间接酶联免疫吸附试验

摘要： 目的 基于Antigen 5(Ag5)建立一种具有较高灵敏度和特异度的检测囊型棘球蚴病(CE)的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)法。方法 构建pGEX-6p-2-Ag5表达载体,经表达及亲和纯化后的重组蛋白作为包被抗原,经过标准品血清的检测,确定其临界值。对184例CE患者按照感染时期,包囊数量、状态,是否接受药物及手术治疗分组,利用建立的iELISA法进行检测,并与商品化试剂盒方法比较。结果 当临界吸光值(A)比值为0.46时,该iELISA法具有最佳的灵敏度(91.6%)和特异度(96.3%)。处于过渡期(CE3a、CE3b)的CE患者血清中含有较高水平的特异性抗体。iELISA方法对于CE4和CE5期患者的阳性率分别为83.3%和63.0%,明显高于商品化试剂盒检测的阳性率(P<0.05);iELISA方法对于健康人血清的检测,阳性率为2.4%。另外,活性包囊、多包囊以及经过药物治疗的CE患者具有更高的阳性率。结论 该研究建立的iELISA法具有较高的灵敏度及特异度,为CE患者的临床诊断提供了一种有价值的检测手段。

摘要： 奶牛乳房炎是危害奶牛健康和影响奶业发展的重要而常见奶牛疾病,金黄色葡萄球菌(S.aureus)是引起奶牛乳房炎的重要病原菌,已经用S.aureus铁调节的表面决定簇B(IsdB)的免疫优势片段IsdB_(137-361)与其他抗原成分构建了预防S.aureus感染的奶牛乳房炎候选疫苗(命名为GIT)。为了检测该候选疫苗免疫奶牛后的IsdB_(137-361)相关抗原的血清抗体,用pGEX-6p-1表达的IsdB_(137-361)作抗原建立了牛血清抗体间接ELISA检测方法。通过对抗原包被浓度、血清稀释倍数和反应条件进行了优化,确定cut-off值检测了血清交叉反应性和敏感性。结果显示,在抗原使用浓度为2.5μg·mL^(-1)-1、血清1:1000倍稀释、cut-off值为0.45时,该方法具有良好的特异性和敏感性。表明,所建立的间接ELISA检测方法可用于IsdB_(137-361)相关抗原疫苗的免疫牛血清抗体检测。

摘要： 为了解2021年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体水平,以期为该病的科学防控提供参考,研究采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自4个地区12个规模化猪场382份猪血清进行PRRSV抗体检测。结果显示,PRRSV抗体平均阳性率为80.10%(306/382),高于国家规定标准(70.0%),S/P的平均值为(0.579±0.306),变异系数为82.98%;4个地区的PRRSV抗体平均阳性率均高于国家标准;75%(9/12)的养殖场PRRSV抗体阳性率达到国家标准,50%(6/12)的养殖场PRRSV抗体的变异系数较低。结果表明,新疆部分地区规模化猪场的PRRSV整体免疫效果较好,个别养殖场的PRRSV免疫效果较差,需要调整和完善现有的免疫程序,进一步加强PRRSV的免疫防控。

摘要： 目的 研究双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的临床价值.方法 选取2018年1月至2019年12月在血站无偿献血的486份标本为研究对象.收集无偿献血筛查标本并均实施间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法检查.观察间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法诊断抗-HCV结果,并以荧光定量聚合酶链式反应(PCR)血液筛查结果为金标准,计算间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法诊断抗-HCV特异度、敏感度及准确率.结果 经荧光定量PCR血液筛查,486份标本中抗HCV阳性标本19例,抗HCV阴性标本467例;间接ELISA法诊断抗HCV阳性、抗HCV阴性分别为96例、390例;双抗体夹心ELISA法诊断抗HCV阳性、抗HCV阴性分别为28例、458例;双抗体夹心ELISA法诊断抗-HCV敏感度(94.74％)、特异度(97.86％)、准确率(97.74％)高于间接ELISA法(63.16％、82.01％、81.28％),差异有统计学意义(P<0.05).结论 双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV敏感度、特异度及准确率较高,有利于提升抗HCV阳性检出率,降低由于生物学假阳性所致的血液报废及献血者流失,可作为血液样本抗-HCV筛查优选方法.

摘要： [背景]副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)是猪革拉瑟氏病(Glasser's Disease)的病原体,抗生素治疗和疫苗接种对于防控该病效果不明显,建立快速、准确的抗体检测方法尤为重要.[目的]利用表达纯化的HPS转铁结合蛋白A(TbpA)建立检测HPS抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.[方法]PCR扩增HPS的tbpA基因并与原核表达载体pET-SUMO连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒转入Escherichia coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定产物.以纯化的TbpA蛋白作包被抗原,通过各种反应条件优化,建立检测HPS抗体的间接ELISA方法,并进行临床应用与评价.[结果]该方法的最佳条件:包被抗原浓度为5 μg/mL,4°C过夜;5％脱脂奶粉于37°C封闭2 h;血清稀释度为1∶1 600,37°C孵育45 min;酶标二抗稀释度为1∶5 000,37°C作用30 min;显色时间为37°C5 min.该方法可特异性检测HPS抗体,阳性血清稀释至1∶12 800仍可检出,与其他猪病原阳性血清均无交叉反应,批内及批间变异系数均小于10％,与全菌体包被间接ELISA、商品化ELISA试剂盒及Western Blot比较,该方法总符合率分别为90.00％、86.67％和90.00％,其中阳性符合率分别为90.38％、88.46％和92.00％,阴性符合率分别为87.50％、75.00％和80.00％.该方法检测免疫抗体阳性率为80.00％,感染抗体阳性率为19.50％.[结论]基于TbpA蛋白建立的HPS抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性以及临床应用的可靠性,为HPS的免疫监测和流行病学调查提供了技术手段.

摘要： 目的 探讨神经精神性狼疮(NPSLE)患者血清中血小板反应蛋白-1(TSP-1)的表达及临床意义.方法 53例风湿疾病血液标本取自郑州大学第五附属医院风湿免疫科2016年1月至2020年1月住院患者,NPSLE组34例,SLE组19例,健康对照组17例,应用ELISA法检测血清中TSP-1表达水平.分析NPSLE组、SLE组与健康对照组TSP-1蛋白表达量的差异.分析TSP-1蛋白表达量与NPSLE患者血细胞计数、补体C3、补体C4、血沉、免疫球蛋白、系统性红斑狼疮疾病活动度评分(SLEDAI)等指标的相关性.结果 健康对照组血清中TSP-1的水平显著高于NPSLE组及SLE组(P<0.05),TSP-1在红细胞减少(P<0.05)、血红蛋白减少(P<0.05)、抗核小体抗体阳性(P<0.05)的NPSLE患者中表达显著下降,TSP-1与红细胞(r=0.456,P=0.007)、血红蛋白(r=0.468,P=0.005)、血小板(r=0.508,P=0.002)、补体C3(r=0.301,P=0.048)呈正相关.结论 TSP-1可能在NPSLE疾病过程中发挥免疫负调节作用,对NPSLE的诊断具有一定意义.

摘要： 为建立羊血清布鲁氏菌抗体的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)方法,以布鲁氏菌(B.suis)S2疫苗株的基因组为模板,通过引物设计、PCR扩增、原核载体构建、IPTG诱导,NTA树脂层析柱亲和层析法纯化重组布鲁氏菌外模蛋白16(OMP16),通过SDS-PAGE和Western blot鉴定分析,以纯化的OMP16作为包被抗原,优化反应条件,建立检测布鲁氏菌抗体的iELISA方法.结果显示,克隆了Omp16基因,表达、纯化了重组蛋白OMP16,该重组蛋白具有很好的反应原性.iELISA检测方法的最佳反应条件为:抗原包被浓度1μg/mL,血清稀释倍数为10倍,酶标二抗的稀释度为1:1000,TMB的反应时间为30 min.临床样本检测显示,建立的iELISA方法具有良好的灵敏度,与虎红平板凝集试验的符合率达到了93％.本研究建立的iELISA方法能够满足生产实践中布鲁氏菌病的检测,为布鲁氏菌病流行病学调查提供了技术支持.

摘要： 鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis,DVH)是一种具有高度接触性和高致死率的传染病,主要病原为鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A viral,DHAV).其特点是肝空泡增多、肝坏死和出血.幼雏鸭感染后的病死率可达95％以上.鸭甲型肝炎病毒可分为DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3共3种血清型,其中DHAV-1最广泛且毒性最强.为准确、高效、特异地鉴定DHAV,建立一系列检测方法.目前较为常用的是间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA).对DHAV-1的防治早期多使用灭活苗和弱毒苗,但是并未达到理想的免疫效果.近年来,很多研究集中于基因工程疫苗及中药的应用,对于防治DHAV-1具有很好的前景.

摘要： 目的 建立检测血清抗H2A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H2A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义.方法 RT-PCR扩增H2 A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H2 A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H2 A重组蛋白建立检测人血清中抗H2 A抗体的间接ELISA方法.用建立的间接ELISA方法检测50例RA患者和50例健康人对照组血清抗H2 A抗体水平.结果 表达的H2 A蛋白相对分子量约为15000,与预期大小相符,western blot结果表明组蛋白H2 A与抗H2 A抗体阳性血清具有良好的反应原性.经方法学评估,建立的ELISA法在特异性、可重复性方面均达到检测要求.RA组抗H2A抗体水平高于健康人对照组(P<0.01).当cut-off值设为0.494时,RA患者血清抗H2A抗体的阳性率为84％(42/50),明显高于健康人对照组20％(10/50),差异具有统计学意义(χ2=41.026,P<0.01).结论 成功建立了检测血清抗H2 A抗体的间接ELISA技术.RA患者血清中抗H2 A抗体水平明显高于健康人对照组.抗H2 A抗体在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义.

摘要： 目的建立检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H_(2)A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方法RT-PCR扩增H_(2)A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H_(2)A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H_(2)A重组蛋白建立检测人血清中抗H_(2)A抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测50例RA患者和50例健康人对照组血清抗H_(2)A抗体水平。结果表达的H_(2)A蛋白相对分子量约为15000,与预期大小相符,western blot结果表明组蛋白H_(2)A与抗H_(2)A抗体阳性血清具有良好的反应原性。经方法学评估,建立的ELISA法在特异性、可重复性方面均达到检测要求。RA组抗H_(2)A抗体水平高于健康人对照组(P<0.01)。当cut-off值设为0.494时,RA患者血清抗H_(2)A抗体的阳性率为84%(42/50),明显高于健康人对照组20%(10/50),差异具有统计学意义(χ^(2)=41.026,P<0.01)。结论成功建立了检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术。RA患者血清中抗H_(2)A抗体水平明显高于健康人对照组。抗H_(2)A抗体在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义。

摘要： 目的:以实验猕猴血清评价间接血凝试验(IndirectHaemagglutination Assay,IHA)和间接酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)。rn 方法:按照GB/T18448.2-2008所示方法,以弓形虫RH株制备虫体抗原,富集纯化后裂解包被,制备间接ELISA试剂;采集180份实验用猴血清,用IHA方法和赛润医用弓形虫抗体ELISA检测试剂盒作平行检测,比较阳性检出率与符合率,并对检测的结果进行统计分析。rn 结果:经平行检测180份实验用猕猴血清,IHA法、自制ELISA方法、赛润ELISA试剂盒阳性率分别为0%(0/180)、5%(9,180)和3.3%(6/180),IHA方法检验结果与自制ELISA方法的结果总符合率为95%;IHA方法检验结果与赛润ELISA方法的结果总符合率为96.7%：两种ELISA方法检验结果之间总符合率为98%。卡方检验显示：自制ELISA检出阳性率与IHA的实验结果有极显著差异(x2=7.29,P＜0.01)。自制ELISA与赛润ELISA试剂盒检验结果差异不显著(x2=1.19,P＞0.05),赛润ELISA试剂盒与IHA试剂盒的检验结果有显著差异(x2=4.24,0.01＜P＜0.0)。rn 结论:就实验用猕猴血清的弓形虫检测而言,间接酶联免疫吸附方法灵敏度和总符合性更高。

摘要： 通过应用猪瘟正向间接血凝法(IHA)，间接酶联免疫吸附试验以及阻断酶联免疫吸附试验对规模化养猪场65份猪血清进行猪瘟免疫抗体水平的检测，并对三种方法的检测结果进行分析和比较。结果表明：IHA试验合格数为34份，合格率为52.31%;间接ELISA合格数为29份，合格率为44.62%;阻断ELISA合格数为42份，合格率为64.62%.通过对以上三种检测方法结果的分析，显示IHA和间接ELISA的符合率为89.23%，具有较高的相关性。

摘要： 采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)，对贵州省4个地区6个规模化猪场240份血清进行猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪圆环病毒2型(PCV2)抗体水平检测。结果：CS-FV、PPV和PRV免疫抗体阳性率分别为64.2％、77.9％和59.2％;PRRSV、PCV2抗体阳性率分别为10.4％和32.5％。上述结果表明，猪细小病毒病、猪伪狂犬病和猪瘟免疫效果比较理想，但6个规模场存在PRRSV和PCV2混合感染，应引起各养殖场高度重视。

摘要： 目的：检测卵巢肿瘤患者血清中survivin、p53、p16、cyclinBl、cyclinDl和cyclinE六种肿瘤相关抗原(tumor-asSOCiatedantigens，TAAs)自身免疫抗体，评价TAAs微阵列对卵巢癌诊断及术后病情监测的价值。rn 方法：用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测55例原发卵巢上皮性癌、40例卵巢良性肿瘤及23例卵巢癌患者术后化疗期间39份血清中以上六种TAAs自身免疫抗体，流行病学方法分析结果。rn 结果：单独检测一种抗原抗体诊断卵巢癌时阳性率为9.1%-23.6%，survivin为最高，cyclinE为最低;随抗原联合种类增加阳性率亦有增加，六种TAAs微阵列联合检测灵敏度达到63.6%，特异度达到85.7%、阳性和阴性预测值及约登指数分别是87.5%、60.0%、0.4935;六种TAA微阵列检测阳性率与卵巢癌组织学类型和临床分期无明显相关(P>0.05);比较卵巢癌患者术前与术后化疗期间血清阳性率，术后化疗各组阳性率(0%-12.5%)较术前(65.2%)有明显降低(P<0.001)，并且阳性率变化与患者病情变化密切相关。rn 结论：联合六种肿瘤相关抗原微阵列检测血清中自身抗体能够提高卵巢癌的诊断敏感性，对卵巢癌诊断和术后病情监测可能具有重要参考价值。

摘要： 目的：NT-P-BSA-IgM-ELISA和NT-P-BSA-IgG-ELISA比较实验,评价其敏感性和特异性.方法：应用NT-P-BSA抗原检测80名麻风患者,80名正常对照,30份妊娠个体及结缔组织疾病、银屑病、结核患者各30份血清中的IgM和IgG类抗体水平.结果：麻风病人血清中IgM的含量高于IgG,且多菌型病人的抗体含量较高,而在少菌型病人的含量较低,且妊娠、银屑病、结核患者中的IgM和IgG均明显大于正常人.结论：麻风患者血清中存在抗NT-P-BSA的IgM和IgG的抗体,而多菌型病人敏感性较高,少菌型较低,且两者均存在与妊娠、银屑病、结核患者的交叉反应.

摘要： 目的：NT-P-BSA-IgM-ELISA和NT-P-BSA-IgG-ELISA比较实验,评价其敏感性和特异性.方法：应用NT-P-BSA抗原检测80名麻风患者,80名正常对照,30份妊娠个体及结缔组织疾病、银屑病、结核患者各30份血清中的IgM和IgG类抗体水平.结果：麻风病人血清中IgM的含量高于IgG,且多菌型病人的抗体含量较高,而在少菌型病人的含量较低,且妊娠、银屑病、结核患者中的IgM和IgG均明显大于正常人.结论：麻风患者血清中存在抗NT-P-BSA的IgM和IgG的抗体,而多菌型病人敏感性较高,少菌型较低,且两者均存在与妊娠、银屑病、结核患者的交叉反应.

摘要： 目的：NT-P-BSA-IgM-ELISA和NT-P-BSA-IgG-ELISA比较实验,评价其敏感性和特异性.方法：应用NT-P-BSA抗原检测80名麻风患者,80名正常对照,30份妊娠个体及结缔组织疾病、银屑病、结核患者各30份血清中的IgM和IgG类抗体水平.结果：麻风病人血清中IgM的含量高于IgG,且多菌型病人的抗体含量较高,而在少菌型病人的含量较低,且妊娠、银屑病、结核患者中的IgM和IgG均明显大于正常人.结论：麻风患者血清中存在抗NT-P-BSA的IgM和IgG的抗体,而多菌型病人敏感性较高,少菌型较低,且两者均存在与妊娠、银屑病、结核患者的交叉反应.

摘要： 目的：NT-P-BSA-IgM-ELISA和NT-P-BSA-IgG-ELISA比较实验,评价其敏感性和特异性.方法：应用NT-P-BSA抗原检测80名麻风患者,80名正常对照,30份妊娠个体及结缔组织疾病、银屑病、结核患者各30份血清中的IgM和IgG类抗体水平.结果：麻风病人血清中IgM的含量高于IgG,且多菌型病人的抗体含量较高,而在少菌型病人的含量较低,且妊娠、银屑病、结核患者中的IgM和IgG均明显大于正常人.结论：麻风患者血清中存在抗NT-P-BSA的IgM和IgG的抗体,而多菌型病人敏感性较高,少菌型较低,且两者均存在与妊娠、银屑病、结核患者的交叉反应.

摘要： 本研究通过生物信息学方法分析NDVxx08株基因组特征,选取HN蛋白主要抗原区设计引物,利用PCR技术扩增出HN片段主要抗原区(Ile175-Lys367),将该基因片段克隆于pMD 18-T-simple载体,构建重组克隆载体pMD-HnIleNLy.,鉴定并测序后构建HneNLys原核重组表达载体pET32-HneNLys,将其转化至Rosetta (DE3)表达菌株中,对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,以确定该蛋白最适表达条件,并通过SDS-PAGE和Western-blot对蛋白产物进行分析和抗原性进行鉴定.以最适诱导条件对HneNLys表达菌体进行诱导并收集上清,并通过Ni-NTA亲和树脂对目的蛋白进行纯化.利用纯化获得的HⅡeNLys、重组蛋白作为包被抗原，通过优化最适抗原包被浓度、待检血清最适稀释比例，建立NDV血清抗体效价的间接ELISA检测方法。利用本研究所建立的检测方法对40份NDV临床阳性血清、10份NDV临床阴性血清、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡禽流感病毒的标准阳性血清进行检测，并与血凝抑制实验(HI)结果进行比较，确定所建立检测方法的敏感性和特异性。实验结果表明，pET32-HⅡeNLys、表达菌体在28°C,IPTG 0.2mmol/L诱导4个小时获得高效表达，且通过SDS-PAGE和Western-blot分析，所获得HⅡeNLys重组蛋白分子量为38ku，并能够与鸡抗NDV高免血清发生特异性反应，具有良好的免疫学活性，能够作为包被抗原用于新城疫抗体效价检测。NDV血清抗体效价间接ELISA检测方法建立结果表明，HⅡeNLys重组蛋白作为包被抗原最适浓度为5μL/ml，检测血清最适稀释比例为1:20。以血凝抑制效价24为阳性判断标准，所建立方法对血清样本检测临界值为0.185。利用所建立的NDV血清抗体效价间接ELISA方法对40份NDV临床阳性血清和1O份NDv临床阴性血清进行检测，与血凝抑制实验(HI)比较其阳性符合率能达到88%,阴性符合率为100%，无假阳性检测结果，并与鸡传染性法氏囊病毒，鸡传染性支气管炎病毒，鸡禽流感病毒等标准阳性血清无交叉反应。本研究建立的检测新城疫抗体的间接ELISA方法具有简单、快速，特异性强等优点能够用于鸡新城疫抗体水平的快速检测。

摘要： 本研究通过生物信息学方法分析NDVxx08株基因组特征,选取HN蛋白主要抗原区设计引物,利用PCR技术扩增出HN片段主要抗原区(Ile175-Lys367),将该基因片段克隆于pMD 18-T-simple载体,构建重组克隆载体pMD-HnIleNLy.,鉴定并测序后构建HneNLys原核重组表达载体pET32-HneNLys,将其转化至Rosetta (DE3)表达菌株中,对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,以确定该蛋白最适表达条件,并通过SDS-PAGE和Western-blot对蛋白产物进行分析和抗原性进行鉴定.以最适诱导条件对HneNLys表达菌体进行诱导并收集上清,并通过Ni-NTA亲和树脂对目的蛋白进行纯化.利用纯化获得的HⅡeNLys、重组蛋白作为包被抗原，通过优化最适抗原包被浓度、待检血清最适稀释比例，建立NDV血清抗体效价的间接ELISA检测方法。利用本研究所建立的检测方法对40份NDV临床阳性血清、10份NDV临床阴性血清、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡禽流感病毒的标准阳性血清进行检测，并与血凝抑制实验(HI)结果进行比较，确定所建立检测方法的敏感性和特异性。实验结果表明，pET32-HⅡeNLys、表达菌体在28°C,IPTG 0.2mmol/L诱导4个小时获得高效表达，且通过SDS-PAGE和Western-blot分析，所获得HⅡeNLys重组蛋白分子量为38ku，并能够与鸡抗NDV高免血清发生特异性反应，具有良好的免疫学活性，能够作为包被抗原用于新城疫抗体效价检测。NDV血清抗体效价间接ELISA检测方法建立结果表明，HⅡeNLys重组蛋白作为包被抗原最适浓度为5μL/ml，检测血清最适稀释比例为1:20。以血凝抑制效价24为阳性判断标准，所建立方法对血清样本检测临界值为0.185。利用所建立的NDV血清抗体效价间接ELISA方法对40份NDV临床阳性血清和1O份NDv临床阴性血清进行检测，与血凝抑制实验(HI)比较其阳性符合率能达到88%,阴性符合率为100%，无假阳性检测结果，并与鸡传染性法氏囊病毒，鸡传染性支气管炎病毒，鸡禽流感病毒等标准阳性血清无交叉反应。本研究建立的检测新城疫抗体的间接ELISA方法具有简单、快速，特异性强等优点能够用于鸡新城疫抗体水平的快速检测。

摘要： 一种化学检测技术领域的基于免疫磁珠联合酶联免疫吸附试验检测伏马毒素的方法，通过制备伏马毒素-KLH偶联物和伏马毒素-OVA偶联物并将伏马毒素-KLH偶联物与免疫磁珠结合，制备成伏马毒素检测磁珠；再利用伏马毒素-KLH偶联物制备伏马毒素单克隆抗体，并与伏马毒素检测磁珠一并运用竞争ELISA方法进行伏马毒素分子检测，并通过磁性分离法获取伏马毒素检测磁珠，进行显色后通过酶标仪获得检测结果。本发明对低于检测极限的伏马毒素样品，通过免疫磁珠的富集作用以及磁珠在液体中充分扩散使得结合表面积扩大，从而能够间接改变检测极限，提高检测的灵敏度，避免漏检。

摘要： 牛羊布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒及其制备方法，属于人畜共患传染病病原体的检测领域，解决了现有采用其他抗原检测布鲁氏菌存在敏感性低、特异性差的问题，该试剂盒是以SUMO为表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达的重组布鲁氏菌BCSP31蛋白为抗原包被酶标板，加入待检血清、兔抗牛HRP-IgG或兔抗羊HRP-IgG，并配以洗涤缓冲液、封闭液、TMB底物溶液和终止液组装而成。本发明利用原核表达载体SUMO在大肠杆菌BL21中高效可溶地表达了布鲁氏菌BCSP31蛋白，用于布鲁氏菌ELISA检测方法的建立，检测的重复性、特异性较好，利用此方法可以快速有效的检测牛羊布鲁氏菌。

摘要： 本发明的目的在于提供一种满足我国动物防疫需求、快速、敏感、特异、稳定的布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验奶液抗体检测试剂盒。它是利用平滑型布氏杆菌与粗糙型布氏杆菌的纯化脂多糖混合物作抗原包被酶标板，用免疫健康牛制备阳性对照奶液，用健康非免疫牛制备阴性对照奶液，以酶标记的与哺乳动物Fc段结合的受体--蛋白质AG作酶标记结合物，配以稀释液、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B、H2O2、终止液，组装组成。本发明布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验奶液抗体检测试剂盒，建立适合布鲁氏菌病诊断和流行病学调查的快速、敏感、特异、准确的检验方法，满足我国动物防疫的需求。

摘要： 一种间接酶联免疫吸附试验检测马动脉炎病毒的方法，其操作程序是：分析马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白的抗原性，设计引物并克隆大囊膜糖蛋白的抗原域编码基因，构建大囊膜糖蛋白表达载体pET-GL1，将pET-GL1质粒转化BL-21宿主菌，高效表达大囊膜糖蛋白，纯化重组大囊膜糖蛋白作为检测抗原，建立了检测马动脉炎病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验。间接酶联免疫吸附试验与病毒中和试验、西班牙生产的马动脉炎病毒检测试剂盒(品牌：INGEZIM-ARTERITIS)的检测结果符合率分别达到94.1％、95.6％。间接酶联免疫吸附试验方法检测马动脉炎病毒，特异性好、灵敏度高，可提高检测效率，降低检测成本，具有很强的推广性和实用性。

摘要： 一种定量检测赤潮异弯藻的间接酶联免疫吸附试验方法，用于海洋生物技术领域。本发明以识别赤潮异弯藻的抗体为基础，首先以赤潮异弯藻标准样品和待检样品包被酶标板，37°C孵育后用脱脂奶粉溶液封闭，洗板后加入特异性抗赤潮异弯藻抗血清稀释溶液，37°C孵育后洗板，加入酶标二抗溶液，37°C孵育，洗板后加入酶反应底物，孵育后加入终止反应液终止反应；然后用酶标仪测定板上各孔的吸光值，经过数据转换后，得出赤潮异弯藻检测的标准曲线，其线形范围经过计算得出线性方程，对待测样品中的赤潮异弯藻进行定量。本发明可快速、简便的定量检测赤潮异弯藻，克服了赤潮异弯藻常规检测中的缺点。

摘要： 牛羊布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒及其制备方法，属于人畜共患传染病病原体的检测领域，解决了现有采用其他抗原检测布鲁氏菌存在敏感性低、特异性差的问题，该试剂盒是以SUMO为表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达的重组布鲁氏菌BCSP31蛋白为抗原包被酶标板，加入待检血清、兔抗牛HRP-IgG或兔抗羊HRP-IgG，并配以洗涤缓冲液、封闭液、TMB底物溶液和终止液组装而成。本发明利用原核表达载体SUMO在大肠杆菌BL21中高效可溶地表达了布鲁氏菌BCSP31蛋白，用于布鲁氏菌ELISA检测方法的建立，检测的重复性、特异性较好，利用此方法可以快速有效的检测牛羊布鲁氏菌。

摘要： 本发明的目的在于提供一种价格适中，反应时间短，与我国实际检测普查工作需求密切结合的布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒。它是利用平滑型布氏杆菌与粗糙型布氏杆菌的纯化脂多糖混合物作抗原包被酶标板，用S1119.3免疫健康牛制备阳性对照血清、标准弱阳性血清，用健康非免疫牛血清作阴性对照血清，以酶标记的与哺乳动物Fc段结合的受体--蛋白质AG作酶标记结合物，配以血清稀释液、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B、H2O2、终止液，组装组成。本发明建立适合布鲁氏菌病诊断和流行病学调查的快速、敏感、特异、准确的方法；结果判定客观、操作简便，既适合大规模筛选试验，又能用于布鲁氏菌病的最后的确诊诊断。

摘要： 本发明的目的在于提供一种满足我国动物防疫需求的、快速、敏感、特异、稳定的布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验奶液抗体检测试剂盒。它是利用平滑型布氏杆菌与粗糙型布氏杆菌的纯化脂多糖混合物作抗原包被酶标板，用免疫健康牛制备阳性对照奶液，用健康非免疫牛制备阴性对照奶液，以酶标记的与哺乳动物Fc段结合的受体——蛋白质AG作酶标记结合物，配以稀释液、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B、H2O2、终止液，组装组成。本发明布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附试验奶液抗体检测试剂盒，建立适合布鲁氏菌病诊断和流行病学调查的快速、敏感、特异、准确的检验方法，满足我国动物防疫的需求。

摘要： 一种间接酶联免疫吸附试验检测马动脉炎病毒的方法，其操作程序是：分析马动脉炎病毒GL蛋白的抗原性，设计引物并克隆GL蛋白的抗原域编码基因，构建GL蛋白表达载体pET－GL1，将pET－GL1质粒转化BL－21宿主菌，高效表达GL蛋白，纯化重组GL蛋白作为检测抗原，建立了检测马动脉炎病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(iGL1－ELISA)。iGL1－ELISA与病毒中和试验、西班牙INGEZIM－ARTERITIS试剂盒的检测结果符合率分别达到94.1％、95.6％。iGL1－ELISA方法检测马动脉炎病毒，特异性好、灵敏度高，可提高检测效率，降低检测成本，具有很强的推广性和实用性。

摘要： 一种定量检测赤潮异弯藻的间接酶联免疫吸附试验方法，用于海洋生物技术领域。本发明以识别赤潮异弯藻的抗体为基础，首先以赤潮异弯藻标准样品和待检样品包被酶标板，37°C孵育后用脱脂奶粉溶液封闭，洗板后加入特异性抗赤潮异弯藻抗血清稀释溶液，37°C孵育后洗板，加入酶标二抗溶液，37°C孵育，洗板后加入酶反应底物，孵育后加入终止反应液终止反应；然后用酶标仪测定板上各孔的吸光值，经过数据转换后，得出赤潮异弯藻检测的标准曲线，其线形范围经过计算得出线性方程，对待测样品中的赤潮异弯藻进行定量。本发明可快速、简便的定量检测赤潮异弯藻，克服了赤潮异弯藻常规检测中的缺点。