脂肪干细胞

摘要： 背景:生长激素具有免疫调节、促进细胞增殖及蛋白合成等生理作用,已被证实可以促进急慢性创面愈合。目的:构建过表达生长激素的脂肪干细胞系(生长激素-脂肪干细胞),并探究其对成纤维细胞增殖迁移能力的影响及其分子机制。方法:①体外分离并鉴定脂肪干细胞;②构建生长激素过表达慢病毒,将脂肪干细胞分为生长激素组、空载组、对照组,以上3组分别转染生长激素过表达慢病毒、空载慢病毒或不进行传染;③RT-qPCR、Western blot、ELISA检测各组细胞内及上清中生长激素的mRNA和蛋白表达、ERK1/2通路相关基因的表达情况;④划痕实验和Transwell实验、MTS实验检测生长激素组和空载组细胞对成纤维细胞的迁移和增殖能力的影响、RT-qPCR检测生长激素-脂肪干细胞与成纤维细胞共培养后成纤维细胞内相关基因的表达变化;⑤ERK抑制剂抑制生长激素组细胞后,观察其与成纤维细胞共培养后成纤维细胞内相关基因的表达变化。结果与结论:①分离并鉴定脂肪干细胞,成功构建生长激素-脂肪干细胞系;②生长激素组细胞内生长激素的mRNA和蛋白表达较空载组和对照组显著升高(P<0.01),且上清中生长激素浓度更高;生长激素组细胞内ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达上调;③生长激素组较空载组促成纤维细胞迁移和增殖能力增强(P<0.05);④生长激素-脂肪干细胞与成纤维细胞共培养后成纤维细胞内基质金属蛋白酶2基因表达下调,Ⅰ型胶原蛋白基因表达上调,Ⅲ型胶原蛋白基因表达无显著变化;⑤抑制生长激素-脂肪干细胞内ERK蛋白后,成纤维细胞内上述基因mRNA表达差异消失;⑥结果表明,慢病毒转染法构建过表达生长激素的脂肪干细胞效率较高,且该细胞可持续分泌生长激素并促进成纤维细胞增殖迁移,该生理作用可能与上调细胞内ERK1/2信号通路有关。

摘要： 背景:相关研究表明双相磷酸钙可有效重建骨质疏松症伴颅骨极量缺损动物模型的骨质缺损,另有研究展望了脂肪干细胞在骨质疏松性骨折及其继发骨缺损防治中的潜在应用前景,课题组前期研究结果表明,相较于正常脂肪干细胞,骨质疏松症小鼠脂肪干细胞(osteoporosis adipose-derived stem cells,OP-ASCs)的体外增殖能力及成骨分化潜能显著降低。目的:探讨OP-ASCs结合双相磷酸钙对骨质疏松症小鼠颅骨极量缺损的重建效果。方法:18只C57BL/6雌性小鼠随机均分为3组:空白组、双相磷酸钙组、OP-ASCs/双相磷酸钙组,建立骨质疏松症小鼠颅骨极量缺损模型,空白组不植入材料,另两组分别植入双相磷酸钙、OP-ASCs/双相磷酸钙复合体。各组于第8周及12周分别处死3只小鼠,采用Micro-CT、苏木精-伊红染色、Masson染色检测其颅骨缺损部位骨形成差异。结果与结论:①术后第8周及第12周,空白组仅在颅骨缺损边缘可见少量新生骨组织,而另两组颅骨缺损部位可见明显新生骨组织,且OP-ASCs/双相磷酸钙组新生骨组织明显多于双相磷酸钙组(P<0.05);②第12周,双相磷酸钙组及OP-ASCs/双相磷酸钙组新生骨组织均明显多于第8周(P<0.05),且第12周OP-ASCs/双相磷酸钙组新生骨组织与双相磷酸钙组的差距较第8周更为明显(P<0.05);③结果表明,OP-ASCs/双相磷酸钙复合体对骨质疏松症小鼠颅骨极量缺损具有良好的重建效果,且重建效果较单纯双相磷酸钙更佳。

摘要： 背景:颊脂垫常用于修复口腔颌面部缺损,其能使口腔黏膜快速上皮分化.由于缺损创面暴露于唾液中,因而认为唾液可能促进颊脂垫中的脂肪干细胞上皮化.目的:探讨唾液体外诱导促进兔脂肪干细胞上皮分化的可行性.方法:取两三个月龄的新西兰大白兔脂肪组织,分离、培养脂肪干细胞并传代.将第3代脂肪干细胞分为3组,即阴性对照组、表皮生长因子组与唾液组,后两组采用10μg/L表皮生长因子、15％唾液来诱导脂肪干细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,诱导7,14 d采用免疫荧光、RT-PCR检测细胞角蛋白19的表达.结果 与结论:①唾液诱导后脂肪干细胞形态由长梭形逐渐变为短梭形,甚至不规则的扁圆形;②诱导7,14 d,表皮生长因子组、唾液组细胞角蛋白19呈阳性表达,均高于阴性对照组,且诱导14 d细胞角蛋白19的表达量明显高于诱导7 d;③诱导7,14 d,表皮生长因子组、唾液组细胞角蛋白19的mRNA表达量均高于阴性对照组(P<0.01),且诱导14 d的表达量要显著高于诱导7 d(P<0.01);④结果表明,唾液在一定程度上能促进脂肪干细胞向上皮分化.

摘要： 背景:脂肪干细胞来源广泛、易于获取,人脂肪组织来源的干细胞进入分化骨细胞涉及基因表达的变化主要受miRNA和转录因子调节,但调节脂肪干细胞成骨分化的转录因子-miRNA-mRNA调控网络尚未建立.目的:筛选脂肪干细胞成骨分化过程中的差异表达基因、差异表达miRNA及转录因子,探讨脂肪干细胞成骨分化过程中的转录因子-miRNA-mRNA调控网络及其潜在的靶基因、miRNA和转录因子.方法:从GEO数据库获取3张芯片(GSE37329,GSE63754 mRNA数据芯片2张,GSE72429 miRNA数据芯片1张),筛选差异表达基因和差异表达miRNA;差异表达基因进行PPI网络、GO功能和KEGG信号通路分析;随后差异表达基因预测上游miRNA,差异表达miRNA预测转录因子,通过Cytoscape3.7.1软件构建转录因子-miRNA-mRNA网络图.结果 与结论:筛选出86个差异表达基因(26个上调,60个下调)、16个差异表达miRNA(10个上调,6个下调);PPI网络中蛋白互作共表达的占76.52％,协同定位的占8.69％;GO功能富集分析主要在对经典Wnt信号通路的负调控、软骨发育的负调控等功能相关,KEGG信号通路涉及酪氨酸代谢、脂肪酸降解等信号通路;差异表达基因预测到11381个miRNA及差异miRNA预测到55个转录因子,构建转录因子-miRNA-mRNA调控网络.脂肪干细胞成骨分化过程中的关键基因可能是PODXL、SEMA3D、ADGRG6、LGR4、LPL、CADM3、GRIA1、GPM6B、RERG、APCDD1和NRCAM,重要的miRNA有hsa-miR-502-3p、hsa-miR-762和hsa-miR-1275,核心转录因子是CTCF、TAL1、STAT2、STAT1和TCF3.结果 显示,通过生物信息学技术和数据库挖掘等方法构建的转录因子-miRNA-mRNA调控网络,为脂肪干细胞成骨分化的深入研究提供潜在的治疗靶标.

摘要： 背景:随着脂肪干细胞的广泛应用,探寻其应用调控机制,有利于拓宽材料的选择.目的:探讨脂肪干细胞移植对老年小鼠脂肪组织免疫微环境的影响及其在衰老相关性肥胖中的作用机制.方法:分离纯化得到小鼠脂肪干细胞,通过腹腔注射移植到18月龄老年小鼠体内,腹腔注射等量PBS的18月龄老年小鼠作为老年对照组,腹腔注射等量PBS的2月龄小鼠作为青年对照组.移植4周后,记录各组小鼠食物摄取量、体质量变化,流式细胞术分析脂肪、脾、骨髓、外周血中免疫细胞丰度变化,qRT-PCR、ELISA检测脂肪组织和血清中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平.结果 与结论:①与老年对照组比较,脂肪干细胞移植组老年小鼠体质量降低了(1.94±0.26)g;②流式细胞术丰度分析结果显示,脂肪干细胞移植组老年小鼠中髓源抑制细胞丰度减少,T细胞丰度增加,B细胞和NK细胞丰度趋向青年对照组发展;③qRT-PCR和ELISA实验结果显示,脂肪干细胞移植组老年小鼠脂肪组织和血清中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达水平显著下调;④结果表明,脂肪干细胞移植能够通过对老年小鼠免疫微环境的调控来抑制炎症衰老小鼠肥胖的发生.

摘要： 背景:组织工程的发展为临床骨缺损治疗提供了新方法,但组织工程骨形成缓慢、血管化缓慢等问题一直存在.已有研究表明血管内皮细胞和脂肪干细胞联合培养体系修复骨缺损能力优于单种细胞.成纤维细胞具有优良增殖能力、分泌合成胶原能力,包含多种调控因子,可向成骨分化,具有成为优良种子细胞参与构建组织工程骨的潜力.目的:探讨成纤维细胞、血管内皮细胞和脂肪干细胞联合培养对脂肪干细胞增殖和成骨分化的影响.方法:①将细胞分为4组:脂肪干细胞组、脂肪干细胞+血管内皮细胞共培养组、脂肪干细胞+成纤维细胞共培养组、脂肪干细胞+血管内皮细胞+成纤维细胞共培养组,倒置显微镜下观察细胞的形态变化;②共培养第1,3,5,7,9天,采用CCK-8法检测各组脂肪干细胞增殖情况并绘制生长曲线;③共培养第7,14,21,28天,各组脂肪干细胞进行茜素红染色、碱性磷酸酶染色;④共培养第3周,采用Western blot检测各组脂肪干细胞中骨形态发生蛋白2的表达水平.结果 与结论:①培养14 d时,脂肪干细胞+血管内皮细胞+成纤维细胞共培养组部分细胞融合成团块状,呈巢状分布,而脂肪干细胞组细胞形态单一,未见细胞团出现;②各组细胞生长曲线形态基本相同,细胞吸光度值逐渐升高,脂肪干细胞+血管内皮细胞+成纤维细胞共培养组吸光度值最高,脂肪干细胞+血管内皮细胞共培养组次之,其次是脂肪干细胞+成纤维细胞共培养组;③共培养第28天时茜素红染色,各组细胞均有红色阳性细胞,以脂肪干细胞+血管内皮细胞+成纤维细胞共培养组最多,脂肪干细胞组最少.共培养第28天时碱性磷酸酶染色,各组细胞均有红色阳性颗粒,以脂肪干细胞+血管内皮细胞+成纤维细胞共培养组和脂肪干细胞+成纤维细胞共培养组最多,脂肪干细胞组最少;④各组细胞均有骨形态发生蛋白2表达,以脂肪干细胞+成纤维细胞共培养组和脂肪干细胞+血管内皮细胞+成纤维细胞共培养组较明显;⑤结果表明,体外共培养条件下成纤维细胞促进脂肪干细胞成骨分化的能力比血管内皮细胞强,但促增殖效果不如血管内皮细胞;成纤维细胞联合血管内皮细胞与脂肪干细胞共培养体系促进脂肪干细胞大量增殖、快速高效向成骨细胞分化的能力最强.

摘要： 背景:3D打印的聚乳酸-羟基乙酸/羟基磷灰石支架因其个性化的外型、优异的生物相容性和骨传导性,被广泛应用于临界骨缺损修复,然而由于支架内部缺乏早期的血管供应,植入后对骨组织再生会产生不利影响.目的:验证负载去铁胺的聚乳酸-羟基乙酸/羟基磷灰石复合支架的成骨与成血管作用.方法:采用低温3D打印技术分别构建聚乳酸-羟基乙酸/羟基磷灰石复合支架(对照支架)与负载去铁胺的聚乳酸-羟基乙酸/羟基磷灰石复合支架(实验支架),表征支架的微观形貌与体外降解性能,同时检测负载去铁胺的聚乳酸-羟基乙酸/羟基磷灰石复合支架的去铁胺缓释性能.将大鼠脂肪干细胞分别接种于两组支架上,以接种培养板的细胞为对照,分别进行细胞骨架观察、细胞增殖实验、活死细胞染色、qRT-PCR检测与免疫荧光分析.结果与结论:①扫描电镜下可见,两种支架具有均匀分布的大孔结构,表观形貌无明显差异,支架孔径约510 μm;②体外降解实验显示,两组支架均缓慢稳定的降解,第8周时的降解率均小于10%;两种支架周围的pH值稳定在7.1-7.4;③体外缓释实验显示,实验支架浸泡在PBS中前2周时去铁胺释放较快,后期释放较为平缓,在8周内释放了75%左右;④荧光倒置显微镜下可见,两种支架上的脂肪干细胞均呈纺锤形,铺展较大;扫描电镜下可见,两组支架上均有很多细胞伪足,细胞在材料表面有较大的铺展;⑤CCK-8实验显示,3组细胞增殖无差异(P > 0.05);⑥qRT-PCR检测显示,与对照组及对照支架组比较,实验组支架组的血管内皮生长因子、骨钙素基因表达升高(P < 0.01);免疫荧光分析显示,与对照组及对照支架组比较,实验支架组的血管内皮生长因子、骨钙素蛋白表达升高(P < 0.01);⑦结果表明,3D打印乳酸-羟基乙酸/羟基磷灰石/去铁胺支架有望发挥良好的成骨和血管化双重作用.

摘要： 组织工程研究中的干细胞:培养与移植栏目设置1研究与报告1.1 骨髓干细胞1.2 造血干细胞1.3 脂肪干细胞1.4 脐带脐血干细胞1.5 肿瘤干细胞1.6 胚胎干细胞1.7 牙髓及牙周膜干细胞1.8 诱导性多能性干细胞2 技术与方法2.1 干细胞培养与分化2.2 干细胞移植2.3 干细胞外泌体2.4 干细胞因子及调控因子2.5 干细胞转基因表达2.6 干细胞与中药2.7 干细胞相关大数据分析.

摘要： 背景:临界骨缺损的修复一直是困扰临床外科医生的关键问题,骨组织工程研究提供了解决该问题的新思路.如何加快组织工程骨的血管化,进而促进种子细胞的成骨分化是骨组织工程研究中的关键问题.目的:探讨血管内皮细胞和脂肪干细胞联合培养体系与部分脱蛋白生物骨构建组织工程骨修复骨缺损的能力.方法:体外构建3种组织工程骨:部分脱蛋白生物骨+血管内皮细胞、部分脱蛋白生物骨+脂肪干细胞、部分脱蛋白生物骨+脂肪干细胞+血管内皮细胞(血管内皮细胞:脂肪干细胞比例为1:1),以单纯部分脱蛋白生物骨为对照组.取18周龄SD大鼠60只,随机分为5组,每组12只,分别将4种支架材料植入相应的SD大鼠下颌骨骨缺损处,空白对照组仅制造骨缺损,不做修复.术后2,4,8,12周处死动物行大体观察、X射线检查、苏木精-伊红染色和Masson染色组织学观察,并取Masson染色切片行骨胶原定量检测.结果 与结论:①大体观察示术后部分脱蛋白生物骨+脂肪干细胞+血管内皮细胞组骨支架降解最快,修复骨缺损能力强于其他组,空白对照组骨缺损未被修复;②X射线片示术后8周时部分脱蛋白生物骨+脂肪干细胞+血管内皮细胞组出现骨性联合,骨缝消失,至12周时骨密度明显增加,骨形态已经基本恢复正常;其他组至12周时材料大体形态依然存在,空白对照组骨缺损未被修复;③组织学观察可见部分脱蛋白生物骨+脂肪干细胞组与单纯部分脱蛋白生物骨组比较差异无显著性意义(P=0.607>0.05),部分脱蛋白生物骨+血管内皮细胞组与部分脱蛋白生物骨+脂肪干细胞组比较差异有显著性意义(P=0.011<0.05),其余各组两两比较差异均有非常显著性意义(P<0.01);④结果表明,联合培养细胞构建的组织工程骨修复骨缺损能力最强,血管内皮细胞的影响力大于脂肪干细胞.

摘要： 背景:脂肪干细胞含量丰富、易获取,已成为再生医学领域备受欢迎的种子细胞之一.脂肪干细胞来源外泌体是脂肪干细胞与其他细胞间通讯的桥梁与纽带,具有调节免疫和炎症反应、促进损伤细胞自我修复等作用,被认为是脂肪干细胞的可替代治疗方案.目的:对脂肪干细胞来源外泌体调节组织再生的研究进展及面临的挑战作一综述.方法:通过检索CNKI、万方数据库及PubMed、Web of Science数据库相关文章,以"脂肪来源干细胞""脂肪干细胞""外泌体"为中文检索词,以"adipose-derived stem cell""adipose stem cell""exosomes"为英文检索词.根据纳入与排除标准对文章进行初筛,保留相关性和参考价值较高的70篇文章进行综述.结果 与结论:脂肪干细胞来源外泌体在皮肤创面、神经退行性疾病、肿瘤、骨再生、肾脏疾病、心血管疾病、免疫性疾病、纤维化疾病等多种疾病治疗中表现出广阔的应用潜力.

摘要： 针对犬免疫介导溶血性贫血并发肝损伤发病率较高、传统治疗方案不能有效缓解的状况,本文首次将异体脂肪干细胞结合常规方法用于治疗免疫介导溶血性贫血并发肝损伤病例,治疗结果表明相对于常规疗法,脂肪干细胞可显著缩短该病的治疗过程,治疗效果较好.本文为脂肪干细胞用于该病的临床治疗提供了理论依据和技术支持.

摘要： 目的：探索生肌玉红复合胶原改善脂肪干细胞功能及其作用机制. 方法：首先,将生肌玉红膏提取液分0.0125g·L-1、0.025g·L-1、0.05g·L-1、0.1g·L-1各浓度,以细胞增殖实验筛选生肌玉红膏提取液促进脂肪干细胞增殖的最佳浓度;将筛选的最佳浓度生肌玉红膏提取液、胶原及最佳浓度生肌玉红膏提取液复合胶原,分别以transwell小室实验刺激脂肪干细胞迁移;增殖培养48h后提取脂肪干细胞蛋白,以免疫蛋白印迹法(western blot)测定各组细胞外调节蛋白激酶类(extracellular regulated protein kinases,ERK)蛋白表达,同时以酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量. 结果：在给药培养后24h、48h及72h后,0.05g·L-1生肌玉红膏提取液增殖效果最为明显,均优于各时间观测点其他浓度的生肌玉红膏提取液,培养48h后,生肌玉红复合胶原组相对于对照组增殖了46％,显著高于生肌玉红膏提取液组27.4％及胶原组27.6％,差异有显著统计学意义(P＜0.05);提高脂肪干细胞迁移率约220％,显著高于生肌玉红膏提取液组140％及胶原组50％;提高脂肪干细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达40％左右,显著高于生肌玉红膏提取液组15％及胶原组10％;同时刺激脂肪干细胞分泌VEGF达411.4ng·L-1,显著高于生肌玉红膏提取液组207.5ng·L-1及胶原组240.8ng·L-1. 结论：生肌玉红复合胶原可以通过MARK/ERK通路信号通路显著促进脂肪干细胞功能并刺激血管内皮生长因子分泌,与脂肪干细胞结合可进一步提升促血管新生功效.

摘要： 在组织工程领域,材料不仅为细胞提供力学支撑,其与细胞接触的表面还会影响细胞的一系列行为,如细胞贴附、形貌、增殖、迁移以及分化.已经证明材料的表面形貌、力学性能、表面化学状态等都会影响细胞行为,如成骨类细胞MC3T3-E1,骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、神经干细胞等.在实际组织工程应用中，由于支架形状、成分复杂多变，难以用硅烷化或分子自组装的方法进行表面改性。而等离子体聚合能对不同的基底进行改性，生成一层稳定、均匀无孔洞、容易灭菌的聚合物涂层；同时通过改变所使用的聚合单体，可生成不同化学性质的表面。

摘要： 脂肪是高度血管化的组织,所以血管化是再生脂肪组织是否可以长期存活和功能化的重要依据.脂肪干细胞(ASCs)具有强大的成脂分化的潜力,并且在血管化生长因子的促进下表现出治疗性血管再生的优点.ASCs聚集后形成的细胞微团在低氧诱导的旁分泌作用下可以显著提高血管化效率,因此ASCs微团应用在血管化过程中更有效.此外,ASCs微团还表现出更高的分化能力和抗细胞凋亡能力.但是,在脂肪再生过程中,ASCs微团却很少使用.本研究利用聚(L-谷氨酸)(PLGA)制备能够阻止细胞黏附、驱动细胞自发聚集形成微团的多孔水凝胶材料,在促进脂肪再生的同时提高再生组织血管化程度.

摘要： 此项研究中，采用石蜡微球沥滤和定向结晶TIPS技术相结合的方式，制备一种具有创新性的含软骨钙化层的多相一体化仿生支架。该仿生支架具有特征性的三层结构:上层以丝素蛋白为材料模仿天然软骨组织的取向微孔结构;下层是由HA和SF组成的3D多孔结构，模仿正常的软骨下骨;致密的中间层同样由HA和SF组成，作为软骨层和成骨层的分界，同时起到增强支架整体强度的作用。体外评估脂肪干细胞(ADSC)在支架上的黏附、增殖以及成骨和成软骨分化活动。

摘要： TAZ是Hippo信号通路下游的关键效应分子,具有调节间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)自我更新和多向分化的能力.TAZ作为转录共激活因子可与RUNX2结合后增强OCN的表达以促进MSC成骨分化；另一方面，TAZ也可与PPAR-γ结合抑制MSC向脂肪细胞分化。脂肪干细胞（adipose-derived stem cells, ADSCs）是从脂肪中分离出具有较强增殖能力和多向分化潜能的干细胞，相较于骨髓干细胞来说，由于其来源广泛、获取简便已成为当前骨组织工程和再生医学领域的主力种子细胞之一。然而,脂肪干细胞成骨分化的具体机制尚未完全阐明。本研究旨在证探索小分子化合物TM-25659激活TAZ促进ADSCs成骨分化过程中的作用和机制。

摘要： 近年来,随着社会的不断发展及物质生活水平的提高,人们对美的意识越来越强烈,整形美容日益受到大众的青睐.而其中软组织充填、瘢痕修复、面部年轻化、身体塑形等也随之成为整形美容外科的主要临床需求.本课题组研究发现大鼠的腹股沟皮下脂肪组织分泌的外泌体具有促进干细胞成脂成血管分化的能力，并于体内证实脂肪组织外泌体可有效促进脂肪再生。脂肪干细胞已在全球进行了大范围的临床试验，但 ASCs 本身仍需进一步的研究，包括构建从提取、培养到冻存的标准化制备流程，应用的安全性，特别是成瘤性以及供体因素对应用效果的影响等方方面面，为未来 ASCs 的产业化应用奠定基础。

摘要： 将脂肪干细胞(ADSC,A)负载入可注射性软骨细胞砖-富血小板血浆(Chondrocyte Bricks-Platelet Rich Plasma,CB-PRP)复合体中,探究其作为种子细胞实现颌面部微创软骨修复的可行性.

摘要： 目的：通过体外分离培养脂肪干细胞,并进行传代、表型鉴定及多向诱导分化,进一步了解其生物学特性,为临床运用奠定实验基础. 方法：取SD大鼠附睾近心端,肾周及腹股沟韧带皮下脂肪组织,采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法,对脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增、表型鉴定及成骨成脂诱导分化,在倒置显微镜下观察原代及传代细胞形态变化,并采用MTT法检测第3、5、7、9代细胞增殖能力,用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记,取第3代细胞进行成骨成脂诱导分化,并采用茜素红染色、油红0染色方法进行鉴定. 结果：采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法得到的脂肪干细胞,其细胞形态较为均一,基本呈长梭形,旋涡状生长,并形成集落样生长.MTT法检测第3、5、7、9代ADSCs呈典型的"S"形增殖曲线,符合干细胞的特性,脂肪干细胞表型鉴定结果显示CD29阳性高表达,CD34阴性表达,CD45低表达,CD105弱阳性表达,脂肪干细胞能向成骨细胞及脂肪细胞分化. 结论：脂肪干细胞取材较方便,含量丰富、并能够在体外分离培养,其稳定表达特异性的表面抗原,并且经过相应诱导培养后可向成骨及成脂多向分化,可作为优良的骨组织工程的种子细胞来源.

摘要： 目的：通过体外分离培养脂肪干细胞,并进行传代、表型鉴定及多向诱导分化,进一步了解其生物学特性,为临床运用奠定实验基础. 方法：取SD大鼠附睾近心端,肾周及腹股沟韧带皮下脂肪组织,采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法,对脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增、表型鉴定及成骨成脂诱导分化,在倒置显微镜下观察原代及传代细胞形态变化,并采用MTT法检测第3、5、7、9代细胞增殖能力,用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记,取第3代细胞进行成骨成脂诱导分化,并采用茜素红染色、油红0染色方法进行鉴定. 结果：采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法得到的脂肪干细胞,其细胞形态较为均一,基本呈长梭形,旋涡状生长,并形成集落样生长.MTT法检测第3、5、7、9代ADSCs呈典型的"S"形增殖曲线,符合干细胞的特性,脂肪干细胞表型鉴定结果显示CD29阳性高表达,CD34阴性表达,CD45低表达,CD105弱阳性表达,脂肪干细胞能向成骨细胞及脂肪细胞分化. 结论：脂肪干细胞取材较方便,含量丰富、并能够在体外分离培养,其稳定表达特异性的表面抗原,并且经过相应诱导培养后可向成骨及成脂多向分化,可作为优良的骨组织工程的种子细胞来源.

摘要： 本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种脂肪间充质干细胞冻存液以及脂肪间充质干细胞冻存方法。本发明提供的脂肪间充质干细胞冻存液，包括如下组分及其重量份数组成：基础培养基80～120份、低温保护剂5～10份，L‑岩藻糖2～6份，硫辛酸1～5份，还原型谷胱甘肽0.1～2份。本发明提供的脂肪间充质干细胞冻存液不含有动物血清，安全性高，成本低，且制备方法简单，与常规的冻存方法相比，采用本发明脂肪间充质干细胞的冻存方法冻存的细胞可明显减少冻存液对细胞的损伤，复苏后细胞回收率高。

摘要： 本发明公开了一种脂肪间充质干细胞冻存液以及脂肪间充质干细胞冻存方法，其中，脂肪间充质干细胞冻存液，包括如下重量份数的组分：RPMI‑1640培养基80‑88份；FBS为2‑5份；环丁砜1‑2份；5 wt%乙醇1.5‑2.5份；10 wt%乙二醇0.8‑1.2份；10 wt%1,2‑丙二醇0.8‑1.2份；吐温80为0.3‑0.7份，甘油0.5‑1.5份，50U/mL青霉素0.01‑0.05份；海藻糖0.5‑1份；聚乙烯吡咯烷酮0.5‑0.8份；琼脂粉0.2‑0.6份。本发明对脂肪间充质干细胞具有不含毒性且冻存效果好的优点。

摘要： 本发明提供了一种虎脂肪间充质干细胞培养液和虎脂肪间充质干细胞的培养方法。每100mL所述虎脂肪间充质干细胞培养液包含5mL～15mL胎牛血清、0.5mL～1.5mL双抗、0.5mL～1.5mL谷氨酰胺、400ng～600ng TGF‑a和400ng～600ng PGE1，以及细胞基础培养液。与传统技术相比，本发明具备如下有益效果：本发明提供的培养液配方，适用于虎脂肪间充质干细胞的原代培养，填补了脂肪间充质干细胞在虎这一物种上的研究空白，为虎脂肪间充质干细胞体外培养、建系和应用奠定了基础，为后续临床疾病研究提供了新思路。

摘要： 本发明提供了一种脂肪源干细胞的分离制备方法，1，无菌条件下采集脂肪组织保存；2，将脂肪组织离心分离，留下脂肪组织层；3，用生理盐水清洗脂肪组织，离心分层，留下脂肪组织，重复本步骤；4，在3获得的脂肪组织中加入胶原酶溶液消化，离心后留下细胞沉淀和脂肪组织层；5，在4获得的脂肪组织中加入胶原酶溶液消化，离心后留下细胞沉淀，将细胞沉淀重悬在含人血白蛋白的生理盐水中，与4中的细胞沉淀悬浮液合并；6，将5获得的细胞沉淀过滤后离心，弃上清，得到脂肪源干细胞。通过本发明制备得到的脂肪源干细胞数量大、活率高、纯度高，完全能满足临床要求。

摘要： 本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种脂肪间充质干细胞冻存液以及脂肪间充质干细胞冻存方法。本发明提供的脂肪间充质干细胞冻存液，包括如下组分及其重量份数组成：基础培养基80～120份、低温保护剂5～10份，L‑岩藻糖2～6份，硫辛酸1～5份，还原型谷胱甘肽0.1～2份。本发明提供的脂肪间充质干细胞冻存液不含有动物血清，安全性高，成本低，且制备方法简单，与常规的冻存方法相比，采用本发明脂肪间充质干细胞的冻存方法冻存的细胞可明显减少冻存液对细胞的损伤，复苏后细胞回收率高。

摘要： 本发明公开了一种脂肪间充质干细胞冻存液以及脂肪间充质干细胞冻存方法，其中，脂肪间充质干细胞冻存液，包括如下重量份数的组分：RPMI‑1640培养基80‑88份；FBS为2‑5份；环丁砜1‑2份；5 wt%乙醇1.5‑2.5份；10 wt%乙二醇0.8‑1.2份；10 wt%1,2‑丙二醇0.8‑1.2份；吐温80为0.3‑0.7份，甘油0.5‑1.5份，50U/mL青霉素0.01‑0.05份；海藻糖0.5‑1份；聚乙烯吡咯烷酮0.5‑0.8份；琼脂粉0.2‑0.6份。本发明对脂肪间充质干细胞具有不含毒性且冻存效果好的优点。

摘要： 本发明提供了一种制备脂肪干细胞外泌体的方法、脂肪干细胞外泌体及其应用，属于生物工程技术领域，所述制备方法包括以下步骤：1)将脂肪干细胞与电转染工作液混合，得到混合液，将所述混合液与CTF1质粒混合，得到预转染物；2)将所述步骤1)得到的预转染物进行电击，得到转染CTF1基因的脂肪干细胞；3)将所述步骤2)得到的转染CTF1基因的脂肪干细胞进行常规培养后，收集脂肪干细胞外泌体。采用本发明提供的方法制备得到的脂肪干细胞外泌体可显著促进子宫内膜微血管内皮细胞增殖。

摘要： 本发明公开了一种无血清脂肪干细胞培养基及脂肪干细胞的培养方法，属于细胞培养技术领域，一种无血清脂肪干细胞培养基及脂肪干细胞的培养方法，包括培养皿和营养添加剂，营养剂添加在培养皿内部，培养皿包括均为玻璃材质的圆盘状结构的皿底和皿盖，皿盖卡接于皿底的顶端，皿盖卡接于皿底的顶端，皿盖的外侧固定设有玻璃外环，且皿盖的顶端固定设有辅助拉把手，营养添加剂包括运铁蛋白、FGF、免疫球蛋白、刺五加皂苷B、氯化矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷、β‑蜕皮甾酮，它可以在保证对脂肪干细胞的营养供给的情况下，有效避免细胞间的生物反应或者物质间的化学反应对整个培养基内脂肪干细胞的培养过程的影响，真实反应了脂肪干细胞的培养情况。

摘要： 本发明提供了一种制备脂肪干细胞外泌体的方法、脂肪干细胞外泌体及其应用，属于生物工程技术领域，所述制备方法包括以下步骤：1)将脂肪干细胞与电转染工作液混合，得到混合液，将所述混合液与CTF1质粒混合，得到预转染物；2)将所述步骤1)得到的预转染物进行电击，得到转染CTF1基因的脂肪干细胞；3)将所述步骤2)得到的转染CTF1基因的脂肪干细胞进行常规培养后，收集脂肪干细胞外泌体。采用本发明提供的方法制备得到的脂肪干细胞外泌体可显著促进子宫内膜微血管内皮细胞增殖。

摘要： 本发明公开了一种无血清脂肪干细胞培养基及脂肪干细胞的培养方法，该培养基包括基础培养基和添加剂；所述基础培养基为DMEM/F12培养基，所述添加剂包括：转铁蛋白，成纤维细胞生长因子，C‑藻蓝素，刺五加皂苷B，矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷，β‑蜕皮甾酮。本发明的培养基和培养方法既能促进脂肪干细胞的生长和增殖能力，又能降低培养过程中脂肪干细胞的增殖活性损伤，从而大幅度提高脂肪干细胞的体外扩增效率。