原代细胞

摘要： 背景:肿瘤相关成纤维细胞系是构成肿瘤微环境的重要细胞成分,但是在原代培养过程中极易老化和表型丢失,进而显著降低肿瘤相关成纤维细胞功能相关研究的实验重复性.目的:旨在建立一种永生化的口腔癌相关成纤维细胞系,为探索口腔癌中肿瘤相关成纤维细胞功能提供稳定的细胞实验材料.方法:采用酶消化法分离、纯化人口腔癌组织来源肿瘤相关成纤维细胞,利用包装有人端粒酶反转录酶(pBABE-hygro-hTERT)的慢病毒感染原代肿瘤相关成纤维细胞,鉴定其形态及其标志物,然后进行细胞增殖、衰老功能检测,对原代和永生化肿瘤相关成纤维细胞进行染色体核型分析、细胞系身份鉴定.结果 与结论:①成纤维细胞永生化后,其标志物α-SMA、PDGFRβ以及FSP-1表达没有发现显著改变;②即使在传代15代后,永生化成纤维细胞的增殖速率明显优于非永生化成纤维细胞;③β-半乳糖苷酶染色结果显示:随着细胞代数增加,与非永生化成纤维细胞相比,永生化成纤维细胞未见明显衰老;④永生化成纤维细胞染色体核型仍保留正常细胞的基本特征,而未发生恶性转化;⑤短串联重复序列鉴定结果显示,永生化成纤维细胞为原代细胞,与已知细胞数据库信息均无重合;⑥以上结果说明,成功建立了口腔癌来源的永生化成纤维细胞系,为口腔癌肿瘤微环境研究提供进一步的实验基础.

摘要： 目的本研究拟分离培养保留原始肿瘤的重要特征和功能的小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)原代细胞,并在此基础上构建SCLC原代细胞脑转移小鼠模型,为SCLC脑转移患者的药物研发和评估提供更贴近临床的动物模型。方法收集临床病人的新鲜SCLC肿瘤组织样本进行小鼠皮下移植,通过小鼠的荷瘤情况、肿瘤组织大小和肿瘤生长曲线的结果,确定小细胞肺癌人源肿瘤异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型的构建情况。并对成瘤后的肿瘤组织进行原代细胞分离培养,通过细胞划痕实验和增殖实验检测细胞的增殖和侵袭能力。通过颈动脉注射原代细胞构建SCLC脑转移模型,并通过临床表现和病理观察确定转移模型是否成功。结果(1)成功构建SCLC皮下PDX模型,肿瘤传代时间约为56 d,肿瘤生长曲线呈对数生长趋势。(2)成功分离筛选出具备成瘤性的SCLC原代L0细胞,并证实该L0细胞具备较强的细胞迁移和增殖能力。(3)颈动脉注射法成功构建SCLC脑转移模型,并分离出具备脑转移特性的SCLC脑转移B0细胞。结论本研究利用分离培养SCLC原代细胞,成功构建SCLC原代细胞的脑转移的模型。

摘要： 饲料所研究创新了鸭胚肝脏原代细胞分离和培养方法近日,中国农业科学院饲料研究所科研人员研究创新了一种简单、快速的鸭胚肝脏原代细胞分离和培养方法,并研究了鸭胚肝脏原代细胞胆碱缺乏模型中的基因可变剪切,为鸭胆碱与基因结构的相关性研究提出了新的见解,相关研究结果发表于《动物生物科学(Animal Bioscience)》上。

摘要： 目的分离鉴定乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠肝原代细胞,为HBV体外相关研究提供有利模型。方法HBV转基因C57 BL/6小鼠深度麻醉后,通过二步灌注法,首先用不含钙灌注液将肝中的血液冲洗干净,然后用含钙的IV型胶原缓冲液将肝细胞消化下,通过3次低速低温离心法纯化去除杂质,则成功分离提取肝原代细胞。进而通过糖原染色法对提取的细胞进行鉴定,并检测7 d内肝细胞的增殖活力,以及第1天和第3天细胞凋亡情况。最后,将提取的肝细胞应用于过氧化氢诱导肝细胞损伤表型检测,包括细胞内活性氧、线粒体膜电位、多个氧化应激因子转录水平检测和LDH泄露情况。结果(1)分离的HBV小鼠肝原代细胞为典型性肝细胞形态,并呈现糖原阳性染色结果;(2)肝细胞活性检测发现肝细胞贴壁后,活性增强,第5~6天时活性最高,然后逐渐下降;(3)对比肝细胞提取后第1天和第3天的细胞死亡情况,未发生明显自发性死亡;(4)细胞通过过氧化氢诱导后,发现胞内活性氧积聚,线粒体膜电位改变,氧化应激因子转录水平上调,以及乳酸脱氢酶泄露增加。结论在本实验条件下,成功分离鉴定HBV小鼠肝原代细胞,并应用于肝损伤相关实验。

摘要： 目的 分离提纯培养子宫腺肌病(AM)内膜间质细胞(ESc),检测其细胞功能的差异,为进一步的细胞及分子水平研究奠定基础.方法 选取2013年1月至2016年12月份在本院治疗的正常子宫内膜和子宫腺肌病手术病例,在严格无菌条件下,收集临床确诊的AM患者在位子宫内膜组织12例、异位子宫内膜组织41例及正常对照内膜组织13例,分别分离培养ESc,并通过免疫组织化学法对分离提纯培养的细胞进行鉴定.分别检测三种细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等细胞功能.结果 正常人ESc 13例,AM患者在位12例、异位ESc原代分离41例均成功,成功率为100.00％.与正常在位ESc相比,在位、异位ESc在普通光镜下,形态观察无明显差异,但是细胞功能方面,在位ESc生长曲线显示增殖率明显升高;异位ESc的迁移、侵袭率水平升高,差异有统计学意义(P<0.01),三种细胞凋亡无明显差异.结论 采用间质细胞原代培养方法可以成功培养AM ESc,并保持较高的细胞培养成功率.在位ESc增殖率最高,异位ESc的迁移、侵袭率水平升高,细胞凋亡均无明显差异.

摘要： 目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人子宫肌瘤细胞增殖的影响及其机制.方法 获取人子宫肌瘤组织后提取人子宫肌瘤细胞.将细胞分为对照组、50μmol/L EGCG组、100μmol/L EGCG组、200μmol/L EGCG组,各EGCG剂量组分别加入相应浓度的EGCG,对照组加入等体积的磷酸缓冲盐溶液.干预24 h、48 h、72 h后,检测细胞存活率;干预48 h后观察细胞形态,并检测Wnt5 b、β-连环蛋白(β-Catenin)、上皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达情况.结果 干预48 h、72 h后,对照组、50μmol/L EGCG组、100μmol/L EGCG组、200μmol/L EGCG组人子宫肌瘤细胞存活率依次降低;随着干预时间的延长,各干预组细胞存活率有下降趋势(均P<0.05);免疫组化检测结果显示,各浓度EGCG干预组Wnt5 b、β-Catenin蛋白表达水平均低于对照组;200μmol/L EGCG组Wnt5 b蛋白表达水平低于其他两个浓度干预组,50μmol/L EGCG组、100μmol/L EGCG组、200μmol/L EGCG组β-Catenin蛋白表达水平依次降低(均P<0.05).免疫印迹试验结果显示,各浓度EGCG干预组EGFR、β-Catenin蛋白表达水平均低于对照组,100、200μmol/L EGCG组Wnt5 b蛋白表达水平低于对照组;200μmol/L EGCG组的EGFR、Wnt5 b蛋白表达水平均低于其他两个干预组(均P<0.05).结论 EGCG可抑制人子宫肌瘤细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-Catenin信号通路和EGFR的表达有关.

摘要： 目的 探讨良性脑膜瘤及柔脑膜原代细胞的培养及脂多糖(LPS)对其增殖的影响.方法 通过酶消化法培养良性脑膜瘤及柔脑膜原代细胞,采用免疫荧光组化方法鉴定脑膜瘤细胞.用LPS处理原代细胞后,采用CCK法检验细胞增殖活性,Real-timePCR对常见的炎症因子如白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子κB(NF-κB) mRNA表达水平进行检测.结果 成功培养良性脑膜瘤及柔脑膜细胞原代细胞,免疫荧光鉴定细胞均表达上皮膜抗原(EMA)和波形蛋白(VIM).LPS处理细胞后,细胞的增殖活性随LPS浓度增加和时间延长而增加,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB mRNA表达水平也明显升高.结论 良性脑膜瘤与柔脑膜原代细胞的培养成功为良性脑膜瘤的基础研究打下了基础.LPS处理细胞后,细胞增殖明显增加,炎性因子和NF-κB表达上调.良性脑膜瘤的生长与炎症有密切关系.

摘要： 条件重编程(conditional reprogramming,CR)培养可以从人源组织中扩增原代细胞,并使得原代细胞能够于体外永久传代培养.CR培养体系的建立的特征主要在于新鲜消化分离的人类正常细胞或肿瘤细胞和经过辐照的小鼠成纤维细胞3T3滋养细胞在含有Rho酶抑制剂(Y-27632)的培养基中共培养.CR细胞培养体系可用于多种应用,可用于再生医学、肿瘤基因表达谱、蛋白表达谱和对药物敏感性的分析,从而提高对疾病的分子机制的认识,以及精准指导药物个性化治疗.

摘要： 目的 探讨腺性肥大乳房乳腺上皮细胞(hMEC-GAHB)的原代培养方法,观察该原代细胞的形态学及生物学特点.方法 采用0.25％胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶混合液,结合长时间4°C和短时间37°C消化,配合低转速离心的方法,从2010年4月至2011年4月华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科手术治疗的10例腺性乳房肥大症患者(M组,实验组)和10例正常体积乳房患者(N组,对照组)的乳腺组织中消化获取乳腺上皮细胞并进行原代培养,评价获取原代细胞的效果,观察各组细胞的形态学特点,采用多抗体免疫细胞化学法(MICC)鉴定原代细胞种属,并采用碘化丙锭(PI)染色法、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术等方法对各组细胞的细胞周期和体外增殖及凋亡等生物学特点等进行分析.结果 腺性肥大乳房每克乳腺组织可获取细胞数为5×106个,细胞存活率为70％,接种后48 h细胞贴壁率为60％,贴壁细胞活性良好,接种后约72 h胞质展开,约120 h相互融合.细胞增殖明显,未见明显凋亡.hMEC-GAHB与正常体积乳房乳腺上皮细胞在细胞形态学上差异无统计学意义,且正常表达典型的上皮细胞骨架蛋白[CK8、CK14、CK18、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等].在含有相同浓度的17β-雌二醇的体外环境中,处于同一时期细胞对数生长期时,hMEC-GAHB组的群体倍增率(PDR)为0.548、1.634、2.062、3.946、5.210、8.700,正常体积乳房组的群体倍增率(PDR)为0.394、1.455、1.820、3.822、4.467、5.213,两者间差异有统计学意义(P＜0.05);hMEC-GAHB组和正常体积乳房组的G2/M期与G0/G1期细胞数比值分别为0.45±0.01和0.34±0.01,两者间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用改良的酶消化法可获得较满意的细胞数和细胞活性.hMEC-GAHB具有典型上皮细胞的形态学及生物学特点,在含有雌激素的体外环境中,hMEC-GAHB比较正常体积乳房乳腺上皮细胞具有更强的增殖活力,并具有正常的细胞衰退期.

摘要： 本文主要阐述了原代细胞在疫苗生产中的应用及其优缺点和原代细胞制备中存在的潜在污染因素，力求从科学的角度分析和认识细胞污染对疫苗质量满在的危险性；同时依据GMP和2010年版《中国药典》，提出了上述污染因素的控制措施。

摘要： 本文主要阐述了原代细胞在疫苗生产中的应用及其优缺点和原代细胞制备中存在的潜在污染因素，力求从科学的角度分析和认识细胞污染对疫苗质量潜在的危险性；同时依据GMP和2010年版《中国药典》，提出了上述污染因素的控制措施。

摘要： 本文主要阐述了原代细胞在疫苗生产中的应用及其优缺点和原代细胞制备中存在的潜在污染因素，力求从科学的角度分析和认识细胞污染对疫苗质量潜在的危险性;同时依据GMP和2010年版《中国药典》，提出了上述污染因素的控制措施。

摘要： 目的：探讨PI3Kδ抑制剂CAL-101对多发性骨髓瘤IgE型细胞系U266、IgG型细胞系RPMI8226和骨髓瘤患者原代细胞的作用和机制,为这类疾病的治疗提供新的思路.rn 方法：用不同浓度的CAL-101处理多发性骨髓瘤细胞系U266、RPMI8226,以MTT法检测CAL-101对两种细胞系的增殖抑制作用;Western Blot法分析细胞系和患者原代细胞中磷酸化蛋白AKT、ERK(p-AKT、p-ERK)、非磷酸化蛋白AKT、ERK和PI3Kδ表达水平,观察其在被CAL-101处理后的变化;MTT法结合CalcuSyn software软件分析检测CAL-101是否可与PCI-32765、SAHA、硼替唑咪(Bortezomib,BTZ)产生协同抑制骨髓瘤细胞增殖的效应.rn 结果：10 a mol/L及更高浓度的CAL-101对U266细胞系、RPMI8226细胞系有明显的增殖抑制作用，呈剂量依赖性，15、20、20、30、40 a mol/L(AL-101作用于U266细胞48小时，细胞增殖抑制率分别为(29.65±1.23)%,(33.54±1.51)%,(41.72±1.78)%,(53.67±2.01%),(79.25±1.92)%空白对照组为(1.37±0.02)%(P<0.05)。作用于RPM工8226细胞系48小时，细胞增殖抑制率分别为(20.66±2.18)% ,(41.08±1.92)%,(18.90±2.75)%,(58.47±1.18)%,(59.58±2.27)%,(64.01±1.97)，空白对照组为(2.35±0.58)%(P<0.05).Western Blots分析显示，在U266细胞系、RPM工8226细胞系和骨髓瘤患者原代细胞中，均可见p-AKT、p-ERK、AKT、ERK和PI3K6的表达;经CAL-101处理后，p-AKT和p-ERK的表达水平显著下调。CalcuSyn software软件分析证实，在U266细胞系中，CAL-101与PCI-32765, SAHA,BTZ具有协同作用，而在RPM工8226细胞系中，CAL-101与PCI-32765、硼替吟咪具有协同作用，药物联用可显著协同抑制骨髓瘤细胞的增殖，CI值小于1。rn 结论:PI3Ks抑制剂CAL-101细胞系U266和RPM工8226的增殖。在细胞系和原代细胞中，均可见p-AKT、p-ERK、s的表达。而CAL-101抑制增殖的机制可能与下调AKT信号通路中p-AKT水平和AKT可抑制骨髓瘤、ERK和PI3KERK通路中p-ERK有关。CAL-101与骨髓瘤一线治疗药物硼替佐米和新药PCI-2765, SAHA有显著地协同抗骨髓瘤效应。CAL-101有望为多发性骨髓瘤的治疗带来希望。

摘要： 目的:探讨Bcl-2相关永生基因3(BAG3)作为BAG家族成员之一,在慢性淋巴细胞白血病(CLL)原代细胞中表达水平及凋亡和迁移中的作用机制.方法：本实验收集100例初诊CLL患者外周血单个核细胞,检测BAG3 mRNA表达,与患者临床相关资料进行相关性分析,探讨BAG3基因在CLL中的异常表达及其临床应用价值.

摘要： 关于急性白血病的研究对象,国内外学者有采用细胞株的,有应用原代细胞的。在对原代细胞的研究中有许多需要注意的方面,现以急性髓系白血病2例,急性淋巴细胞白血病2例为例,总结在培养过程中遇到的问题。

摘要： 目的：构建含有可溶性环氧化物水解酶基因特异性的RNA干扰序列pSUPER retro neo质粒栽体，选择性下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达，筛选出抑制效果最明显的表达质粒。方法：构建2条靶向可溶性环氧化物水解酶基因的特异性小干扰RNA质粒栽体(EH-1和EH-2)，以含非特异性小干扰RNA编码序列的质粒栽体为阴性时照(pCN组)，用FuGENE HD将质粒特染入原代培养的小鼠心肌细胞，并设空白对照组，转染后通过半定量RT-PCR和Western Blotting法，检测可溶性环氧化物水解酶的mRNA和蛋白表达情况。结果：与空白对照组、阴性对照组和EH-1组相比，质粒EH-2使心肌细胞可溶性环氧化物水解酶mRNA和蛋白的相对表达量明显下调(分别为0.202±0.017和0.212±0.029，P<0.01)。结论：构建了特异性小干扰RNA质粒表达栽体，利用RNA干扰技术成功下调了原代培养的心肌细胞中可溶性环氧化物水解酶的表达，为进一步进行心肌细胞的RNA干扰研究奠定了基础。

摘要： 目的：构建含有可溶性环氧化物水解酶基因特异性的RNA干扰序列pSUPER retro neo质粒栽体，选择性下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达，筛选出抑制效果最明显的表达质粒。方法：构建2条靶向可溶性环氧化物水解酶基因的特异性小干扰RNA质粒栽体(EH-1和EH-2)，以含非特异性小干扰RNA编码序列的质粒栽体为阴性时照(pCN组)，用FuGENE HD将质粒特染入原代培养的小鼠心肌细胞，并设空白对照组，转染后通过半定量RT-PCR和Western Blotting法，检测可溶性环氧化物水解酶的mRNA和蛋白表达情况。结果：与空白对照组、阴性对照组和EH-1组相比，质粒EH-2使心肌细胞可溶性环氧化物水解酶mRNA和蛋白的相对表达量明显下调(分别为0.202±0.017和0.212±0.029，P<0.01)。结论：构建了特异性小干扰RNA质粒表达栽体，利用RNA干扰技术成功下调了原代培养的心肌细胞中可溶性环氧化物水解酶的表达，为进一步进行心肌细胞的RNA干扰研究奠定了基础。

摘要： 目的：构建含有可溶性环氧化物水解酶基因特异性的RNA干扰序列pSUPER retro neo质粒栽体，选择性下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达，筛选出抑制效果最明显的表达质粒。方法：构建2条靶向可溶性环氧化物水解酶基因的特异性小干扰RNA质粒栽体(EH-1和EH-2)，以含非特异性小干扰RNA编码序列的质粒栽体为阴性时照(pCN组)，用FuGENE HD将质粒特染入原代培养的小鼠心肌细胞，并设空白对照组，转染后通过半定量RT-PCR和Western Blotting法，检测可溶性环氧化物水解酶的mRNA和蛋白表达情况。结果：与空白对照组、阴性对照组和EH-1组相比，质粒EH-2使心肌细胞可溶性环氧化物水解酶mRNA和蛋白的相对表达量明显下调(分别为0.202±0.017和0.212±0.029，P<0.01)。结论：构建了特异性小干扰RNA质粒表达栽体，利用RNA干扰技术成功下调了原代培养的心肌细胞中可溶性环氧化物水解酶的表达，为进一步进行心肌细胞的RNA干扰研究奠定了基础。

摘要： 目的：构建含有可溶性环氧化物水解酶基因特异性的RNA干扰序列pSUPER retro neo质粒栽体，选择性下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达，筛选出抑制效果最明显的表达质粒。方法：构建2条靶向可溶性环氧化物水解酶基因的特异性小干扰RNA质粒栽体(EH-1和EH-2)，以含非特异性小干扰RNA编码序列的质粒栽体为阴性时照(pCN组)，用FuGENE HD将质粒特染入原代培养的小鼠心肌细胞，并设空白对照组，转染后通过半定量RT-PCR和Western Blotting法，检测可溶性环氧化物水解酶的mRNA和蛋白表达情况。结果：与空白对照组、阴性对照组和EH-1组相比，质粒EH-2使心肌细胞可溶性环氧化物水解酶mRNA和蛋白的相对表达量明显下调(分别为0.202±0.017和0.212±0.029，P<0.01)。结论：构建了特异性小干扰RNA质粒表达栽体，利用RNA干扰技术成功下调了原代培养的心肌细胞中可溶性环氧化物水解酶的表达，为进一步进行心肌细胞的RNA干扰研究奠定了基础。

摘要： 本发明提出一种原代星形胶质细胞/原代中脑腹侧神经元共培养体系在星形胶质细胞与神经元间铁代谢研究中的应用，属于细胞生物学领域，该技术方案通过设计试验方法检测该共培养体系，可在细胞层面明确神经元铁的来源、其与星形胶质细胞间的相互影响，以及铁转运的方向性问题。本发明建立的原代星形胶质细胞与原代中脑腹侧神经元共培养体系是一种新的研究帕金森病的细胞模型，可用于研究帕金森病等神经退行性疾病脑内高铁的相关研究中。

摘要： 本发明涉及干细胞培养技术领域，特别涉及一种脐带间充质干细胞原代培养基及其原代培养方法。该原代培养基包括氨甲环酸、G‑CSF、EGF和基础培养基；脐带间充质干细胞原代培养基中各组分的浓度为：氨甲环酸：500～15000mg/L；G‑CSF：10～50ng/L；EGF：5～30ng/mL；基础培养基：补足。本发明将氨甲环酸、G‑CSF、EGF添加入基础培养基，能缩短原代培养时间，效果好于常规培养基及添加单一因子的培养基；同时可以避免异源性物质的引入，具有更高的临床安全性。

摘要： 本发明提供了一种原代汗腺细胞条件培养基及原代汗腺细胞培养方法，其中，所述原代汗腺条件细胞培养基包括：细胞基础培养基、血清、Glutamax、缓冲液、细胞培养添加剂、青霉素/链霉素、表皮生长因子、碱性成纤维细胞因子、非必需氨基酸、胰岛素、ROCK抑制剂及NF‑κB激动剂。本发明在原代汗腺细胞基础培养基中添加有表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、NF‑κB激动剂及ROCK抑制剂。通过这些生长因子和小分子的组合，以实现人原代汗腺细胞在二维条件下的体外长期扩增培养，并在传代中维持其自身的生物学特性，延缓原代汗腺细胞的衰老进程，为快速大量制备高质量的、可移植用人汗腺细胞，满足大规模临床治疗的需求提供了前提条件。

摘要： 本发明提供一种用于快速、稳定地培养原代肝癌细胞的原代肝癌细胞培养基和原代肝癌细胞培养方法。上述原代肝癌细胞培养基含有谷氨酰胺、非必需氨基酸、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、IL‑6、表皮生长因子、胰岛素、Y27632、N2添加剂、B27添加剂、Primocin、青霉素和链霉素、胎牛血清、以及任选的氢化可的松、任选的R‑spondin1。由本发明的原代肝癌细胞培养基以及本发明的原代肝癌细胞培养方法得到的细胞模型，能够用于药物的疗效评估和筛选。

摘要： 本发明公开了一种小鼠原代角质细胞和原代免疫细胞非接触共培养的方法，属于生物技术领域，包括小鼠原代角质细胞分离、小鼠原代角质细胞培养、小鼠皮肤免疫细胞的分离、小鼠原代角质细胞与免疫细胞非接触共培养；本发明原代角质细胞分离方法进行改造，并建立了完善的原代角质细胞与原代免疫细胞共培养体系，简化细胞的生长环境，方便施加实验因素，便于观测实验结果，为研究免疫缺陷小鼠中角质形成细胞的改变提供技术手段。

摘要： 本发明涉及一种原代干细胞分离液以及采用该原代干细胞分离液从脐带中分离原代间充质干细胞的方法；本发明的原代干细胞分离液采用DMEM基础培养基作为溶液以及添加特定浓度的胶原酶I型、分散酶II型和脱氧核糖核酸酶的组合，能够快速便捷地从脐带组织中收获大量且健康的原代间充质干细胞，大大提高了间充质干细胞培养的可控性和细胞收获率，不论是对于科研实验的条件控制或是临床应用的安全性都具有很大的意义。

摘要： 本发明提出一种原代星形胶质细胞/原代中脑腹侧神经元共培养体系在铁代谢、尤其是铁转运中的应用，属于细胞生物学领域，该技术方案通过设计试验方法检测该共培养体系，可在细胞层面明确神经元铁的来源、其与星形胶质细胞间的相互影响，以及铁转运的方向性问题。本发明建立的原代星形胶质细胞与原代中脑腹侧神经元共培养体系是一种新的研究帕金森病的细胞模型，可用于研究帕金森病等神经退行性疾病脑内高铁的相关研究中。

摘要： 一种牙髓干细胞原代培养促贴壁基质及原代牙髓干细胞的培养方法，本发明提供了一种可促进细胞贴壁生长的材料，用其包被培养皿的培养方式，为牙髓干细胞原代制备建立成熟的体外培养体系并且为后续实验研究提供优质及丰富的细胞来源，本发明在牙髓干细胞原代培养时，使用多酚蛋白作为促贴壁试剂预包被培养皿，增加了组织块细胞爬出率及原代细胞的数量，缩短了原代制备时间，提升了原代培养的成功率。

摘要： 本发明提供了一种小鼠原代肝细胞的分离方法及其制得的小鼠原代肝细胞与应用，涉及原代细胞分离技术领域。小鼠原代肝细胞的分离方法，包括如下步骤：将麻醉小鼠依次进行腹腔暴露、肝周管结扎、原位三步灌流和细胞分离得到小鼠原代肝细胞；原位三步灌流依次包括第一灌流，第二灌流和第三灌流；第一灌流，用第一灌流液去除红细胞，并对血液进行抗凝；第二灌流，用第二灌流液去除抗凝剂，并对肝组织进行初步消化；第三灌流，用第三灌流液进一步消化。该小鼠原代肝细胞的分离方法缓解了现有技术中缺乏一种分离后细胞活性高、贴壁迅速、存活细胞收率高、分离成本低并且分离过程不易污染的小鼠原代肝细胞分离方法的技术问题。

摘要： 本发明提供了家禽胫骨生长板软骨原代细胞分离用消化酶液，以完全培养基为基础液，含有以下组分：质量浓度为80～100mg/mL的胶原酶IV和质量浓度为80～100mg/mL的透明质酸酶；所述完全培养基是以高糖DMEM‑F12培养基为基本培养基，包含以下组分：体积浓度为8～12％的胎牛血清、质量浓度为4.5～5.5mg/mL维生素C和质量浓度为1～10mg/mL的青链霉素。本发明通过对消化酶的选择、浓度的优化，使细胞产率达到85～95％以上；对消化后的细胞进一步培养时，细胞涨势良好。同时消化后的原代细胞细胞活力达85～95％以上，且细胞活力较为稳定。