滑膜间充质干细胞

摘要： 目的探究高糖对大鼠滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cells,SMSCs)衰老的影响,为SMSCs应用于糖尿病患者骨关节炎的治疗提供风险评估依据。方法葡萄糖生理浓度(5.5 mmol/L)作为对照组,高糖(25 mmol/L)作为高糖组,检测大鼠SMSCs在高糖刺激下的衰老情况,包括细胞增殖活性,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)表达,衰老相关表型(SASP)IL6、MMP13、TNFα、CXCL1、IFNβ的mRNA表达,细胞内线粒体裂解情况,p21蛋白表达,以及透明质酸的分泌。结果本实验条件下,高糖刺激不影响大鼠SMSCs增殖(P=0.675),SA-β-gal染色阳性细胞增加,SMSCs胞内线粒体裂解增加,线粒体呈碎片化,衰老相关表型SASP的mRNA表达增加,MMP13(P=0.011),TNF、IL-6、INFβ(P=0.000),CXCL1(P=0.003),p21蛋白表达下降(P=0.00),透明质酸释放降低(P=0.002)。结论高糖使大鼠SMSCs进入衰老状态,损害其生物学功能,采用SMCSs治疗糖尿病患者骨关节炎其临床效果有待商榷。

摘要： 骨关节炎是老年群体中较为常见的关节疾病,可引起关节软骨损伤,具有一定的慢性致残风险。目前,该病的发病机制尚不明确,但随着临床研究的不断深入,滑膜细胞与该病的关联获得了大量证实,且不同类型滑膜细胞的作用机制也存在较大差异。为此,本文主要对为滑膜细胞与骨关节炎疾病的研究进展进行综述,以期为骨关节炎疾病的病理机制及治疗方案的探索提供更多的参考方向。

摘要： 背景:基于原位组织工程再生理念应用于半月板再生领域中的需要,可利用3D生物打印技术构建一种有效结合招募性生物活性因子和优良材料的支架。目的:优化负载有血小板衍生生长因子BB的聚己内酯/甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质3D生物打印支架制备流程,检测其生长因子缓释性能及对滑膜间充质干细胞迁移和增殖的作用。方法:利用甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质制备光敏性生物墨水,采用3D生物打印技术制备单纯聚己内酯支架及聚己内酯/甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质仿生支架,最终负载血小板衍生生长因子BB于生物墨水内构建聚己内酯/甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质/血小板衍生生长因子BB功能化支架,检测支架的力学性能与缓释性能。分离培养新西兰大白兔滑膜间充质干细胞,通过Transwell和CCK-8实验探究3种支架对滑膜间充质干细胞的迁移和增殖行为的影响,以单纯培养基培养的细胞为阴性对照。将第3代滑膜间充质干细胞分别接种于3种支架上,利用共聚焦显微镜和扫描电镜观察3种支架上细胞的活性、黏附和生长状态。结果与结论:①仿生支架的拉伸模量及压缩模量与单纯聚己内酯支架比较差异无显著性意义(P>0.05);②功能化支架具有良好的缓释性能,可持续释放血小板衍生生长因子BB长达28 d;③相对于阴性对照组,仿生支架及功能化支架可促进滑膜间充质干细胞的迁移,其中以功能化支架促迁移效果更显著;④相对于阴性对照组,仿生支架及功能化支架培养4,7 d的细胞增殖较快(P<0.001),其中功能化支架的促增殖作用更明显;⑤死活染色显示,各组细胞活性良好,且功能化支架上的细胞数量最高;⑥扫描电镜显示,细胞均附着于3组支架表面生长,其中仿生支架及功能化支架上的细胞黏附数量较多,并分泌大量细胞外基质;⑦结果表明,负载血小板衍生生长因子BB的3D生物打印半月板支架具有良好的力学性能和生物相容性,可促进滑膜间充质干细胞的迁移和增殖。

摘要： 背景:基于原位组织工程再生理念应用于半月板再生领域中的需要,可利用3D生物打印技术构建一种有效结合招募性生物活性因子和优良材料的支架.目的:优化负载有血小板衍生生长因子BB的聚己内酯/甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质3D生物打印支架制备流程,检测其生长因子缓释性能及对滑膜间充质干细胞迁移和增殖的作用.方法:利用甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质制备光敏性生物墨水,采用3D生物打印技术制备单纯聚己内酯支架及聚己内酯/甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质仿生支架,最终负载血小板衍生生长因子BB于生物墨水内构建聚己内酯/甲基丙烯酸酯化明胶/半月板细胞外基质/血小板衍生生长因子BB功能化支架,检测支架的力学性能与缓释性能.分离培养新西兰大白兔滑膜间充质干细胞,通过Transwell和CCK-8实验探究3种支架对滑膜间充质干细胞的迁移和增殖行为的影响,以单纯培养基培养的细胞为阴性对照.将第3代滑膜间充质干细胞分别接种于3种支架上,利用共聚焦显微镜和扫描电镜观察3种支架上细胞的活性、黏附和生长状态.结果与结论:①仿生支架的拉伸模量及压缩模量与单纯聚己内酯支架比较差异无显著性意义(P>0.05);②功能化支架具有良好的缓释性能,可持续释放血小板衍生生长因子BB长达28 d;③相对于阴性对照组,仿生支架及功能化支架可促进滑膜间充质干细胞的迁移,其中以功能化支架促迁移效果更显著;④相对于阴性对照组,仿生支架及功能化支架培养4,7 d的细胞增殖较快(P<0.001),其中功能化支架的促增殖作用更明显;⑤死活染色显示,各组细胞活性良好,且功能化支架上的细胞数量最高;⑥扫描电镜显示,细胞均附着于3组支架表面生长,其中仿生支架及功能化支架上的细胞黏附数量较多,并分泌大量细胞外基质;⑦结果表明,负载血小板衍生生长因子BB的3D生物打印半月板支架具有良好的力学性能和生物相容性,可促进滑膜间充质干细胞的迁移和增殖.

摘要： 目的:探讨滑膜间充质干细胞在创伤性颞下颌关节强直中的作用.方法:将12只绵羊随机分为2组,每组各6只;实验组和对照组均采用髁突截骨术造成实验动物右侧髁突矢状骨折,实验组保留滑膜组织,对照组术中同时去除部分滑膜组织.分别于术后4周,12周各处死3只动物,进行髁突大体形态学观察,组织病理学染色观察成骨细胞表达及免疫组织化学染色观察滑膜间充质干细胞表面标志物CD44,CD90,CD34,CD45的表达情况.结果:术后12周实验组髁突形态改变明显.组织病理学染色可见实验组成骨细胞表达明显增多.免疫组化结果显示实验组及对照组均可见滑膜间充质干细胞标志物CD44及CD90呈阳性表达,CD34及CD45呈阴性表达,且实验组CD44及CD90表达较对照组明显增加.结论:颞下颌关节骨折后,TMJ滑膜间充质干细胞定向迁移至骨断端之间,使骨折区成骨作用增强,致髁突形态明显改变.

摘要： 目的 使用Transwell小室将大鼠关节软骨细胞(ACC)和CD105阳性滑膜间充质干细胞(CD105+SMSC)进行间接共培养,研究共培养体系下CD105+SM SC成软骨分化的能力和伴随的炎症反应情况.方法 在体外分离培养大鼠SMSC,通过形态学观察和成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定.使用磁珠分选方法 (MACS)筛选出表面标记为CD105阳性的细胞,并用免疫荧光和流式细胞学方法 鉴定.体外分离培养大鼠ACC,用形态学观察及甲苯胺蓝染色鉴定.ACC按一定比例(4:1,2:1,1:1,1:2,1:4)与CD105+SM SC在T ransw ell小室中间接共培养,另设单独培养的CD105+SMSC作阴性对照,CD105+SMSC+成软骨诱导培养液(chondrogenic culture medium,CCM)作阳性对照.在培养的第14天提取各组CD105+SMSC总RNA,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测二型胶原(Col2A1),蛋白聚糖(aggrecan)、性别决定区Y框蛋白9(SOX-9)、转化生长因子-β3(TGF-β3)等相应的成软骨指标表达,检测聚蛋白多糖酶-5(ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Runt相关转录因子-2(RUNX-2)等炎症指标的表达.结果 分离培养后的SMSC可进行成骨、成脂、成软骨三系分化.MACS分选后可见免疫荧光和流式细胞学鉴定均提示CD105阳性.与软骨细胞间接共培养14 d后,Real-time PCR检测结果 示,与阴性对照组相比,2:1和1:1实验组的各成软骨指标较阴性对照组上升,ADAMTS-5和RUNX-2炎症指标无明显改变,MMP-3和M M P-13指标显著下降.结论 与ACC间接共培养可以促进CD105+SM SC向成软骨方向分化,并能够在一定程度上降低其分化过程中的炎症反应.

摘要： 目的探讨细胞外基质因子诱导血管化组织工程膜修复兔膝关节半月板损伤的潜能及可行性。方法采用胶原酶消化法分别原代培养获得兔滑膜间充质干细胞与血管内皮细胞,联合小肠黏膜下层(SIS)支架材料三维条件下诱导血管化培养成人工半月板组织材料。选取20只健康体质新西兰大白兔为研究对象(80个半月板),作膝关节半月板损伤造模后随机分为4组(A组、B组、C组、D组),A组植入血管化培养后的人工半月板组织,B组植入未血管化培养滑膜间充质干细胞-内皮细胞-小肠黏膜下层复合材料,C组仅植入小肠黏膜下层支架材料,D组则为自发修复空白对照。分别于术后4周、8周、12周、16周处死大白兔取半月板材料为标本(每次5只),采用大体形态学观察、生物力学及阿尔新蓝比色法检测糖胺多糖(GAG)含量作为评估指标评价半月板损伤修复情况。结果大体及形态学观察结果显示A组半再生组织类似半月板组织,且随着日期的增长越类似。生物力学结果显示各阶段A组再生组织弹性模量明显大于其他各组,A组与其他各组之间的差异比较有统计学意义(P<0.05)。阿尔新蓝比色法GAG含量测定结果显示A组均明显高于其他各组,且随着时间延长而增加,两者之间的差异比较有统计学意义(P<0.05)。结论以小肠黏膜下层为支架材料,以滑膜间充质干细胞和内皮细胞为种子细胞,经体外扩增及细胞因子刺激血管化培养后的再生组织,植入兔关节腔内修复半月板局部缺损的方法,是一种较为可行的修复半月板损伤的方法。

摘要： Objective To isolate, culture and expand SD rat synovial mesenchymal stem cells in vitro and identify their potential multilineage differentiation. Methods Traumatic osteoarthritis models were made in SD rats. Synovial tissue was collected under aseptic conditions. The synovial tissue was digested with type I collagenase to isolate synovial mesenchymal stem cells. Cells were purified by limiting dilution of the monoclonal culture and expanded in vitro. After the third passage of culture, growth curve determination, adipogenesis induction, osteoinduction and chondrogenesis induction were performed. Real-time qPCR and Western blot were used to detect the expression of proteoglycan and type Ⅱ collagen after chondrogenic differentiation. Results In the present study, rat synovial mesenchymal stem cells exhibited a homogeneous, fibroblast-like, spindle-shaped morphology after passage in vitro. Synovial mesenchymal stem cells were subjected to adipogenesis induction, osteoinduction and chondrogenesis induction and being identified. Under the influence of inflammatory factors, mRNA of type Ⅱ collagen and proteoglycans was positively expressed in differentiated cells induced by chondrocytes using real-time qPCR and Western blot. Conclusion Rat-derived synovial mesenchymal stem cells still have good chondrogenic potential in inflammatory environment.%目的 体外分离培养及扩增SD大鼠滑膜间充质干细胞, 鉴定其多向分化潜能.方法 制作SD大鼠创伤性骨关节炎模型, 无菌条件下获取炎性的滑膜组织, Ⅰ型胶原酶消化法分离滑膜间充质干细胞, 有限稀释单克隆培养法纯化.体外扩增培养至第3代后, 进行生长曲线测定、成脂诱导、成骨诱导和成软骨诱导, Real-time qPCR和Western Blot检测成软骨分化后蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达含量.结果 分离纯化培养大鼠滑膜来源的间充质干细胞, 在体外传代后表现出均匀的成纤维细胞样的纺锤形形态.将滑膜间充质干细胞进行成脂诱导、成骨诱导和成软骨诱导并加以鉴定.在炎性因子的作用下, 用Real-time qPCR和Western Blot检测成软骨诱导分化后细胞中Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA呈阳性表达.结论 在炎性环境中大鼠来源的滑膜间充质干细胞具有良好的成软骨能力.

摘要： 目的:比较骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞3种间充质干细胞的成软骨分化潜能,为软骨组织工程中种子细胞的选择提供实验依据.方法:采用贴壁法分别分离提取兔骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞3种间充质干细胞,并进行传代培养,绘制3种间充质干细胞的生长曲线并比较其倍增时间.将3种间充质干细胞成软骨诱导14d后,行甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组化染色以观测3种细胞成软骨分化能力.结果:脂肪间充质干细胞的倍增时间短于骨髓间充质干细胞,滑膜间充质干细胞的倍增时间最短;3种细胞成软骨诱导14 d后均产生糖胺聚糖和Ⅱ型胶原,且组与组之间Ⅱ型胶原表达水平的差异有统计学意义,骨髓间充质干细胞组高于脂肪间充质干细胞组(P＜0.01),滑膜间充质干细胞组高于骨髓间充质干细胞组(P＜0.01).结论:在一定的培养条件下,3种间充质干细胞均有一定的成软骨细胞分化潜能,滑膜间充质干细胞最快的增殖速度及最强的成软骨分化潜能.

摘要： 目的:利用体外分离培养兔滑膜间充质干细胞,探讨其在体外多向分化潜能。研究表明，兔膝关节滑膜组织可分离获取SMSCs，兔SMSCs在体外具有向成软骨、成骨、成脂多向分化的潜能，SMSCs与自制的生物衍生骨支架材料有较好的相容性。有望成为组织工程理想的种子细胞来源，在骨和软骨的再生修复中发挥重要作用。

摘要： 本发明涉及从脐带血中分离和培养间充质干细胞/祖细胞的方法，还涉及将脐带血来源的间充质干细胞/祖细胞分化成各种间充质组织的方法。所述方法包括如下步骤：将脐带血覆盖在Ficoll-Hypaque溶液上；将Ficoll-Hypaque溶液上的脐带血离心，获得单核细胞层；使通过单核细胞单层培养获得的细胞与针对间充质干细胞/祖细胞特异性抗原的抗体反应预定的孵育期；使用细胞分选仪仅分离与其相应抗体相结合的细胞；将分离的细胞培养，从而获得具有高纯度和极好生存能力的间充质干细胞/祖细胞。本发明的间充质干细胞/祖细胞能够分化成包括软骨细胞和成骨细胞在内的各种间充质组织。因此，根据本发明的细胞分离和培养方法能够实现间充质干细胞/祖细胞的大规模生产，本发明获得的细胞在受损间充质组织的再生和治疗上是有用的。

摘要： 本发明提供一种新型可增进骨髓间充质干细胞(Bone‑marrow‑derived mesenchymal stem cells,BM‑MSCs)干细胞性和增殖效率的糖类化合物以及其联合无血清培养基的扩增培养方法。本发明提供的糖类化合物为植物血凝素(Phytohemagglutinin，PHA)。将继代培养的BM‑MSCs(BGJb+15％FCS)培养于添加PHA的培养基PHA+BGJb+15％FCS中，以增进BM‑MSCs的干细胞性，再将PHA+BGJb+15％FCS中培养的BM‑MSCs经过消化后转入PHA+无血清ZEzh培养基中短期培养，以增进BM‑MSCs扩增效率和临床疗效，从数量和质量上均可达到临床要求。

摘要： 本发明涉及一种用于直接分化胚胎干细胞来源间充质干细胞的培养基、用其制备间充质干细胞的方法、由此制备的间充质干细胞以及包括其的细胞治疗剂，根据一方面的培养基组合物和方法，不仅可以在短时间内以高产率制备间充质干细胞，而且由于没有胚状体形状的步骤，因此制备工艺简单，并且可以获得具有均质性的细胞，从而具有可以在比现有方法更短的时间内提供细胞治疗剂的效果。

摘要： 本发明的目的在于，提供包含治疗效果好的MSC的细胞制剂。提供一种活化的MSC的制造方法，包括使用具有由纤维构成的三维结构的细胞培养载体在含有哺乳动物胎儿附属物来源的活化剂的培养基中培养MSC的工序。此外，还提供选自由p16

摘要： 本发明涉及评估间充质干细胞(MSC)群体的伤口愈合效力的方法。此外，本发明涉及选择用于在cGMP条件下产生干细胞群体的MSC的方法，选择用于产生用于后续药物施用的干细胞群体的MSC群体的方法。此外，本发明涉及选择用于生成主细胞库的MSC群体的方法，以及鉴定适合作为用于产生用于药物用途的MSC群体的起始材料的组织的方法。所述方法包括测定培养基中由MSC分泌至培养基中的选自血管生成素1(Ang‑1)、转化生长因子β(TGF‑β)、血管内皮生长因子(VEGF)和肝细胞生长因子(HGF)的至少两种蛋白质的水平。

摘要： 本发明的目的在于，提供一种对各种疾病发挥优异的治疗效果的新的间充质干细胞及含有该间充质干细胞的新的药物组合物、以及它们的制备方法。本发明为一种ROR1阳性的间充质干细胞。上述ROR1阳性的间充质干细胞优选为CD29、CD73、CD90、CD105及CD166阳性，优选源自脐带或脂肪。

摘要： 本发明涉及从脐带血中分离和培养间充质干细胞/祖细胞的方法，还涉及将脐带血来源的间充质干细胞/祖细胞分化成各种间充质组织的方法。所述方法包括如下步骤：将脐带血覆盖在Ficoll－Hypaque溶液上；将Ficoll－Hypaque溶液上的脐带血离心，获得单核细胞层；使通过单核细胞单层培养获得的细胞与针对间充质干细胞/祖细胞特异性抗原的抗体反应预定的孵育期；使用细胞分选仪仅分离与其相应抗体相结合的细胞；将分离的细胞培养，从而获得具有高纯度和极好生存能力的间充质干细胞/祖细胞。本发明的间充质干细胞/祖细胞能够分化成包括软骨细胞和成骨细胞在内的各种间充质组织。因此，根据本发明的细胞分离和培养方法能够实现间充质干细胞/祖细胞的大规模生产，本发明获得的细胞在受损间充质组织的再生和治疗上是有用的。

摘要： 本发明公开了一种免疫调节功能增强型脐带间充质干细胞、干细胞制剂及脐带间充质干细胞的制备方法。本申请通过分离脐带组织，将获得的间充质干细胞种子细胞进行细胞因子分泌水平的检测，对符合要求的种子细胞给与添加了炎性因子组合的特定培养基进行传代培养，从而获得免疫调节功能增强型脐带间充质干细胞。上述制备方法制得的间充质干细胞强化了其免疫调节功能，对免疫调节功能紊乱人群及自身免疫性疾病的治疗更具有针对性。

摘要： 本发明涉及一种从人多能干细胞制备间充质干细胞的方法，更具体地说，涉及一种制备间充质干细胞的方法，其中在无异种和无血清的环境中制备从一定大小的拟胚体分化的间充质干细胞，由此所述间充质干细胞表现出更高的安全性并长期保持其自身特性。根据本发明的从人多能干细胞制备间充质干细胞的方法采用无滋养细胞、无异种、无血清的培养环境，以解决外来动物源性材料的污染问题，并允许制备高度安全的间充质干细胞。此外，该方法利用球状拟胚体形成形状和大小均匀的成熟拟胚体，从而提高了对间充质干细胞的分化效率，并且即使在长期传代培养(例如20次或更多次传代)后仍表现出稳定保持间充质干细胞特性的优异效果，通过该传代可大量制备人多能干细胞来源的间充质干细胞。因此，本发明有利于将安全性和效率极佳的细胞治疗剂商业化。

摘要： 本发明提供一种新型可增进骨髓间充质干细胞(Bone‑marrow‑derived mesenchymal stem cells,BM‑MSCs)干细胞性和增殖效率的糖类化合物以及其联合无血清培养基的扩增培养方法。本发明提供的糖类化合物为植物血凝素(Phytohemagglutinin，PHA)。将继代培养的BM‑MSCs(BGJb+15％FCS)培养于添加PHA的培养基PHA+BGJb+15％FCS中，以增进BM‑MSCs的干细胞性，再将PHA+BGJb+15％FCS中培养的BM‑MSCs经过消化后转入PHA+无血清ZEzh培养基中短期培养，以增进BM‑MSCs扩增效率和临床疗效，从数量和质量上均可达到临床要求。