H9N2亚型禽流感病毒

摘要： 本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株,对流感病毒的增殖特性进行初步研究。设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体,与pCAG-Cas9-EGFP表达载体共转染MDCK细胞,经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除细胞系,CCK-8法检测细胞增殖速度;荧光定量PCR方法检测H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染后的TCID_(50)、病毒拷贝数以及IRF3、IFN-β、Mx1基因转录水平变化。结果显示,筛选出1株MAVS基因缺失44 bp的MDCK细胞(MAVS^(-/-)MDCK),其增殖速度与正常细胞相比未观察到显著差异;荧光定量PCR结果表明,TCID_(50)、病毒拷贝数差异最高可分别达到MDCK细胞的4.11倍和1.82倍;MAVS^(-/-)MDCK中IRF3、IFN-β和Mx1 m RNA表达水平显著降低,表明MAVS敲除后抑制了Ⅰ型干扰素信号通路。表明,本研究获得的MAVS^(-/-)MDCK能够促进禽流感病毒的复制,为提高疫苗生产效率和质量提供候选细胞株;该细胞株也为进一步研究MAVS参与抗病毒天然免疫应答奠定基础。

摘要： 为探讨隐绿原酸(4-CQA)对感染H9N2亚型禽流感(H9N2-AIV)病毒的小鼠造成肺损伤的修复作用,将90只6~8周龄健康昆明系小鼠随机分为病毒(H9N2)感染组、H9N2+4-CQA组、空白对照组、4-CQA对照组,用H9N2-AIV滴鼻复制小鼠肺损伤模型并灌胃4-CQA干预。观察各组小鼠肺组织病理学变化;测定肺指数及肺内丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、髓过氧化物酶(MPO)含量;测定脾内T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)百分比及比率(CD4^(+)/CD8^(+))。结果显示,H9N2组小鼠表现出精神沉郁、呼吸急促;肺指数上升、脾指数下降;肺组织病理学表现为肺泡萎缩、肺泡隔增厚、局部肺实变;T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比率显著下降(P<0.05);肺内T-SOD活性显著下降、MDA含量显著增加、MPO活性显著升高(P<0.05)。4-CQA干预后,小鼠肺指数下降、脾指数上升;肺组织病理学损伤减轻;T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比率显著上升(P<0.05);肺内T-SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,MPO活性显著下降(P<0.05)。得出4-CQA可通过维持机体免疫平衡、降低机体氧化损伤来缓解由H9N2亚型AIV诱导的小鼠肺损伤。

摘要： 人类历史上数次流感大流行,都与不同流感病毒之间的基因重组有关,为了研究新发现的蝙蝠流感病毒与禽流感病毒的重组可能性,本研究利用反向遗传操作技术对嵌合蝙蝠流感病毒(Bat09:mH9mN2)与禽流感病毒(A2093/H9N2)进行替换重组,研究发现仅H9病毒的M基因可单向替换Bat病毒的M基因获得重组嵌合蝙蝠流感病毒,命名为Bat09:mH9mN2-A2093(M),其他基因均不能互换拯救。该重组病毒可以在鸡胚上、MDCK细胞上复制良好,但在禽源LMH细胞上几乎不复制。本研究发现蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒之间的基因兼容性并不强,仅有禽源病毒M基因可以单向替换重组,这与之前的研究报道一致,关于M基因的重组兼容性及重组病毒生物学特性还有待进一步研究。

摘要： 为尝试性探究太子参须提取物对鸭H9N2亚型流感病毒体外生长的抑制作用,本文基于TCID50试验检测鸭H9N2亚型流感病毒体外感染不同处理组的MDCK细胞.结果 表明,太子参须提取物高低剂量组(75％、25％)和黄芪多糖阳性对照组均对鸭H9N2亚型流感病毒体外生长产生抑制,且太子参须提取物高剂量组(75％)的抑制作用最优.结论:太子参须提取物对鸭H9N2亚型流感病毒在MDCK细胞上的体外增殖具有一定抑制作用,且呈相应剂量关系.

摘要： H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)持续暴发和流行,不但给养禽业造成了重大损失,而且给公共卫生安全带来了潜在威胁.为了解中国H9N2 AIVs的流行现状,作者对H9N2亚型AIVs的抗原性、受体结合特性、致病性进行了总结,并且对2016—2020年的流行毒株进行了分析.结果显示,H9N2 AIVs在20多个省市地区流行,其中江西、广东、贵州、江苏等地区暴发次数较多.H9N2 AIVs主要感染鸡,少数感染水禽和小家禽,零星感染人.H9N2 AIVs主要位于h9.4.2.5分支,极少数毒株隶属h9.4.2.1分支.当前H9N2 AIVs受体的结合特性呈现双嗜性或优先结合α-2,6 SA受体.抗原相关位点处的氨基酸呈现出多态性,抗原性正在发生着改变.PB2、PA和HA蛋白获得了一些适应性突变,增强了其在哺乳动物细胞上的复制能力以及对小鼠的致病性,增加了其跨宿主传播感染哺乳动物甚者人的风险.综上所述,人们要加强对H9N2 AIVs流行情况的监测,密切关注其抗原特性及致病性的变化.

摘要： 本研究旨在探究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)感染对小鼠肠道菌群的影响.选用24只SPF级BALB/c雄性小鼠,随机平均分为对照组和感染组,对照组小鼠鼻腔接种正常尿囊液,感染组小鼠鼻腔接种含有1.2×105 PFU H9N2 AIV的尿囊液.收集对照组小鼠在第0、33天和感染组小鼠在感染后第4、8、21和33天的粪便,提取粪便DNA,并对其进行16S rRNA测序,根据测序结果再进行微生物多样性的生信分析,探究H9N2 AIV感染后小鼠肠道菌群的动态变化.结果表明,对照组小鼠在第0、33天的肠道菌群的alpha多样性和各物种的相对丰度都没有显著差异(P>0.05);对照组小鼠在第0天和感染组小鼠在感染后第4、8、21和33天的肠道菌群的al-pha多样性也没有显著差异(P>0.05),而其各物种在门水平、属水平以及OUT水平上的相对丰度都存在显著差异(P<0.05).在门水平上,主要表现为H9N2 AIV感染后小鼠肠道菌群中的厚壁菌门细菌相对丰度先减少后逐渐增多,而拟杆菌门细菌的相对丰度则先增多后逐渐减少.此外,在OUT水平上,进行PCoA分析也显示,对照组小鼠的肠道菌群以及感染组小鼠在感染后第4、8、21和33天的肠道菌群可明显区分开来.综上表明,正常小鼠的肠道菌群在第33天内是稳定的,而H9N2 AIV感染可引起小鼠肠道菌群群落结构发生明显改变,并且在感染33 d后仍未恢复.

摘要： 为评价H9N2亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗对流行毒株的免疫保护效果,将禽流感病毒HF株灭活疫苗和商品化鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗分别以0.3 mL/只接种21日龄SPF鸡,3周后采血测定HI抗体效价,并用2018年-2019年分离的4株H9亚型禽流感病毒分别进行攻毒.结果显示,免疫后21 d,HF株灭活疫苗免疫组HI抗体效价达到9.1 log2以上,商品化疫苗HI抗体效价几何平均值则为6.3 log2以内.4株H9亚型禽流感病毒流行毒株以107.0 EID50的剂量静脉攻毒后,HF株灭活疫苗免疫组可抵抗流行毒株的攻击,保护率为100％;而商品化疫苗对流行毒株的攻毒保护率仅为40％～60％.说明H9N2亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗具有较强的免疫原性,能使免疫鸡抵抗流行毒株的攻击.

摘要： 目的 了解贵州省H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的流行与遗传变异情况,为AIV的防控提供依据.方法 统计2018年10月—2019年3月贵州省活禽市场外环境AIV检出情况,对选取的H9N2亚型AIV进行基因组的提取、血凝素(hemagglutinin,HA)基因的RT-PCR扩增与测序,并对获得的HA基因序列进行同源性、遗传进化和关键位点变异分析.结果 贵州省活禽市场外环境AIV检出率为52.2％,H9N2占阳性的83.7％.H9N2亚型AIV HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为91.6％～100.0％和91.0％～100.0％,均属于Y280亚系,G57基因型;与致病性相关的裂解位点序列均为PSRSSRGLF和LSRSSRGLF,符合低致病性AIV的分子特征;与宿主特异性相关的受体结合关键位点存在H191N、E198T/A和Q234L三个位点的突变,具有人样受体结合特征;与毒力相关的糖基化位点均具有7个,其中因突变218位点均存在一个糖基化位点缺失,313位点均存在一个增加.与人感染毒株相比关键位点未发生重要突变.结论 贵州省活禽市场外环境AIV检出率较高,污染较严重,且以H9N2为优势流行亚型;H9N2亚型AIV均属于Y280亚系,G57基因型,为低致病性AIV,毒株遗传差异在增大,关键氨基酸位点存在变异,具有感染人的风险,故应加强监测该病毒的分子遗传变异情况.

摘要： H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于低致病性AIV,但因其分布广泛、传播迅速,可引起感染家禽生产性能下降,给家禽业带来了极大的经济损失.H9N2亚型AIV在感染家禽过程中可引起严重的免疫抑制,使家禽极易继发上呼吸道细菌、消化道细菌等感染,从而导致H9N2亚型AIV致病力增强,细菌黏附定植能力增强,家禽死亡率显著升高.另外,H9N2亚型AIV还能与禽传染性支气管炎病毒、禽传染性法氏囊病病毒、新城疫病毒等发生混合感染,病毒入侵时有可能出现协同作用或颉颃作用,从而相互促进或抑制病毒的复制和排毒;H9N2亚型AIV还极易发生突变或与其他亚型流感病毒在混合感染时发生基因重组产生感染人的新亚型毒株,给人类健康和公共卫生安全带来重大威胁.作者综述了H9N2亚型AIV与其他病原混合感染的研究进展,通过阐述H9N2亚型AIV与细菌或病毒混合感染的协同或颉颃作用,以期为临床上H9N2亚型AIV混合感染的防治提供参考.

摘要： 为建立H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)免疫层析快速检测技术,本研究以差速离心法纯化H9N2亚型AIV免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合和HAT选择性培养;以H9N2亚型AIV感染MDCK细胞建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPM A)的单克隆抗体检测方法,通过对杂交瘤细胞的IPMA筛选和连续克隆化筛选鉴定抗H9N2亚型AIV中和性单克隆抗体;以胶体金标记HA单克隆抗体,配对HA单克隆抗体和羊抗小鼠IgG为检测线和质控线,制备H9N2亚型AIV快速检测试纸条,测定其特异性和敏感性.结果显示,获得了11株稳定分泌抗H9N2亚型AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞,其单克隆抗体腹水IPMA效价在1.28×10-4至2.56×10-5之间.单克隆抗体3A2、5H6、6B8、7E10和9G12血凝抑制试验(HI)显示血凝抑制活性,其(HI)效价在61og2～91og2之间.单克隆抗体3A2、6B8和9G12在病毒中和试验中对H9N2亚型AIV有显著病毒中和活性,中和效价分别1 ∶ 6 400、1 ∶ 25 600和1 ∶ 25 600.Western blotting结果提示,该中和单克隆抗体识别HA蛋白线性抗原表位.利用配对单克隆抗体3A2和9G12研制的H9N2亚型AIV检测试纸条检测H9N2亚型AIV尿囊液的效价为9log2,灵敏度与经典血凝试验(HA)相当,与其他亚型AIV(H1、H3、H5、H7),以及新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒等相关病毒均无交叉反应.本研究制备了具有病毒中和活性的抗H9N2亚型AIV单克隆抗体,并初步研制了 H9N2亚型AIV检测试纸条,为H9N2亚型AIV新型疫苗研制和快速检测奠定良好的研究基础.

摘要： 为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、克隆、测序,并对所获得的全序列与参考株进行了8个基因片段的同源性比较和遗传进化分析.结果显示,该分离株的HA基因与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC40/2015(H9N2)的核苷酸同源性最高,裂解位点处氨基酸序列为-PSRSSR↓GLF-,符合低致病性裂解位点序列特征,其226位氨基酸为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性;NA基因颈部63、64和65位点氨基酸有缺失,与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC32/2014(H9N2)的核苷酸同源性最高;M2基因的31位氨基酸为N,表明该病毒已经对金刚烷胺类药物产生了耐药性;分离株的基因组由3个亚系的基因重组产生,其中HA和NA基因来源于BJ/94亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,PB1、PA、NP和NS基因来源于F98亚系;该分离株的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS与H7N9、H10N8、H5N6亚型禽流感病毒的内部基因存在复杂的交叉重组现象.因此须加强对H9N2亚型禽流感病毒的流行病学监测.

摘要： 为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、克隆、测序,并对所获得的全序列与参考株进行了8个基因片段的同源性比较和遗传进化分析.结果显示,该分离株的HA基因与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC40/2015(H9N2)的核苷酸同源性最高,裂解位点处氨基酸序列为-PSRSSR↓GLF-,符合低致病性裂解位点序列特征,其226位氨基酸为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性;NA基因颈部63、64和65位点氨基酸有缺失,与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC32/2014(H9N2)的核苷酸同源性最高;M2基因的31位氨基酸为N,表明该病毒已经对金刚烷胺类药物产生了耐药性;分离株的基因组由3个亚系的基因重组产生,其中HA和NA基因来源于BJ/94亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,PB1、PA、NP和NS基因来源于F98亚系;该分离株的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS与H7N9、H10N8、H5N6亚型禽流感病毒的内部基因存在复杂的交叉重组现象.因此须加强对H9N2亚型禽流感病毒的流行病学监测.

摘要： 为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、克隆、测序,并对所获得的全序列与参考株进行了8个基因片段的同源性比较和遗传进化分析.结果显示,该分离株的HA基因与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC40/2015(H9N2)的核苷酸同源性最高,裂解位点处氨基酸序列为-PSRSSR↓GLF-,符合低致病性裂解位点序列特征,其226位氨基酸为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性;NA基因颈部63、64和65位点氨基酸有缺失,与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC32/2014(H9N2)的核苷酸同源性最高;M2基因的31位氨基酸为N,表明该病毒已经对金刚烷胺类药物产生了耐药性;分离株的基因组由3个亚系的基因重组产生,其中HA和NA基因来源于BJ/94亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,PB1、PA、NP和NS基因来源于F98亚系;该分离株的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS与H7N9、H10N8、H5N6亚型禽流感病毒的内部基因存在复杂的交叉重组现象.因此须加强对H9N2亚型禽流感病毒的流行病学监测.

摘要： 为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、克隆、测序,并对所获得的全序列与参考株进行了8个基因片段的同源性比较和遗传进化分析.结果显示,该分离株的HA基因与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC40/2015(H9N2)的核苷酸同源性最高,裂解位点处氨基酸序列为-PSRSSR↓GLF-,符合低致病性裂解位点序列特征,其226位氨基酸为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性;NA基因颈部63、64和65位点氨基酸有缺失,与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC32/2014(H9N2)的核苷酸同源性最高;M2基因的31位氨基酸为N,表明该病毒已经对金刚烷胺类药物产生了耐药性;分离株的基因组由3个亚系的基因重组产生,其中HA和NA基因来源于BJ/94亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,PB1、PA、NP和NS基因来源于F98亚系;该分离株的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS与H7N9、H10N8、H5N6亚型禽流感病毒的内部基因存在复杂的交叉重组现象.因此须加强对H9N2亚型禽流感病毒的流行病学监测.

摘要： 目的:通过研究H9N2亚型禽流感病毒对小鼠肺上皮细胞(MLE-12)和肺微血管内皮细胞(PMVECs)表达Ⅰ型IFN或AVPs的抑制作用,来研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.rn 方法:应用RT-PCR、Western Blotting(或ELISA)和激光共聚焦显微镜等方法,检测病毒感染后PMVECs和MLE-12表达Ⅰ型IFN及受体、PKR和Mx1基因和蛋白水平的情况以及黄芩苷对表达变化的影响,由此确定PMVECs和MLE-12两种细胞表达上述因子差异性的关系后,在体外模仿体内环境建立小鼠MLE-12和PMVECs的共培养模型检测病毒对共培养细胞PKR和Mx1表达的影响以及黄芩苷的作用.rn 预期结果:H9N2亚型禽流感病毒能够抑制MLE-12和PMVECs细胞表达1型IFN和AVPs以及黄芩苷可以改变病毒对Ⅰ型IFN和AVPs表达的抑制作用;而建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,确定黄芩苷的抗H9N2亚型禽流感病毒作用与MLE-12和PMVECs免疫功能之间的关系.rn 创新点:在体外模仿体内环境建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,探索研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.

摘要： 目的:通过研究H9N2亚型禽流感病毒对小鼠肺上皮细胞(MLE-12)和肺微血管内皮细胞(PMVECs)表达Ⅰ型IFN或AVPs的抑制作用,来研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.rn 方法:应用RT-PCR、Western Blotting(或ELISA)和激光共聚焦显微镜等方法,检测病毒感染后PMVECs和MLE-12表达Ⅰ型IFN及受体、PKR和Mx1基因和蛋白水平的情况以及黄芩苷对表达变化的影响,由此确定PMVECs和MLE-12两种细胞表达上述因子差异性的关系后,在体外模仿体内环境建立小鼠MLE-12和PMVECs的共培养模型检测病毒对共培养细胞PKR和Mx1表达的影响以及黄芩苷的作用.rn 预期结果:H9N2亚型禽流感病毒能够抑制MLE-12和PMVECs细胞表达1型IFN和AVPs以及黄芩苷可以改变病毒对Ⅰ型IFN和AVPs表达的抑制作用;而建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,确定黄芩苷的抗H9N2亚型禽流感病毒作用与MLE-12和PMVECs免疫功能之间的关系.rn 创新点:在体外模仿体内环境建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,探索研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.

摘要： 目的:通过研究H9N2亚型禽流感病毒对小鼠肺上皮细胞(MLE-12)和肺微血管内皮细胞(PMVECs)表达Ⅰ型IFN或AVPs的抑制作用,来研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.rn 方法:应用RT-PCR、Western Blotting(或ELISA)和激光共聚焦显微镜等方法,检测病毒感染后PMVECs和MLE-12表达Ⅰ型IFN及受体、PKR和Mx1基因和蛋白水平的情况以及黄芩苷对表达变化的影响,由此确定PMVECs和MLE-12两种细胞表达上述因子差异性的关系后,在体外模仿体内环境建立小鼠MLE-12和PMVECs的共培养模型检测病毒对共培养细胞PKR和Mx1表达的影响以及黄芩苷的作用.rn 预期结果:H9N2亚型禽流感病毒能够抑制MLE-12和PMVECs细胞表达1型IFN和AVPs以及黄芩苷可以改变病毒对Ⅰ型IFN和AVPs表达的抑制作用;而建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,确定黄芩苷的抗H9N2亚型禽流感病毒作用与MLE-12和PMVECs免疫功能之间的关系.rn 创新点:在体外模仿体内环境建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,探索研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.

摘要： 目的:通过研究H9N2亚型禽流感病毒对小鼠肺上皮细胞(MLE-12)和肺微血管内皮细胞(PMVECs)表达Ⅰ型IFN或AVPs的抑制作用,来研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.rn 方法:应用RT-PCR、Western Blotting(或ELISA)和激光共聚焦显微镜等方法,检测病毒感染后PMVECs和MLE-12表达Ⅰ型IFN及受体、PKR和Mx1基因和蛋白水平的情况以及黄芩苷对表达变化的影响,由此确定PMVECs和MLE-12两种细胞表达上述因子差异性的关系后,在体外模仿体内环境建立小鼠MLE-12和PMVECs的共培养模型检测病毒对共培养细胞PKR和Mx1表达的影响以及黄芩苷的作用.rn 预期结果:H9N2亚型禽流感病毒能够抑制MLE-12和PMVECs细胞表达1型IFN和AVPs以及黄芩苷可以改变病毒对Ⅰ型IFN和AVPs表达的抑制作用;而建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,确定黄芩苷的抗H9N2亚型禽流感病毒作用与MLE-12和PMVECs免疫功能之间的关系.rn 创新点:在体外模仿体内环境建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,探索研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.

摘要： 目的:通过研究H9N2亚型禽流感病毒对小鼠肺上皮细胞(MLE-12)和肺微血管内皮细胞(PMVECs)表达Ⅰ型IFN或AVPs的抑制作用,来研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.rn 方法:应用RT-PCR、Western Blotting(或ELISA)和激光共聚焦显微镜等方法,检测病毒感染后PMVECs和MLE-12表达Ⅰ型IFN及受体、PKR和Mx1基因和蛋白水平的情况以及黄芩苷对表达变化的影响,由此确定PMVECs和MLE-12两种细胞表达上述因子差异性的关系后,在体外模仿体内环境建立小鼠MLE-12和PMVECs的共培养模型检测病毒对共培养细胞PKR和Mx1表达的影响以及黄芩苷的作用.rn 预期结果:H9N2亚型禽流感病毒能够抑制MLE-12和PMVECs细胞表达1型IFN和AVPs以及黄芩苷可以改变病毒对Ⅰ型IFN和AVPs表达的抑制作用;而建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,确定黄芩苷的抗H9N2亚型禽流感病毒作用与MLE-12和PMVECs免疫功能之间的关系.rn 创新点:在体外模仿体内环境建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,探索研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.

摘要： 目的:通过研究H9N2亚型禽流感病毒对小鼠肺上皮细胞(MLE-12)和肺微血管内皮细胞(PMVECs)表达Ⅰ型IFN或AVPs的抑制作用,来研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.rn 方法:应用RT-PCR、Western Blotting(或ELISA)和激光共聚焦显微镜等方法,检测病毒感染后PMVECs和MLE-12表达Ⅰ型IFN及受体、PKR和Mx1基因和蛋白水平的情况以及黄芩苷对表达变化的影响,由此确定PMVECs和MLE-12两种细胞表达上述因子差异性的关系后,在体外模仿体内环境建立小鼠MLE-12和PMVECs的共培养模型检测病毒对共培养细胞PKR和Mx1表达的影响以及黄芩苷的作用.rn 预期结果:H9N2亚型禽流感病毒能够抑制MLE-12和PMVECs细胞表达1型IFN和AVPs以及黄芩苷可以改变病毒对Ⅰ型IFN和AVPs表达的抑制作用;而建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,确定黄芩苷的抗H9N2亚型禽流感病毒作用与MLE-12和PMVECs免疫功能之间的关系.rn 创新点:在体外模仿体内环境建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,探索研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本发明提供一种禽偏肺病毒和H9亚型禽流感病毒二联疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是保藏编号为CCTCC NO:V201517的H9亚型禽流感病毒株和氨基酸序列为SEQ ID NO:1的禽偏肺病毒F蛋白。本发明将H9亚型禽流感病毒QDY株与禽偏肺病毒F蛋白抗原液按比例混合后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。本发明制备的疫苗能提高免疫后的抗体水平，提高免疫后抗体的整齐度，保证了疫苗的免疫效果，此疫苗具有高效、安全性好的优点。

摘要： 本发明公开了一种H9亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒二重RT-PCR检测试剂盒，该试剂盒含有两对特异性引物。本发明具有操作简便、敏感性高、特异性强和重复性好等优点，应用本发明可建立H9亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒的二重PCR的检测方法，实现同时检测和鉴别H9亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒两种病原体，用于H9亚型禽流感病毒感染造成的免疫力减低导致的鸭坦布苏病毒的混合感染，既可以节约时间的成本，又可以减少污染。

摘要： 本发明公开了一种H9亚型禽流感病毒和禽肺炎病毒的二重RT-PCR试剂盒及其应用。该试剂盒中含有用于鉴定或辅助鉴定AIVH9和APV的引物对组，组成如下：序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对1，和由序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对2。实验证明，本发明仅需一次PCR就能同时检测和鉴别AIVH9和APV两种病原体，具有特异性强、灵敏度高、低成本、高效率等优点；且本发明在引物设计上利用扩增片段长度的不同可直接判定扩增结果，更简便、直观和实用。本发明最低能同时检出10pg？AIVH9RNA和10pg？APV？RNA，其敏感性为由这两种病毒引起的早期发病提供了快速准确的诊断结果，对预防和控制这两种病具有重要意义，对养鸡业可持续健康发展有重要的现实意义。

摘要： 本发明公开了用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组。利用本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组建立的二重RT‑PCR，可准确鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒，且特异性好，灵敏度高，对H9亚型禽流感病毒和H6亚型AIV的最小检出限均达到5×10

摘要： 本发明属于生物技术领域，提供了一种检测H7亚型禽流感病毒的引物对及其引用、检测H7亚型禽流感病毒的方法。本发明提供的引物对包括序列为SEQ ID NO.1所示的上游引物和序列为SEQ ID NO.2所示的下游引物，能够快速检测H7亚型禽流感病毒，可以用于H7亚型禽流感病毒的科学研究，也可以用于动物或人的临床诊断检测。

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本发明公开了鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测引物组、试剂盒及方法，设计了针对鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的特异性引物，经过对不同引物组合进行试验筛选得到扩增效果较好的一个引物组合，然后继续对反应体系中引物浓度、引物之间的比例、退火温度和扩增时间进行优化，最终建立起可同时检测鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的方法。本发明的引物和检测方法通过一次PCR反应便可同时确定样品中鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的混合感染及单一感染情况，该方法同时具有特异性强、灵敏度高、快速简便及易于操作等优点，十分适于在基层单位应用推广，为鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的监测及其防控提供技术支撑。

摘要： 本发明公开了禽肾炎病毒和H9亚型禽流感病毒二重LAMP检测引物组，包括用于检测禽肾炎病毒的引物1至引物5以及探针1和用于H9亚型禽流感病毒的引物6至引物10以及探针2。据此，发明人还建立了的LAMP检测方法。优化反应条件后，本发明所建立的LAMP检测方法只需要在63°C恒温反应55min即可完成，能特异地检测禽肾炎病毒和H9亚型禽流感病毒，并且检测的灵敏度非常高，最低能检测到3.83fg/μL的禽肾炎病毒和H9亚型禽流感病毒核酸混合样品。总之，本发明具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，且通过荧光基团的颜色检测阳性结果，有效的抑制了假阳性结果，并且减少了气溶胶污染，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明提供一种禽偏肺病毒和H9亚型禽流感病毒二联疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是保藏编号为CCTCC NO:V201517的H9亚型禽流感病毒株和氨基酸序列为SEQ ID NO:1的禽偏肺病毒F蛋白。本发明将H9亚型禽流感病毒QDY株与禽偏肺病毒F蛋白抗原液按比例混合后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。本发明制备的疫苗能提高免疫后的抗体水平，提高免疫后抗体的整齐度，保证了疫苗的免疫效果，此疫苗具有高效、安全性好的优点。