯虾(Procambarus clarkii)中的一种新型Crustin基因,命名为Pc-CruL。通过Pc-CruL抵抗病原性细菌的免疫防御反应的初步探究,发现Pc-CruL对克氏原螯虾的天然免疫系统至关重要,为深入研究克氏原螯虾奠定了一定的基础,在克氏原螯虾的人工养殖过程中的疾病的预防和治疗中具有一定的指导意义且提供了一定的理论基础。Pc-CruL包含330 bp,编码109个氨基酸,与已知的克氏原螯虾甲壳素同源性较低,为Ⅰ型甲壳素蛋白家族新成员。Pc-CruL在健康的克氏原螯虾的血淋巴、鳃、肠道、胃、心和肝胰腺中均存在,在血淋巴中的含量最高,而在肝胰腺中含量最低。同时进行了体外抑菌实验,结果表明Pc-CruL重组蛋白显著地抑制了几种常见的病原性细菌的生长,具有良好的广谱抑菌活性。体内实验表明,对健康的克氏原螯虾注射Pc-CruL重组蛋白可以保护克氏原螯虾,在副溶血弧菌感染后,提高存活率。Pc-CruL是克氏原螯虾中关键的免疫因子,在克氏原螯虾抵抗外界病原菌入侵和感染过程中起着重要的作用。

摘要： 目的通过优化粪便的分离培养方法,提高沙门菌、志贺菌和副溶血弧菌的检出率。方法分别对沙门菌、志贺菌和副溶血弧菌在不同放置温度(包括4°C和25°C、常温)、不同放置时间(0 h、2 h、3 h和6 h)及不同肉汤增菌时间(0 h、8 h、12 h和24 h)等实验条件下进行培养,记录检出率。结果将沙门菌、志贺菌、副溶血弧菌三种病原菌在4°C和25°C放置2 h,其检出率(95%和90%、60%和50%、85%和95%)比较差异均无统计学意义(P>0.05);将三种病原菌分别于常温放置0 h、2 h、3 h和6 h,沙门菌和副溶血弧菌的检出率无明显变化,志贺菌的检出率分别为75%、55%、20%、5%,呈下降趋势;三种病原菌增菌前(0 h)检出率均为0,增菌8 h、12 h和24 h,沙门菌的检出率分别为90%、90%和95%,志贺菌的检出率分别为50%、20%和5%,副溶血弧菌的检出率均为95%,增菌后检出率均有升高;使用沙门志贺肉汤,沙门菌的适宜增菌时间为8~24 h,志贺菌为8 h,使用碱性蛋白胨水,副溶血弧菌的适宜增菌时间为8~24 h;志贺菌在三组实验中的检出率均较低。结论粪便经增菌肉汤增菌至适宜时间接种选择性显色平板可显著提高沙门菌、志贺菌和副溶血弧菌的检出率;4°C或25°C放置,6 h内直接接种选择性平板,适用于沙门菌和副溶血弧菌菌量大于10^(6) cfu/mL的粪便样本;培养志贺菌不宜单独使用麦康凯琼脂平板。

摘要： 为探究引起天津某养殖场线纹海马发病死亡的病因,从患病线纹海马肝胰脏分离得到一株优势菌Par-1,经细菌形态学观察、生理生化特征检测、16S rRNA测序及系统进化树分析等方法确定其种。形态学观察及生理生化检测结果表明,Par-1为短小、弯曲呈弧状的革兰氏阴性菌,发酵葡萄糖产酸不产气,赖氨酸脱羧酶、硝酸盐还原等为阳性;菌株所扩增的16S rRNA基因序列长度为1418 bp,与副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的同源性达99%~100%,从而鉴定该菌株为副溶血弧菌。人工感染试验结果表明,其对线纹海马的半数致死量(LD_(50))为5.01×10^(6)CFU/mL。药敏试验结果显示,该菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢噻肟、阿齐霉素、诺氟沙星、链霉素、四环素等22种药物敏感。本研究为防治天津地区线纹海马细菌性病害提供参考。

摘要： 从西宁市5个市场采集鱼、虾各30份样品,通过常规的细菌分离技术分离到副溶血弧菌6株,其平均检出率为10%。药敏试验结果显示分离所得副溶血弧菌对卡那霉素、庆大霉素、复方新诺明等出现高度敏感;对头孢拉啶、头孢唑啉出现中度敏感;对氨苄西林、青霉素不敏感。

摘要： 目的调查分析某大型婚宴食物中毒暴发事件发生的原因,预防此类事件的发生。方法对事发饭店进行现场卫生学调查和采样检测。制定病例定义,在附近医院搜索病例,从发现的患者中抽取一定数量的病例为病例组,在与患者有共同就餐史的家属、朋友中选择未发病者为对照组,开展问卷调查,进行病例对照分析发病的影响因素。结果本次食物中毒事件同期暴露人数1270人,发病190例,罹患率为14.9%。共纳入病例组90例和对照组90人进行病例对照分析,患者的临床表现中以腹泻、腹痛、恶心、呕吐和发热等为主;婚宴上的"元宝扣蹄花"为中毒的危险因素(OR值为5.80,95%CI为2.80-12.00)。实验室检测158份样品,有5份副溶血弧菌阳性。结论本次食物中毒暴发事件由被副溶血弧菌污染食品引起,建议酒店加强厨房硬件建设和卫生管理,防止生熟食品交叉污染,食物过餐存放后要彻底加热才能食用。

摘要： 海水贝类养殖产业在海水养殖总产量中名列前茅。在贝类养殖业不断发展的过程中,贝类常受到严重的病害影响,导致贝类养殖过程中发生大批的死亡,制约着贝类养殖业的发展。在贝类的养殖中,常见的微生物疾病种类包括四类:细菌性、病毒性、真菌性、原核生物样微生物疾病。本文分别对四类疾病中的典型疾病副溶血弧菌病、牡蛎疱疹病毒病、壳病以及立克次体样微生物导致的疾病进行介绍。

摘要： 采用高效液相色谱法对黄连提取物中的主要化学成分进行鉴定。采用牛津杯法和试管法测定黄连提取物抗副溶血弧菌的活性。采用生长曲线法、紫外吸收法、电导率法和碱性磷酸酶法解析黄连提取物抗副溶血弧菌的作用机理。结果表明黄连提取物中主要含表小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱等5种化合物,其中,小檗碱和表小檗碱为黄连提取物中主要的抗副溶血弧菌活性化合物。黄连提取物对副溶血弧菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为1.0mg/mL和2.0mg/mL。黄连提取物通过增加细胞壁和细胞膜的通透性、破坏细胞膜的完整性,抑制副溶血弧菌的增殖,且抑制效果同提取物浓度呈正相关。研究结果为进一步探索黄连提取物作为天然生物防腐剂在食品保藏中的应用提供了依据。

摘要： 该研究旨在探讨原儿茶酸对副溶血弧菌的抑菌活性和减毒作用,揭示原儿茶酸抑菌的作用机制。通过测定最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)、生长曲线、核酸与蛋白质泄漏量、丙二醛(MDA)含量,利用扫描电镜观察副溶血弧菌形态的变化,来评估原儿茶酸对副溶血弧菌的抑菌活性及其对细胞膜完整性和通透性的影响。同时,通过检测亚抑菌浓度(Sub-inhibitory Concentrations,SICs)下原儿茶酸对副溶血弧菌毒力因子合成的影响,研究原儿茶酸对副溶血弧菌的毒力衰减作用。实验结果表明,原儿茶酸的MIC为2 mg/mL,经MIC浓度原儿茶酸处理后,副溶血弧菌发生严重内陷和破裂,上清液中核酸、蛋白质、MDA含量分别是对照组的2.65倍、1.94倍和10.05倍。此外,原儿茶酸在浓度为1/4 MIC时对胞外多糖、胞外蛋白酶、生物被膜的抑制率分别为40.57%、19.79%和26.04%,在浓度为1/2 MIC时的抑制率分别为52.85%、28.38%和34.69%。原儿茶酸主要作用于细胞膜,通过影响细胞膜的完整性和通透性抑制副溶血弧菌的生长,在亚抑菌浓度下便可有效减弱副溶血弧菌毒力。

摘要： 本文对副溶血弧菌生物菌膜(Vibrio parahaemolyticus Biofilm)的形成过程、生长影响因素及防治措施等进行了介绍,旨在更系统全面地了解副溶血弧菌生物菌膜的性质与特性,以期为防治由副溶血弧菌引起的食源性疾病提供理论基础。

摘要： 针对副溶血弧菌常见的毒力基因(toxR、Collagenase、toxS、trh、tdh、tlh、UreR、FlaA、ompW、AspA、fur),建立了两套六重PCR检测体系,应用于副溶血弧菌环境分离株和水产品分离株的毒力基因分布情况调查.在229株副溶血弧菌中,毒力相关基因FlaA、ompW和fur的分布最广(100％),其次为AspA(99.56％),toxR、Collagenase、toxS和tlh的分布率均在90％左右并具有较高的相关性,UreR的分布极少(1.31％),而trh和tdh这229株副溶血弧菌中没有分布.本研究所建立的多重PCR 检测体系能快速、高效地检测多个毒力基因的分布特征为副溶血弧菌的毒力机制研究和风险评估提供方法和依据.

摘要： 根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计了1对特异性引物,建立了副溶血弧菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,进行了标准曲线的建立,并对所建立方法进行了特异性和灵敏度测试。结果表明所建立的荧光定量PCR扩增效率E=100％,R2=0.996,最低检出量为2.14个拷贝;该方法仅能检出副溶血弧菌,而不能检测出溶藻弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌、沙门氏菌、枸橼酸杆菌没有交叉反应,具有很好的特异性。并且将结果与普通PCR进行比较,发现同条件下本方法的灵敏度比普通PCR高10倍。经临床检测,从100份进口冷冻带鱼、鱿鱼和墨鱼等中检出3份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法符合率100％。表明已成功建立了特异灵敏的副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。本试验方法的建立对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。

摘要： 副溶血弧菌广泛存在于海洋环境,引起水生动物疾病,是污染海产品的主要致病菌,也是我国食物中毒病的主要病原之一.本文结合本实验室的工作和国内外研究现状,概要叙述副溶血弧菌在食品中的污染、分子多样性与流行特征、Ⅵ型分泌系统功能等方面的研究进展.

摘要： 为建立多重PCR方法用于同时快速检测海产品中的副溶血弧菌和溶藻弧菌，本研究根据副溶血弧菌(vP)和溶藻弧菌(vA)的toxR基因序列应用Primer Premier6.0设计了针对这2种细菌的2对特异性引物，建立了能快速同时检测这两种细菌的多重PcR方法，并对该反应体系的特异性和灵敏度进行分析。结果显示纯培养细菌的检测灵敏度分别为VP 2．32×103cfu/mL和VA2.56×103cfu/mL，临床病料检测灵敏度分别可达VP2cfu/mL，和vA 3cfu/mL;与枸橼酸杆菌、沙门氏菌、美人鱼弧菌、霍乱孤菌、麦氏弧菌没有交叉反应。研究表明本实验方法操作简便快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好，并且经济实惠每个PCR反应成本不到1元，值得推广应用。

摘要： 目的：本研究旨在建立评价副溶血性弧菌毒力的小鼠模型,为研究副溶血性弧菌的致病机制奠定基础.rn 材料方法：将不同剂量的RIMD210633菌液经腹腔感染4-5周龄雌性Balb/c小鼠,注射剂量分别为109、108、107、106CFU/只,观察小鼠的症状及死亡数,以确定最佳感染量;然后将不同盐分浓度(2％NaCl和0.5％NaCl)下培养的RIMD2210633菌以最适浓度经腹腔感染小鼠,以确定最佳盐分浓度;在上述最优条件下,比较RIMD2210633株和S251株的小鼠致死毒性,同时通过PCR方法比较两株菌的基因型特征.rn 结果：高盐(2%NaCl)条件下培养的标准强毒株RIMD2210633，经腹腔感染107CFU/只的菌量，小鼠的存活率为20-30%．而环境分离株S251的小鼠存活率为l00%。同时两株菌的基因型特征分别为(toxR+,PGS+,tdh+,trh-)和（toxR+,PGS-,tdh-,trh-）。rn 结论：建立了评价副溶血弧菌毒力的实验小鼠模型，并将其应用于不同盐分浓度培养的强毒株与环境无毒株的毒力比较实验。结果可得RIMD2210633株的小鼠致死毒力远远强于S251株，这与基因水平上的预测结果相符。

摘要： 副溶血弧菌引发食物中毒的规模呈明显的上升趋势，目前已超过沙门氏菌食物中毒，跃居首位。因此需要从多方面加强检测，以防止该菌对食品造成的大面积污染，保证人们的身体健康。为此本文全面介绍了副溶血弧菌的各种检测方法，包括：传统方法，免疫学方法，分子生物学技术，传感器技术等，为副溶血弧菌的检测提供理论依据。

摘要： 本研究应用兔抗V.parahaemolyticus IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线，羊抗兔IgG包被对照线，胶体金标记兔抗V.par小aemolyticus IgG-1，建立了检测副溶血弧菌(V.parahaemolydcus)的免疫金层析试纸条法(IGcA)。结果表明，阳性者试纸条检测线和对照线均出现红色线，实验过程仅需5—15min即可判断结果，该法对V.parahaemolyticus的最低检测量为3.60×10cfu/Ml，与溶藻弧菌、霍乱弧菌、美人鱼弧菌、麦氏弧菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门菌等常见肠道菌不发生交叉反应。将试纸条4°C存放6个月、常温存放3个月，37°C存放1个月，检测结果无差异。说明建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强和稳定性好，结果容易观察和判断，非常适于基层养殖部门应用。

摘要： 为建立多重PCR方法用于同时快速检测海产品中的副溶血弧菌和溶藻弧菌,本研究根据副溶血弧菌(VP)和溶藻弧菌(VA)的toxR基因序列应用Primer Premier 6.0设计了针对这2种细菌的2对特异性引物,建立了能快速同时检测这两种细菌的多重PCR方法,并对该反应体系的特异性和灵敏度进行分析.结果显示纯培养细菌的检测灵敏度分别为VP 2.32×103 cfu/mL和VA 2.56×103cfu/ mL,临床病料检测灵敏度分别可达VP 2cfu/mL和VA 3cfu/mL；与枸橼酸杆菌、沙门氏菌、美人鱼弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌没有交叉反应.研究表明本实验方法操作简便快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好,并且经济实惠每个PCR反应成本不到1元,值得推广应用.

摘要： 应用兔抗V.parahaemolyticus IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,羊抗兔IgG包被对照线,胶体金标记兔抗V.parahaemolyticus IgG-1制成检测试纸条,建立了检测副溶血孤菌(V.parahaemolyticus)的免疫金层析试纸条法(IGCA).结果表明,阳性者试纸条检测线和对照线均出现红色线,实验过程仅需5-15min即可判断结果,该法对V.parahaemolyticus的最低检测量为3.60×104cfu/mL,与溶藻孤菌、霍乱弧菌、美人鱼孤菌、麦氏孤菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门菌等常见肠道菌不发生交叉反应.将试纸条4°C存放6个月、常温存放3个月,37°C存放1个月,检测结果无差异.说明建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强和稳定性好,结果容易观察和判断,非常适于基层养殖部门应用.

摘要： 本发明涉及一种以具备特异性杀灭副溶血弧菌的能力并具有用序列号1标示的基因组为特征的从自然界分离的肌尾噬菌体科噬菌体Vib‑PAP‑5(保藏号KCTC 13029BP)及利用以其为有效成分包含的组合物防止副溶血弧菌感染及治疗副溶血弧菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然界中分离并且可特异性地杀灭副溶血弧菌细胞的短尾噬菌体Vib‑PAP‑2(保藏编号为KCTC 12910BP)以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗副溶血弧菌感染的方法，所述噬菌体具有由SEQ ID NO:1的核苷酸序列表示的基因组。

摘要： 本发明涉及一种从自然界中分离并且可特异性地杀灭副溶血弧菌细胞的短尾噬菌体Vib‑PAP‑1(保藏编号：KCTC 12817BP)以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗副溶血弧菌感染的方法，所述噬菌体具有由SEQ ID NO:1的核苷酸序列表示的基因组。

摘要： 本发明涉及一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影疫苗制备，该菌影疫苗最终以冻干粉的形式保存，其制备过程如下：构建裂解质粒pJSL20；构建Ara和IPTG双控诱导外膜蛋白及裂解E蛋白表达质粒pJSL24；将pJSL24通过三亲结合方式转入副溶血弧菌SD菌株中，命名为rVP；rVP表达外膜蛋白后进行裂解得rVPG，并制作冻干粉；除此之外，实验中，以斑马鱼为模型，探究了VPG的免疫效果；实验证明VPG有良好的安全性，并且VPG免疫的斑马鱼在一定程度上可抵御副溶血弧菌和溶藻弧菌的感染。故本发明涉及的rVPG疫苗为VPG疫苗的加强型疫苗。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的肌尾噬菌体科噬菌体Vib‑PAP‑7(登录号：KCTC 13247BP)，其具有杀灭副溶血弧菌的能力，并且具有由SEQ ID NO:1表达的基因组，以及使用一种包含肌尾噬菌体科噬菌体Vib‑PAP‑7作为活性成分的组合物来预防或治疗由副溶血弧菌引起的疾病的方法。

摘要： 本发明涉及一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影疫苗制备，该菌影疫苗最终以冻干粉的形式保存，其制备过程如下：构建裂解质粒pJSL20；构建Ara和IPTG双控诱导外膜蛋白及裂解E蛋白表达质粒pJSL24；将pJSL24通过三亲结合方式转入副溶血弧菌SD菌株中，命名为rVP；rVP表达外膜蛋白后进行裂解得rVPG，并制作冻干粉；除此之外，实验中，以斑马鱼为模型，探究了VPG的免疫效果；实验证明VPG有良好的安全性，并且VPG免疫的斑马鱼在一定程度上可抵御副溶血弧菌和溶藻弧菌的感染。故本发明涉及的rVPG疫苗为VPG疫苗的加强型疫苗。

摘要： 本发明涉及一种从自然界分离的肌尾噬菌体科噬菌体Vib‑PAP‑4(登录号：KCTC 13168BP)，其具有特异性杀灭副溶血弧菌的能力，并且其包括由SEQ.ID.NO:1表达的基因组，并且涉及一种使用包含其作为活性成分的组合物来预防和治疗副溶血弧菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种以具备特异性杀灭副溶血弧菌的能力并具有用序列号1标示的基因组为特征的从自然界分离的肌尾噬菌体科噬菌体Vib‑PAP‑5(保藏号KCTC 13029BP)及利用以其为有效成分包含的组合物防止副溶血弧菌感染及治疗副溶血弧菌感染的方法。

摘要： 本发明提供了一种利用烈性副溶血弧菌噬菌体快速鉴定副溶血弧菌的方法及试剂盒，属于副溶血弧菌菌种鉴定技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将浓度为107～109cfu/mL待检菌种涂布于LB琼脂平板上，静置15～20min，获得待检平板；2)将烈性副溶血弧菌噬菌体混合液滴加至待检平板上，获得鉴定体系；3)将步骤2)中获得的鉴定体系置于28～35°C，静置培养8～16h，观察鉴定体系如果有噬菌斑出现，待检菌种鉴定为副溶血弧菌。本发明所述的方法成本低，省时省力，所需时间仅为16～18h，尤其适于大量副溶血弧菌的初步筛选。

摘要： 本发明涉及一种从自然界中分离并且可特异性地杀灭副溶血弧菌细胞的短尾噬菌体Vib‑PAP‑1(登录号：KCTC 12817BP)以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗副溶血弧菌感染的方法，所述噬菌体具有由SEQ ID NO:1的核苷酸序列表示的基因组。