NIH3T3细胞

摘要： 为给抗氧化损伤药物的开发利用和抗氧化损伤机制的研究提供理论依据和实验基础,本方法构建了过氧化氢(H_(2)O_(2))体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)经典的氧化应激损伤模型。应用贴壁细胞培养法培养NIH-3T3细胞,采用不同浓度的H_(2)O_(2)处理NIH-3T3细胞不同时间模拟氧化损伤模型,通过CCK-8法观察H_(2)O_(2)引起NIH-3T3细胞半数致死率浓度(IC50)和时间;检测丙二醛(MDA)以及一氧化氮(NO)的表达水平;免疫荧光法观察H_(2)O_(2)诱导NIH-3T3细胞氧化损伤后细胞核内组蛋白γH_(2)AX的表达变化。通过与对照组进行分析比较,300μM H_(2)O_(2)处理NIH-3T3细胞2 h后,NIH-3T3细胞死亡率最接近50%。此时,NIH-3T3细胞内MDA和NO水平显著增高,细胞核中组蛋白γH_(2)AX表达水平也明显提高。研究表明,H_(2)O_(2)体外诱导NIH-3T3细胞氧化应激模型的最适条件:300μM H_(2)O_(2)处理2 h。

摘要： 本研究以南昆山毛叶茶为材料,探讨其水提物对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,tBHP)诱导小鼠成纤维细胞NIH3T3氧化损伤的保护作用.以tBHP诱导NIH3T3细胞建立氧化损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒测定细胞膜完整性.同时,检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,以及过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)抗氧化酶活性,评价其抗氧化能力,荧光探针测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化,分光光度法和Western blot检测caspase-3、caspase-9、细胞色素c的表达以探究其损伤保护机制.结果表明,与tBHP组相比,南昆山毛叶茶水提物在25～100 μg/mL浓度范围内,细胞存活率由49.68％显著提高至81.69％;LDH活性由520.70 U/L降低至346.42 U/L.同时,可显著抑制ROS、MDA产生,均为tBHP组的0.02倍,增加GSH含量至tBHP组的3.07倍,提高CAT、GSH-Px、SOD等抗氧化酶活性,分别为tBHP组的1.42倍、2.48倍和1.77倍,提高MMP,抑制caspase-3、caspase-9、细胞色素c的表达.说明南昆山毛叶茶水提物能修复抗氧化系统,抑制线粒体细胞凋亡途径,有效减缓tBHP诱导的NIH3T3细胞氧化损伤.本研究初步揭示了南昆山毛叶茶的抗氧化机理,为这一特殊资源的更广泛开发利用提供了抗氧化功能特性的理论研究基础.

摘要： 目的 研究新型受体酪氨酸激酶STYK1/NOK加入DFG基序后对小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3增殖和细胞周期G1/S的影响.方法 SWISS MODEL同源比对STYK1/NOK的二级结构确定DFG加入的位置;用CCK8和MTT法检测瞬时转染pcDNA3.0或pcDNA3.0-DFG-NOK的NIH3T3细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞周期;Western blot检测细胞增殖信号通路蛋白Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、STAT、p-STAT、JAK3、p-JAK3和周期蛋白cyclin D1的表达.结果 与瞬时转染pcDNA3.0相比,1)瞬时转染pcDNA3.0-DFG-NOK可抑制NIH3T3细胞增殖;2)DFG-NOK阻碍细胞周期由G1期进入S期;3)DFG-NOK抑制Erk、STAT1、STAT3和JAK3的磷酸化和周期蛋白cyclin D1表达.结论 DFG-NOK抑制NIH3T3细胞增殖和细胞周期G1期进入S期.

摘要： 目的 探究阿奇霉素(AZM)对H2O2诱导的小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH/3T3)衰老模型的效果及相关机制.方法 采用H2O2处理NIH/3T3细胞,构建细胞衰老模型,利用ELISA检测相关标志物水平,分析衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-GAL)活性以检测模型的相关表型;运用West-ern blot检测其衰老相关分泌表型(SASP)的蛋白标志物表达水平,qPCR分析其相关mRNA水平;使用AZM处理正常细胞及衰老细胞,并运用流式细胞术、TUNEL、Western blot等检测AZM作用下相关表型并验证相关表型的标志物.结果 H2O2处理后的NIH/3T3细胞核体积变大;β-半乳糖苷酶染色蓝染比率升高(P＜0.05);衰老相关细胞炎性因子IL-6、IL-8/CXCL8分泌量显著上升(P＜0.05);衰老标志性蛋白P53、P21、P16水平均显著升高(P＜0.05),同时mRNA呈相同趋势(P＜0.05).衰老细胞在使用不同浓度AZM处理后,发生凋亡,并具有浓度依赖性.使用AZM处理不同实验组细胞24 h后,West-ern blot结果显示衰老细胞cleaved PARP/PARP、Bax上调、Bcl-2下调(P＜0.05);经Annexin V-PE/7-AAD双染,Annexin V阳性比率上升(P＜0.05);正常细胞在AZM的处理下凋亡比例未见明显差异(P＞0.05);TUNEL实验结果与上述一致.结论 AZM可能特异性诱导衰老细胞凋亡,为临床上抗衰老药物的选择与应用提供了新的策略.

摘要： 目的:本研究旨在探究微小RNA-433(miR-433)在纤维化中的作用及机制.方法:采用Tar-getScan预测miR-433的潜在靶基因.检测转化生长因子β1(TGF-β1)处理小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3细胞)24 h后miR-433表达的变化.检测miR-433 mimic对TGF-β1处理的NIH-3T3细胞中p-SMAD2、纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的影响.采用CCK-8法和流式细胞术检测转染miR-433 mimic对TGF-β1诱导的NIH-3T3细胞生长和S期阻滞的影响.构建矽尘诱导的小鼠肺纤维化模型并使用agomiR-433进行干预,HE染色和Masson染色观察miR-433对小鼠肺纤维化的影响,采用免疫组化检测小鼠肺组织中α-SMA的表达.结果:miR-433能特异性结合SMAD2的3'-UTR,并抑制其蛋白和mRNA的表达.TGF-β1能下调NIH-3T3细胞中miR-433的表达水平,上调p-SMAD2蛋白的水平,同时也增强FN、α-SMA和CTGF蛋白和mRNA的表达,并增强细胞活力,诱导S期细胞数量增加;而miR-433 mimic能逆转TGF-β1对NIH-3T3细胞活力和S期阻滞的影响.在矽尘诱导的小鼠肺纤维化模型中,agomiR-433能抑制肺纤维化进程,减少小鼠肺组织中α-SMA的表达.结论:miR-433可能通过靶向调控SMAD2干预TGF-β1/SMAD2信号通路,从而参与调节纤维化的病理过程.

摘要： 目的:探究槲皮素在体外抑制小鼠肺纤维化的潜在分子机制.方法:用TGF-β刺激小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NIH3T3构建体外纤维化模型,然后用槲皮素处理,MTT法检测各组细胞不同时间(0、12、24、48 h)细胞增殖情况.ELISA法检测细胞培养液中Ⅰ型胶原Coll和透明质酸酶HA的含量;收集细胞并提取总RNA和总蛋白,采用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1超家族信号转导蛋白7(Smad7) mRNA的表达;Western blot检测细胞中TGF-β1超家族信号转导蛋白7(Smad7)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)的表达.结果:槲皮素能够抑制TGF-β诱导NIH3T3细胞的增殖(P＜0.05).ELISA检测结果显示槲皮素处理组细胞分泌的Coll与HA的含量较空白组降低(P＜0.05).Westemblot和RT-qPCR结果显示,Smad7表达水平较对照组显著升高(P＜0.05),α-SMA、FN蛋白的表达水平显著降低(P＜0.05).结论:槲皮素能够缓解TGF-β诱导的小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NIH3T3纤维化,作用机制可能是通过调控Smad7信号来实现的.

摘要： 目的 探讨长期1800 MHz电磁辐射对NIH/3T3细胞增殖能力的影响.方法 采用1800MHz电磁辐射,SAR值2 W/kg,间断暴露方式(5 min on/10 min off),5 h/d.对暴露60 d和138 d的细胞,进行平板克隆和软琼脂克隆实验,并采用ELISA法检测端粒酶的表达.结果 平板克隆实验中,60 d暴露组细胞的克隆形成率显著低于假暴露组(P＜0.05),而138 d暴露组细胞的克隆形成率与假暴露组无明显差异.软琼脂克隆实验中,60 d暴露组和假暴露组细胞均未见克隆形成,而138 d暴露组克隆形成率显著高于假暴露细胞.端粒酶检测结果,60 d暴露组细胞的端粒酶表达量与假暴露组无显著差异,而138 d暴露组细胞的端粒酶表达量显著高于假暴露组(P＜0.05).结论 1800 MHz电磁辐射长期暴露至60 d,有损NIH/3T3细胞的增殖能力,而更长期的暴露后(138 d)细胞转化增殖能力增强.%Objective To observe the proliferation ability of NIH/3T3 cells after a long-term exposure to 1800 MHz electromagnetic radiation.Methods Cells were exposed to 1800 MHz electromagnetic radiation,at SAR of 2 W/kg,intermittently exposure mode (5 min on/10 min off),5 h/d.Then plate clone forming test and soft agar clone forming test of the exposed and sham exposed cells were cultured respectively after 60-day and 138-day exposure.Telomerase expressions of each group were detected by ELISA.Results In plate clone experiments,plate clone forming ratio was significantly lowcr than that of the sham group (P＜O.05) after 60-day exposure,however,there was no significant difference between the exposed cells and the sham after 138-day exposure.In soft agar clone experiments,soft agar clone forming was no significantly different from sham group after 60-day exposure,however,138-day exposure group formation was significantly higher than that of the sham group (P＜0.05).In telomerase experiments,after 60 days of exposure,the expression of telomerase was no significantly different from sham group,whereas 138-day exposure group was significantly higher than sham group (P ＜ 0.05).Conclusions 1800 MHz electromagnetic radiation could damage the proliferation of NIH/3T3 cells exposed for 60 days,whereas the ability of cell transformation and proliferation increased significantly after more long-term exposure (138 days).

摘要： Objective:To explore PUMILIO1 (PUM1)associatedproteinsinmammaliancells (NIH3T3 and DU145 cells).Methods:NIH3T3 and DU145 cells were respectively collected.Proteins were obtained by IP (Immunoprecipitation) experiment.Experimental group and control group were set up using anti PUM1 antibody and anti Goat-IgG antibody,respectively.Silver staining revealed differential bands in PUM1 pull-down lane in comparison to IgG lane.Proteins from the differential bands were analyzed by mass spectrum and Mascot software analysis.Results:A macroscopic differential band around 37 KD in experimental group was observed both in NIH3T3 and DU145 cells.NDFIP2 protein acquired the highest Mascot score using mass spectrum and peptide mass fingerprint in which the minimum threshold value of the score representing real differences of protein was set to 65(P＜0.05).The peptides coverage specific to NDFIP2 was forty percent in reference to NCBInr database.Conclusions:NDFIP2 was associated with PUM1 protein in mammalian cells and might be a partner protein of PUF family proteins.%目的:探索NIH3T3和DU145细胞中PUM1蛋白的伴侣蛋白.方法:收集NIH3T3和DU145细胞进行免疫沉淀实验,实验组和对照组分别使用抗PUM1抗体和抗Goat-IgG抗体.通过银染实验观察实验组与对照组是否有差异性条带,通过质谱鉴定和Mascot软件对差异性条带所包含的蛋白进行分析,鉴定PUM1蛋白在细胞中发挥作用时的可能互动蛋白.结果:在NIH3T3和DU145细胞银染实验中,实验组凝胶泳道均在约37 KD处出现差异性条带.对NIH3T3细胞中差异性条带进行质谱分析,通过Mascot软件肽质量指纹谱搜索,将有真实差异的蛋白评分最低阈值设为65,P＜0.05,结果显示肽段评分最高的蛋白为NDFIP2蛋白.与NCBInr数据库比对,检测到针对NDFIP2的肽段的覆盖率为40％.结论:NDFIP2与哺乳动物PUM1蛋白在细胞内关联,可能是PUF家族蛋白的伴侣蛋白.

摘要： 本论文从刺参中分离纯化得到一种海参肽,并研究其对NIH/3T3细胞增殖和胶原蛋白分泌的影响.采用活性追踪的方法从新鲜刺参中通过离子交换层析、凝胶层析分离纯化得到海参肽SP12,采用MTT法检测SP12对NIH/3T3细胞的增殖作用;采用流式细胞术检测SP12对NIH/3T3细胞细胞周期的影响;采用羟脯氨酸测定试剂盒的方法检测SP12对NIH/3T3细胞胶原蛋白分泌的影响;采用Western Blot及RT-PCR的方法,在蛋白水平及基因水平上检测SP12对NIH/3T3细胞Ⅰ型胶原蛋白、MMP-1及TIMP-1表达的影响.结果表明SP12能显著提高NIH/3T3细胞的增殖率,能促进NIH/3T3细胞由G1期向S期转变,增加其胶原蛋白的分泌量,且在0～20 μg/mL范围内均呈剂量依赖性.在蛋白水平和基因水平,SP12均能显著促进Ⅰ型胶原蛋白及TIMP-1的表达,抑制MMP-1的表达,这可能是SP12促进NIH-/3T3细胞胶原蛋白分泌的作用机制.

摘要： 目的：利用高通量筛选分析技术评价单味中草药提取物对肝癌细胞及成纤维细胞的作用，以期获得具有特异性抗肝癌作用的中草药提取物。方法将242种常用单味中草药分别应用石油醚、乙醇或水进行提取，共获得554个中草药提取物。采用MTT来评价提取物对人肝癌细胞Bel7402和小鼠成纤维细胞NIH3T3存活的作用。结果提取物对人肝癌细胞Bel7402及成纤维细胞NIH3T3生长抑制作用>50%的样品分别占总样品数的7.4%和14.8%，对2种细胞抑制率同时>50%的样品占总数的4.4%，对Bel7402抑制率为对NIH3T3抑制率2倍以上且对Bel7402抑制率>50%的样品占总样品数的1.6%。复筛结果显示，防己乙醇提取物（DF173）对肝癌细胞的细胞毒作用特异性较好，具有良好的量效关系。DF173对Bel7402细胞毒作用IC50为8.27 mg·L-1，对NIH3T3的细胞毒作用IC50为19.48 mg·L-1。结论肿瘤细胞联合正常成纤维细胞筛选评价中草药提取物特异性抗肿瘤作用，有利于发现高效、低毒抗肿瘤中草药提取物。%OBJECTIVE To evaluate the effect of single traditional Chinese medicine(TCM) herb extracts on hepatoma and normal fibroblast cells using high-throughput screening in order to obtain extracts with specific anti-hepatoma effect. METHODS 242 commonly used TCM herbs were extracted by petroleum ether,ethanol and water,respectively. The total number of TCM extracts was 554. The cyto⁃toxicity of samples was evaluated by MTT in human hepatoma cells Bel7402 and mice normal fibroblasts NIH3T3. RESULTS 7.4%of the total extracts had an inhibitory effect greater than 50%for Bel7402,but 14.8% for fibroblasts NIH3T3 cells. Extracts with an inhibitory effect above 50% on both Bel7402 and NIH3T3 cells accounted for 4.4%of the total extracts. Our results showed that the sample DF173 had preferable cytotoxicity effect on hepatoma carcinoma cells in a good dose-effect relationship. DF173 is an ethanol extract from Stephania tetrandra,which is a commonly used herb in TCM. The cytotoxic IC50 of DF173 against Bel7402 was 8.27 mg·L-1,and 19.48 mg·L-1 on NIH3T3. CONCLUSION The components of TCM herbs are highly complicated. The combination of tumor cells with normal fibroblast cells to evaluate the cytotoxicity effect during anti-tumor drug screening will contribute much to the discovery of TCM drugs with high anti-tumor efficiency and lower toxicity.

摘要： 目的：构建pcDNA3．1-Rap2b真核表达载体，以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞，了解该基因对NIH3T3细胞P38MAPK信号传导通路的影响，为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法：构建人R印2b真核表达载体pcDNA3．1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell，利用western blotting 方法对转染的细胞进行P38及其下游底物ATF-2磷酸化蛋白及总蛋白表达水平的检测。rn 结果：转染pcDNA3．1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3．1的细胞相比，其P38及ATF-2磷酸化蛋白表达水平上调(P<0．05)，P38特异性抑制剂预处理可以使ATF22磷酸化蛋白表达水平下调(P<0．05)。rn 结论：Rap2b基因激活了P38MAPK信号通路，使下游ATF-2蛋白的磷酸化上调，其在P38MAPK信号通路中发挥重要作用。

摘要： 目的：构建pcDNA3．1-Rap2b真核表达载体，以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞，了解该基因对NIH3T3细胞P38MAPK信号传导通路的影响，为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法：构建人R印2b真核表达载体pcDNA3．1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell，利用western blotting 方法对转染的细胞进行P38及其下游底物ATF-2磷酸化蛋白及总蛋白表达水平的检测。rn 结果：转染pcDNA3．1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3．1的细胞相比，其P38及ATF-2磷酸化蛋白表达水平上调(P<0．05)，P38特异性抑制剂预处理可以使ATF22磷酸化蛋白表达水平下调(P<0．05)。rn 结论：Rap2b基因激活了P38MAPK信号通路，使下游ATF-2蛋白的磷酸化上调，其在P38MAPK信号通路中发挥重要作用。

摘要： 目的：构建pcDNA3．1-Rap2b真核表达载体，以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞，了解该基因对NIH3T3细胞P38MAPK信号传导通路的影响，为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法：构建人R印2b真核表达载体pcDNA3．1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell，利用western blotting 方法对转染的细胞进行P38及其下游底物ATF-2磷酸化蛋白及总蛋白表达水平的检测。rn 结果：转染pcDNA3．1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3．1的细胞相比，其P38及ATF-2磷酸化蛋白表达水平上调(P<0．05)，P38特异性抑制剂预处理可以使ATF22磷酸化蛋白表达水平下调(P<0．05)。rn 结论：Rap2b基因激活了P38MAPK信号通路，使下游ATF-2蛋白的磷酸化上调，其在P38MAPK信号通路中发挥重要作用。

摘要： 目的：构建pcDNA3．1-Rap2b真核表达载体，以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞，了解该基因对NIH3T3细胞P38MAPK信号传导通路的影响，为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法：构建人R印2b真核表达载体pcDNA3．1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell，利用western blotting 方法对转染的细胞进行P38及其下游底物ATF-2磷酸化蛋白及总蛋白表达水平的检测。rn 结果：转染pcDNA3．1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3．1的细胞相比，其P38及ATF-2磷酸化蛋白表达水平上调(P<0．05)，P38特异性抑制剂预处理可以使ATF22磷酸化蛋白表达水平下调(P<0．05)。rn 结论：Rap2b基因激活了P38MAPK信号通路，使下游ATF-2蛋白的磷酸化上调，其在P38MAPK信号通路中发挥重要作用。

摘要： 目的:构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号传导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法:构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell,利用westernblotting方法对转染的细胞进行AKT、ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及总蛋白表达水平检测。rn 结果:转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3.1的细胞相比,其AKT、ERK、JNK磷酸化蛋白表达水平差异无统计学意义(p>0.05),而P38磷酸化蛋白表达水平明显上调(p<0.05)。rn 结论:Rap2b基因外源性高表达可能对P38通路有活化作用,对JNK、ERK、AKT通路无活化作用。

摘要： 目的:构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号传导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法:构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell,利用westernblotting方法对转染的细胞进行AKT、ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及总蛋白表达水平检测。rn 结果:转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3.1的细胞相比,其AKT、ERK、JNK磷酸化蛋白表达水平差异无统计学意义(p>0.05),而P38磷酸化蛋白表达水平明显上调(p<0.05)。rn 结论:Rap2b基因外源性高表达可能对P38通路有活化作用,对JNK、ERK、AKT通路无活化作用。

摘要： 目的:构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号传导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法:构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell,利用westernblotting方法对转染的细胞进行AKT、ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及总蛋白表达水平检测。rn 结果:转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3.1的细胞相比,其AKT、ERK、JNK磷酸化蛋白表达水平差异无统计学意义(p>0.05),而P38磷酸化蛋白表达水平明显上调(p<0.05)。rn 结论:Rap2b基因外源性高表达可能对P38通路有活化作用,对JNK、ERK、AKT通路无活化作用。

摘要： 目的:构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号传导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法:构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell,利用westernblotting方法对转染的细胞进行AKT、ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及总蛋白表达水平检测。rn 结果:转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3.1的细胞相比,其AKT、ERK、JNK磷酸化蛋白表达水平差异无统计学意义(p>0.05),而P38磷酸化蛋白表达水平明显上调(p<0.05)。rn 结论:Rap2b基因外源性高表达可能对P38通路有活化作用,对JNK、ERK、AKT通路无活化作用。

摘要： 目的:构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号传导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。rn 方法:构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并稳定转染NIH3T3 cell,利用westernblotting方法对转染的细胞进行AKT、ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及总蛋白表达水平检测。rn 结果:转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3.1的细胞相比,其AKT、ERK、JNK磷酸化蛋白表达水平差异无统计学意义(p>0.05),而P38磷酸化蛋白表达水平明显上调(p<0.05)。rn 结论:Rap2b基因外源性高表达可能对P38通路有活化作用,对JNK、ERK、AKT通路无活化作用。

摘要： 目的：表达具备生物活性的重组小鼠Wnt-3a信号蛋白。rn 方法：应用脂质体转染试剂将重组真核表达载体pSecTag2/Hygro B-Wnt3a转染并筛选稳定表达的NIH3T3细胞，Western Blot鉴定重组Wnt-3a蛋白的表达，并对Wnt3a/NIH3T3细胞的融合密度及抗凋亡能力给予检测。rn 结果：Wnt-3a信号蛋白在Wnt3a/NIH3T3细胞中获得稳定表达，Wnt-3a信号蛋白能够明显提高NIH3T3细胞的融合密度及抗凋亡能力。rn 结论：在NIH3T3细胞中表达的重组Wnt-3a信号蛋白具备生物活性。

摘要： 本发明提供一种三维细胞培养支架的制备方法，包括如下步骤：a.称取1~10g的聚合物溶于的有机溶剂中，配成聚合物溶液；b.称取0~500mg增塑剂加到上述聚合物溶液中，混合均匀；c.称取羟基磷灰石胶纳米颗粒；银纳米颗粒；氧化锌纳米颗粒；壳聚糖纳米颗粒，加入到步骤b处理的溶液中，混合均匀，获得纺丝原液；d.将纺丝原液注入到静电纺丝设备中，在静电纺丝设备的接收装置上获得纺丝；e.将纺丝烘干，制得三维细胞培养支架。本发明还提供一种基于所述三维细胞培养支架制备方法所获得的三维细胞培养装置。所述培养装置可为培养的细胞提供无毒的具有生物相容性的生长环境，同时可适用于多种不同的种类细胞的培养。

摘要： 一种H2O2诱导的NIH-3T3细胞衰老模型。本发明属于研究获得简单、快速的动物模型来检验抗衰老药物的疗效。采取如下的技术方案：将NIH-3T3细胞接种在含10%胎牛血清的MEM，在温度37°C、饱和湿度的培养箱中培养；从20代开始，细胞随机分3组后细胞培养，3-4天换液1次，细胞达到融合时，用0.025%胰酶后1:4传代，细胞至30代时随机收获部分细胞；将H2O2用DMEM完全培养液按不同浓度梯度稀释后，加入细胞中，形成浓度梯度，培养2小时后，弃去。用PBS或DMEM洗三遍，加入DMEM完全培养液继续培养；在连续培养到第十天，用胰酶消化6孔板中细胞，取其中5000个细胞接种到24孔板中培养24小时得抗衰老动物模型。

摘要： 本发明公开了一类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

摘要： 本发明公开了一类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

摘要： 本发明涉及含细胞外基质的组合物、三维组织体形成用临时支架材料及三维组织体形成剂以及从三维组织体中回收细胞的方法。所述含细胞外基质的组合物包含片段化的细胞外基质成分和水性介质。

摘要： 本公开涉及用于控制细胞行为的三维微环境结构、用于控制细胞行为的三维表面、以及用于制造阵列和三维微环境结构的方法。

摘要： 一种三维骨细胞主动接种方法、三维骨细胞主动接种支架及其制备方法。该制备方法包括：将聚有机硅氧烷与固化剂加入反应瓶中搅拌混匀，真空抽滤得混合物，加入导电填料、成孔剂后充分混合后超声处理，然后浇筑到模具中加热固化，得到复合导电薄层，在其表面浇筑一层混合物形成绝缘层，加热固化后激光切割，得到具有微结构的电极状薄膜，除去电极状薄膜中的成孔剂；将多个去除成孔剂后的电极状薄膜进行粘贴，形成三维骨细胞主动接种支架。该三维骨细胞主动接种方法包括：将该支架置于细胞悬浮液中进行细胞吸附，吸附牢固后转移至细胞培养液中培养一周。本发明具有较高的孔隙率、细胞接种效率高，制备方法简单，成本低廉，具有很大的市场潜力。

摘要： 本发明提供一种三维细胞培养支架的制备方法，该方法包括如下步骤：a.称取1~10g的聚合物溶于10~100ml的有机溶剂中，配成聚合物溶液；b.称取0~500mg增塑剂，加到上述聚合物溶液中，混合均匀；c.称取羟基磷灰石胶纳米颗粒、银纳米颗粒、氧化锌纳米颗粒、壳聚糖纳米颗粒各0~2g，加入到步骤b处理的溶液中，混合均匀，获得纺丝原液；d.将所述纺丝原液注入到静电纺丝设备中，在静电纺丝设备的接收装置上获得纺丝；e.将所获得的纺丝进行烘干处理，即制得三维细胞培养支架。本发明还提供一种基于所述三维细胞培养支架制备方法所获得的三维细胞培养装置。所述培养装置可为培养的细胞提供无毒的具有生物相容性的生长环境，同时可适用于多种不同的种类细胞的培养。

摘要： 本发明公开了一种小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3电转染的方法，该法主要采用等渗透压的电转染缓冲液，对小鼠成纤维细胞NIH/3T3进行一次放电，通过等渗透压和高压脉冲电场压组合，使得细胞体积增大，高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入细胞质中，从而提高电转效率。实际试验表明，应用本发明质粒pmaxGFP(绿色荧光蛋白)转染到小鼠成纤维细胞NIH/3T3，转染效率最高可以达到55％左右。本发明可以缩短试验周期，节约成本，减少繁琐的操作步骤，并且安全无害，为小鼠成纤维细胞NIH/3T3细胞系的后续研究提供了关键的技术支持。

摘要： 一种H2O2诱导的NIH-3T3细胞衰老模型。本发明属于研究获得简单、快速的动物模型来检验抗衰老药物的疗效。采取如下的技术方案：将NIH-3T3细胞接种在含10%胎牛血清的MEM，在温度37°C、饱和湿度的培养箱中培养；从20代开始，细胞随机分3组后细胞培养，3-4天换液1次，细胞达到融合时，用0.025%胰酶后1:4传代，细胞至30代时随机收获部分细胞；将H2O2用DMEM完全培养液按不同浓度梯度稀释后，加入细胞中，形成浓度梯度，培养2小时后，弃去。用PBS或DMEM洗三遍，加入DMEM完全培养液继续培养；在连续培养到第十天，用胰酶消化6孔板中细胞，取其中5000个细胞接种到24孔板中培养24小时得抗衰老动物模型。