Müller细胞

摘要： 目的探讨丹酚酸B对高糖诱导的视网膜Müller细胞凋亡、自噬及AMPK信号通路的影响。方法提取大鼠视网膜原代Müller细胞,随机分为对照组、高糖组、高糖+丹酚酸B组、高糖+AMPK抑制剂Dorsomorphin(DS)组、高糖+DS+丹酚酸B组、高糖+AICAR组和高糖+AICAR+丹酚酸B组。其中,对照组细胞给予5 mmol·L^(-1)葡萄糖处理,高糖为35 mmol·L^(-1)高浓度葡萄糖,丹酚酸B浓度为40μmol·L^(-1),DS浓度为10μmol·L^(-1),AICAR浓度为1 mmol·L^(-1)。MTT法检测各组细胞活力,Hoechst 33258染色观察各组细胞凋亡情况,qRT-PCR检测各组细胞自噬相关基因Beclin1和LC3-II mRNA的表达,Western blot检测各组细胞Beclin1、LC3-I、LC3-II、p-AMPK、AMPK、Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果与对照组比较,高糖组细胞Beclin1、LC3-II、p-AMPK、Bcl-2蛋白及Beclin1、LC3-II mRNA表达均显著减少(均为P0.05),细胞核浓缩和DNA片段化无显著变化。各组细胞间LC3-I和AMPK蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论丹酚酸B可通过激活AMPK信号显著增强细胞自噬而抑制Müller细胞凋亡,从而对高糖诱导的Müller细胞起到保护作用。

摘要： 目的研究姜黄素(curcumin)对小鼠视网膜Müller细胞抗紫外线光损伤的保护作用及机制。方法选择C57BL/6小鼠12只作为研究对象,Müller细胞按照加入姜黄素浓度(0、2.5、5、10、15、20μmol/L)是否用紫外线辐照分对照组和紫外线组两组,每组各6只。对照组正常培养;紫外线组在暗室中的无菌操作台中,用紫外线仪(UVB)进行照射。紫外线辐照检测计调控紫外线仪照射剂量354μW/cm^(2)。用MTT法检测姜黄素对小鼠Müller细胞抗紫外线的保护作用;用Western blot检测不同浓度姜黄素活化Müller细胞中Nrf2水平。另选择小鼠(6-8周)12只作为研究对象,小鼠是否行姜黄素200 mg/(kg d)灌胃分为对照组和药物组两组,每组各6只。通过视觉电生理检测其对视网膜光损伤的保护作用。结果姜黄素减轻紫外线对Müller细胞的损伤。姜黄素(2.5、5、10、15、20μmol/L)进行预处理后的细胞活性相对于对照组,大幅提高。姜黄素诱导的Müller细胞保护作用在一定浓度范围内(2.5、5、10μmol/L)随浓度而增加,紫外线组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);姜黄素激活Nrf2信号通路发挥保护作用;小鼠姜黄素200 mg/(kg d)灌胃后,减少了光损伤对小鼠闪光视网膜B波的影响,药物组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。ERG结果表明姜黄素灌胃能够减轻小鼠视网膜光损伤。结论姜黄素通过激活Müller细胞Nrf2信号通路减轻小鼠视网膜光损伤。

摘要： 目的探究舒洛地特(SDX)通过调节NLRP3表达对视网膜Müller细胞凋亡的影响。方法将24只清洁级C57BL/6小鼠随机数字表法分为4组,正常组、DR组、DR+DMSO组、DR+SDX组,各6只。除正常组小鼠外,均采用腹膜内注射链脲佐菌素(STZ)诱导实验性糖尿病视网膜病变(DR)模型。正常组小鼠,标准饲料喂养;DR组模型小鼠42%高脂肪饮食;DR+DMSO组模型小鼠2%高脂肪饮食+1 mL•kg^(-1)•d^(-1)0.1%DMSO,DR+SDX组模型小鼠42%高脂肪饮食+1 g•kg^(-1)•d^(-1) SDX,连续干预21 d。通过蛋白质印迹法检测NLRP3炎症小体(免疫受体NLRP3、接头蛋白ASC和蛋白酶caspase-1)和促炎因子白细胞介素(IL)-1β的表达水平。然后从小鼠眼组织分离原代视网膜Müller细胞,分别在正常葡萄糖(NG组,5 mmol/L)或高糖葡萄糖(HG组,30 mmol/L)培养,用NLRP3炎症小体抑制剂MCC950(10μmol/L)处理24 h(HG+MCC950组),并用5 mmol/L NLRP3激动剂三磷酸腺苷(ATP)处理30 min(HG+SDX+ATP组)或使用1 mmol/L活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理24 h(HG+NAC组),并用活性氧200μmol/L激动剂叔丁基过氧化氢(TBHP)处理最后3 h(HG+SDX+TBHP组),通过ELSIA检测氧化应激标志物活性氧、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)和Müller细胞培养上清液中的血管内皮生长因子(VEGF)、造血生长因子(HGF)的表达水平。结果(1)与正常组相比,DR组NLRP3蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与DR组和DR+DMSO组相比,DR+SDX组NLRP3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与正常组相比,DR组ASC、cleaved caspase-1/pro-caspase-1、cleaved IL-1β/pro-IL-1β水平均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与DR组和DR+DMSO组相比,DR+SDX组NLRP3以上指标表达均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与NG组相比,HG组和HG+DMSO组Müller细胞和培养液中VEGF和HGF均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与HG和HG+DMSO组相比,HG+MCC950和HG+SDX组细胞和培养液中VEGF和HGF均显著降低,而HG+SDX+ATP则显著高于HG+SDX组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)与NG组相比,HG组和HG+DMSO组Müller细胞活性氧活性和丙二醛含量均显著增加,SOD活性则显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与HG和HG+DMSO组相比,HG+NAC和HG+SDX组细胞中活性氧活性和丙二醛含量均显著降低,SOD活性则显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与HG+SDX组相比,HG+SDX+TBHP组活性氧活性和丙二醛含量均显著增加,SOD活性则显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论舒洛地特可通过抑制活性氧/NLRP3炎症小体信号转导来减轻高血糖诱导的Müller细胞增殖和促血管生成因子的产生。

摘要： 目的测量Müller细胞不同程度的高糖培养条件下生长活性的变化,推测Müller细胞在糖尿病性视网膜病变进展中的活性变化。方法通过组织块贴壁培养法进行视网膜Müller细胞体外培养,MTT法测定其在不同程度的高糖及作用时间下的活性OD值。结果高糖组Müller细胞培养时间为1d时表现生长增强;培养时间延长到3d以上,高糖组内见Müller细胞折光增加,随培养时间及浓度不同程度加强,其OD值逐渐呈下降趋势。结论视网膜Müller细胞在高糖作用下其生长受到显著的抑制。

摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的条件培养基对人永生化Müller细胞系MIO-M1细胞增生、黏附和分化的作用。方法BMSCs传至第3代进行成骨、成软骨及成脂诱导培养基诱导分化,并分别使用茜素红、阿利辛蓝及油红O染色进行分化鉴定;采用流式细胞仪检测细胞中间充质干细胞标志物CD73、CD90和CD105以及造血干细胞标志物CD34、CD45和人类白细胞DR抗原(HLA-DR)表达。采用免疫荧光染色法检测MIO-M1细胞中Müller细胞标志物SOX9、谷氨酰胺合成酶(GS)、vimentin和胞内视黄醛结合蛋白(CRALBP),视网膜干细胞标志物SOX2、nestin和CHX10,以及细胞增生标志物细胞周期蛋白D3(CCND3)的表达。将MIO-M1细胞分为标准培养基组、293T条件培养基组和BMSC条件培养基组,分别在标准培养基、293T培养上清液和BMSC培养上清液中培养。定量分析各组细胞面积、圆度、伸长系数、周长等形态参数;采用流式细胞仪检测细胞周期,采用成球实验和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测细胞增生情况。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组培养上清液中血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的表达;采用荧光定量PCR法检测各组细胞中VCAM-1 mRNA表达。采用免疫荧光染色法和荧光定量PCR法分别检测各组细胞诱导分化培养后视网膜神经元标志物蛋白激酶C(PKCα)、Rhodopsin、微管相关蛋白2(MAP2)和β-微管蛋白(Tuj1)的表达变化。结果培养的BMSCs高表达CD73、CD90和CD105,低表达CD34、CD45和HLA-DR,并可成功诱导分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。MIO-M1细胞表达SOX9、GS、vimentin、CRALBP、SOX2、CHX10、nestin和CCND3。与标准培养基和293T条件培养基组比较,BMSC条件培养基组的MIO-M1细胞形态发生改变,形成细长的纺锤形或多极形态,且细胞面积减少,伸长系数增加,圆度降低,差异均有统计学意义(F=6.973、12.370、6.311,均P<0.01);与标准培养基和293T条件培养基组比较,不同时间点BMSC条件培养基组MIO-M1细胞形成的神经球面积明显增大,差异均有统计学意义(F_(组别)=134.300,P=<0.001;F_(时间)=82.910,P<0.001);与标准培养基和293T条件培养基组比较,BMSC条件培养基组MIO-M1细胞的EdU阳性率和细胞增生指数均显著提高,差异均有统计学意义(F=6.973、74.110,均P<0.05);与标准培养基和293T条件培养基组比较,BMSC条件培养基组的细胞上清液中VCAM-1蛋白质量浓度和细胞中的VCAM-1 mRNA相对表达量均显著升高,差异均有统计学意义(F=13.720、7.896,均P<0.05);MIO-M1细胞在分化条件下,BMSC条件培养基组的MIO-M1细胞在mRNA水平的PKCα、Rhodopsin、Tuj1和MAP2相对表达量较标准培养基组和293T条件培养基组均明显升高,差异均有统计学意义(F=14.490、5.424、14.330、7.405,均P<0.05)。结论BMSC条件培养基可以改变Müller细胞的形态,并促进其增生、黏附和向视网膜神经元的分化。

摘要： 目的本实验研究紫外线对高糖环境下视网膜Müller细胞糖基化终末产物受体(RAGE)基因表达的影响。方法配置糖基化终末产物(AGE)-牛血清蛋白(BSA),以浓度梯度的方式来干预细胞,将Müller细胞分为正常对照组、BSA组、25μg/ml AGE-BSA组、50μg/ml AGE-BSA组和100μg/ml AGE-BSA组,将细胞内的培养基换用添加了BSA以及预先配制好的25、50、100μg/ml的AGE-BSA无血清培养基,处理细胞44 h,然后将细胞放置于超净台上,紫外灯管(25 W)辐照。根据上述AGE-BSA给药浓度对RAGE的表达情况,选定100μg/ml的给药浓度。将细胞分为正常对照组、BSA组和AGEBSA组,分别处理8、16、24、48、72 h后收集细胞,然后将细胞放置于紫外灯管下(25 W)辐照。分析不同浓度AGE-BSA以及不同作用时间100μg/ml AGE-BSA对Müller细胞RAGE基因表达的影响。结果25μg/ml AGE-BSA组、50μg/ml AGE-BSA组和100μg/ml AGE-BSA组Müller细胞的RAGE基因的表达均高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),并且随着AGE-BSA浓度的增加,RAGE基因的表达也可以逐渐的增高,在AGE-BSA浓度为100μg/ml时RAGE基因的表达可达到峰值(P<0.05)。经100μg/ml处理过的Müller细胞可以表达少量的RAGE基因,处理8、16、24、48、72 h后Müller细胞的RAGE基因表达均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),在AGE-BSA浓度为100μg/ml,处理48 h时RAGE基因表达可达到峰值(P<0.05)。结论紫外线环境下,持续升高的血糖可使视网膜Müller细胞的AGE生成增多,并通过与其受体RAGE的相互作用,加速了DR的发生和发展。

摘要： 目的探讨内质网应激(ERS)抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)对高糖(HG)诱导大鼠视网膜Müller细胞胶质增生的作用及机制。方法取对数生长期Müller细胞,选择0、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、7.5、10 mmol/L 4-PBA预处理细胞1 h,DMEM培养基继续培养24 h和48 h后,采用二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测Müller细胞存活率;对数生长期Müller细胞分为Control组(5.5 mmol/L葡萄糖)、Mannitol组(34.5 mmol/L甘露醇+5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(40 mmol/L葡萄糖)、4-PBA-L组(1 mmol/L 4-PBA+40 mmol/L葡萄糖)及4-PBA-H组(5 mmol/L 4-PBA+40 mmol/L葡萄糖),各组细胞分别给与相应处理,4-PBA-L和4-PBA-H组给予不同浓度4-PBA预作用1 h,再给予40 mmol/L葡萄糖作用细胞48 h;处理结束后,采用Giemsa染色法观察各组Müller细胞的形态学特征,采用流式细胞术检测各组Müller细胞活性和细胞周期;采用蛋白质免疫印记法(Western blot)检测各组Müller细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化-PERK(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化-eIF2α(p-eIF2α)、转录激活因子(ATF4)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及血管内皮生长因子(VEGF-A)的蛋白表达。结果HG组Müller细胞较Control组数目急剧增多、细胞形状变圆、细胞间隙变小,4-PBA-L、4-PBA-H组Müller细胞数较HG组减少、细胞形状恢复长条形、间隙变宽;MTT检测结果显示,HG组Müller细胞的存活率和细胞周期S期水平较Control组增加(P<0.05),4-PBA-L、4-PBA-H组Müller细胞存活率和细胞周期S期水平则较HG组降低(P<0.05);Western blot检测结果显示,HG组Müller细胞中GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、GFAP及VEGF-A蛋白表达较Control组升高(P<0.05),4-PBA-L、4-PBA-H组Müller细胞中GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、GFAP及VEGF-A蛋白表达则较HG组降低(P<0.05)。结论4-PBA可抑制HG诱导大鼠视网膜Müller细胞的异常增殖并降低细胞的胶质增生水平,其作用机制可能与调节ERS有关。

摘要： 目的 探讨尾静脉注射碘酸钠(NaIO3)对小鼠视网膜形态结构的影响.方法 36只昆明小鼠分为4组:对照组、损伤3d组、损伤7d组、损伤14d组.对照组不作任何处理,各损伤组小鼠经尾静脉单剂量注射NaIO3(35 mg·kg-1).在NaIO3损伤3 d、7 d、14 d后取材,进行视网膜组织铺片和组织切片.利用HE染色、NeuN免疫组织化学染色及Opn1 mw、GFAP、Iba1免疫荧光染色,检测NaIO3注射后不同时间小鼠视网膜形态结构的改变.结果 HE染色结果 显示,损伤3 d后外核层每10μm长度细胞数由正常水平(31.97±2.27)个下降至(26.21±0.83)个,差异有统计学意义(P<0.05);损伤7 d后内核层每10μm长度细胞数由正常水平(12.33±0.16)个下降至(11.39±0.43)个,差异有统计学意义(P<0.05).NeuN染色结果 显示,损伤14 d后视网膜神经节细胞层每100μm长度视网膜神经节细胞数由正常水平(14.92±1.74)个下降至(11.25±0.09)个,差异有统计学意义(P<0.05).GFAP染色结果 显示,损伤3 d组每200μm×200μm范围内活化的Müller细胞数由对照组的(16.96±0.85)个增加至(20.42±1.64)个,差异也有统计学意义(P<0.05).Opn1mw、Iba1染色结果 显示,损伤后视网膜视锥细胞外节段变薄、小胶质细胞数增加.结论 尾静脉注射NaIO3 会引起小鼠视网膜形态结构不可逆的损伤,且该损伤具有时间依赖性.

摘要： 目的 探讨母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)对糖尿病视网膜病变(DR)Müller细胞的活化及炎症因子分泌的影响及机制.方法 高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射构建小鼠DR体内模型.高糖刺激人视网膜Müller细胞株MIO-M1构建DR体外模型.免疫荧光化学染色及Western blot检测小鼠视网膜及Müller细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.Western blot及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠视网膜及细胞培养基上清中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.ELISA检测小鼠视网膜及细胞培养基上清中IL-1β蛋白的表达.分别或同时向Müller细胞中转染pcDNA-MEG3及miR-34a mimic对其表达进行干预.qRT-PCR检测MEG3 mRNA及miR-34a表达.结果 与正常对照组小鼠比较,DR组小鼠视网膜中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均增多(均为P<0.05),MEG3 mRNA表达降低(P<0.01).与对照组比较,高糖组Müller细胞中MEG3 mR-NA表达降低(P<0.01),而GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均升高(均为P<0.05).与高糖组比较,高糖+pcDNA-MEG3组中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均降低(均为P<0.05).与正常对照组比较,DR组小鼠视网膜及高糖刺激的Müller细胞中miR-34a表达均升高(均为P<0.05).与pcDNA组比较,pcDNA-MEG3组中miR-34a表达减少(P<0.01).与pcDNA+NC mimic组比较,pcDNA+miR-34a mimic组中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均升高(均为P<0.05),而pcDNA-MEG3+NC mimic组中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均减少(均为P<0.05).与pcDNA-MEG3+miR-34a mimic组比较,GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达水平均升高(均为P<0.05).结论 MEG3在DR小鼠视网膜及高糖刺激的Müller细胞中表达均降低,其可通过负向调控miR-34a抑制Müller细胞活化及炎症因子的分泌.过表达MEG3可能成为DR治疗的新靶点.

摘要： 视网膜退行性疾病是以视网膜神经元凋亡为主要病理过程的一类致盲性眼病,视网膜神经元受损后再生困难,Müller细胞是参与视网膜发育、受损及再生过程的重要胶质细胞.近年研究证明,Müller细胞是视网膜神经元的内源性替代来源,为视网膜神经再生的优秀靶标.本文根据视网膜神经再生过程、Müller细胞与视网膜神经再生相关因素进行综述,为神经再生研究提供新方向.

摘要： 目的：探讨高糖及转化生长因子-β2(Transforming growth factor,TGF-β2)和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法：以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2+高糖组、正常中药干预组、TGF-β2+高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力,SPS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异(P＞0.05),但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多(P＜0.05);TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多(P＜0.05);TGF-β2+高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少(P＜0.05);TGF-β2+高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量(P＜0.05)。结论：Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖(50mol/L)以及TGF-β2(150pg/ml)干预48h后Müller细胞活力明显降低;TG-β2对体外培养Müller细胞活力的影响因干预时间以及干预条件不同而异;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。

摘要： 目的：探讨高糖及转化生长因子-β2(Transforming growth factor,TGF-β2)和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法：以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2+高糖组、正常中药干预组、TGF-β2+高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力,SPS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异(P＞0.05),但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多(P＜0.05);TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多(P＜0.05);TGF-β2+高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少(P＜0.05);TGF-β2+高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量(P＜0.05)。结论：Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖(50mol/L)以及TGF-β2(150pg/ml)干预48h后Müller细胞活力明显降低;TG-β2对体外培养Müller细胞活力的影响因干预时间以及干预条件不同而异;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。

摘要： 目的：探讨高糖及转化生长因子-β2(Transforming growth factor,TGF-β2)和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法：以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2+高糖组、正常中药干预组、TGF-β2+高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力,SPS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异(P＞0.05),但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多(P＜0.05);TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多(P＜0.05);TGF-β2+高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少(P＜0.05);TGF-β2+高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量(P＜0.05)。结论：Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖(50mol/L)以及TGF-β2(150pg/ml)干预48h后Müller细胞活力明显降低;TG-β2对体外培养Müller细胞活力的影响因干预时间以及干预条件不同而异;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。

摘要： 目的：探讨高糖及转化生长因子-β2(Transforming growth factor,TGF-β2)和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法：以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2+高糖组、正常中药干预组、TGF-β2+高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力,SPS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异(P＞0.05),但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多(P＜0.05);TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多(P＜0.05);TGF-β2+高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少(P＜0.05);TGF-β2+高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量(P＜0.05)。结论：Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖(50mol/L)以及TGF-β2(150pg/ml)干预48h后Müller细胞活力明显降低;TG-β2对体外培养Müller细胞活力的影响因干预时间以及干预条件不同而异;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。

摘要： 目的：探讨高糖及转化生长因子-β2(Transforming growth factor,TGF-β2)和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法：以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2+高糖组、正常中药干预组、TGF-β2+高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力,SPS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异(P＞0.05),但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多(P＜0.05);TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多(P＜0.05);TGF-β2+高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少(P＜0.05);TGF-β2+高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量(P＜0.05)。结论：Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖(50mol/L)以及TGF-β2(150pg/ml)干预48h后Müller细胞活力明显降低;TG-β2对体外培养Müller细胞活力的影响因干预时间以及干预条件不同而异;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。

摘要： 目的：探讨高糖及转化生长因子-β2(Transforming growth factor,TGF-β2)和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法：以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2+高糖组、正常中药干预组、TGF-β2+高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力,SPS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异(P＞0.05),但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多(P＜0.05);TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多(P＜0.05);TGF-β2+高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少(P＜0.05);TGF-β2+高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量(P＜0.05)。结论：Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖(50mol/L)以及TGF-β2(150pg/ml)干预48h后Müller细胞活力明显降低;TG-β2对体外培养Müller细胞活力的影响因干预时间以及干预条件不同而异;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。

摘要： 目的：探讨高糖及转化生长因子-β2(Transforming growth factor,TGF-β2)和高糖同时存在条件对体外培养的Müller细胞活力的影响,以及补肾活血中药的干预作用。方法：以改良酶消化法体外培养大鼠Müller细胞,P3细胞分别置于模拟正常、高糖、TGF-β2及TGF-β2和高糖同时存在条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、TGF-β2组、高糖组、TGF-β2+高糖组、正常中药干预组、TGF-β2+高糖中药干预组;分别在试验干预12h、24h及48h后,以490型酶标仪测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力,SPS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：TGF-β2组和高糖组12h和24h的LDH漏出量与正常对照组比较均无明显差异(P＞0.05),但48h的LDH漏出量均较正常对照组增多(P＜0.05);TGF-β2组24h的LDH漏出量较高糖组增多(P＜0.05);TGF-β2+高糖组24h和48h的LDH漏出量均较TGF-β2组减少(P＜0.05);TGF-β2+高糖组48h的LDH漏出量较高糖组减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能降低24h时TGF-β2和高糖同时存在条件下LDH的漏出量,降低各时段正常条件下的LDH漏出量(P＜0.05)。结论：Müller细胞对短期高糖状态以及浓度为150pg/ml的TGF-β2短期干预可能有一定的耐受性,但当高糖(50mol/L)以及TGF-β2(150pg/ml)干预48h后Müller细胞活力明显降低;TG-β2对体外培养Müller细胞活力的影响因干预时间以及干预条件不同而异;补肾活血中药复方含药血清能提高正常及高糖和TGF-β2同时存在条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、增强Müller细胞活力可能是补肾活血中药复方防治糖尿病性视网膜病变的另一药物干预途径。

摘要： 目的: 系统观察正常大鼠视网膜Müller细胞的形态特征及其与神经细胞之间的区别，从形态学方面探索Müller细胞的生理功能。rn 方法: 应用透射电镜技术观察视网膜Müller细胞形态结构。rn 结果: 电镜下视网膜Müiler细胞的胞体发出放射状突起，这些坚韧的突起纵贯视网膜全层，几乎占据了神经细胞所没有占据的空间。rn 结论: Müller细胞不仅是视网膜的支架，而且是神经节细胞能量的重要来源、是维持视网膜内环境的稳定及保护神经突触传递的重要的神经胶质细胞。

摘要： 目的: 系统观察正常大鼠视网膜Müller细胞的形态特征及其与神经细胞之间的区别，从形态学方面探索Müller细胞的生理功能。rn 方法: 应用透射电镜技术观察视网膜Müller细胞形态结构。rn 结果: 电镜下视网膜Müiler细胞的胞体发出放射状突起，这些坚韧的突起纵贯视网膜全层，几乎占据了神经细胞所没有占据的空间。rn 结论: Müller细胞不仅是视网膜的支架，而且是神经节细胞能量的重要来源、是维持视网膜内环境的稳定及保护神经突触传递的重要的神经胶质细胞。

摘要： 目的: 系统观察正常大鼠视网膜Müller细胞的形态特征及其与神经细胞之间的区别，从形态学方面探索Müller细胞的生理功能。rn 方法: 应用透射电镜技术观察视网膜Müller细胞形态结构。rn 结果: 电镜下视网膜Müiler细胞的胞体发出放射状突起，这些坚韧的突起纵贯视网膜全层，几乎占据了神经细胞所没有占据的空间。rn 结论: Müller细胞不仅是视网膜的支架，而且是神经节细胞能量的重要来源、是维持视网膜内环境的稳定及保护神经突触传递的重要的神经胶质细胞。

摘要： 本发明公开了一种人多能干细胞来源的Müller细胞的制备方法，属于细胞生物学技术领域。本发明方法包括以下步骤：将人多能干细胞诱导分化获得三维视网膜类器官；将视网膜类器官机械分离获得神经视网膜片；将获得的神经视网膜片消化，获得视网膜单细胞悬液。将获得的视网膜单细胞悬液，在Müller细胞培养基中贴壁培养，去除非Müller细胞，获得人多能干细胞来源的人Müller细胞，并进行传代扩增及冻存。利用本发明方法获得的人Müller细胞，弥补人组织分离Müller细胞的局限性；经鉴定，本发明获得的Müller细胞不存在其它视网膜细胞及星形胶质细胞等非Müller细胞的污染，纯度高；来源于诱导分化晚期如第120天之后的视网膜类器官的Müller细胞，可连续扩增10代以上，短期内可生产大量细胞，并且可通过简单的方法进行冷冻保存，为人类Müller细胞在生理病理状态下的特征及功能研究，以及视网膜疾病损伤修复研究等提供有用的细胞工具或种子细胞。

摘要： 本发明提供了一种在视网膜Müller细胞中特异性表达的启动子Müller‑P，序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的启动子具有很强的在视网膜Müller细胞中特异性表达的活性，基于该启动子的重组腺相关病毒在Müller细胞相关的视网膜疾病的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。此外，本发明的启动子可以在Müller细胞中特异性表达绿色荧光蛋白GFP基因，可以实现Müller细胞的定位，实现对Müller细胞的荧光标记，可用于筛选Müller细胞，在Müller细胞转分化等研究中有潜在应用价值。

摘要： 一种用于促进眼部Müller细胞定向转分化的磁刺激材料及制备方法和应用以及修复方法，设计了磁学性能和生物相容性良好的人工磁纳米受体，通过远程交变磁场的刺激，有效的激活Müller细胞损伤修复与再生相关信号通路，实现了Müller细胞向视神经节细胞的定向转分化调控，为临床治疗视神经损伤类疾病提供了新的思路与途径。

摘要： 本发明的目的在于，提供能够使T细胞或NK细胞高效地增殖并且维持该细胞的状态(例如未分化性)的T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法等，其包括如下步骤：在含有式(X‑1)或式(X‑2)所示的双苄基异喹啉生物碱或者其中的1个醚键断裂后的化合物或其药学上可接受的盐的培养基中培养T细胞或NK细胞。

摘要： 提供能保存细胞的组合物。本发明的组合物包含微小气泡。

摘要： 本发明涉及一种红细胞除去装置(100)，具备：血液容器(10)，其容纳血液；以及红细胞除去器(11)，其从血液容器(10)接受血液，并从血液至少部分地除去红细胞。

摘要： 提供一种细胞的培养方法，在细胞培养器内向细胞导入因子，并在与上述细胞培养器相同的细胞培养器内培养导入了上述因子的细胞。另外，提供一种单核细胞的回收方法，其包括：对血液进行处理，制作至少部分地除去了红细胞而得到的处理血液；对处理血液进行稀释；使稀释后的处理血液中所含的单核细胞沉降；除去稀释后的处理血液的上清液；以及回收单核细胞。

摘要： 本申请提供了一种制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法，该方法包括：将单个核细胞置于培养容器内并通过保持该培养容器静置而使得所述单个核细胞中的一些沉降于所述容器的底表面上的步骤；将除已沉降于所述培养容器的底表面上的细胞以外的悬浮细胞去除的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使已沉降于所述底表面上的细胞中的单核细胞分化为未成熟树突细胞的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使所述未成熟树突细胞成熟；和通过向所述培养容器内添加α‑半乳糖神经酰胺而将成熟树突细胞诱导为NKT细胞刺激性树突细胞的步骤。

摘要： 含有细胞细胞外基质的制造方法包括：在具有前端开口部的移液管的内部准备含有(i)细胞外基质前体以及(ii)细胞或者细胞团的细胞外基质溶液；排出上述细胞外基质溶液，在上述移液管的前端开口部形成上述细胞外基质溶液的液滴；使上述移液管的前端开口部接近细胞培养容器的培养面，按照使上述移液管的前端开口部不与上述培养面接触的方式将上述液滴载置于上述培养面上；使上述移液管的前端开口部从上述培养面远离，将上述液滴与上述移液管的前端开口部分离；以及使上述细胞外基质溶液凝胶化，形成含有细胞细胞外基质。

摘要： 本发明提供具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定性较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料。本发明的细胞培养用支架材料为含有合成树脂的细胞培养用支架材料，其中，所述合成树脂的氮含量为0.1质量％以上10质量％以下。