滑膜成纤维细胞

摘要： 背景:1,25(OH)2D3缺乏会加剧骨关节炎.前期研究显示,1,25(OH)2D3调控关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡,但是其对滑膜成纤维细胞中炎症小体信号通路的调控作用尚不明确.目的:明确含NOD样受体家族Pyrin域蛋白3(pyrin domain containing protein 3,NLRP3)通路分子在滑膜成纤维细胞中的表达水平,探讨1,25(OH)2D3调控NLRP3信号通路的作用及具体机制.方法:通过对临床收集的关节炎和非关节炎患者滑膜组织进行原代细胞培养,检测NLRP3、Caspase招募域和半胱天冬氨酸蛋白酶1等分子的蛋白及mRNA表达水平,体外1,25(OH)2D3刺激原代细胞24 h后,检测上述指标的蛋白表达水平,并通过染色质免疫共沉淀技术检测NLRP3启动子区域的H3K4me3、H2AK119Ub、H3K27me3等组蛋白修饰水平.利用小干扰技术敲低细胞内维生素D受体的表达水平,体外1,25(OH)2D3刺激原代细胞24 h后,检测NLRP3、半胱天冬氨酸蛋白酶招募域和半胱天冬氨酸蛋白酶1等分子的蛋白表达水平.结果 与结论:①NLRP3信号通路相关分子(NLRP3、半胱天冬氨酸蛋白酶招募域和半胱天冬氨酸蛋白酶1)在关节炎滑膜细胞中过表达,NLRP3在骨关节炎患者滑膜成纤维细胞内转录水平明显较健康人组增高,差异有显著性意义(P<0.05);②与对照组相比,体外1,25(OH)2D3可以明显抑制关节炎患者滑膜细胞中NLRP3转录表达及NLRP3信号通路活化,差异有显著性意义(P<0.05);③敲低维生素D受体可减弱1,25(OH)2D3对NLRP3转录的抑制作用,并减弱其抑制NLRP3信号通路活化的作用,提示1,25(OH)2D3对NLRP3的作用主要依赖于维生素D受体;④1,25(OH)2D3抑制NLRP3转录表达主要是通过提高NLRP3启动子区域H3K27me3和H2AK119Ub水平,抑制H3K4me3水平.

摘要： 目的探讨丹酚酸B对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的丹酚酸B(0、1、10、20、30、40和50μmol/L)处理人RA滑膜成纤维细胞MH7A,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,筛选丹酚酸B的最适作用浓度。取MH7A细胞,设置对照组(正常培养)、丹酚酸B组(加入丹酚酸B培养)与丹酚酸B+3-MA组(加入丹酚酸B和5 mmol/L自噬抑制剂3-MA共培养)。采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况;qRT-PCR检测caspase-3 mRNA相对表达水平;Western blotting检测caspase-3、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白相对表达水平。结果与0μmol/L丹酚酸B组比较,30、40和50μmol/L丹酚酸B处理的MH7A细胞增殖率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),据此选择50μmol/L丹酚酸B进行后续实验。与对照组比较,丹酚酸B组细胞增殖率、p62蛋白相对表达水平明显降低,细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05);与丹酚酸B组比较,丹酚酸B+3-MA组细胞增殖率(63.47%±1.94%vs.51.33%±4.67%)、p62蛋白相对表达水平(0.97±0.06 vs.0.20±0.02)明显升高,细胞凋亡率(21.4%±1.8%vs.30.4%±0.6%)、caspase-3 mRNA(0.83±0.06 vs.1.27±0.15)和蛋白(0.64±0.05 vs.1.10±0.09)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.29±0.07 vs.1.23±0.21)、Beclin-1(0.36±0.05 vs.1.05±0.08)蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。结论丹酚酸B可能通过诱导自噬抑制人RA滑膜成纤维细胞的增殖并促进其凋亡。

摘要： 目的探讨瑞香素(daphnetin,DAP)对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)的作用及其与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)PERK/ATF4/CHOP信号通路的关系。方法RA-FLS细胞培养,免疫荧光法检查波形蛋白(vimentin)和CD68对细胞进行鉴定;CCK-8检测(0、5、10、20、30、40、50、60、70)mg·L^(-1) DAP对RA-FLS细胞增殖活性的影响,根据增殖活性将实验分为空白组(Blank)、低剂量组(L-DAP)、中剂量组(M-DAP)、高剂量组(H-DAP)以及高剂量+抑制剂4-PBA组(H-DAP+4-PBA);ELISA检测TNF-α、IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中与内质网应激相关蛋白GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP、Caspase-12、C-caspase-12、Bcl-2表达。结果CCK-8结果显示,与0 mg·L^(-1) DAP组比较,20~70 mg·L^(-1) DAP中各组增殖活性均差异具有显著性(P<0.05),组间比较后0、20、40、60 mg·L^(-1) DAP对应的细胞增殖率差异具有统计学意义(P<0.05),以此浓度分别作为空白、低剂量、中剂量、高剂量组以及高剂量+4-PBA实验分组依据;DAP可成浓度依耐性抑制RA-FLS细胞炎症因子IL-6、TNF-α释放,减弱细胞侵袭能力,促进细胞凋亡,上调PERK、p-PERK、ATF4、GRP78、CHOP及Caspase-12及C-caspase-12蛋白表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平。另一组实验证明,高剂量DAP+4-PBA可上调IL-6、TNF-α表达以及细胞侵袭,抑制细胞凋亡及ERS相关蛋白表达。结论DAP可通过激活PERK/ATF4/CHOP信号通路调节相关炎症因子分泌,抑制RA-FLS细胞增殖及侵袭,诱导细胞凋亡,有望成为治疗RA的潜在途径。

摘要： 目的探究秦息痛对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法以类风湿关节炎滑膜成纤维细胞株MH7A为研究对象,根据秦息痛干预剂量不同将细胞分为对照组、低剂量组(QXT-20组)、中剂量组(QXT-50组)及高剂量组(QXT-100组)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,Western blotting检测细胞外调节蛋白激酶(Erk)蛋白及磷酸化Erk蛋白(p-Erk)的表达水平。结果CCK-8结果显示秦息痛可以抑制MH7A细胞增殖,与对照组相比,干预1、2、3、4、5 d后,QXT-50组和QXT-100组MH7A细胞增殖能力显著降低,且QXT-100组干预3、4、5 d的MH7A细胞增殖能力显著低于QXT-50组(P<0.01)。流式细胞术结果显示秦息痛可促进MH7A细胞凋亡,与对照组比较,QXT-50组和QXT-100组的MH7A细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。Transwell检测结果显示秦息痛可抑制MH7A细胞迁移及侵袭,与对照组比较,QXT-50组和QXT-100组抑制MH7A细胞迁移及侵袭能力显著增高(P<0.01)。Western blotting实验结果显示秦息痛可降低p-Erk1/2表达水平,与对照组比较,QXT-50组和QXT-100组的p-Erk1/2蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论秦息痛可通过调节Erk信号通路抑制RA-SFs增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡,这为秦息痛的临床应用提供了科学的基础依据。

摘要： 目的探讨微RNA-27a-3p(miR-27a-3p)调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、侵袭的分子机制。方法体外分离培养正常滑膜成纤维细胞(SFs)和RASFs。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-27a-3p表达;预测miR-27a-3p可能结合的潜在靶基因,并通过荧光素酶报告试验进行验证;通过Lipofectamine 2000将miR-27a-3p抑制剂转染入RASFs;分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)、Transwell检测miR-27a-3p和靶基因对RASFs增殖、侵袭的影响。结果与SFs比较,miR-27a-3p在RASFs中过表达,miR-27a-3p可通过作用于分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)的3′非翻译区抑制其表达;SFRP1在RASFs中弱表达,抑制miR-27a-3p表达后,SFRP1表达增加,细胞增殖和侵袭能力明显减弱(P<0.05)。同时抑制SFRP1后,增殖和侵袭能力明显恢复(P<0.05)。结论miR-27a-3p可促进RASFs的增殖与侵袭能力,对类风湿关节炎的发生起着重要作用,其机制可能是通过抑制SFRP1的表达实现的。

摘要： 目的:探讨lncRNA LINC01419对小儿类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:取2017年1月至2019年12月本院21例小儿类风湿关节炎患者的滑膜组织及21例因骨折式创伤截肢者的膝关节正常滑膜组织;分离培养小儿类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs),将其分为si-NC组、si-LINC01419组、pcDNA组、pcDNALINC01419组、miR-NC组、miR-320a组、si-LINC01419+anti-miR-NC组、si-LINC01419+anti-miR-320a组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC01419和miR-320a的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;荧光素酶报告实验检测LINC01419和miR-320a的靶向关系。结果:与正常滑膜组织相比,小儿类风湿关节炎患者滑膜组织中LINC01419表达水平升高,miR-320a表达水平降低(P<0.05)。抑制LINC01419表达或过表达miR-320a,细胞活性降低,迁移和侵袭细胞数降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高(P<0.05)。LINC01419靶向调控miR-320a的表达,干扰miR-320a表达逆转了抑制LINC01419表达对小儿类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制LINC01419表达可能通过靶向上调miR-320a抑制小儿类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭。

摘要： 目的探讨微小RNA-18a-5p(miR-18a-5p)对类风湿关节炎成纤维细胞(SFs)样滑膜细胞迁移、侵袭及炎症反应的影响及其作用机制。方法体外培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A,分为miR-18a-5p组、miR-NC组、si-PSORS1C1组、si-NC组、miR-18a-5p+pcDNA3.1-PSORS1C1组、miR-18a-5p+pcDNA3.1组。qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-18a-5p表达;分别采用Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭的情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-18a-5p与PSORS1C1的靶向关系;Western印迹检测PSORS1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、钙黏附蛋白-E(E-cadherin)蛋白表达;测定细胞上清液中白细胞介素(IL)-1、IL-2水平。结果miR-18a-5p在MH7A细胞中的表达水平显著降低(P<0.05),miR-18a-5p过表达可明显抑制MH7A细胞迁移及侵袭能力,IL-1水平与MMP-2表达水平显著降低(P<0.05),而IL-2水平与E-cadherin表达水平均显著升高(P<0.05);miR-18a-5p可靶向结合PSORS1C1;抑制PSORS1C1表达后,与si-NC组相比,MH7A细胞迁移及侵袭能力显著降低(P<0.05),IL-1水平与MMP-2表达水平显著降低(P<0.05),而IL-2水平与E-cadherin表达水平显著升高(P<0.05);过表达PSORS1C1可逆转miR-18a-5p对MH7A细胞迁移、侵袭及炎症因子的作用。结论miR-18a-5p过表达通过抑制PSORS1C1表达而减弱SFs样滑膜细胞迁移、侵袭能力,并可减轻炎症反应。

摘要： 目的探究microRNA-126(miR-126)通过靶向Dickkopf-1(DKK1)参与类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、侵袭、凋亡的机制研究。方法选取2018年6月—2019年9月在武汉市第一医院就诊的25例类风湿性关节炎(RA)患者的滑膜组织(RA组),同时收集在该院同期接受膝关节十字韧带断裂重建手术的21例非类风湿关节炎患者的滑膜组织作为健康组,检测其miR-126和DKK1蛋白。利用RA组织构建原代RASFs,通过双萤光素酶报告验证miR-126与DKK1的靶向关系。将RASFs分为对照组、miR-126组、DKK1组、miR-126+DKK1组。采用CCK-8、Transwell及流式细胞术检测过表达miR-126和/或DKK1对RASFs增殖、侵袭和凋亡的影响。结果RA组滑膜组织miR-126相对表达量低于健康组(P<0.05),而DKK1蛋白相对表达量高于健康组(P<0.05)。miR-126 mimic与DKK1 Wt共转染后的相对萤光素酶活性低于miR-126 NC质粒与DKK1 Wt共转染(P<0.05),证明miR-126与DKK1靶向结合。miR-126组RASFs增殖力和侵袭细胞数低于对照组(P<0.05),而凋亡率高于对照组(P<0.05)。DKK1组RASFs增殖力和侵袭细胞数高于对照组(P<0.05),而凋亡率低于对照组(P<0.05)。miR-126+DKK1组增殖力和侵袭细胞数高于miR-126组(P<0.05),而低于DKK1组(P<0.05);miR-126+DKK1组凋亡率低于miR-126组(P<0.05),而高于DKK1组(P<0.05)。结论miR-126在RA滑膜组织中低表达,miR-126可通过靶向DKK1抑制RASFs增殖、侵袭及凋亡。

摘要： 目的探讨瑞香素(DAP)对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡的影响及其与内质网应激(ERS)的关系。方法取对数增长期人RA-FLS细胞,分别用0、10、20、30、40、50、60及70 mg/L DAP处理24 h,采用细胞增殖计数试剂盒(CCK-8)检测RA-FLS细胞存活率;选择0、20、40及60 mg/L DAP处理RA-FLS细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用细胞免疫荧光方法检测0和20 mg/L DAP组RA-FLS中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酰化-PERK(p-PERK)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)蛋白表达;采用Western blot方法检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、激活转录因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与0 mg/L DAP组相比,人RA-FLS细胞增殖活性随DAP浓度增加而降低(P<0.05),细胞凋亡率随DAP浓度增加而增大(P<0.05);20 mg/L DAP组人RA-FLS细胞中PERK、GRP78及Caspase-12荧光强度高于0 mg/L DAP组;与0 mg/L DAP组比较,20、40及60 mg/L DAP组人RA-FLS细胞PERK、p-PERK、GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表达均增加(P<0.05),但Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论DAP可抑制人RA-FLS细胞增殖并促进细胞凋亡发生,其机制可能与ERS的激活有关。

摘要： 目的探讨R406(free base)对人类风湿关节炎关节滑膜成纤维细胞(RASFs)炎性因子分泌的抑制及生物学功能(侵袭、迁移和凋亡)的调节作用,观察R406对关节炎小鼠关节炎症的缓解作用。方法取3~7代生长的RASFs,分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组分别用1、10、50、100 ng/mL R406和10 ng/mL IL-1β干预,阴性对照组加入DMSO,阳性对照组加入DMSO和10 ng/mL IL-1β干预。干预24 h,采用qRT-PCR法检测各组炎性因子IL-6、IL-8、CCL2 mRNA。选择最适浓度(50 ng/mL)的R406作用于RASFs(实验组)不同时间(6、12、24、48 h),阴性对照组及阳性对照组处理方法同上,采用qRT-PCR检测各组IL-6、IL-8、CCL2 mRNA,ELISA法检测各组IL-6、IL-8、CCL2蛋白,Trans Well检测各组RASFs的侵袭能力;划痕法检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率。建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)模型鼠,将18只8周龄的DBA 1/J小鼠平均分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组诱发CIA后腹腔注射R406,200 mg/kg,每两天注射1次;阴性对照组不诱发CIA;阳性对照组诱发CIA后腹腔注射等量DMSO,每两天注射1次。R406治疗30 d后,ELISA法检测各组小鼠血清中炎性因子IL-6、IL-8、IL-1α、COMP。结果与阳性对照组比较,实验组中不同剂量R406作用后RASFs中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2 mRNA表达被抑制,且在50 ng/mL时抑制效果最为显著(P均<0.01)。与阳性对照组比较,实验组中50 ng/mL R406作用于RASFs不同时间,细胞中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2蛋白的表达均被抑制,且在24 h抑制效果最显著(P均<0.01);与阳性对照组比较,实验组RASFs上清液中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2水平降低(P均<0.01)。与阳性对照组比较,实验组RASFs侵袭和迁移数均降低,凋亡率增加(P均<0.05)。与阳性对照组比较,实验组小鼠血清中炎性因子IL-6、IL-8、IL-1α、COMP水平降低(P均<0.01)。结论R406可以抑制RASFs中炎性因子的分泌,调节RASFs侵袭、迁移、凋亡能力,对CIA模型鼠关节炎症具有抑制作用。

摘要： 目的：探讨三水白虎汤(SSBH)含药血清抑制类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)迁移的临床研究. 方法：利用组织块培养法来收集类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞,并进行体外传代培养,将大老鼠随机分为对照组与研究组,然后选取3-6代细胞分别加入对照组(生理盐水制备的血清培养)与研究组(三水白虎汤(SSBH)含药血清培养),在培养72h后,提取细胞总蛋白,通过2-DE(双向凝胶电泳)将细胞总蛋白进行分离,利用凝胶经银染显色与图像数据来识别差异细胞蛋白的位点,随后对差异细胞蛋白的位点进行鉴别. 结果：两组滑膜成纤维细胞蛋白的双向凝胶电泳图谱都出现差异细胞蛋白质点,在差异蛋白表达量超过3倍的中蛋白质点中选择26个差异细胞蛋白质点实施质谱分析,总共鉴定出24种上升的IL-1受体拮抗蛋白. 结论：三水白虎汤可以通过类风湿关节炎患者FLS中的IL-1受体拮抗蛋白来抑制滑膜增生,同时也是治疗类风湿关节炎的一种药理机制.

摘要： 研究背景与目的:类风湿关节炎(RA)是一种以慢性滑膜炎为特征的全身性自身免疫性疾病.过氧化物酶体增殖活化受体(PPAR)γ共激活分子(PPARγcoactivator,PGC)1β属于PGC-1转录辅助活化因子家族中的一员,上调PGC1β可减轻巨噬细胞介导的炎症反应.本研究拟探讨RA滑膜及滑膜成纤维细胞(FLS)PGC1β的表达及意义。rn 方法：30例确诊活动期RA患者，收集临床资料及细针活检获取滑膜组织，免疫组化染色检测PGC1β的表达，比较RA滑膜PGC1β表达与对照组(13例骨关节炎（OA）患者和10例非炎性关节病患者)滑膜的表达差异。体外分离培养RA-FLS，实时荧光定量PCR和Western blot分别检测其中8例RA患者及6例年龄性别匹配的OA患者FLS PGC1βmRNA和蛋白水平的表达，并进一步分析PGC1β蛋白表达水平与RA临床活动指标之间的相关关系。rn 结果：①RA、OA及非炎性关节病患者滑膜PGC1β主要表达在衬里层滑膜细胞和衬里下层浸润的炎症细胞的细胞核中，RA患者滑膜衬里层PGC1β阳性细胞比例[中位数（M）87%，四分位数间距（IQR）78～91%]显著高于OA（M 69%，IQR47～81%）和非炎性关节病患者（M 63%，IQR48～69%，均P＜0.01），衬里下层PGC1β阳性细胞比例（M 90%，IQR86～93%）显著高于OA（M 71%，IQR60～86%）和非炎性关节病患者（M 60%，IQR50～78%，均P＜0.01）。②RA患者FLS中PGC1βmRNA和蛋白水平的表达均显著高于OA患者(PGC1βmRNA：3.18±1.72 vs 1.17±0.74，PGC1β蛋白：0.33±0.17 vs 0.11±0.08,均P＜0.05)。③Spearman’s相关分析显示RA患者FLS中PGC1β蛋白水平的表达与C-反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）及DAS28CRP评分均呈显著正相关(r分别为0.738，0.762和0.786,均P<0.05)。rn 结论：PGC1β在RA滑膜和FLS中表达升高，且与CRP、ESR和DAS28CRP水平正相关，提示PGC1β可能参与RA滑膜炎症。

摘要： 目的:研究柏木醇对LPS诱导大鼠滑膜成纤维细胞(FLS)的作用及作用机制.rn 方法:取佐剂性关节炎大鼠滑膜组织,分离出FLS.用实时RT-PCR检测COX-1,COX-2,MMP-13和MCP-1 mRNA的表达.用Western Blot和ELISA分别测定COX-1、COX-2和PGE2、IL-1β,TNF-α蛋白的表达.用Western Blot检测NF-κB和MAPK信号通路.rn 结果:1、柏木醇对LPS诱导FLS IL-1β,TNF-α蛋白水平表达的影响:与模型组相比,柏木醇和吲哚美辛组均能统计学显著抑制IL-1β和TNF-α蛋白水平的表达.2、柏木醇对LPS诱导FLS COX-1、COX-2 mRNA和蛋白水平表达的影响:与模型组相比，柏木醇和吲哚美辛组均能统计学显著抑制COX-1和COX-2 mRNA和蛋白水平的表达。3、柏木醇对LPS诱导FLS PGE2表达的影响:与模型组相比，柏木醇和吲哚美辛组均能统计学显著抑制PGE2表达。4、柏木醇对LPS诱导FLS MMP-13和MCP-1 mRNA水平表达的影响:与模型组相比，柏木醇和吲哚美辛组均能统计学显著抑制MMP-13和MCP-1 mRNA水平的表达。5、柏木醇对LPS诱导FLS NF-κB和MAPKs信号通路的影响:用Western Blot法分析显示，柏木醇经过MAPK信号通路的ERK通路，连接到NF-κB信号通路，从而对炎症因子的表达产生影响。rn 结论:柏木醇对LPS诱导的大鼠FLS的炎症因子的表达具有抑制作用，作用机制可能是抑制MAPK的ERK通路和NF-κB信号通路。

摘要： 目的:探讨断藤益母汤(DYD)含药血清对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(fibrolast-like synoviocytes,FLS)增殖以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响和机制.rn 方法:体外培养RA-FLS,取第3至5代细胞,分别加入按临床常规口服剂量折算制取的来氟米特(Leflunomide,LEF)和DYD家兔含药血清,对照组加入正常家兔血清,MTT法检测24 h、48 h、72 h后各组含药血清对RA-FLS的影响.ELISA法检测72h后各组细胞培养上清TNF-α的含量.rn 结果:相对于对照组,LEF和DYD含药血清作用48 h、72 h,二者均能显著抑制RA-FLS增殖(P＜0.05),72h后LEF组抑制率明显高于DYD(P＜0.05);相对于对照组,两种含药血清对TNF-α也有显著抑制作用(P＜0.05),组间差异不明显(P＞0.05).rn 结论:成人临床常规剂量的断藤益母汤含药血清作用48 h、72 h后能显著抑制RA-FLS增殖,并可降低该细胞TNF-α分泌量,这可能是该方治疗RA的机制之一.

摘要： 目的：观察紫草塞对人滑膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响,探讨紫草素可能的免疫抗炎作用机制.方法：分离并培养人膝关节滑膜成纤维细胞,各加入IL-1β、TNF-α15ng/ml,体外模拟人类风湿关节炎滑膜细胞.以塞来昔布作阳性对照,进行紫草素(浓度为5-80μg/L)干预,分别作用24h、48h、72h后终止培养.用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达情况.结果：紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA的表达,与浓度无明显依赖性(P=0.089),用药时间有显著统计学意义(P＜0.0001).塞来昔布抑制滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA水平的表达亦无明显浓度依赖性(P=0.051),而与用药时间显著相关(P＜0.0001).紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达的影响与塞来昔布相比,其抑制作用无明显差异.结论：紫草塞可通过抑制COX-2mRNA基因表达,减少炎症性细胞因子的产生而发挥其对类风湿关节炎的免疫抗炎作用,为开发紫草素成为COX-2抑制剂提供一定的实验基础.

摘要： 目的:探讨断藤益母汤(DYD)含药血清对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(fibrolast-like synoviocytes,FLS)增殖以及肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)的影响和机制.rn 方法:体外培养RA-FLS,取第3至5代细胞,分别加入按临床常规口服剂量折算制取的来氟米特(Leflunomide,LEF)和DYD家兔含药血清,对照组加入正常家兔血清,MTT法检测24h、48h、72h后各组含药血清对RA-FLS的影响.ELISA法检测72h后各组细胞培养上清TNF-α的含量.rn 结果:相对于对照组，LEF和DYD含药血清作用48h,72h，二者均能显著抑制RA-FLS增殖，72h后LEF组抑制率明显高于DYD;相对于对照组，两种含药血清对TNF-a也有显著抑制作用，组间差异不明显。rn 结论:成人临床常规剂量的断藤益母汤含药血清作用48 h, 72 h后能显著抑制RA-FLS增殖，并可降低该细胞TNF-a分泌量，这可能是该方治疗RA的机制之一。

摘要： 目的:观察雷藤舒(LLDT-8)对TNF-α诱导的RA-HFLS促凋亡作用;探讨LLDT-8对炎症因子的影响;研究LLDT-8对Ras-MAPKs信号通路的作用机制.rn 方法:在体外培养RA-HFLS体系中,加入50nM LLDT-8与20ng/ml TNF-α共孵育,同时设置对照组,采用TUNEL法检测RA-HFLS细胞的凋亡;RT-PCR检测Bcl-2mRNA的表达水平;ELISA、RT-PCR检测IL-6、MMP-3的表达;Western-blot检测Ras-MAPKs信号通路的磷酸化水平和蛋白的表达.rn 结果:LLDT-8组细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);LLDT-8能显著抑制TNF-α诱导的RA-HFLS分泌的IL-6、MMP-3的表达(P＜0.01).LLDT-8能明显抑制Ras、p-P38、c-Jun和c-Myc蛋白的磷酸化和蛋白的表达,而各组之间p-ERK、p-JNK、c-Fos磷酸化水平和蛋白表达无明显变化.rn 结论:LLDT-8能促进TNF-α诱导的RA-HFLS细胞凋亡,且能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;LLDT-8能通过抑制炎性细胞因子的产生而发挥抗炎作用;LLDT-8降低Ras、p38、c-Jun、c-Fos、c-Myc的磷酸化和蛋白表达水平,从而抑制Ras-p38MAPK信号传导通路的异常活化,间接抑制核内转录因子向细胞进一步分化、增殖或产生炎症,这可能是LLDT-8抑制RA滑膜的增殖,减轻滑膜炎症,抑制RA关节损伤的部分机制.

摘要： 目的：观察雷藤舒(LLDT-8)对TNF-α诱导的RA-HFLS促凋亡作用;探讨LLDT-8对炎症因子的影响;研究LLDT-8对Ras-MAPKs信号通路的作用机制.rn 方法：在体外培养RA-HFLS体系中,加入50nM LLDT-8与20ng/ml TNF-α共孵育,同时设置对照组,采用TUNEL法检测RA-HFLS细胞的凋亡;RT-PCR检测Bcl-2mRNA的表达水平;ELISA、RT-PCR检测IL-6、MMP-3的表达;Western-blot检测Ras-MAPKs信号通路的磷酸化水平和蛋白的表达.rn 结果：LLDT-8组细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);LLDT-8能显著抑制TNF-α诱导的RA-HFLS分泌的IL-6、MMP-3的表达(P＜0.01).LLDT-8能明显抑制Ras、p-P38、c-Jun和c-Myc蛋白的磷酸化和蛋白的表达,而各组之间p-ERK、p-JNK、c-Fos磷酸化水平和蛋白表达无明显变化.rn 结论：LLDT-8能促进TNF-α诱导的RA-HFLS细胞凋亡,且能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2mRNA的表达;LLDT-8能通过抑制炎性细胞因子的产生而发挥抗炎作用;LLDT-8降低Ras、p38、c-Jun、c-Fos、c-Myc的磷酸化和蛋白表达水平,从而抑制Ras-p38MAPK信号传导通路的异常活化,间接抑制核内转录因子向细胞进一步分化、增殖或产生炎症,这可能是LLDT-8抑制RA滑膜的增殖,减轻滑膜炎症,抑制RA关节损伤的部分机制.

摘要： 类风湿关节炎(rheumatoid anhritis,RA)是一种严重危害人类健康,以侵犯骨、关节为主的进行性、系统性的自身免疫性疾病。滑膜炎是其重要病理特性之一,其病理改变具有与肿瘤相似的组织侵润及破坏特点。滑膜细胞的这种无限增殖可能与其分化异常、不能正常成熟和凋亡有关。

摘要： 一种人成纤维细胞无血清培养基，包括基础培养基和无血清培养上清浓缩液，还包括如下组分及其浓度：维生素组合物为5‑100ng/mL，葡多酚为50‑200μg/mL，重组人表皮细胞生长因子为1～50ng/mL，重组人碱性成纤维细胞生长因子为50～200ng/mL，重组人转化生长因子β1为1～50ng/mL，重组血小板衍生生长因子‑C为1～10ng/mL，重组人胰岛素样生长因子‑1浓度为1～10ng/mL，β‑巯基乙醇为50～200μM，人血白蛋白浓度为1～100μg/mL，谷胱甘肽浓度为1‑100μg/mL，黄芪多糖为1‑50μg/mL，透明质酸0.1‑5μg/mL，碳酸氢钠为1.0‑3.7g/L。利用无血清培养基替代传统含动物血清的培养基来培养人成纤维细胞，避免了动物源性成分污染以及异种蛋白引起人体免疫反应等不安全因素。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 提供以新的作用机制为指标的成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选方法。通过以神经激活作为指标，能够进行成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选。

摘要： 本发明涉及对成纤维细胞激活蛋白(FAP)具有特异性的能够与犬、小鼠、和人FAP交叉反应的抗体、结合多肽、和scFv。

摘要： 本发明提供了一种成纤维细胞转化培养基及其应用、成纤维细胞的制备方法，涉及生物技术的技术领域。该成纤维细胞转化培养基中含有血小板活性因子(PRP)，用于诱导脐带间充质干细胞向成纤维细胞转化，可以使脐带间充质干细胞更好的向成纤维细胞转化，缓解了现有技术中存在的外源成纤维细胞获取困难的技术问题。

摘要： 提供制备CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞的方法。此外，提供G‑CSF阳性成纤维细胞群。一种制备CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞的方法，所述方法包括在选自于由TNF‑α和IL‑4组成的组中的一种以上的存在下培养成纤维细胞以使CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞增加的步骤。

摘要： 本发明涉及一种成纤维细胞的培养基及利用其培养成纤维细胞的方法，包括基础培养基、NH

摘要： 本发明提供了一种诱导成纤维细胞分泌抗菌肽的诱导培养基和方法、成纤维细胞及应用，涉及细胞工程领域。该诱导培养基包含基础培养基、血小板裂解液和TGF‑β信号通路抑制剂。该诱导培养基能够激活皮肤成纤维细胞的脂肪分化潜能并在脂肪分化的过程中分泌抗菌肽。使用该诱导培养基诱导成纤维细胞分泌抗菌肽，操作简单，可操控性强，缓解了现有技术中存在的缺乏一种获得能够体外分泌抗菌肽的成纤维细胞的问题。

摘要： 一种人成纤维细胞无血清培养基，包括基础培养基和无血清培养上清浓缩液，还包括如下组分及其浓度：维生素组合物为5‑100ng/mL，葡多酚为50‑200μg/mL，重组人表皮细胞生长因子为1～50ng/mL，重组人碱性成纤维细胞生长因子为50～200ng/mL，重组人转化生长因子β1为1～50ng/mL，重组血小板衍生生长因子‑C为1～10ng/mL，重组人胰岛素样生长因子‑1浓度为1～10ng/mL，β‑巯基乙醇为50～200μM，人血白蛋白浓度为1～100μg/mL，谷胱甘肽浓度为1‑100μg/mL，黄芪多糖为1‑50μg/mL，透明质酸0.1‑5μg/mL，碳酸氢钠为1.0‑3.7g/L。利用无血清培养基替代传统含动物血清的培养基来培养人成纤维细胞，避免了动物源性成分污染以及异种蛋白引起人体免疫反应等不安全因素。