微血管内皮细胞

摘要： 心外膜冠状动脉(冠脉)“正常或接近正常”心肌缺血的主要原因为冠脉微循环异常。寻找微循环功能血清标志物,研发冠脉微循环功能测评新技术,采用冠脉微循环治疗新策略,有助于改善冠脉疾病患者的临床预后和转归。

摘要： 目的:建立一种简便高效的家兔脑微血管内皮细胞原代培养方法,为开展脑血管疾病及相关研究提供重要的载体和工具细胞。方法:无菌条件下取家兔大脑皮质,经剪碎、过细胞筛网、牛血清白蛋白密度梯度离心、Ⅱ型胶原酶消化后接种培养;通过细胞形态学观察及血管形成实验鉴定所培养的细胞。结果:原代培养48 h后,有少量短梭形的内皮细胞从血管段周围爬出;72 h后,细胞以血管段为中心形成“岛屿样”“团簇状”的集落;4~5 d后细胞集落间相互融合成片,铺满皿底,呈典型的单层、鹅卵石样、镶嵌式排列。血管形成实验观察到所培养的目的细胞能够形成管腔样结构,结果显示为阳性。结论:该方法可成功分离培养出原代家兔脑微血管内皮细胞。

摘要： [目的]建立一种简便有效的猪肺微血管内皮细胞原代培养方法.[方法]选取新生SPF长白仔猪,剪取肺边缘组织,在血清中剪碎至1mm3大小,最后将组织块在六孔板中贴壁培养.对培养出的原代细胞进行形态学观察及免疫学鉴定.[结果]组织块贴壁12h后血细胞大量游出,24h后内皮细胞开始从组织块边缘迁出,48h后内皮细胞呈多角形或梭形聚集在组织块边缘,60h后弃掉组织块.细胞汇合状态时呈典型的铺路石形态,免疫学鉴定CD31特异性抗原阳性.[结论]组织块贴壁法成功培养出原代猪肺微血管内皮细胞.

摘要： 背景骨微血管在骨稳态维持过程中发挥着重要作用,“血管-成骨耦联”现象已经成为目前临床医学工作者关注的焦点问题,揭示微血管内皮细胞与成骨细胞之间的相互调控关系将为骨相关疾病的临床治疗提供新的思路。目的探究在共培养条件下,微血管内皮细胞bEnd.3对成骨细胞MC3T3-E1增殖、凋亡的影响。方法利用Transwell小室建立MC3T3-E1/bEnd.3共培养体系,分别设置对照组(单独培养MC3T3-E1细胞)和共培养组(MC3T3-E1细胞和bEnd.3细胞共同培养)。CCK-8实验检测两组MC3T3-E1细胞增殖活性的变化,PI单染流式细胞术检测两组MC3T3-E1细胞周期的变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测两组MC3T3-E1细胞凋亡率的变化,Western blotting检测两组MC3T3-E1细胞PCNA、Bax、Cleaved Caspase-3等增殖/凋亡相关蛋白的表达变化情况。结果与单独培养的MC3T3-E1细胞相比,共培养组的MC3T3-E1细胞增殖活性显著增强(P<0.05),S期细胞比例显著增高(P<0.01),G2/M期细胞比例显著增高(P<0.05),PCNA表达升高(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05),Bax和Cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05)。结论在Transwell小室共培养条件下,微血管内皮细胞bEnd.3能够显著促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖,并抑制其凋亡。

摘要： [目的]了解内皮糖萼在中药多糖调控微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MVECs)分泌生物活性物质中的作用.[方法]采用酶消化法体外分离、培养大鼠空肠黏膜MVECs;以肝素酶Ⅲ处理去除MVECs部分内皮糖萼,及黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)溶液干预后,采取细胞培养液,采用生化试剂盒法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量,采用ELISA法检测白介素6(interleukin 6,IL-6)的含量.[结果]APS处理使NO含量和SOD活性一定程度的升高,IL-6的含量显著下降;肝素酶Ⅲ部分去除内皮糖萼后,APS诱导的NO、SOD和IL-6分泌量变化均被显著减弱.[结论]内皮糖萼的受损,显著影响APS对大鼠空肠黏膜MVECs分泌NO、SOD和IL-6功能的调控.

摘要： 近年来,中药复方抗炎机制的研究不断深入,白头翁汤复方(Pulsatilla decoction,PD)作为经典的清热解毒中药方剂常用于预防和治疗细菌性腹泻.然而其抗炎机制和靶细胞研究仍然不明确,本课题以大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)为模式细胞,旨在研究白头翁汤对LPS诱导的RIMVECs炎症反应的调控作用.利用LPS刺激RIMVECs,通过荧光定量PCR(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)的方法检测白头翁汤对LPS刺激后RIMVECs的炎性信号通路TLR4-ERK1/2信号通路关键蛋白TLR4、TRAF6、ERK的mRNA及蛋白表达.进一步采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测白头翁汤对LPS刺激后的炎性因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的分泌情况.结果 表明:白头翁汤可以显著降低LPS诱导的TLR4、TRAF6、ERK的mRNA水平及蛋白表达并降低了LPS诱导的细胞下游炎性因子的分泌.白头翁汤通过抑制TLR4 ERK1/2信号通路缓解LPS所诱导的RIMVECs炎性反应,发挥抗炎作用.

摘要： 背景 骨微血管在骨稳态维持过程中发挥着重要作用,"血管-成骨耦联"现象已经成为目前临床医学工作者关注的焦点问题,揭示微血管内皮细胞与成骨细胞之间的相互调控关系将为骨相关疾病的临床治疗提供新的思路.目的 探究在共培养条件下,微血管内皮细胞bEnd.3对成骨细胞MC3T3-E1增殖、凋亡的影响.方法 利用Transwell小室建立MC3T3-E1/bEnd.3共培养体系,分别设置对照组(单独培养MC3T3-E1细胞)和共培养组(MC3T3-E1细胞和bEnd.3细胞共同培养).CCK-8实验检测两组MC3T3-E1细胞增殖活性的变化,PI单染流式细胞术检测两组MC3T3-E1细胞周期的变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测两组MC3T3-E1细胞凋亡率的变化,Western blotting检测两组MC3T3-E1细胞PCNA、Bax、Cleaved Caspase-3等增殖/凋亡相关蛋白的表达变化情况.结果 与单独培养的MC3T3-E1细胞相比,共培养组的MC3T3-E1细胞增殖活性显著增强(P<0.05),S期细胞比例显著增高(P<0.01),G2/M期细胞比例显著增高(P<0.05),PCNA表达升高(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05),Bax和Cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05).结论 在Transwell小室共培养条件下,微血管内皮细胞bEnd.3能够显著促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖,并抑制其凋亡.

摘要： 目的 探讨hsa-miR-301a-3p对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)条件下重组组织型纤溶酶原激活剂(Recombinant tissue plasminogen activator,rtPA)相关的脑微血管内皮细胞死亡的作用.方法 建立人体外脑微血管内皮细胞(Human brain microvascular endothelial cells,hBMECs)缺氧复氧模型,应用rtPA干预后检测细胞死亡数量及hsa-miR-301a-3p的改变,并进一步干预hsa-miR-301a-3p后再检测细胞死亡数量,随后在生信学分析的基础上进一步检测靶基因的变化.结果 rtPA干预可引起内皮细胞死亡数量增加及hsa-miR-301a-3p表达水平下降,hsa-miR-301a-3p模拟物(Mimic)可抑制rtPA相关的内皮细胞死亡,并引起下游靶基因缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)表达减少.结论 hsa-miR-301a-3p有助于减少缺氧复氧条件下rtPA相关的脑微血管内皮细胞死亡.

摘要： 目的 探讨大鼠视网膜微血管内皮细胞的体外分离培养方法.方法 选取6～8周龄SD大鼠5只,摘取眼球,挤压球壁后,人工剥离视网膜.将大鼠视网膜剪碎,依次经过200μm、75μm不锈钢筛网;收集滤液,离心,弃上清,予0.1％II型胶原酶消化15～20min;再次将消化液通过45μm尼龙筛网,反复冲洗筛网,收集网上物;添加培养液,接种于Nunc进口培养皿中.通过细胞形态学观察、VIII因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞.结果 接种48h后,微血管内皮细胞从血管组织碎片爬出,单个细胞形态为多角形或短梭形,细胞间隙较大,细胞核清晰,胞质丰富;96h后细胞融合,呈典型的单层、扁平、铺路石样镶嵌式排列.细胞Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色检测,免疫反应阳性细胞率达98％以上.结论 连续物理过筛法结合胶原酶消化法能够成功、高效地分离出原代大鼠视网膜微血管内皮细胞,为视网膜血管疾病的体外基础研究提供有效的细胞模型.

摘要： 目的探讨大鼠视网膜微血管内皮细胞的体外分离培养方法。方法选取6~8周龄SD大鼠5只,摘取眼球,挤压球壁后,人工剥离视网膜。将大鼠视网膜剪碎,依次经过200μm、75μm不锈钢筛网;收集滤液,离心,弃上清,予0.1%II型胶原酶消化15~20min;再次将消化液通过45μm尼龙筛网,反复冲洗筛网,收集网上物;添加培养液,接种于Nunc进口培养皿中。通过细胞形态学观察、VIII因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞。结果接种48h后,微血管内皮细胞从血管组织碎片爬出,单个细胞形态为多角形或短梭形,细胞间隙较大,细胞核清晰,胞质丰富;96h后细胞融合,呈典型的单层、扁平、铺路石样镶嵌式排列。细胞Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色检测,免疫反应阳性细胞率达98%以上。结论连续物理过筛法结合胶原酶消化法能够成功、高效地分离出原代大鼠视网膜微血管内皮细胞,为视网膜血管疾病的体外基础研究提供有效的细胞模型。

摘要： 目的：通过β淀粉样蛋白(amyloidβ-protien,Aβ)损伤人脑微血管内皮细胞(human brain microvas-cular endothelial cells,HBMEC)培养液对正常神经元凋亡的影响及通心络胶囊的干预作用研究,探讨通心络对HB-MEC及脑神经元的保护作用及其可能作用机制. 方法：实验分为空白组,正常组,模型组,Aβ损伤组,通心络组,石杉碱甲组,空白组为正常神经元组,正常组为正常HBMEC培养液培养神经元组,其余4组采用20μmol?L-1Aβ诱导HBMEC损伤,其中通心络组提前干预(400mg·L-1通心络预处理6h),石杉碱甲组提前干预(100mg·L-1石杉碱甲预处理6h),取其损伤后的细胞培养液加到正常脑神经元中进行培养,实验结束检测神经元的凋亡情况及凋亡蛋白、基因表达. 结果：Aβ损伤HBMEC后的培养液可加速脑神经元的凋亡,且较Aβ直接导致脑神经元凋亡严重,提前通过通心络干预的HBMEC培养液诱导脑神经元凋亡细胞减少,凋亡蛋白、基因表达均有降低(P＜0.05,P＜0.01),且优于西药石杉碱甲组(P＜0.05). 结论：老年性痴呆(AD)中HBMEC损伤可以进一步加速神经元的凋亡,而通心络保护HBMEC同时可起到保护脑神经元的作用,通心络胶囊对AD脑神经元及HBMEC具有双重保护作用.

摘要： 本试验旨在研究黄芪多糖(AstragaLus PoLysacharin,APS)对体外培养的大鼠小肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)增殖的影响及作用机制.采用MTT法筛选APS促RIMMVECs增殖的最佳浓度,流式细胞术检测APS对细胞周期的影响,ELisa法检测细胞培养上清中VEGF-A的含量变化,荧光显微镜检测Ca2+荧光探针FLuo-8AM负载分析细胞荧光强度变化,以及Western BLot检测P-ERK蛋白含量.结果显示,100ug/mL APS作用6h和36h后,可显著促进RIMMVECs的增殖(P＜0.05).与对照组相比,培养36h后,APS组细胞上清VEGF-A含量显著升高(P＜0.05);培养6h和12h后,APS组细胞Ca2+浓度显著降低(P＜0.05);培养36h后,APS组细胞P-ERK的表达量显著升高(P＜0.05).研究表明APS具有促进RIMMVECs增殖的作用,该作用可能与促进细胞VEGF-A表达,以及激活ERK通路相关.

摘要： 目的:本研究旨在通过前期实验室的蛋白质组学研究找到微血管内皮细胞上激活嗜中性粒细胞的因子,并验证白头翁汤是否通过筛选出的这些因子保护内皮以激活嗜中性白细胞杀灭细菌,为建立体外筛选激活嗜中性白细胞的抗菌中药提供一个新的方法. 方法:通过分析DIA蛋白芯片技术定量技术检测不同处理下的微血管内皮细胞的差异蛋白表达结果,根据结果及文献查询筛选蛋白进行Western blot验证.再用阻断剂阻断差异因子后作用于微血管内皮细胞考察跨内皮嗜中性白细胞的杀菌能力,确定微血管内皮细胞上激活嗜中性白细胞杀灭细菌的因子. 预期结果:验证出白头翁汤作用LPS损伤微血管内皮细胞差异蛋白的结果,确定白头翁汤是否可通过验证出的因子激活嗜中性白细胞杀灭细菌的能力,建立体外筛选中药的方法. 创新点:筛选微血管内皮细胞上激活嗜中性白细胞杀菌功能的因子目前尚无报道.中药能通过调动筛选出的因子保护内皮以激活嗜中性白细胞杀菌功能的研究尚无报道.

摘要： 目的:旨在找到微血管内皮细胞上激活嗜中性粒细胞的因子,并考察白头翁汤对调控损伤和非损伤RIMVECs后所筛选因子的影响,为建立体外筛选激活PMN的抗菌中药的方法奠定理论基础. 方法:通过PMN穿越损伤和非损伤的RIMVECs后杀菌能力的检测,NE、CG及防御素的检测以及RIMVECs在损伤和非损伤状态下蛋白芯片的检测筛选出RIMVECs上激活PMN抑杀细菌的因子,用Western blot进行验证,再用阻断剂阻断该因子后观察PMN穿越RIMVECs后杀菌能力,NE、CG及防御素的表达确定RIMVECs上激活PMN抑杀细菌的因子,最后用白头翁汤作用损伤和非损伤的RIMVECs察看所筛选因子的变化情况. 预期结果:PMN穿越损伤和非损伤的RIMVECs后杀菌能力,NE、CG及防御素的表达都存在差异;RIMVECs在损伤和非损伤状态下有差异蛋白的表达,从而筛选出RIMVECs上激活PMN抑杀细菌的因子;阻断剂阻断该因子后跨内皮的PMN杀菌能力,NE、CG及防御素的表达均有影响;白头翁汤通过调动筛选出的因子保护内皮以激活PMN抑杀细菌. 创新点:筛选RIMVECs上激活PMN抑杀细菌的因子目前尚无报道,中药能通过调动筛选出的因子保护内皮以激活PMN抑杀细菌的研究尚无报道.

摘要： 微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MVECs)已被证明是重要的免疫调节细胞,然而其在兽医感染性疾病中的作用关注较少.猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染猪的临床症状、组织病理学变化及组织中抗原分布均提示MVECs应是其靶细胞.本文综述了PRRSV在感染猪内皮组织中的抗原分布、体外培养血管内皮细胞对PRRSV的易感性,及MVECs在其它感染性疾病的免疫调节作用.

摘要： 微血管内皮细胞(Microvascular endothelial cells,MVECs)是存在于血液与组织液之间的一层单层的扁平上皮细胞,从结构上来说,MVECs是微血管通透性主要的物理屏障;从功能上来说,MVECs是血管内外物质交换的重要场所,在机体内形成主要防御屏障.尤其是在炎症发生时,与机体固有免疫细胞一嗜中性粒细胞相互作用,调节其颗粒酶活性和功能,从而发挥抵御病原体,控制炎症发生的作用.近年来已证实多种中药及有效成分能从多个方面调节内皮细胞活性物质分泌、抗细胞凋亡等,达到保护内皮细胞功能的目的.

摘要： 目的：本研究旨在建立一种简单易行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞的方法. 方法：取5～7日龄SD大鼠分离外周肺组织,组织植块法获得原代大鼠肺微血管内皮细胞,37°C、5％CO2培养箱中传代培养,采用免疫磁珠法对其进行分离纯化,并对分离纯化后的细胞进行免疫荧光及流式细胞鉴定,通过MTT比色分析法准确、安全、可靠地检测纯化后传代肺微血管内皮细胞的增殖情况. 结果：倒置显微镜下观察单个细胞呈短梭形或多角形,汇合后呈铺路石样,单层贴壁生长,细胞分离纯化后经免疫荧光检测CD31呈阳性,流式细胞仪检测淋巴管内皮细胞表面特有标记VEGFR-3呈阴性(P=0.1,且P＜0.5),且复苏后经MTT测得传代细胞的增殖情况良好. 结论：试验成功建立了一种分离高纯度大鼠肺微血管内皮细胞的体外培养方法.

摘要： 目的:通过研究H9N2亚型禽流感病毒对小鼠肺上皮细胞(MLE-12)和肺微血管内皮细胞(PMVECs)表达Ⅰ型IFN或AVPs的抑制作用,来研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.rn 方法:应用RT-PCR、Western Blotting(或ELISA)和激光共聚焦显微镜等方法,检测病毒感染后PMVECs和MLE-12表达Ⅰ型IFN及受体、PKR和Mx1基因和蛋白水平的情况以及黄芩苷对表达变化的影响,由此确定PMVECs和MLE-12两种细胞表达上述因子差异性的关系后,在体外模仿体内环境建立小鼠MLE-12和PMVECs的共培养模型检测病毒对共培养细胞PKR和Mx1表达的影响以及黄芩苷的作用.rn 预期结果:H9N2亚型禽流感病毒能够抑制MLE-12和PMVECs细胞表达1型IFN和AVPs以及黄芩苷可以改变病毒对Ⅰ型IFN和AVPs表达的抑制作用;而建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,确定黄芩苷的抗H9N2亚型禽流感病毒作用与MLE-12和PMVECs免疫功能之间的关系.rn 创新点:在体外模仿体内环境建立MLE-12和PMVECs的共培养模型,探索研究中药有效成分黄芩苷通过激活MLE-12和PMVECs诱导表达Ⅰ型IFN和AVPs来发挥抗病毒作用.

摘要： 目的:旨在研究调动微血管内皮细胞、从而激活嗜中性粒细胞杀灭细菌的中药,并筛选其中具有显著保护内皮细胞激活嗜中性粒细胞杀菌的单味中药成分及其有效水溶性成分,为日后研发治疗动物细菌性疾病的药物奠定基础. 方法:首先确定白头翁汤中的四种中药成分(黄连、黄柏、秦皮、白头翁)以及马齿苋对降低LPS诱导微血管内皮细胞损伤的浓度和时间,其次收集跨过内皮细胞的嗜中性粒细胞,通过庆大霉素保护试验与大肠杆菌共同作用涂板观察其胞内外杀菌情况,同时ELISA方法测定溶菌酶活性、琼脂糖火箭电泳法测定溶菌酶浓度,并采用流式细胞术法、RT-PCR法检测LL37释放表达情况. 预期结果:五种中药在有效安全浓度下对受LPS损伤的RIMVECs有保护作用,并且激活嗜中性粒细胞的溶菌酶含量和LL37释放量提高,胞内外杀菌情况有显著差异,从而筛选出对嗜中性粒细胞杀菌功能有激活作用的中药水溶性成分. 创新点:马齿苋通过调理微血管内皮细胞激活嗜中性粒细胞杀菌尚无报道,从调动微血管内皮细胞激活嗜中性粒细胞的角度探讨中药水溶性成分,为临床治疗细菌性疾病奠定基础.

摘要： 目的:旨在证明"中药抑杀组织液中的病毒可通过调理和保护微血管内皮细胞,从而保证其激活跨内皮迁移的淋巴细胞抑杀病毒的功能",从而为中药抗病毒复方制剂的研发奠定相关理论基础,为开发有效、无毒副作用的抗病毒药物提供新研究方向.rn 方法:首先通过空斑实验来检测大鼠肺微血管内皮细胞是否支持H9N2禽流感病毒的复制;其次,收集跨过内皮的淋巴细胞,将跨内皮的淋巴细胞培养24小时后与病毒共孵育6～8小时,离心后取部分上清接种于MDCK细胞及空斑法检测病毒数量,并用ELISA方法检测其余上清中的防御素的含量.rn 预期结果:H9N2禽流感病毒接种于大鼠肺微血管内皮细胞后,在细胞培养上清中检测到病毒,并且病毒接种量、培养时问和空斑数量呈正相关.H9N2感染内皮细胞后,跨过内皮的淋巴细胞抑制病毒感染的能力减弱,防御素的含量也会明显降低.rn 创新点:首先是对于淋巴细胞抑杀病毒功能是否需微血管内皮细胞激活,未见文献报道;再者从保护、调理微血管内皮细胞出发,通过激活淋巴细胞抑杀病毒功能,阐述中药的抗病毒机理,也未见报道.

摘要： 本说明书提供：一种分离血管内皮细胞的纯培养物的方法，该方法能够在从由人多能干细胞分化的内皮细胞谱系的细胞系中分离在特定时间粘附在基质上的同质内皮细胞；一种维持血管内皮细胞特性的培养基，其包括通过该方法分离的高纯度血管内皮细胞，4ng/ml至6ng/ml的FGF2、5ng/ml至10ng/ml的EGF、10ng/ml至30ng/ml的VEGF‑A、20ng/ml至50ng/ml的抗坏血酸和DMEM/F‑12作为活性成分；以及包括它们的培养方法。

摘要： 本发明提供了永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子在制备修复组织皮肤全层缺损生物制剂和制备治疗缺血缺氧性组织损伤生物制剂中的应用，所述的复合细胞因子为低氧培养永生化人肺微血管内皮细胞所分泌的细胞因子，所述的复合细胞因子不含有遗传物质（DNA或RNA）。用低氧培养的永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子局部应用，促进局部血管的形成，具有明显的效果。并且对于皮肤组织缺损等损伤疾病具有明显的组织再生作用。复合细胞因子具有多种促进血管生成的有效成分，能够促进血管再生，并对损伤组织进行修复，促进损伤组织的生长愈合，调节免疫反应等等。

摘要： 本发明提供一种原代脊髓微血管内皮细胞的分离培养方法及由其得到的脊髓微血管内皮细胞，所述方法包括如下步骤：（1）将脊髓组织与平衡盐溶液混合，进行研磨，离心，收集沉淀；（2）将步骤（1）得到的沉淀与富集试剂混合，离心，弃上清，得富集的脊髓微血管片段；（3）将得到的脊髓微血管片段与酶混合，消化，得脊髓微血管内皮细胞；（4）将脊髓微血管内皮细胞与增殖培养基混合，接种于蛋白质和/或多肽包被的细胞培养板上，进行一次培养，后换用选择培养基进行二次培养，即得。所述方法稳定性高、可重复性好、简便快速、成本低、得到的脊髓微血管内皮细胞纯度高且产量高，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明提供一种小鼠脑微血管内皮细胞与周细胞联合提取培养方法，该方法新颖而简单，采用“两步酶解法”可从小鼠中枢神经系统中分离和培养大量内皮细胞与周细胞，该方法易于建立，并在较短时间内提供大量高纯度的内皮细胞和周细胞，进而用于多种下游应用，包括体外和体内实验，转录组学、蛋白质组学、代谢组学、表观基因组学和单细胞分析。

摘要： 本发明提供了永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子在制备修复组织皮肤全层缺损生物制剂和制备治疗缺血缺氧性组织损伤生物制剂中的应用，所述的复合细胞因子为低氧培养永生化人肺微血管内皮细胞所分泌的细胞因子，所述的复合细胞因子不含有遗传物质（DNA或RNA）。用低氧培养的永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子局部应用，促进局部血管的形成，具有明显的效果。并且对于皮肤组织缺损等损伤疾病具有明显的组织再生作用。复合细胞因子具有多种促进血管生成的有效成分，能够促进血管再生，并对损伤组织进行修复，促进损伤组织的生长愈合，调节免疫反应等等。

摘要： 本发明公开一种小鼠肺微血管内皮细胞永生化以获得胞外囊泡的方法，包括以下步骤：S1、小鼠肺微血管内皮原代细胞分离：分离新生小鼠边缘肺组织，用眼科剪刀将组织剪成小块，制备单细胞悬液，磁珠阴性选择去除CD45+、CD90.2+和CD326+的细胞，筛选内皮细胞集落进行体外增殖；S2、内皮细胞永生化：转染六种慢病毒并进行筛选，根据细胞的生长速率和形态选择永生化细胞株；S3、囊泡提取：采用超声离心法提取囊泡。本发明通过磁珠阴性选择和圈选手段，避免了传统磁珠阳性选择提取细胞的损害，极大改善内皮细胞的损耗；本发明通过转染慢病毒至原代细胞，构建永生化细胞，永生化细胞分泌囊泡保留了原代细胞分泌囊泡的特性，极大降低囊泡提取成本。

摘要： 本发明公开了脑微血管内皮细胞在制备用于修复血脑屏障损伤的药物中的应用，涉及细胞制剂领域。本发明解决了目前技术下缺血性脑卒中后血脑屏障不可逆开放引发了损伤扩大化，改善了卒中治疗的预后；本发明中的细胞制剂来源广泛，易于获得，且可以快速修复脑血屏障。本发明中的细胞制剂能够靶向至脑缺血部位，可采用简单的静脉注射进行给药便于临床操作。

摘要： 本发明涉一种永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用。该方法是使用混合酶消化法，采用Ⅱ型胶原酶、分散酶和脱氧核糖核酸酶I从树鼩视网膜组织中分离并通过差速消化法纯化获得原代树鼩视网膜微血管内皮细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞；本发明方法获得的细胞能够稳定传代至50代以上，有效维持了树鼩视网膜微血管内皮细胞稳定的生长状态和增殖能力，改善了目前视网膜血管研究只能现用现取的烦琐程序，为眼科相关疾病的研究提供了稳定的视网膜微血管内皮细胞系，真正做到省时、省力、高效、便利。

摘要： 本发明公开了一种脑微血管内皮细胞提取纯化方法，涉及细胞纯化的技术领域。其提取纯化方法，包括以下步骤：S1、粗提小鼠脑组织中的脑微血管内皮细胞；S2、对S1处理后的脑微血管内皮细胞混合物进行第一次CD31免疫磁珠分选以纯化；S3、对S2处理后的脑微血管内皮细胞进行第二次CD31免疫磁珠分选以纯化，即得纯化后的脑微血管内皮细胞。本申请采用CD31磁珠二次分选的方式，降低对脑微血管内皮细胞活性的损伤，分离纯化效率高，操作步骤相对简单，可以获得高纯度、高产量及高活性的脑微血管内皮细胞。

摘要： 本发明公开了A型肉毒毒素(BTXA)预处理真皮微血管内皮细胞拮抗再灌注的处理过程，利用手术过程中多余的皮肤组织，通过中性蛋白酶和胶原酶进行孵育消化，提取独立的真皮细胞，进行磁珠分选，以获得真皮微血管内皮细胞，进行细胞培养。通过传代培养将细胞分成八组：第一组置于低氧舱(通入低氧混合气体5％O2、5％CO2、90％N2)内8小时；第二组置于低氧舱8小时后，转入普通培养箱内复氧24小时；第三组到第八组分别加入含0.1U/mL，0.2U/mL，0.4U/mL，0.8U/mL，1.6U/mL，3.2U/mLBTXA的内皮细胞培养基培养12小时，然后将细胞置于低氧舱内8小时，随后在普通培养箱内复氧24小时。