核糖体失活蛋白

摘要： 麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C均具N-糖苷酶活性,然而两者的体外翻译抑制能力却具有明显差异,这暗示着两者的N-糖苷酶活性也存在差异.为了探究造成这一差异的结构基础,本研究使用trRosetta对两种蛋白进行了三级结构的预测,通过PROCHECK和Qmean对预测得到的三级结构模型进行了质量评估,利用Chem3D对小分子配体腺嘌呤和腺苷进行了结构优化,借助UCSF Chimera对Curcin及Curcin C活性位点的氨基酸组成进行了预测.最终使用分子对接软件AutoDock将预测得到的模型与小分子腺嘌呤及腺苷进行分子对接.对接结果显示,两种蛋白与腺嘌呤的相互作用模式具有较高的相似性,但Curcin的关键氨基酸Arg并未参与到与配体的相互作用.此外Curcin C与腺嘌呤和腺苷之间的结合能都低于Curcin,且其和腺苷与腺嘌呤之间结合能的差值也要高于Curcin.这一结果暗示着Curcin和Curcin C之间的活性差异与其活性位点处的结构特征有关,Curcin C中的关键氨基酸Arg与腺嘌呤及腺苷的结合位点更为靠近,从而导致Curcin C与底物之间的结合能更低,更有利于催化反应的进行.

摘要： 麻疯树核糖体失活蛋白curcin和curcin C均具有抗肿瘤活性,但后者的活性水平显著高于前者,为了探索造成这一差异的结构基础,本文采用在线的同源建模预测软件SWISS-MODEL,对两种麻疯树核糖体失活蛋白curcin、curcin C的三维结构模型进行预测,采用SYBYL对预测模型进行能量最小化优化,采用PROCHECK、VERIFY 3D和ERRAT软件对优化前后的模型进行质量评估,随后采用AutoDock软件将预测的模型与腺嘌呤进行分子对接分析.结果显示,两种蛋白采用与Ricin A类似的方式与腺嘌呤相互作用,但在相互作用的氨基酸残基种类、数量以及形成的氢键和疏水相互作用上还是存在差异,其中,curcin C与腺嘌呤具有最强的结合能力,curcin则最低.

摘要： 苦瓜MAP30蛋白属于Ⅰ型核糖体失活蛋白,具有广谱的抗病毒、抗肿瘤活性,并且具有良好的特异性,对正常细胞无毒副作用.总结了MAP30蛋白结构、抗病毒活性、抗肿瘤活性及相关机制,并对其应用前景进行了分析,为进一步深入研究MAP30蛋白抗病毒、抗肿瘤机制及开发相关药物提供科学依据和理论基础.

摘要： 核糖体失活蛋白(Ribosome-inactivating proteins,RIPs)是广泛存在于高等植物体内的一类毒蛋白,其作用位点多为细胞的核糖体大亚基RNA.该蛋白通过去除核糖体RNA(rRNA)中一个或多个腺嘌呤残基,导致rRNA断链且核糖体结构被破坏,不能正常结合蛋白质合成过程中的延伸因子,进而导致植物体的蛋白质生物合成受抑制.有研究表明,RIPs对多种病菌、害虫具有广谱抗性,这一特性使得RIPs在农业领域具有很高的应用价值,可用于培育转基因作物、抗虫活性、研制免疫毒素等.

摘要： 利用34种具有全基因组数据的代表植物,通过生物信息分析方法,深入挖掘和分析不同植物类群基因组中RIPs基因家族的成员构成,推测其可能的扩增方式和功能分化,并探讨了该基因家族在植物中的总体进化趋势.采用BLAST和HMMsearch两种检索方法共鉴定出79个RIPs基因家族成员;通过序列比对和系统进化树的构建,发现RIPs在单双子叶中存在双起源,RIPs在两者分化之前就已存在.它们可能为适应复杂的环境而出现在早期陆生植物中,随后在长期进化过程中不断发生谱系的扩张和拷贝丢失,最后通过功能分化在不同植物中保留下来,其在被子植物进化的过程中有物种特异性的重复.

摘要： [目的]克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况.研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应.[方法]根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和苦瓜素基因全序列,设计并合成扩增PAP和α-MC基因全长引物,通过RT-PCR及基因克隆方法,从苦瓜和商陆春叶克隆得到苦瓜α-MC、商陆PAP,用WolfPS0RT预测蛋白定位,将苦瓜α-MC、商陆PAP分别融合在GFP和DsRed2的N端,构建融合蛋白表达载体,采用GFP和DsRed2标记进行亚细胞定位,验证预测结果;通过农杆菌介导在本氏烟中瞬时表达α-MC,再接种烟草花叶病毒,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测病毒在接种叶片的蛋白积累量和RNA表达量,分析瞬时表达α-MC的抗病毒效果.利用qRT-PCR分析植物防卫相关基因NPR1/PR1、PR2的表达,探究其抗病毒机理.[结果]克隆得到基因α-MC和PAP全长,分别为861和939 bp.Wolf PS0RT预测显示α-MC和PAP主要定位于细胞质膜上.共聚焦荧光显微镜下观察发现,分别用GFP和DsRed2标记的α-MC和PAP均定位在本氏烟叶片表皮细胞质膜上,与Wolf PS0RT预测的α-MC和PAP定位结果相一致.异源表达的PAP对植物细胞毒性作用强,导致表达部位细胞坏死,异源表达α-MC的植物细胞无明显毒性,表达部位细胞完整.在本氏烟中异源表达α-MC后,再接种TMV-GFP,在紫外灯下观察发现α-MC处理后的本氏烟在接种TMV-GFP 48 h后没有出现绿色荧光,而对照组出现荧光.72h后处理组出现零星荧光,但对照组的绿色荧光开始扩散,连续观察,处理组几乎没有变化,接种TMV-GFP 6 d后,发现处理组的绿色荧光几乎没有扩大的趋势,而对照组的绿色荧光已扩散至心叶;ELISA检测表明,在接种TMV-GFP 6 d后的叶片中,对照组与健康植物的0D492比值几乎已达到处理组的1 0倍以上;qRT-PCR检测TMV RNA的含量,结果显示对照组TMV RNA表达量是处理组的149倍左右,表明α-MC对TMV复制和移动均有明显抑制;qRT-PCR结果分析显示,NPR1在只注射TMV、单独表达α-MC以及表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均被诱导表达,但后者的表达量是前两个处理的约2.5倍左右,在只接种α-MC和表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均检测到PR1、PR2,但后者的表达量显著高出前者5-7倍,表明异源表达α-MC可诱导植物中防卫相关基因NPR1、PR1/PR2的表达,从而引起更强的防御反应.[结论]异源表达α-MC显著抑制TMV,能够激活植物防卫反应,且对植物细胞无明显毒性.研究结果为利用异源表达α-MC方法开发控制植物病毒新产品提供了参考依据.%[Objective] The objective of this study is to obtain the alpha-momorcharin (α-MC) and pokeweed antiviral protein (PAP) by cloning,observe the cellular localization of which in Nicotiana benthamiana by heterologous expression,and to evaluate the effects of α-MC on inhibiting Tobacco mosaic virus (TMV) and the resistance defense response of N.benthamiana.[Method] Based on the published sequences of α-MC and PAP,primer pairs for cloning PAP and α-MC were designed.RT-PCR and gene cloning were used to obtain the target genes α-MC and PAP from the leaves of Momordica charantia and Phytolacca acinosa,respectively.First,subcellular localization of the α-MC and PAP was predicted through Wolf PSORT,then the fusion protein vectors for verifying the subcellular localization were constructed by fusing the α-MC and PAP to the N-terminal of the GFP and DsRed2,respectively.The α-MC was transiently expressed in the N.benthamiana leaves by agro-infiltration,and the α-MC expressed leaves were inoculated with TMV-GFE The accumulation of the virions and viral RNA were detected by indirect ELISA and real-time quantitative PCR (qRT-PCR).In order to understand the antiviral mechanism of the α-MC,the expression of plant defense-related genes including non-expressor ofpathogenesis-related genes (NPR1,PR1,PR2) were evaluated by qRT-PCR.[Result] The length of genes α-MC and PAP obtained by RT-PCR were 861 and 939 bp,respectively.The subcellular localization showed that the coding proteins of α-MC and PAP were predicted by Wolf PSORT to distribute on the plasma membrane.Under the confocal laser scanning microscope,the fusion proteins α-MC-GFP and PAP-DsRed2 also distributed on the plasma membrane of the leaf epidermis cell of N.benthamiana,which is consistent with the predicted results.It was observed that the heterologously expressed PAP produced strong toxic effects on tobacco leaf cells,which led to necrosis of the cells,while the heterologously expressed α-MC showed no obvious toxic effect on tobacco leaf cells,which were kept intact.Additionally,following the heterologous expression of α-MC in N.benthamiana,TMV-GFP was inoculated.After 48 hours,there was no green fluorescence observed in the α-MC expressed leaves under UV light,but the green fluorescence could be observed in the control group.After 72 hours,sporadic green fluorescence was observed in the treatment group and the fluorescence in the control group started to spread.After 6 days,the green fluorescence spread to the spear leaf of the control group,while no obvious change was found in that of the treatment group.ELISA assay results showed that after 6 days of TMV-GFP inoculation,the value of OD492 in the control group was over 10 times more than the value of samples under treatment,qRT-PCR data showed that the expression level of TMV in control group was 149 times than that of the level in group after treatment.Those data indicate that α-MC has a significant impact on both replication and movement of TMV.The expression levels of several defense-related genes in N.benthamiana leaves expressing α-MC with or without TMV were tested through qRT-PCR.Data showed that NPR1 was induced in both cases while the expression level was 2.5 times in plant with TMV injection than the one without injection.As to PR1 and PR2,the expression of these two genes was 5-7 times higher in plants with TMV injection.Combining all those data together,it was suggested that the resistance effect of heterologously expressed α-MC on plant viruses could induce the expression of responsive defense-related genes including NPR1,PR1 and PR2,resulting in much stronger plant defense response.[Conclusion] The heterologously expressed α-MC significantly inhibited TMV,activated the plant defense response,enhanced the defense response of N.benthamiana,and produced few toxicity to the plant cells.Therefore,the results will provide a reference for the development of new products for the control of plant viruses based on heterologous expression ofα-MC.

摘要： 蓖麻毒素(ricin)是一种从蓖麻籽中提取的剧毒植物蛋白,是核糖体失活蛋白(RIP)的一种,可以使核糖体失去蛋白质合成能力并最终导致细胞死亡,毒素在体内通过独特的"逆向转运"途径进入胞浆并与核糖体结合发挥毒性作用,目前对蓖麻毒素尚无有效的抗毒剂.本文对蓖麻毒素的结构,转运过程,作用机制以及抗毒剂的研究进展进行综述.%Ricin is a highly toxic plant protein produced by the seeds of the castor plant. It belongs to the ribosome inactivat-ing proteins(RIP)family and causes cell death by inhibiting the protein synthesis activity of ribosome. Ricin takes a unique pathway called"retrograde trafficking pathway"to enter the cytosol,where it interacts with ribosome and then exerts its inhibitory activity. No effective antidote agents have been developed for the treatment of ricin poisoning. In this paper,the structure,cell trafficking process, toxicological mechanism and the research progress in ricin antitoxin agents are reviewed.

摘要： The Jatropha curcas L.seeds collected from 6 individual locations (Xichang,Panzhihua,Haikou,Sanya and Dongfang) were analyzed in this study.The results showed that the average curcin contents in the endosperms were among 1.8770～2.5602 mg/g following the order from high to low:Xichang,Panzhihua,Haikou,Sanya and Dongfang,showing large content variation among them.The analysis on the coefficient of variation (CV) of curcin contents within a population found that the highest CV (14.6189) is from Renli while the lowest one (7.1876) from Haikou.The correlation analysis suggests non-relationship between curcin content with 100-seed weight and kernel yield,non-obvious relationship with oil content and low negativle relationship with soluble protein contents at the level of 0.01.Based on these data,the seeds from Xichang with relative higher curcin content could be used as one of resources for the further application at present.%本研究对西昌、攀枝花、仁里、海口、三亚、东方六地的麻疯树种子进行资源调查研究,结果显示六个地区麻疯树种子胚乳核糖体失活蛋白含量均值为1.8770～2.5602 mg/g,由高到低依次为西昌、三亚、海口、仁里、攀枝花、东方,且地区间差异较大.各地区内部种子胚乳核糖体失活蛋白含量数据分析显示,仁里地区种子胚乳核糖体失活蛋白含量变异系数最大,为14.6189;海口地区的变异系数最小,为7.1876.麻疯树种子性状相关性分析结果显示胚乳核糖体失活蛋白含量与百粒重、出仁率值在0.01水平上没有相关性,与含油率相关性不显著,与可溶性蛋白含量在0.01水平上低度负相关.综合各项指标认为西昌地区的麻疯树种子核糖体失活蛋白含量较高,可作为现阶段核糖体失活蛋白应用的材料来源之一.

摘要： Ribosome-inactivating proteins (RIPs) are a class ofcytotoxic enzymes which possess highly specific rRNA N-glycosidase activity and are capable of catalytically inactivating prokaryotic or eukaryotic ribosomes.Due to their unique biological activities,RIPs have been considered to have great potential in medical and agricultural applications.The cucumber genome accommodates two genes encoding type 2 ribosome-inactivating proteins,further referred to as CumsaAB 1 and CumsaAB2.Type 2 RIPs,represented by ricin,usually consist of two peptides linked by a disulfide bridge.A chain with N-glycosidase activity and B chain with carbohydrate-binding activity.In this study,the expression of the cucumber RIPs was analyzed.Sequence analysis showed that CumsaAB1 is synthesized with a signal peptide and subcellular localization studies further confirmed that the protein is expressed extracellularly,following the secretory pathway.Analyses of the transcript levels in various tissues during cucumber development showed that CumsaAB1 is present at extremely low levels in most tissues while the expression of CumsaAB2 is much higher,especially in leaves from plants at first-true-leaf stage and plants at the onset of flowering.Molecular modelling of the RIP sequences was performed to unravel the three-dimensional conformation of cucumber RIPs and their carbohydrate-binding sites.This study provided valuable information on the subcellular localization,the tissue-specific expression and the structure of RIPs from cucumber plants.%核糖体失活蛋白是一类具有高度特异性rRNA N-糖苷酶活性的蛋白,它们能够使原核或真核细胞的核糖体失活因而具有细胞毒性.由于其独特的生物学性质,核糖体失活蛋白被认为在农业和医学中都有着巨大的应用潜力.我们之前的研究表明,黄瓜的基因组中共包含2个2类核糖体失活蛋白基因,分别命名为CumsaAB1和CumsaA2.以蓖麻毒蛋白Ricin为代表,2类核糖体失活蛋白通常由2条二硫键连接的肽链组成:具有N-糖苷酶活性的A链与具有凝集素活性的B链.本文研究了黄瓜中核糖体失活蛋白的表达情况.亚细胞定位研究表明CumsaAB1经过蛋白分泌通路表达于细胞外,这与蛋白质序列分析显示的CumsaAB1包含一个信号肽而不含转膜区域相一致.对黄瓜的不同生长阶段的不同组织中的转录水平分析表明,CumsaAB1在大部分组织中以极低的水平表达,而CumsaAB2表达水平则明显更高,尤其在第一片真叶阶段和刚开花的植物中.最后,我们使用分子模拟对黄瓜中核糖体失活蛋白的结构及糖结合位点进行了分析.本研究对黄瓜中核糖体失活蛋白的亚细胞定位、表达水平和可能的蛋白质结构进行了研究,为其进一步的生物学功能研究提供了重要信息.

摘要： 核糖体失活蛋白（ribosome-inactivating proteins，RIPs）是一类能够脱去真核细胞28S rRNA内SRL区域的A4342，从而破坏延伸因子与核糖体的结合，将蛋白质的生物合成抑制在延伸阶段的蛋白质家族。RIPs有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，苦瓜中已发现的α-苦瓜素、β-苦瓜素、γ-苦瓜素、δ-苦瓜素、ε-苦瓜素、MAP30等，均属于Ⅰ型RIPs。这些RIPs具有抗病毒、抗菌、抗虫害、抑制肿瘤细胞生长等生物学活性，受到了人们的广泛关注。本文从RIPs的分类、生物学活性、功能与应用等方面，对苦瓜中的RIPs进行了综述。%Ribosome-inactivating proteins (RIPs) are a family of protein than can remove A4324 from the highly conserved and surface-exposed sarcin/ricin loop (SRL) in the 28S rRNA of eukaryotic ribosomes. The depurination destroys the interaction between elongation factors and ribosome, thereby resulting in the inactivation of ribosome and the inhibition of protein synthesis. RIPs can be classified into type I, type II and type III. The RIPs identified in Momordica charantia L., such asα-momorcharin,β-momorcharin,γ-momorcharin,δ-momorcharin,ε-momorcharin and MAP30, all belong to the type I RIPs. Antiviral, antibacterial, pesticidal and anti-tumor, hypolipidemia, hypoglycemia and other biologically activities have been reported for these RIPs. In this article, the classification, biologically activity, function and application of RIPs have been reviewed in the hope of providing a theoretical basis for further development and utilization of bitter mellon RIPs.

摘要： 核糖体失活蛋白是一类作用于rRNA而抑制核糖体功能的毒蛋白，广泛存在于各种植物体内。其特点是具有N-糖苷酶活性，能水解生物核糖体大亚基rRNA颈环结构上特定位点的腺嘌呤，使核糖体失活，从而抑制了蛋白质合成。核糖体失活蛋白不仅对病毒具有广谱抗性，而且对真菌和昆虫也有抗性。本文对核糖体失活蛋白的分类、主要性质、作用机制、应用以及国内外有关这类蛋白的研究进展加以概述。

摘要： 苦瓜蛋白MAP30是苦瓜中的一种有效成分,具有抗病毒、抗肿瘤、抗真菌的作用,苦瓜蛋白MAP30是属于Ⅰ型核糖体失活蛋白。核糖体失活蛋白是一类主要分布于植物体内的毒蛋白，通过作用于真核细胞大亚基28SrRNA导致核糖体失活，抑制蛋白质的生物合成，从而对细胞产生毒害作用。根据RIPs的一级结构和功能，RIPs可分为三型：Ⅰ型RIPs为单链结构，具有RNA N-糖苷酶活性，本身是活性链，分子量约30 kD，等电点在8～10，大多为碱性糖蛋白，比较稳定。Ⅱ型RIPs则由2条多肽链通过分子间的二硫键连接（分为A链和B链），分子量60～65 kD。其中，A链具有RNA N-糖苷酶活性，是活性链：而B链具有凝集素功能，能与细胞膜上的特异性糖基发生结合作用，促使活性链A链进入到细胞内，对细胞造成毒性。Ⅲ型RIPs包括大麦JIP60和玉米RIPI(b-32)两种，其分子只有一条链组成，当分子中心某些区域经酶切后暴露出来活性中心才显示生物学功。苦瓜蛋白只包含Ⅰ型和Ⅱ型核糖体失活蛋白，研究者先后从苦瓜中分离到多种核糖体失活蛋白，包括苦瓜抑制剂、苦瓜凝集素、α-苦瓜素、β-苦瓜素、δ-苦瓜素、γ-苦瓜素、ε-苦瓜素和MAP30等。除了ε-苦瓜素为Ⅱ型RIPs外，其他的苦瓜蛋白都属于I型RIPs。

摘要： 本文利用热不对称交错PCR克隆了CsRIP基因编码区上游1299bp的启动子序列。用CsRIP的编码区替换pBI121的gus编码区，通过农杆菌介导的遗传转化，共获得15株表达CsRIP的转基因烟草。利用荧光定量RT PCR技术对S株转基因烟草的26S rRNA第3007位点的脱腺嘌呤作用进行了分析，发现与未转基因的对照植株相比，该位点的脱嘌呤水平提高了大约2.8倍，说明在烟草细胞中表达的茶树II型核糖体蛋白具有N一糖普酶活性，能够催化烟草26S rRNA的脱嘌呤作用。

摘要： 本文研究通过分析葫芦科作物中RIP核苷酸序列,据其保守区域设计一对简并引物P1、P2,在海芋、剑麻、望江南、那坡指天蕉、邻水野蕉等五种植物中分别分离出新的RIP基因片段,并对其序列进行分析.

摘要： 在目前的实验中,首次测定了三种核糖体失活蛋白(苦瓜蛋白、丝瓜蛋白和肥皂草蛋白)对十种真菌(禾本科镰孢、腐皮镰孢、串珠镰孢、落花生球腔菌、立枯丝核菌、灰葡萄孢、大孢链格孢、梨生囊孢壳、黑曲霉和黄曲霉)的抑制活性.结果显示,苦瓜蛋白有最强的抗真菌活性,丝瓜蛋白次之,肥皂草蛋白最低.除镰刀菌外,苦瓜蛋白在50μg/ml的浓度下,对其它十一种真菌的菌丝生长均有90﹪的抑制作用.同时发现,苦瓜蛋白的浓度直接影响其抗真菌效应.丝瓜蛋白对灰葡萄孢、梨生囊孢壳和串珠镰孢菌有较强的抑制效应,而肥皂草蛋白只对立枯丝核菌有抑制作用.

摘要： 目的：研究TCS抗HIV-1的构效关系并对机制进行探讨。rn 方法：蛋白工程技术构建14个TCS突变体，测定各种TCS突变体的细胞毒性和抗HIV活性。rn 结果：活性中心突变体TCSM(120-123)与TCSE160A/E189A在失去绝大部分RI活性的同时，也几乎完全失去抗HIV活性。而另一个活性中心突变体TCSR122G,RI活性下降160倍，却仍保留一定的抗HIV活性。TCSC末端删除突变体(TCSC2，TCSC4和TCSC14)抗HIV活性的下降(1.4-4.8倍)与其RI活性呈平行下降(1.2-3.3倍)；分别在C末端加上末端19个氨基酸延伸肽或KDEL，信号肽的突变体TCSC19aa与TCSKDEL，虽然保留全部的RI活性，但却几乎完全失去抗HIV活性；TCS抗原决定簇位点突变后对TCS抗HIV-1活性没有显著影响，但当在抗原决定簇突变体所引入的Cys残基上加上PEG20K后，这些突变体则显著降低了抗HIV-1的活性。TCS不能抑制HIV-1进入宿主细胞；对感染细胞和未感染细胞的融合没有抑制作用；TCS也不能抑制HIV-1 rRT活性；TCS对病毒颗粒的直接杀伤作用不大。rn 结论：TCS抗HIV-1活性与其RI活性显著相关，但似乎又不是唯一的决定因素；TCS C末端氨基酸的突变影响其抗HIV-1活性；在C末端增加KDEL信号肽序列及19aa尾肽并不能增加其抗HIV活性；抗原决定簇突变体以及PEG20K偶联TCS抗原决定簇突变体体外抗HIV-1活性下降；抗HIV-1机制可能与对感染细胞的间接作用有关。

摘要： 目的：研究TCS抗HIV-1的构效关系并对机制进行探讨。rn 方法：蛋白工程技术构建14个TCS突变体，测定各种TCS突变体的细胞毒性和抗HIV活性。rn 结果：活性中心突变体TCSM(120-123)与TCSE160A/E189A在失去绝大部分RI活性的同时，也几乎完全失去抗HIV活性。而另一个活性中心突变体TCSR122G,RI活性下降160倍，却仍保留一定的抗HIV活性。TCSC末端删除突变体(TCSC2，TCSC4和TCSC14)抗HIV活性的下降(1.4-4.8倍)与其RI活性呈平行下降(1.2-3.3倍)；分别在C末端加上末端19个氨基酸延伸肽或KDEL，信号肽的突变体TCSC19aa与TCSKDEL，虽然保留全部的RI活性，但却几乎完全失去抗HIV活性；TCS抗原决定簇位点突变后对TCS抗HIV-1活性没有显著影响，但当在抗原决定簇突变体所引入的Cys残基上加上PEG20K后，这些突变体则显著降低了抗HIV-1的活性。TCS不能抑制HIV-1进入宿主细胞；对感染细胞和未感染细胞的融合没有抑制作用；TCS也不能抑制HIV-1 rRT活性；TCS对病毒颗粒的直接杀伤作用不大。rn 结论：TCS抗HIV-1活性与其RI活性显著相关，但似乎又不是唯一的决定因素；TCS C末端氨基酸的突变影响其抗HIV-1活性；在C末端增加KDEL信号肽序列及19aa尾肽并不能增加其抗HIV活性；抗原决定簇突变体以及PEG20K偶联TCS抗原决定簇突变体体外抗HIV-1活性下降；抗HIV-1机制可能与对感染细胞的间接作用有关。

摘要： 目的：研究TCS抗HIV-1的构效关系并对机制进行探讨。rn 方法：蛋白工程技术构建14个TCS突变体，测定各种TCS突变体的细胞毒性和抗HIV活性。rn 结果：活性中心突变体TCSM(120-123)与TCSE160A/E189A在失去绝大部分RI活性的同时，也几乎完全失去抗HIV活性。而另一个活性中心突变体TCSR122G,RI活性下降160倍，却仍保留一定的抗HIV活性。TCSC末端删除突变体(TCSC2，TCSC4和TCSC14)抗HIV活性的下降(1.4-4.8倍)与其RI活性呈平行下降(1.2-3.3倍)；分别在C末端加上末端19个氨基酸延伸肽或KDEL，信号肽的突变体TCSC19aa与TCSKDEL，虽然保留全部的RI活性，但却几乎完全失去抗HIV活性；TCS抗原决定簇位点突变后对TCS抗HIV-1活性没有显著影响，但当在抗原决定簇突变体所引入的Cys残基上加上PEG20K后，这些突变体则显著降低了抗HIV-1的活性。TCS不能抑制HIV-1进入宿主细胞；对感染细胞和未感染细胞的融合没有抑制作用；TCS也不能抑制HIV-1 rRT活性；TCS对病毒颗粒的直接杀伤作用不大。rn 结论：TCS抗HIV-1活性与其RI活性显著相关，但似乎又不是唯一的决定因素；TCS C末端氨基酸的突变影响其抗HIV-1活性；在C末端增加KDEL信号肽序列及19aa尾肽并不能增加其抗HIV活性；抗原决定簇突变体以及PEG20K偶联TCS抗原决定簇突变体体外抗HIV-1活性下降；抗HIV-1机制可能与对感染细胞的间接作用有关。

摘要： 目的：研究TCS抗HIV-1的构效关系并对机制进行探讨。rn 方法：蛋白工程技术构建14个TCS突变体，测定各种TCS突变体的细胞毒性和抗HIV活性。rn 结果：活性中心突变体TCSM(120-123)与TCSE160A/E189A在失去绝大部分RI活性的同时，也几乎完全失去抗HIV活性。而另一个活性中心突变体TCSR122G,RI活性下降160倍，却仍保留一定的抗HIV活性。TCSC末端删除突变体(TCSC2，TCSC4和TCSC14)抗HIV活性的下降(1.4-4.8倍)与其RI活性呈平行下降(1.2-3.3倍)；分别在C末端加上末端19个氨基酸延伸肽或KDEL，信号肽的突变体TCSC19aa与TCSKDEL，虽然保留全部的RI活性，但却几乎完全失去抗HIV活性；TCS抗原决定簇位点突变后对TCS抗HIV-1活性没有显著影响，但当在抗原决定簇突变体所引入的Cys残基上加上PEG20K后，这些突变体则显著降低了抗HIV-1的活性。TCS不能抑制HIV-1进入宿主细胞；对感染细胞和未感染细胞的融合没有抑制作用；TCS也不能抑制HIV-1 rRT活性；TCS对病毒颗粒的直接杀伤作用不大。rn 结论：TCS抗HIV-1活性与其RI活性显著相关，但似乎又不是唯一的决定因素；TCS C末端氨基酸的突变影响其抗HIV-1活性；在C末端增加KDEL信号肽序列及19aa尾肽并不能增加其抗HIV活性；抗原决定簇突变体以及PEG20K偶联TCS抗原决定簇突变体体外抗HIV-1活性下降；抗HIV-1机制可能与对感染细胞的间接作用有关。

摘要： 本申请提供修饰的玉米核糖体失活蛋白前体，其包含修饰的内部失活区域，其中，所述修饰的内部失活区域含有病毒蛋白酶酶切位点。本申请提供编码所述修饰的玉米核糖体失活蛋白前体的多核苷酸、包含与起始载体可操作连接的所述多核苷酸的表达载体。本申请提供包含所述修饰的玉米核糖体失活蛋白前体或表达载体的药物组合物及其应用。本申请还提供可穿膜蛋白，所述可穿膜蛋白由天然存在的玉米核糖体失活蛋白前体或其核糖体失活活性形式及与其N端连接的穿膜肽构成。此外，本申请提供蛋白纯化方法。

摘要： 本发明提供了一种测定核糖体失活蛋白活性的方法，包括如下步骤：(1)取核糖体失活蛋白(RIP)与三磷酸腺苷(ATP)于合适温度和pH下反应；(2)使步骤(1)的产物与偶联酶试剂反应；(3)测定550nm处的光吸收值；所述合适温度为53～62°C；所述合适pH为1～3；所述偶联酶试剂(ECR显色剂)含有催化量的腺苷脱氨酶(ADA)、过氧化物酶(POD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)，以及过量的4‑氨基安替比林(4‑AA)和N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐(TOOS)。本发明使用ATP为底物，能使核糖体失活蛋白充分发挥其N‑糖苷酶活性，生成大量游离的腺嘌呤，通过检测腺嘌呤有效实现核糖体失活蛋白，包括I型、II型和III型RIP的酶活测定，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种麻疯树核糖体失活蛋白及其制备制备方法，该核糖体失活蛋白从麻疯树种子萌发4～49天的麻疯树幼苗的子叶或/和胚乳中分离纯化得到，相对分子量为31.398kDa，等电点为7.12该核糖体失活蛋白的N‑末端的氨基酸残基的序列如序列表中SEQ ID No：1所示。本发明还提供了所述麻疯树核糖体失活蛋白在制备治疗肿瘤的药物中的应用，该核糖体失活蛋白对人骨肉瘤U20S、人非小细胞肺癌A549、人非小细胞肺癌H1975和人结肠癌HCT116均具有明显的增殖抑制作用，对人骨肉瘤U20S的离体增殖抑制效果优于Curcin和紫杉醇，并且对人正常肾细胞的毒性较低。

摘要： 本发明提供了一种测定核糖体失活蛋白活性的方法。本发明还提供了一种测定核糖体失活蛋白活性的显色液及其用途。本发明的核糖体失活蛋白测定方法操作简单、成本低，只需分光光度计就能完成定量测定过程，同时可避免传统RNA酶对反应的干扰，在核糖体失活蛋白的研究和开发领域，具有广泛的实际应用前景。

摘要： 本专利申请属于生物工程技术领域，具体公开了一种核糖体失活蛋白基因病毒载体构建及其在肿瘤细胞中表达活性蛋白的方法，包括如下步骤：步骤一、选取合适的核糖体失活蛋白，对其成熟区基因进行人源化表达的密码子优化；步骤二、野生型及优化后基因的腺病毒载体构建与重组病毒包装；步骤三、重组腺病毒感染肿瘤细胞，并检测使其在肿瘤细胞中蛋白表达及其抗肿瘤效应。本方案将α‑苦瓜素基因进行密码子优化，构建能感染哺乳动物肿瘤细胞的腺病毒表达载体系统，以适合于在肿瘤细胞中表达活性蛋白，克服了现有技术中使用原核细胞表达体系只能在大肠杆菌中表达以及使用植物病毒载体只能在植物细胞中表达而不能在肿瘤细胞中表达和杀伤肿瘤的缺陷。

摘要： 本申请提供修饰的玉米核糖体失活蛋白前体，其包含修饰的内部失活区域，其中，所述修饰的内部失活区域含有病毒蛋白酶酶切位点。本申请提供编码所述修饰的玉米核糖体失活蛋白前体的多核苷酸、包含与起始载体可操作连接的所述多核苷酸的表达载体。本申请提供包含所述修饰的玉米核糖体失活蛋白前体或表达载体的药物组合物及其应用。本申请还提供可穿膜蛋白，所述可穿膜蛋白由天然存在的玉米核糖体失活蛋白前体或其核糖体失活活性形式及与其N端连接的穿膜肽构成。此外，本申请提供蛋白纯化方法。

摘要： 一种核糖体失活蛋白—南瓜蛋白(Cucurmosin)是从常用蔬菜葫芦科植物南瓜中分离出来的,其分子量为27KD(SDS－PAGE检测),等电点>9。我们采用温和的提取方法,经DEAE－纤维素过滤和二次SP－琼脂糖快流速凝胶离子交换层析,获得了高纯度的蛋白。该蛋白已培养成可供X－射线衍射的晶体。该蛋白可以作为引产药物和抗肿瘤制剂的商业应用,作为N－糖苷酶用于分子生物学和免疫学研究,并可用作为免疫毒素的毒素材料。

摘要： 本申请涉及一种检测活性II型核糖体失活蛋白(RIP‑II)的方法，还涉及一种用于检测活性RIP‑II的试剂盒，还涉及所述试剂盒用于检测活性RIP‑II的用途。

摘要： 本发明提供了麻疯树核糖体失活蛋白JcRIP12编码基因，密码子优化的麻疯树核糖体失活蛋白JcRIP12编码基因，以及这两种编码基因编码的麻疯树核糖体失活蛋白JcRIP12，并通过体外抗肿瘤实验证实了麻疯树核糖体失活蛋白JcRIP12对人非小细胞肺癌细胞、人骨肉瘤细胞、人肝癌细胞或者人胃癌细胞具有良好的抗肿瘤活性，据此本发明还提供了麻疯树核糖体失活蛋白JcRIP12在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本发明不但丰富了具有抗肿瘤活性的麻疯树核糖体失活蛋白的种类，可为抗肿瘤药物的研发提供支持，而且解决现有技术从麻疯树中分离纯化麻疯树核糖体失活蛋白存在的分离纯化过程繁琐、工艺复杂、生产效率低下和生产成本较高的问题。

摘要： 本专利申请属于生物工程技术领域，具体公开了一种阻断受体结合的核糖体失活蛋白减毒改造的方法，A、预测结合位点，以分子对接软件预测核糖体失活蛋白与受体结合的部位和结合位点；B、根据A步骤中的预测结果，对结合位点的氨基酸残基进行突变改造；C、根据步骤B得出突变体基因进行密码子优化；D、将C步骤中优化的目标突变体全基因合成，并进行表达载体构建；E、检测，对D步骤中构建的目标突变体基因蛋白进行检测，通过毒性试验和荧光测试，检测其是否进入细胞，检测其是否表达。本方案创建的突变结合位点氨基酸残基的结构改造模式能显著阻断α‑MMC进入细胞及其引发的细胞毒性，从而达到显著减毒效果。