孤雌激活

摘要： 目的 研究猪孤雌激活胚胎初次卵裂时间对早期胚胎发育潜能的影响,以筛选最优胚胎.方法 将猪卵母细胞进行体外成熟培养,孤雌激活后,胚胎采用时差成像系统(TLI)筛选,分为早期卵裂组(<24 h)、中期卵裂组(24～30 h)和晚期卵裂组(30～48 h).各组分开培养至囊胚期,统计比较各组的桑椹胚率和囊胚率,并对囊胚中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53和细胞周期蛋白Cyclin B1、Cdk1、Cdk2的表达水平进行检测.结果 早期卵裂组桑葚胚率、囊胚率高于中期卵裂组(P<0.05)和晚期卵裂组(P<0.01);凋亡相关基因Bax、P53表达在早期卵裂组中显著低于中期和晚期卵裂组(P<0.01),而抗凋亡基因Bcl-2表达则显著高于中期和晚期卵裂组(P<0.01);早期卵裂组细胞周期蛋白Cyclin B1、Cdk1和Cdk2的表达显著高于中期和晚期卵裂组(P<0.05).结论 猪孤雌激活胚胎初次卵裂时间较早的胚胎具有较高的发育潜能,利用TLI确定的初次卵裂时间可作为筛选优质胚胎的重要参数.

摘要： 孤雌生殖(parthenogenesis)是指无雄性配子的任何作用,由雌性配子产生个体的繁殖.孤雌生殖技术通过人工刺激模拟受精过程,提高胞质内钙离子浓度,从而使卵母细胞在无需精子条件下被激活,是一项重要的生物技术.钙离子载体A23187作为常用的化学激活介质广泛应用于哺乳动物卵母细胞的激活,钙离子载体A23187通过Ca2+的跨膜转运,能迅速诱导卵母细胞内Ca2+浓度升高,激活哺乳动物的卵母细胞,而6-DMAP是蛋白质磷酸化抑制剂,能阻止蛋白质磷酸化,抑制MPF和CSF活性,同时抑制第二极体的释放,保证孤雌激活偶数目细胞的染色体为二倍体.本实验是来观察钙离子载体A23187(Ca-A23187)及6-甲基嘌呤(6-DMAP)对小鼠卵母细胞的孤雌激活作用.

摘要： 在卵母细胞体外成熟、胚胎培养及玻璃化冷冻与解冻过程中全程添加200 nmol/L MitoQ,观察其对猪孤雌激活囊胚解冻后线粒体膜电位、TUNEL凋亡水平、活性氧(ROS)水平、脂质氧化产物(MDA)水平、总Caspase蛋白表达水平及凋亡氧化相关基因表达水平的影响.结果表明:添加MitoQ冷冻后其囊胚线粒体膜电位(0.83)相比对照组(0.52)显著升高;囊胚凋亡阳性细胞比例(22.36％)相比对照组(36.42％)显著降低;MDA含量(37.64 nmol/L)与ROS荧光强度(26.32)相比对照组(49.83 nmol/L与35.70)显著降低;总Caspase活性荧光强度(20.65)相比对照组(42.47)显著降低;相比对照组,Bcl-2、DNM1、CuZnSOD和MFN2基因的表达水平显著提升,Bax和TNF-α基因的相对表达量则显著下降.综上,全程添加MitoQ能够降低猪孤雌激活囊胚的氧化损伤、改善线粒体功能,并通过调节相关基因的表达水平,达到降低其细胞凋亡和提高其抗冻能力的目的.

摘要： 为探索哺乳动物孤雌激活胚胎早期发育过程中胞吞作用相关蛋白的动态表达,通过体外生产小鼠孤雌激活胚胎,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测不同发育时期小鼠孤雌激活胚胎胞吞作用相关蛋白Cav1、Cav2基因和蛋白相对表达水平,并采用免疫荧光技术进行不同发育时期小鼠孤雌激活胚胎中Cav1、Cav2表达定位分析.结果表明,在小鼠孤雌激活胚胎不同时期均可检测到Cav1、Cav2基因及其蛋白的表达,其中囊胚和桑椹胚中该2个基因的表达水平最高,4-8细胞时期次之,2细胞最低;各发育时期孤雌激活胚胎中Cav1、Cav2蛋白主要定位在胚胎细胞胞质内;囊胚中内细胞团(ICM)细胞中Cav1的荧光强度高于滋养层细胞.说明胞吞作用相关蛋白Cav1、Cav2可能参与小鼠早期胚胎发育的生理调控,桑椹胚和囊胚时期可能是其发挥生理功能的重要时期,并且在囊胚时期对内细胞团发育的调控作用更为显著.研究结果可为探索胞吞作用参与哺乳动物胚胎早期发育的调控机制提供重要参考.

摘要： [背景]众所周知TEA结构域转录因子4(TEA domain transcription factor 4,TEAD4)是TEAD转录因子家族中的一员,在决定啮齿类动物着床前胚胎的特性中发挥关键作用.在小鼠胚胎中发现,可以通过促进Cdx2表达来参与调控着床前胚胎滋养层细胞的谱系分化.若当小鼠胚胎中缺乏TEAD4时可导致小鼠囊胚形成失败.然而,TEAD4在猪早期胚胎发育中的作用尚不清楚.[目的]通过初步阐明TEAD4对猪早期胚胎发育的影响,以期为进一步探索转录因子对猪早期胚胎发育的分子机制奠定理论基础.[方法]利用网页版工具对猪TEAD4进行生物信息学分析,主要包括对猪TEAD4序列的分析,猪与人、小鼠之间同源性的比较,以及TEAD4在不同物种之间进化关系的比较.再通过试验检测TEAD4在猪早期胚胎发育中的作用.首先采用荧光定量PCR技术检测TEAD4在猪卵母细胞和早期胚胎中mRNA表达水平,再通过设计靶向TEAD4的siRNA,采用显微注射技术注入成熟卵母细胞中,降低卵胞质内源性的TEAD4水平,并确定TEAD4 siRNA仅作用于TEAD4,以期确定TEAD4在猪早期胚胎发育中的作用.[结果]序列分析结果显示:猪TEAD4包含11个外显子,定位于5号染色体上,跨越长度37.188 kb,mRNA全长1473 bp,编码区全长1305 bp,编码434个氨基酸;与人、小鼠的同源性分析揭示TEAD4在不同物种中的保守性较高;且在猪和牛上的亲缘关系最近.荧光定量PCR检测基因表达水平结果显示:TEAD4 mRNA在猪卵母细胞和早期胚胎中均有表达,且以GV期卵母细胞为参照时比较发现,MII期卵母细胞表达量最低,并保持较低水平直至4-细胞时期,但到8-细胞时期表达量达到最高,而到桑椹胚和囊胚时期又逐渐下降.通过显微注射靶向TEAD4的siRNA发现:TEAD4 siRNA仅作用于卵母细胞中内源性的TEAD4,而对TEAD1和TEAD3不发挥作用;并与对照组和阴性对照siRNA组相比,注射TEAD4 siRNA显著降低8-细胞和桑椹胚时期TEAD4 mRNA表达量,敲低效率达到80％.当敲低TEAD4表达时观察猪孤雌激活和体外受精胚胎的发育效率表明,与对照组和阴性对照siRNA组相比,显著降低TEAD4 siRNA敲低组从8-细胞至囊胚阶段的发育效率.[结论]TEAD4在各物种间保守性高,在猪和牛上的亲缘性最近,TEDA4可参与调控猪早期胚胎的发育.

摘要： 为了探讨牦牛HSP27(heat shock proteins27,HSP27)基因在牦牛卵母细胞和早期孤雌激活胚胎中的表达情况及定位,本试验通过实时荧光定量PCR检测牦牛HSP27基因在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的相对表达量,用免疫荧光染色法检测HSP27蛋白在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的表达与定位情况。结果显示,HSP27基因在牦牛未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及体外培养孤雌激活不同时期胚胎中均可表达,其中在未成熟卵母细胞中的表达量显著高于成熟卵母细胞;在孤雌激活胚胎中,2~4细胞期表达量最高,囊胚期胚胎表达量最低,随着胚胎的发育,HSP27的表达量呈现逐渐降低的趋势;在2~4细胞期和囊胚期胚胎中的表达与其他组表达存在显著差异性,在5~8细胞期和桑椹胚中的表达无显著差异。免疫荧光染色结果表明,HSP27蛋白在牦牛卵丘细胞和卵母细胞中均有表达,在牦牛孤雌激活2~4细胞期、5~8细胞期和桑椹期胚胎中主要表达于细胞核内和细胞质中,在囊胚期主要表达于细胞核中;而HSP27蛋白的表达水平与基因表达水平基本一致。本研究为后续研究HSP27基因在牦牛生殖生理过程中的作用机制提供了参考。

摘要： 为探讨直径为2 mm以下和2～6 mm猪卵泡卵母细胞的体外培养分裂率与囊胚率差异,采用相同体外成熟培养条件,来培养从不同直径的2种卵泡中所抽出的卵母细胞,在卵母细胞成熟培养后44～48 h,对卵母细胞进行化学激活和体外培养,观察胚胎体外发育能力;在培养48 h时进行分裂数据统计,培养168 h时统计囊胚个数.结果 发现,2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率差异显著,分别为62.46％、81.76％(P<0.05);2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率差异不显著,分别为11.71％、15.30％.说明正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞在体外成熟后,孤雌激活胚分裂率依次降低,孤雌胚胎的分裂能力随卵泡直径的增大而增强;正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞体外成熟后,孤雌激活胚囊胚率随卵泡直径的增大有一定增高,但变化不显著.

摘要： 为研究亚甲基蓝(MB)对猪卵母细胞体外发育的影响,选取500个猪卵母细胞随机分为5组,各组添加亚甲基蓝浓度为0、10、50、100和200 nmol/mL,培养成熟44 h～46 h后,观察不同浓度的亚甲基蓝对卵母细胞成熟率影响;孤雌激活2 d～7 d后,观察胚胎卵裂率和囊胚率以及活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、母系表达基因含量的变化.结果表明,亚甲基蓝能显著提高猪卵母细胞孤雌激活后胚胎卵裂率和囊胚率,提高孤雌胚中GSH含量,降低ROS含量,增加孤雌激活胚中母系基因细胞周期素B1表达量.结果提示,一定剂量的亚甲基蓝可有效改善猪卵母细胞在体外的发育能力.

摘要： 旨在探究自噬调节因子Atg5和Beclin1在胚胎早期发育过程中的表达模式及胚胎的不同生产方式对两种因子表达的影响.本研究将6～8周龄雌性小鼠进行超数排卵,分为2组,一组收集小鼠卵母细胞,孤雌激活处理后进行体外培养;另一组超排小鼠与公鼠1:1合笼,第2天收集小鼠受精卵进行体外培养;分别在2细胞期、4～8细胞期、桑葚胚期和囊胚期收集不同阶段小鼠孤雌激活胚胎和自然受精胚胎.提取RNA和蛋白,通过实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测自噬关键因子A tg5和Beclin1的表达,通过间接免疫荧光法检测Atg5和Beclin1在小鼠囊胚中的表达定位.结果显示,小鼠自然受精和孤雌激活胚胎在发育各时期均可表达A tg5和Beclin1,表达量在胚胎发育的早期呈现出较高的水平,其中二者的表达在小鼠自然受精胚胎中从2细胞期起逐渐降低,而在孤雌激活胚胎的4～8细胞阶段表达量最高,与同期自然受精胚胎差异极显著(P<0.01);从4细胞期开始,各时期孤雌激活胚胎中Atg5和Beclin1蛋白表达水平均高于自然受精胚胎,差异极显著(P<0.01);在囊胚中,滋养层细胞和内细胞团中均可检测到Atg5和Beclin1蛋白的荧光,但内细胞团中的荧光强度高于滋养层细胞,且Beclin1蛋白在孤雌激活胚胎囊胚内细胞团中荧光强度高于自然受精胚胎.自噬关键因子Atg5和Beclin1在不同来源小鼠胚胎早期发育各时期均有不同程度的表达,提示自噬对早期胚胎发育的调控作用与胚胎的生产方式存在一定关联,研究结果为进一步探索细胞自噬参与哺乳动物胚胎发育的生理调控提供理论依据.

摘要： [目的]探索猪孤雌激活胚胎培养过程和猪卵母细胞体外成熟前后的DNA甲基化水平及其变化,为探讨猪孤雌激活胚胎和卵母细胞的发育提供理论依据.[方法]通过使用间接免疫荧光组化和激光共聚焦显微镜的荧光相对定量的两种方法来间接检测猪孤雌激活胚胎培养过程中和猪卵母细胞成熟前后的细胞5-甲基胞嘧啶的相对含量,观察其体外发育过程中甲基化水平的变化.[结果]随着体外培养时间的延长,猪孤雌激活胚胎的甲基化程度在二到桑葚胚时呈逐渐减弱趋势;在猪孤雌激活胚胎发育的过程中,同一个胚胎的不同卵裂球之间的甲基化水平有差异;内细胞团的甲基化水平低于滋养层.猪卵母细胞成熟前和体外成熟的基因组DNA甲基化水平相比,成熟前卵母细胞基因组DNA甲基化水平低于体外成熟后的卵母细胞基因组DNA甲基化水平;随着体外成熟时间的延长,猪卵母细胞的基因组DNA甲基化水平大致呈上升趋势.[结论]IVM/PA/IVC对猪卵母细胞及早期胚胎的甲基化模式有一定影响;猪卵母细胞体外培养过程中,猪卵母细胞核基因组的甲基化水平接近于正常体内的卵母细胞.

摘要： 本研究通过对比确定了放线菌酮在猪卵母细胞孤雌激活和体细胞核移植中的作用.实验一,对比了体外成熟的猪卵母细胞经电激活结合6-二甲氨基嘌呤或细胞松弛素B或放线菌酮处理对孤雌胚胎发育的影响;实验二,研究了放线菌酮预处理卵母细胞后再经电激活和药物激活对猪孤雌胚胎发育的影响.实验三,对比了不同激活药物对体细胞核移植的重构胚的发育能力的影响.结果表明,在孤雌激活过程中,放线菌酮激活能力较其它两种药物差,表现为较长的激活时间和较低的卵裂率及囊胚率.孤雌激活前经放线菌酮预处理可以提高猪孤雌激活胚胎的发育能力.放线菌酮处理可以提高体细胞核移植的重构胚发育为囊胚的能力.

摘要： 本试验目的是通过对不同电激活参数的摸索，电激活和化学联合激活的研究，确定适合于猪卵母细胞孤雌激活的最佳方案。

摘要： 探讨了电激液中不同Ca2+浓度与不同电脉冲强度相互关系对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响；以及山梨醇电激活液在猪孤雌激活中的应用。结果表明：（1）当Ca2+浓度不高时，同时增加电激液Ca2+浓度和电脉冲强度能协同促进孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率的提高，Ca2+浓度为0.05和0.1 mmol/L时，分别以1.6kV/cm和1.2kV/cm激活，得到的卵裂率为73.75%、74.70%；囊胚率为37.50%、36.83%，显著高于其余各组（P0.05）。以上结果说明：猪卵母细胞激活所需内流Ca2+浓度存在临界值，临界值内，提高Ca2+浓度或电参数，都能提高卵母细胞的激活效果；超过临界值，效果相反；山梨醇液能够取代甘露醇液用于猪卵细胞的电激活；同时以山梨醇和甘露醇作为电激液的基本成分，完全可以用于猪卵母细胞的电激活或融合。

摘要： 实验旨在探讨L-肉碱对猪卵母细胞核成熟、胞内活性氧含量及早期胚胎发育能力的影响。在卵母细胞成熟过程中添加0、0.25、0.5、1、2 mg／ml的L-肉碱，测定(1)44小时后卵母细胞的成熟效果及早期胚胎发育能力;(2)卵母细胞内活性氧的含量。结果表明：在成熟液中添加0.5 mg／mlL-肉碱组成熟率显著高于2 mg／ml组(F(0.05);但与对照组之间差异不显著(P>0.05)。孤雌激活卵裂率和囊胚率在各处理组之间无显著差异(P>0.05);囊胚细胞数以0.5 mg／ml组最高，显著高于对照组和2 mg／ml组(p0.05)。0.5 mg／ml的L-肉碱与对照组相比，能够显著降低胞质内活性氧含量(p>0.05)。由此可见，在猪卵母细胞成熟过程中添加适当浓度的L-肉碱可以降低胞内活性氧含量，并提高早期胚胎的质量。

摘要： 本实验的目的是改进云南半细毛羊卵母细胞体外培养体系，并对卵母细胞玻璃化冷冻保存进行初步研究。本研究表明，添加ITS对于GV期卵母细胞的体外成熟作用不显著，但是ITS可以明显提高孤雌激活后卵母细胞的卵裂率.

摘要： 试验旨在研究小鼠孤雌激活胚胎和体内正常发育胚胎在子宫中发生着床过程时，胚胎上和子宫上wnt 3a这一信号分子的表达情况。试验主要运用免疫组织化学的方法比较受体子宫中孤雌胚胎的着床位点和体内发育正常胚胎的着床位点上wnt3a的表达状况。结果发现：(1)在着床期，即怀孕第5.5天和6.5天，受体子宫中孤雌胚胎的着床位点处和体内发育正常胚胎的着床位点处，子宫上的Wnt3a表达情况相似;(2)在着床期，即怀孕5.5天和6.5天时，孤雌胚胎上和正常胚胎上Wnt3a的表达情况不同;(3)Wnt3a在空怀假孕母鼠子宫上表达情况与有正常胚胎着床的子宫上的表达情况相似。这些结果可能为孤雌胚胎着床率低提供新的线索。

摘要： 本研究探讨褪黑激素处理对猪卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎体外发育的影响。本实验用放射免疫分析法检测了同一卵巢上不同大小卵泡内卵泡液中褪黑激素的浓度，结果发现，卵泡液内含有褪黑激素，浓度为10-11mol／L左右，且随着卵泡直径的增大，卵泡液内的褪黑激素浓度有减小的趋势。

摘要： 本试验以屠宰场绵羊卵巢为材料，采用抽吸法收集卵泡直径小于2mm、2-5mm、大于5mm卵母细胞，置于26μM/L的BCB染色液中避光染色90min，将卵母细胞质呈蓝色的设为BCB十卵母细胞，未着色的设为BCB+卵母细胞，体外成熟24h，用0.1%透明质酸酶去除卵丘细胞，再用含5μM/L离子霉素的激活液中激活4min，然后移入含6-DMAP的培养液内培养2h，最后，移入含有600-700μM/L体外培养液的四孔培养板中培养。取第7d的囊胚，进行囊胚Hoechst细胞染色，然后在倒置显微镜的紫外光下进行细胞计数。研究表明：小于2mm组卵母细胞可能由于体内某种物质储备不足，核成熟可以达到，但后期胚胎的发育能力会受到限制，大于5mm卵泡直径的卵母细胞，受精卵基本都能发育到桑胚或囊胚。通过卵泡直径的分类和BCB染色法的结合，可以有效筛选出卵泡直径大于2mm卵母细胞适合体外培养，并且大于2mmBCB+组卵母细胞后期发育潜能更强。

摘要： 本试验以屠宰场绵羊卵巢为材料，采用抽吸法收集卵泡直径小于2mm、2-5mm、大于5mm卵母细胞，置于26μM/L的BCB染色液中避光染色90min，将卵母细胞质呈蓝色的设为BCB十卵母细胞，未着色的设为BCB+卵母细胞，体外成熟24h，用0.1%透明质酸酶去除卵丘细胞，再用含5μM/L离子霉素的激活液中激活4min，然后移入含6-DMAP的培养液内培养2h，最后，移入含有600-700μM/L体外培养液的四孔培养板中培养。取第7d的囊胚，进行囊胚Hoechst细胞染色，然后在倒置显微镜的紫外光下进行细胞计数。研究表明：小于2mm组卵母细胞可能由于体内某种物质储备不足，核成熟可以达到，但后期胚胎的发育能力会受到限制，大于5mm卵泡直径的卵母细胞，受精卵基本都能发育到桑胚或囊胚。通过卵泡直径的分类和BCB染色法的结合，可以有效筛选出卵泡直径大于2mm卵母细胞适合体外培养，并且大于2mmBCB+组卵母细胞后期发育潜能更强。

摘要： 本试验以屠宰场绵羊卵巢为材料，采用抽吸法收集卵泡直径小于2mm、2-5mm、大于5mm卵母细胞，置于26μM/L的BCB染色液中避光染色90min，将卵母细胞质呈蓝色的设为BCB十卵母细胞，未着色的设为BCB+卵母细胞，体外成熟24h，用0.1%透明质酸酶去除卵丘细胞，再用含5μM/L离子霉素的激活液中激活4min，然后移入含6-DMAP的培养液内培养2h，最后，移入含有600-700μM/L体外培养液的四孔培养板中培养。取第7d的囊胚，进行囊胚Hoechst细胞染色，然后在倒置显微镜的紫外光下进行细胞计数。研究表明：小于2mm组卵母细胞可能由于体内某种物质储备不足，核成熟可以达到，但后期胚胎的发育能力会受到限制，大于5mm卵泡直径的卵母细胞，受精卵基本都能发育到桑胚或囊胚。通过卵泡直径的分类和BCB染色法的结合，可以有效筛选出卵泡直径大于2mm卵母细胞适合体外培养，并且大于2mmBCB+组卵母细胞后期发育潜能更强。

摘要： 本发明涉及万氏潜蝇姬小蜂两种品系快速PCR检测方法及所用的特异性COI引物。该方法根据万氏潜蝇姬小蜂两种品系线粒体DNA特异序列，通过特异性位点设计特异性引物，最终建立了一对万氏潜蝇姬小蜂的特异性检测COI引物。所述引物对包括引物DWAlgdCF：5’‑TTTGGTTTAAT CTCTCAC‑3’；和DWlgdCR：5’‑ATGTAAAACAATATC AATTGAAGA‑3’。一步双重PCR引物为通用引物COISF、特异性引物DWAlgdCF和特异性引物DWlgdCR。成功建立的双重PCR体系能够对万氏潜蝇姬小蜂两性品系的卵、幼虫、蛹、雌成虫和雄成虫DNA，及两种品系在同一虫态下的混合DNA为模板亦有良好的检测效果。本方法是在难以从形态准确鉴定两种品系的背景下，能够快速有效的鉴定出其中一种品系，应用该方法，大大节约了时间和资金，并能获得可靠的结果。

摘要： 本发明公开了一种利用孤雌激活的孤雌胚胎干细胞体外分化形成卵子的方法，该方法用锶离子和细胞松弛素D处理获得孤雌激活胚胎并建立孤雌胚胎干细胞细胞系，进一步分化形成原始生殖细胞样细胞，将所述原始生殖细胞样细胞与小鼠雌性胚胎性腺体细胞聚合移植到联合免疫缺陷型小鼠体内获得卵子；通过该技术可以产生无限多的正常功能性卵子，该技术无论对于临床治疗不孕不育或卵巢早衰，还是科学研究过程中获得足量的高质量卵子均具有重要的意义。

摘要： 本发明公开了一种用于猪孤雌激活胚的体外培养液(mPZM‑3)及培养方法，属于动物胚胎体外培养领域，所述体外培养液(mPZM‑3)的原料包括mPZM‑3基础培养液及五水乳酸钙和丙酮酸钠，且所述体外培养液中五水乳酸钙的浓度为0.606g/L，丙酮酸钠的浓度为0.022g/L；所述体外培养液所用溶剂为富氢水，且其中H

摘要： 本发明公开了一种利用孤雌激活的孤雌胚胎干细胞体外分化形成卵子的方法，该方法用锶离子和细胞松弛素D处理获得孤雌激活胚胎并建立孤雌胚胎干细胞细胞系，进一步分化形成原始生殖细胞样细胞，将所述原始生殖细胞样细胞与小鼠雌性胚胎性腺体细胞聚合移植到联合免疫缺陷型小鼠体内获得卵子；通过该技术可以产生无限多的正常功能性卵子，该技术无论对于临床治疗不孕不育或卵巢早衰，还是科学研究过程中获得足量的高质量卵子均具有重要的意义。

摘要： 本发明公开了一种用于猪孤雌激活胚的体外培养液(mPZM‑3)及培养方法，属于动物胚胎体外培养领域，所述体外培养液(mPZM‑3)的原料包括mPZM‑3基础培养液及五水乳酸钙和丙酮酸钠，且所述体外培养液中五水乳酸钙的浓度为0.606g/L，丙酮酸钠的浓度为0.022g/L；所述体外培养液所用溶剂为富氢水，且其中H

摘要： 本发明公开了一种水牛卵母细胞玻璃化冷冻后孤雌激活方法，该法采用优化的离子霉素联合6-DMAP的激活处理方式，改良优化了已有水牛卵母细胞玻璃化冷冻后孤雌激活方法。实验证明，孤雌激活条件对冷冻复苏水牛卵母细胞的发育潜能存在一定影响。应用本发明专门针对冷冻复苏后的卵母细胞的孤雌激活方法，可提高其激活率，进而提高冻融后卵母细胞的存活率和发育潜能。

摘要： 本发明公开了一种猪体外胚胎培养液。本发明所提供的猪体外胚胎培养液，是在NCSU-23胚胎培养液中加入终浓度为0.05～5.00μg/mL的川芎嗪后得到的培养液。本发明所提供的猪体外胚胎培养液中加入了中药单体成分——川芎嗪，实验证明，利用该培养液对猪孤雌激活胚和体外受精胚胎进行体外培养，可有效提高胚胎发育效率及囊胚内细胞团及其总细胞数量。本发明为其他生物技术、医学研究以及畜牧业发展奠定基础，同时为阐明猪早期胚胎发育机制提供一定的理论基础。

摘要： 本发明公开了一种猪体外胚胎培养液。本发明所提供的猪体外胚胎培养液，是在NCSU-23胚胎培养液中加入终浓度为0.1～1.0μg/mL的小檗碱后得到的培养液。本发明所提供的猪体外胚胎培养液中加入了中药单体成分——小檗碱，实验证明，利用该培养液对猪孤雌激活胚和体外受精胚胎进行体外培养，可有效提高胚胎发育效率及囊胚内细胞团及其总细胞数量。本发明为其他生物技术、医学研究以及畜牧业发展奠定基础，同时为阐明猪早期胚胎发育机制提供一定的理论基础。

摘要： 本发明提供了一种孤雌激活源性胚胎干细胞系的建立方法，包括以下步骤：以孕马血清促性腺激素(PMSG)作用于雌性动物体，进行超促排卵；取卵后应用钙离子载体A23187和6－二甲基氨基嘌呤(6－DMAP)对其进行化学激活，将激活发育的胚胎体外培养至囊胚；机械法分离内细胞团细胞，以细针直接刺破胚胎囊胚，将内细胞团剥离出来，在铺有饲养层细胞的培养皿中传代、扩增培养，建立稳定的动物孤雌激活ES细胞系。本发明激活处理的效果好，囊胚率可高达96.5％，以针刺的机械法分离内细胞团细胞，避免了免疫反应对内细胞团细胞的损伤，而且耗时短，减少细胞在培养箱外的暴露时间，最大程度的保护了细胞，解决了胚胎来源ES细胞应用中的免疫原性问题。

摘要： 本发明公开了一种哺乳动物孤雌类上胚层干细胞的诱导及培养建系方法和得到的孤雌类上胚层干细胞系，对ICR和129两种品系的雌性小鼠进行超数排卵，然后将卵母细胞进行孤雌激活。激活5h后，在KSOM中培养96h后出现囊胚，利用囊胚进行建系。本发明建系方法可以高效率的将小鼠孤雌胚胎诱导形成孤雌类上胚层干细胞pa‑EpiLSCs，并能保持孤雌二倍体特征且能稳定增长多达30代以上。本发明为隐性性状遗传模型的快速产生提供了一种新的工具，同时也为其它哺乳动物建立孤雌激活胚胎来源的pa‑EpiLSCs细胞提供了新的技术和理论基础。