体细胞核移植

摘要： 为探讨2-甲氧雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME2)、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1)、碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)、胰岛素-转铁蛋白-硒(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS)对体细胞细胞周期的影响,以牛(Bos taurus)耳皮肤成纤维细胞为研究对象,进行流式细胞分析和细胞计数。结果显示,1μmol/L 2-ME2可显著提高细胞周期中G0/G1期细胞及G1早期(early G1,eG1)细胞所占比例,20 ng/mL IGF-1、10 ng/mL bFGF、ITS及4种细胞因子联合处理对细胞周期中G0/G1期细胞和G1早期细胞所占比例无显著影响,表明2-ME2能够显著影响牛耳皮肤成纤维细胞的细胞周期,研究结果对体细胞核移植技术在短时间内获得更多G0/G1期和eG1期的供体细胞具有重要意义。

摘要： 肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是一种骨骼肌生长发育的负调控因子,可以抑制成肌细胞的增殖,是动物品种改良的重要候选基因,该基因突变能够引起骨骼肌的广泛性增生与肥大,产生“双肌”症状,导致动物脂肪分化减少、肌肉含量增加,从而满足市场动物肉品质消费的需求。为了获得“双肌”表型的MSTN基因突变克隆山羊,本研究在山羊MSTN基因第一外显子序列设计并构建TALENs表达载体,转染山羊胎儿成纤维细胞,经嘌呤霉素筛选获得抗性细胞株,通过PCR检测和基因测序筛选MSTN基因突变细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植,并鉴定MSTN基因突变类型;通过组织切片分析MSTN基因突变山羊肌肉组织形态结构,监测不同月龄克隆山羊体重并分析其不同生长发育阶段的体重增长趋势。结果表明,共获得109株MSTN基因突变细胞株,突变效率达到79.0%(109/138),其中46株为双等位基因突变,占细胞株总数的33.3%(46/138)。选取4株生长状态较好的MSTN基因突变细胞株(1株为双等位基因纯合突变,3株为非纯合突变)进行体细胞核移植至12只受体山羊,30 d时B超检查出受孕母羊4只,受孕率为33.3%(4/12),妊娠到期分娩2只克隆山羊,测序结果表明M-1克隆山羊MSTN双等位基因中的一个等位基因未产生突变,另一个等位基因缺失3 bp;M-2克隆山羊MSTN双等位基因中的一个等位基因产生1 bp碱基插入,另一个等位基因缺失13 bp,两种突变均造成MSTN在突变位点之后的蛋白序列丢失。此外,M-1克隆山羊肌纤维排列紧密且粗大,每月体重均高于普通野生型山羊,但与普通野生型山羊生长趋势一致,且能够健康发育至成年。本研究利用TALENs技术成功介导山羊MSTN基因定点修饰,并获得MSTN基因突变的山羊胎儿成纤维细胞,将其作为供核细胞成功生产MSTN基因突变克隆山羊,为培育“双肌”表型山羊新品系奠定了技术基础,也为将来其他转基因动物的制备提供了参考方法。

摘要： 体细胞核移植(somaticcell nucleartransfer,SCNT)是一种将已分化的细胞重编程恢复其全能性,进而生产与供体细胞基因型完全相同后代的无性繁殖技术。包括收集并成熟卵母细胞,供体细胞核处理,重构胚的体外激活,胚胎的培养和移植等过程。猪的SCNT技术的建立在农业和医学有广泛的应用。

摘要： 体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能将已分化的体细胞重编程为全能胚胎的繁殖生物技术,在良种扩繁、濒危物种保护和治疗性克隆等方面有着广泛的应用前景,但极低的克隆效率、克隆动物胎盘异常、出生后胎儿畸形等严重限制了该技术的实际应用。造成克隆效率低和胚胎发育异常的主要原因是供体核表观遗传重编程错误或不完全。1958年,将非洲爪蟾(Xenopus laevis)幼体肠细胞核移入去核卵母细胞,获得了第1例SCNT动物个体;1986年,通过电融合1个卵裂球与去核卵母细胞成功获得了3只存活的羔羊;1997年,将成年母羊的乳腺上皮细胞与去核卵细胞电融合,获得首个SCNT哺乳动物“多利”,开启了克隆时代,目前牛、小鼠、山羊、猪、欧洲盘羊、家兔、家猫、马、大鼠、骡子、狗、雪貂、狼、水牛、红鹿、单峰骆驼、食蟹猴等相继成功克隆,其中最引人瞩目的是2018年食蟹猴的成功克隆。作者通过将SCNT胚胎与受精胚胎的发育进行对比,阐述了SCNT过程中DNA甲基化、组蛋白修饰、基因组印迹、染色体状态等的重编程过程和缺陷,并从表观修饰剂、组蛋白去甲基化酶、抑制Xist表达、补充鱼精蛋白和精子RNA方面探讨单独或联合消除表观遗传重编程障碍对克隆效率的影响。随着低样本量测序技术的发展和完善,人们能够在SCNT胚胎中检测到更详细的全基因组表观遗传修饰图谱,进一步揭示SCNT胚胎表观遗传重编程中的缺陷,为提高克隆效率提供了线索。通过上述内容的阐述,希望为后续开发联合消除多种表观遗传障碍而提高克隆效率的策略和思路。

摘要： 猪的胚胎发育需要经历受精、卵裂、孵化、形态转变、附植、器官分化等一系列重要的生理阶段。虽然在胚胎发育过程中基因的严格表达与正确指导是胚胎能否正常发育的决定性条件,但研究表明DNA甲基化修饰对胚胎的发育也起着必不可少的作用。DNA甲基化是一种常见且重要的表观遗传修饰,虽然不改变DNA的一级序列,但也包含可遗传信息,并在基因的转录调控中起重要作用。在猪的胚胎发育中,DNA甲基化呈现出高度动态的过程,这一过程受孕期母体营养和发育环境条件影响。本文将从胚胎早期发育、体细胞核移植和孕期母体营养三个方面来阐述DNA甲基化对胚胎发育的影响,为进一步研究猪胚胎在发育过程中的DNA甲基化机制和提高体细胞核移植的成功率提供参考。

摘要： 活体采卵(ovum pick-up,OPU)是一种使用非手术方法从供体母牛中获得卵母细胞的方法,能够在对供体损伤较小的情况下获得较多的优质卵母细胞,现已在各繁殖育种技术中得到广泛应用,但活体采卵仍存在效率较为低下、影响因素多、操作技术及设备要求较高等问题。论文介绍了牛活体采卵发展历史,并对活体采卵的3种方法(盲采法、内窥镜法和超声波法)的操作及研究进展和活体采卵的影响因素进行了综述,最后分析了活体采卵在体外胚胎生产和体细胞核移植等技术的应用前景,旨在为活体采卵技术发展完善及在繁殖育种中的进一步推广和应用提供参考。

摘要： [目的]体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)在农业、生物医学等领域应用广泛,但是克隆效率太低制约了该技术的应用和推广.本研究的目的在于探究印记基因XIST和H19 DNA甲基化水平与克隆效率的联系.[方法]利用同一头猪源耳朵成纤维细胞培养获得14个细胞克隆团,分别作为供体细胞进行SCNT试验,统计比较以各克隆团为供体细胞生产克隆胚胎的囊胚率以及各囊胚的XIST和H19基因调控区的DNA甲基化水平,对XIST和H19基因差异甲基化区域DNA甲基化水平与克隆胚胎的囊胚率进行相关性分析.[结果]以1号克隆团为供体细胞得到囊胚的XIST基因DNA甲基化水平最高且囊胚率最低,分别为65.04％、8.6％,以14号克隆团为供体细胞得到XIST基因囊胚的DNA甲基化水平最低但囊胚率最高,分别为16.68％、38.2％;相关性分析表明XIST基因的DNA甲基化水平与囊胚率之间存在高度负相关(|r|=0.8125>0.8).H19基因A侧甲基化平均水平最高和最低分别为5.12％和0.61％,相关性分析表明H19基因A侧DNA甲基化水平与囊胚率间只有极弱的相关(|r|=0.1647<0.3);H19基因G侧DNA甲基化水平最高和最低分别为90.92％和72.69％,相关性分析表明H19基因G侧DNA甲基化水平与囊胚率间只有低度相关(0.3<|r|=0.3098<0.5).[结论]XIST基因DNA甲基化水平越低,则克隆团囊胚率越高.研究结果对提高猪SCNT胚胎发育效率,改善现有的猪SCNT技术体系提供了基础.

摘要： [目的]建立快速筛选猪的基因编辑阳性成纤维细胞系的方法以提高利用体细胞核移植产生基因编辑克隆猪的效率.[方法]通过PCR、T7EN1酶切和Sanger测序分析不同数量的已知猪基因编辑阳性细胞(20、50、100、150和200个细胞)的基因型,确定最小细胞数用于鉴定未知的基因编辑阳性细胞系以证明该方法的可行性.[结果]除20细胞组外,其他所有细胞组中均扩增出2条明显的T7EN1酶切条带(175和555 bp).定量数据显示:20细胞组和50细胞组之间的条带灰度值存在极显著差异(P＜0.01),因此50细胞可用于基因编辑阳性细胞系鉴定.利用CRISPR/Cas9系统构建IPO13打靶载体,转染猪胎儿成纤维细胞形成细胞克隆点后计数50个细胞来筛选阳性细胞系,再通过体细胞核移植快速生产了IPO13敲除猪,从而证实通过微量细胞鉴定快速生产基因编辑猪的可行性.筛选基因编辑阳性细胞系的一般方法大约需要33.7 d,新建立的方法细胞筛选周期仅为18.9 d(减少15d),获得阳性细胞系的成功率也提高了约4倍.[结论]本研究建立了一种通过微量细胞鉴定快速生产基因编辑克隆猪的方法,该方法可行可靠.

摘要： 同一来源的供体细胞之间存在异质性.许多研究已经表明体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)效率与供体细胞有关.然而,鲜有在单细胞水平分析供体细胞异质性对核移植效率的潜在影响.本研究利用单细胞转录组测序技术对同一来源且随机挑选的52个猪耳组织成纤维细胞进行测序分析.结果表明有48个单细胞的基因表达模式相似,4个单细胞(编号为D11_1、D12_1、DW61_2和DW99_2)的基因表达模式与其他单细胞存在较大的差异,并且不存在基因表达模式完全相同的两个单细胞.以基因表达模式相似的48个单细胞作为对照,进一步分析了单细胞D11_1、D12_1、DW61_2和DW99_2的差异基因表达模式:首先利用R语言筛选4个单细胞的差异表达基因,并对前50差异表达基因进行汇总;然后对差异表达基因进行GO富集分析和KEGG通路分析.富集分析发现差异表达基因的主要分子功能包括能量代谢、蛋白质代谢和细胞对刺激的反应等;主要通路包括KEGG中富集的与细胞周期、细胞代谢、DNA复制相关的通路.根据以上研究结果并结合SCNT研究进展讨论了4个单细胞的差异基因表达模式对核移植胚胎发育效率的潜在影响.本研究揭示了猪耳组织成纤维细胞的转录组异质性,并提供了分析精英供体细胞的一种有效方法,为提高克隆效率带来新的思路.

摘要： 克隆又称体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT),是一种将已分化的细胞重编程恢复全能性而生产与供体细胞基因型完全相同后代的无性繁殖技术.猪的克隆技术具有重要的应用价值,包括扩繁优良种猪、制备基因修饰猪、保护珍贵和濒危猪种以及研究猪体细胞重编程机制.然而,克隆猪存在出生率和初生重低以及死胎率、新生期死亡率和畸形率高等问题,这些都严重影响了克隆猪的应用前景.供体核的表观重编程错误被认为是克隆效率低和胚胎发育异常的主要原因,但是目前大多数研究通过修正表观重编程错误并没有大幅度提高克隆猪的出生率和健康率.本文综述了克隆猪的异常表型、发育异常的原因以及提高猪克隆效率的有效方法,以期为提高克隆猪的成活率提供参考.

摘要： 体细胞核移植技术目前发展尚不成熟,克隆成功率较低.本试验旨在优化转脂肪型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)体细胞核移植的技术体系,为克隆胚胎的生产、移植、并最终繁殖转A-FABP基因克隆牛奠定试验基础.试验系统研究了电融合参数、以及不同形态、大小和代数的供体细胞对牛胚胎克隆效果的影响,并比较了新鲜囊胚胎和冷冻囊胚胎的移植效率.结果表明,场强2.5kV/cm、2次电脉冲、脉冲时间为10μs的电融合参数,和圆形光滑型、直径为15—25μm、4-6代的转A-FABP基因供体细胞更适合克隆牛胚胎发育.

摘要： 动物体细胞核移植技术对于优良种畜的复制、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培养以及人类疾病的治疗都具有重要的意义;近几年猪体细胞核移植研究取得了一定的进展,但总体看来核移植效率还很低,还需要对一些关键技术的深入研究和不断完善核移植操作程序,通过对猪体细胞核移植的关键技术及影响因素进行探讨与分析,以其加快猪体细胞核移植技术的研究,提高猪体细胞核移植的效率,进一步促进猪体细胞核移植技术在生产中应用.

摘要： 目的：为优化小型猪体细胞核移植技术(SCNT)技术,探讨供体细胞不同类型、不同传代数以及蚜肠霉素(APC)处理各供体细胞对重构胚体外发育的影响.方法：小型猪输卵管上皮细胞(OEC),耳成纤维细胞(EFC)和卵丘细胞(CC)分别经血清饥饿或血饥饿后再使用0.1μg/mlAPC处理.核移植重构胚体外培养7d,以检测其发育能力.结果：OEC经APC处理后,重构胚的卵裂率和囊胚形成均显著高于仅血清饥饿处理组(61.82％vs56.25％,24.55％vs17.86％;P＜0.05).以EFC为供体细胞,APC组重构胚卵裂率显著高于血清饥饿组(63.36％vs57.01％;P＜0.05).注入CC,APC处理能显著提高重构胚的囊胚形成率(29.63％;P＜0.05).三种细胞经APC处理,CC作为核供体,重构胚的卵裂率和囊胚形成率最高.三种细胞中,无论哪一种作为核供体,其传代数对重构胚的发育没有影响.结论：以CC为供体细胞,血清饥饿后再使用APC处理,更适合小型猪的体细胞核移植。

摘要： MPF是调节细胞周期的一个非常重要的蛋白激酶,在卵母细胞减数分裂启动、GVBD发生、纺锤体形成、MⅡ期停滞的维持等方面均发挥重要作用.MPF的活性受Wee1、Myt1的调控.咖啡因是一种蛋白磷酸酶抑制剂,它能抑制Wee1和Myt1的活性,从而抑制有活性的MPF向其无活性的前体转化,进而提高MPF活性.本试验通过在水牛卵母细胞体外成熟培养不同阶段分别添加不同浓度的咖啡因,以维持受体胞质中MPF的高活性,结果表明:在水牛卵母细胞体外成熟培养12h时添加浓度为lmM的咖啡因对卵母细胞的成熟没有显著影响,但可以显著提高体细胞核移植重构胚的囊胚发育率.

摘要： 本研究通过对比确定了放线菌酮在猪卵母细胞孤雌激活和体细胞核移植中的作用.实验一,对比了体外成熟的猪卵母细胞经电激活结合6-二甲氨基嘌呤或细胞松弛素B或放线菌酮处理对孤雌胚胎发育的影响;实验二,研究了放线菌酮预处理卵母细胞后再经电激活和药物激活对猪孤雌胚胎发育的影响.实验三,对比了不同激活药物对体细胞核移植的重构胚的发育能力的影响.结果表明,在孤雌激活过程中,放线菌酮激活能力较其它两种药物差,表现为较长的激活时间和较低的卵裂率及囊胚率.孤雌激活前经放线菌酮预处理可以提高猪孤雌激活胚胎的发育能力.放线菌酮处理可以提高体细胞核移植的重构胚发育为囊胚的能力.

摘要： 2005年韩国科学家报道首例体细胞克隆犬出生,随后体细胞克隆技术在宠物犬及工作犬的克隆领域得到了广泛的应用.由于犬胚胎质量较差、发育能力较低、生殖结构特殊及卵母细胞在输卵管内成熟的特点,因此目前全世界只有韩国科学家可以独立完成体细胞克隆犬的制备.本研究通过不断探索,建立了一套具有我国自主知识产权、稳定且高效的犬体细胞克隆技术体系.以体内成熟卵母细胞为胞质受体,实验用比格犬皮肤成纤维细胞为核供体,进行体细胞核移植,共移植44枚胚胎至4只代孕母犬体内,最终获得3只健康存活的体细胞克隆比格犬,使我国成为继韩国之后,世界第二个掌握犬体细胞克隆技术的国家,为该技术在宠物犬克隆、工作犬复制及医学模型创建中的应用奠定了良好基础.

摘要： 较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用.而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料.基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪.与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单.因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用.

摘要： 本文以绵羊为研究对象，用切剖法获得卵母细胞，收集卵丘细胞一卵母细胞复合体，进行成熟培养。COCs体外成熟19h后，去除周围卵丘细胞并将其离心洗涤，培养2代后用含有不同浓度Scriptaid的培养液进行接触抑制处理，然后用0.25%胰蛋白酶消化处理2-3min，用移液枪吹打成单个细胞。将卵母细胞在显微操作仪下去除第一机体及周围的少量胞质，并注入卵丘细胞，进行融合。随后置于培养液中培养3h后观察融合结果，再对融合后的胚胎进行激活。将胚胎在含有不同浓度Scriptaid的发育液中培养。然后对不同时期的胚胎进行免疫染色。研究表明：采用0.21μmo1/L的Scriptaid分别处理绵羊卵丘细胞和核移植胚胎后能提高胚胎体外发育能力;但采用0.2μmo1/L Scriptaid同时处理绵羊卵丘细胞及胚胎时所得胚胎体外发育能力低于单独处理供体卵丘细胞或胚胎时的效果;添加Scriptaid可显著提高绵羊核移植胚胎1一细胞、2一细胞、4一细胞和8一细胞期H4K12乙酞化水平。

摘要： 本实验以猪体外成熟卵母细胞为材料，检测猪卵母细胞质中核质蛋白的定性定量表达，同时检测其编码基因Npm基因的表达量，为今后体细胞核移植过程中核重新编程研究提供理论依据。

摘要： 本实验首次构建pCX-mRFP1-pgk—neoR基因，生产表达红色荧光蛋白的小型猪，为以后基因敲除的研究提供理想动物模型。

摘要： 本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。

摘要： 一种基于微流道的机器人化体细胞核移植操作方法。该方法的特点是引入的微流道用于存储细胞，引入了平行的双针分别用于细胞去核以及注核。该方法包括以下关键步骤：细胞的微流道存储，细胞的定位，细胞吸持，细胞去核，去核针与注核针的转换，细胞注核，最后释放已操作的细胞。实验结果表明该流程较传统体细胞核移植流程节约了41.7％的时间，并与手动体细胞核移植的存活率、成功率一致，有效的提升了体细胞核移植的效率与可重复性。

摘要： 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法。本发明提供了毛壳素的应用，为如下(a1)‑(a5)中的至少一种：(a1)制备用于动物体细胞核移植的供核细胞培养液；(a2)制备用于动物体细胞核移植的重构胚胎培养液；(a3)培养用于动物体细胞核移植的供核细胞；(a4)培养用于动物体细胞核移植的重构胚胎；(a5)促进动物体细胞核移植中的重构胚形成囊胚。本发明通过利用小分子药物毛壳素对体细胞核移植中的供核细胞或者重构胚胎进行处理，促进体细胞核移植重编程的发生，显著提高克隆胚胎的囊胚发育率和囊胚细胞数，最终提高猪体细胞核移植技术的整体效率。本发明对提高猪体细胞核移植技术的整体效率有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。

摘要： 用体细胞核移植技术制备移核胚胎干细胞的方法是关于应用体细胞核移植技术制备细胞的一种方法，该方法用显微操作仪将成年动物的神经细胞核移植入动物胚胎的去核胚胎干细胞胞质体内，重新组成具全新基因型移核胚胎干细胞，并培养移核胚胎干细胞使其分裂、增殖到2

摘要： 本发明涉及一种杜鹃素促进体细胞核移植效率的应用及方法。本发明中，杜鹃素用于制备提高体细胞核移植胚胎发育率和出生率的药物的应用，与当前多种小分子化合物在促进的体细胞核移植胚胎发育效率方式相比，本发明涉及的原理与以往通过调控体细胞核移植过程中表观遗传学差异的方法不同，小分子化合物杜鹃素能够有效促进体细胞核移植胚胎的基因组稳定性，并显著提高胚胎发育率和出生率，因而存在与其他药物联用达到更好效果的可能性。同时本发明所建立的筛选流程也更为有效，为探究小分子化合物靶点提供了合理的筛选方式。

摘要： 本发明涉及一种体细胞核移植方法及其应用。该方法利用单倍体胚胎干细胞体系获得单等位基因同时敲除26个H3K27me3相关的印记基因中的一个或多个的供体体细胞进行核移植。结果显示，单等位敲除Slc38a2、Slc38a4、Sfmbt2、Etv6、Platr4、Gramd1b、Slc38a1、Gab1、Mbnl2、Smoc1、Bmp7、Rbms1、Fam198b、Sh3gl3、Hunk、Jade1、E2f3、Tle3、Runx1、Epas1、Bbx、Enc1、Inhbb、Sox21、Otx2、Rbp2中的一个或多个(如Sfmbt2、Jade1、Gab1和Smoc1这四个中的一个或多个)H3K27me3的印记基因使得这些基因的印记表达模式趋于正常。同时，利用该供体体细胞进行克隆可以将体细胞克隆效率提升至14％，而野生型的对照组体细胞克隆效率为0。另外，该方法获得的克隆动物，大胎盘‑大胎儿现象得到了修正。

摘要： 一种基于微流道的机器人化体细胞核移植操作方法。该方法的特点是引入的微流道用于存储细胞，引入了平行的双针分别用于细胞去核以及注核。该方法包括以下关键步骤：细胞的微流道存储，细胞的定位，细胞吸持，细胞去核，去核针与注核针的转换，细胞注核，最后释放已操作的细胞。实验结果表明该流程较传统体细胞核移植流程节约了41.7％的时间，并与手动体细胞核移植的存活率、成功率一致，有效的提升了体细胞核移植的效率与可重复性。

摘要： 本申请揭示，通过将体细胞核移植细胞(SCNT细胞)注射入非人类第一哺乳动物的成熟囊胚中，从而补足导致该非人类第一哺乳动物的该目标器官发育的缺失，因此可再生如肾脏的目标器官。本申请还揭示，使用SCNT细胞在具有与发育期中目标器官发育缺失相关的畸形的非人类第一哺乳动物的活体内生产目标器官的方法，其中所生产的目标器官源自第二哺乳动物，且该第二哺乳动物是不同于该非人类第一哺乳动物的个体。

摘要： 本实用新型公开了一种哺乳动物体细胞核移植重构胚融合装置，包括融合皿、两个电极槽和若干个微穴；若干个微穴为设于融合皿底面的盲孔，盲孔内容纳有重构胚，并且微穴的直径略小于重构胚的直径；若干个微穴为两行排列设置，各行的微穴依次间隔排列，微穴可以固定和排列重构胚，且已调整好方向和位置的重构胚不会由于调整其它重构胚方向的细小动作而发生方向的偏移，且一次可以操作20‑30个重构胚；融合皿底面上并且位于微穴的两侧各设有一第一凹槽，融合皿的相对的两侧壁各设有两第二凹槽，一第一凹槽的两端各与一第二凹槽连通，进而形成一电极槽，电极槽内有金属丝，金属丝不需要用胶固定，金属丝直接通过电极槽插入到皿底便可以固定住。