增殖细胞

摘要： 目的利用CRISPR/Cas9技术,构建靶向精氨酸甲基转移酶3（PRMT3）的基因编辑质粒,建立prmt3基因稳定敲除的A549细胞株,检验prmt3基因敲除效率及其对A549细胞增殖的影响。方法设计靶向prmt3基因的sgRNA序列,将合成的片段克隆到CRISPR/Cas9质粒载体Lenti CRISPR中,挑取单克隆进行测序验证。将构建好的重组质粒和空载体分别进行慢病毒包装,并感染A549细胞,利用嘌罗霉素进行筛选获得PRMT3稳定敲除细胞株,Western印迹检测细胞中PRMT3蛋白的敲除效率。将敲除PRMT3的A549细胞进行单克隆分选,分别利用平板克隆形成实验检测PRMT3敲除后细胞增殖能力,平板划痕实验检测其迁移能力,流式细胞技术检测细胞周期的变化,质谱进行蛋白质组学分析,初步筛查PRMT3可能的底物。结果经测序验证,成功构建了靶向prmt3基因的Lenti CRISPR-PRMT3-sgRNA质粒。经Western印迹检测,A549 PRMT3敲除株中PRMT3的蛋白表达水平明显降低。经单克隆分选,成功获得PRMT3完全敲除的A549细胞株。PRMT3敲除导致A549细胞的克隆形成能力明显增强,细胞迁移能力不变,细胞周期发生G2/M期阻滞。进一步用蛋白质组学的方法初步鉴定了PRMT3可能的底物。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了PRMT3稳定敲除的A549细胞株,发现PRMT3能调控细胞周期和增殖,并对其分子机制做了初步探索。

摘要： 目的 利用CRISPR/Cas9技术,构建靶向精氨酸甲基转移酶3(PRMT3)的基因编辑质粒,建立prmt3基因稳定敲除的A549细胞株,检验prmt3基因敲除效率及其对A549细胞增殖的影响.方法 设计靶向prmt3基因的sgRNA序列,将合成的片段克隆到CRISPR/Cas9质粒载体LentiCRISPR中,挑取单克隆进行测序验证.将构建好的重组质粒和空载体分别进行慢病毒包装,并感染A549细胞,利用嘌罗霉素进行筛选获得PRMT3稳定敲除细胞株,Western印迹检测细胞中PRMT3蛋白的敲除效率.将敲除PRMT3的A549细胞进行单克隆分选,分别利用平板克隆形成实验检测PRMT3敲除后细胞增殖能力,平板划痕实验检测其迁移能力,流式细胞技术检测细胞周期的变化,质谱进行蛋白质组学分析,初步筛查PRMT3可能的底物.结果 经测序验证,成功构建了靶向prmt3基因的LentiCRISPR-PRMT3-sgRNA质粒.经Western印迹检测,A549 PRMT3敲除株中PRMT3的蛋白表达水平明显降低.经单克隆分选,成功获得PRMT3完全敲除的A549细胞株.PRMT3敲除导致A549细胞的克隆形成能力明显增强,细胞迁移能力不变,细胞周期发生G2/M期阻滞.进一步用蛋白质组学的方法初步鉴定了PRMT3可能的底物.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建了PRMT3稳定敲除的A549细胞株,发现PRMT3能调控细胞周期和增殖,并对其分子机制做了初步探索.%Objective To construct plasmids for knock-out of protein arginine methyltransferase 3 (prmt3) gene using CRISPR/Cas9 gene editing method and examine the effect of prmt3 knockout on the proliferation of human non-small cell lung cancer(NSCLC)A549 cells.Methods Synthesized sgRNA oligos targeting prmt3 gene were cloned into LentiCRISPR vector and positive constructs confirmed by sequencing later .After infection with the packaged virus , A549 cells were screened with puromycin , and then the single clones were isolated .The protein level of PRMT3 in individual cell clones was analyzed with Western blot . Biological assay of clone formation , wound healing , flow cytometry assay and mass spectrometry ( MS) analysis were used to compare cellular proliferation behavior changes between control cells and cells with prmt3 gene knockout .Results The LentiCRISPR plasmids targeting prmt3 gene were confirmed by sequencing , and the PRMT3 protein level was significantly decreased in PRMT 3 KO cells compared with control cells .Depletion of PRMT3 promoted cell proliferation and led to cell cycle arrest at G 2/M phase, but had no influence on cell migration .Besides, some PRMT3 substrate candidates were identified with mass spectrum assays .Conclusion A549 cells with prmt3 gene knockout based on CRISPR/Cas9 are successfully established .PRMT3 can regulate cell cycle and proliferation .

摘要： 目的:对子宫平滑肌肿瘤增殖细胞的活性进行研究;方法:以我院40例子宫平滑肌肿瘤患者为研究对象,回顾性分析患者的临床资料,对患者的肿瘤增殖细胞活性进行观察分析;结果:usMT患者中PCNA阳性率处于85%~100%,且具有显著不同,患者的LMS之间差异性非常显著(P<0.01);对BLM患者与LM患者比较,核仁直径与核仁颗粒之间具有显著的差异性(P<0.05);但LM与LMS之间无显著差异,LM是单一型,CL为单一型,BL为单一型与混合型混合,LMS则为弥散型与聚集型;结论:在usMT患者由良性过渡到恶性的过程中,细胞的增殖活性显著升高,PCNA的阳性表达在usMT中没有鉴别意义,但可参考其阳性率进行鉴别.

摘要： 目的:观察不同浓度补肾健脾方含药血清对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响以及不同浓度补肾健脾方对小鼠卵巢组织卵泡颗粒细胞层增殖的影响。方法:采用机械分离法结合胰蛋白酶消化法体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,通过HE染色法进行细胞形态鉴定。采用MTT法检测,分别观察含质量分数5%、10%、20%补肾健脾方含药血清对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。体内实验通过给雌性小鼠灌胃不同浓度的补肾健脾方,连续灌胃4周,取卵巢组织做病理形态学观察。结果:质量分数20%、10%、5%的补肾健脾方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖作用各不相同,质量分数20%、10%的含药血清、20%的空白血清对卵巢颗粒细胞的增殖作用最明显,与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。补肾健脾方大剂量、中剂量、小剂量对卵巢卵泡颗粒细胞层的厚度呈现一定的增高趋势。结论:补肾健脾方对小鼠的卵巢颗粒细胞具有一定的增殖作用。

摘要： 三氧化二砷（As2O3）是中药砒霜的主要成分，其在临床应用已有2400多年的历史。20世纪70年代，中国血液内科医师开始用As2O3治疗早幼粒细胞白血病，获得成功；随后该药也被用于实体肿瘤的治疗，其作用机制为抑制细胞周期、促进细胞凋亡、促进细胞分化、抑制血管新生等。

摘要： Objective To investigate the effect and mechanism of dibenzazepines ( DBZ ) injection on pulmonary hypertension in rat. Methods Rat models of pulmonary hypertension were established, and 30 male rats were randomly divided into 3 groups: normal control group with saline injection, pulmonary hypertension model control group with hypoxia treatment and saline injection, DBZ group with hypoxia treatment and DBZ injection. The right ventricular pressure was determined by ultrasound cardiogram.Pulmonary arterial remodeling was detected by HE staining.Proliferation cell nuclear antigen and CCK-8 in pulmonary arterial smooth muscle cells were detected by Western blotting. Results The right ventricular pressure of pulmonary hypertension group was significantly increased compared with normal control group [(4.60±0.16) kPa vs. (3.37±0.18) kPa(P<0.01)].After hypoxia treatment, pulmonary arterial remodeling and proliferation of pulmonary arterial smooth muscle cells of the rats of pulmonary hypertension group were augmented remarkably. Rats from DBZ group showed reductions in right ventricular pressure, amelioration in pulmonary arterial remodeling and suppression in proliferation of pulmonary arterial smooth muscle cells. The proliferation of rat pulmonary artery smooth muscle cells decreased significantly in DBZ treated group [(2.073±0.064) vs.(4.392±0.013)] compared with model control group (P<0.05). Conclusion Notch pathway takes part in the process of pulmonary hypertension, and DBZ injection can significantly suppress the proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells with a protective effect on pulmonary hypertension.%目的 探讨二苯并吖庚因( DBZ)对大鼠肺动脉高压的影响. 方法 将30只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和DBZ组,每组10只. 正常对照组:腹腔注射0.9%氯化钠溶液;模型对照组:建立大鼠肺动脉高压模型,腹腔注射0.9%氯化钠溶液5 mg·kg-1;DBZ组:建立大鼠肺动脉高压模型,静脉注射DBZ 1 mg·mL-1 ·d-1. 超声心动图检测右心室压力,利用苏木精-伊红染色观察肺动脉的重塑,并利用Western Blot法检测肺组织增殖细胞核抗原的表达, CCK-8法检测肺动脉平滑肌细胞的增殖. 结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠右心室压力增高[ ( 4. 60 ± 0.16) kPa比(3.37±0.18) kPa],差异有统计学意义(P<0.01),而且肺动脉重塑及肺动脉平滑肌增殖均明显增加. 与模型对照组比较,DBZ组大鼠肺组织中右心室压力降低,肺动脉重塑以及肺动脉平滑肌增殖均显著降低. 体外实验结果表明,与模型对照组平滑肌细胞比较,低氧诱导后DBZ处理组平滑肌细胞的增殖显著降低[(2.073±0.064)比(4.392± 0.013) ] ,差异有统计学意义( P<0.05). 结论 Notch信号通路参与肺动脉高压病理过程,DBZ通过抑制Notch信号通路减少平滑肌细胞增殖,对肺动脉高压大鼠有保护作用.

摘要： 目的 明确单次热应激对小鼠睾丸增殖细胞的影响.方法 6周龄雄性C57小鼠36只,随机分为热处理组和对照组.小鼠热处理组单次43°C水浴,干预15 min,于1、7和14 d取材,HE染色观察睾丸结构形态,免疫组织化学染色检测增殖细胞定位及变化,Western Blot检测Ki67蛋白表达,并进行统计学分析.结果 应激处理组生精小管排列疏松,曲细精管中细胞数量明显减少甚至消失,细胞散落在曲细精管中;免疫组化可见,增殖细胞呈现动态变化过程,单次热应激处理后1d增殖细胞显著减少,第7、14天增殖细胞数量开始慢慢恢复;Western Blot可见KI-67表达量在热应激处理后7d表达量显著降低,第14天表达量慢慢恢复,且各组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小鼠睾丸经43°C水浴单次热应激15 min后,增殖细胞的动态恢复是后期精子生成的结构基础.

摘要： 神经损伤后，感觉神经节内发生细胞增殖。虽然通过增殖细胞的形态学和位置特点，初步推断增殖细胞为卫星胶质细胞，但是增殖细胞的具体类型和特性尚不清楚。本研究采用BrdU标记和免疫荧光双标的方法，试图解决以下3个问题：①在眶下神经CCI模型中，增殖细胞除了包括卫星胶质细胞，

摘要： 非增殖细胞将葡萄糖代谢为丙酮酸,进而进入线粒体的三羧酸循环,通过氧化磷酸化产生还原当量和ATP。然而,增殖细胞如激活的T细胞和癌细胞,它们进行糖酵解,在胞浆中将丙酮酸代谢为乳酸,有充足的氧气可以进行氧化磷酸化（OX-PHOS）。这一现象被称为Warburg效应。显然,后者在提供能量方面效率不如前者,提示这一过程可能有其他功能。

摘要： 据《新科学家》报道，瞎鼹鼠可能看不见，但是它们却给征服癌症指明了方向。鼹鼠从不得癌症，这使得它们比大多数啮齿类动物多存活7倍的时间。现在，研究人员正慢慢了解其中的原因。

摘要： 骨髓增生异常综合征(MDS)的患者在治疗后容易频繁复发,这说明目前的治疗策略未能清除使疾病延续的MDS细胞.因此,为了发展靶向治疗,需要对MDS增殖细胞的识别和调节有更好的认识.尽管体内和体外的造血实验都显示了在MDS患者中,通过免疫表型定义的造血干细胞(HSC)很重要,但是这并不能最终排除下阶段的祖细胞也可以使患者体内的恶性克隆增殖.然而,正如本文中所概括的,这些实验仍然非常重要,因为需要这些实验来阐明遗传fate-mapping的方法,以研究患者体内的的MDS增殖细胞本身的命运.这些方法证明了在低到中危MDS患者中,通过免疫表型定义的HSC是唯一的MDS增殖细胞.本文还讨论了这种方法背后的原理,以及用于帮助发展靶向MDS干细胞治疗方法的未来方向.通过阅读本文,应该:理解如何识别MDS干细胞和增殖细胞;理解如何进行MDS干祖细胞功能的体外和异种移植实验以及其局限性;理解fate-mapping策略和应用识别患者体内MDS干细胞的重要性.

摘要： 目的：研究以透明质酸钠凝胶为载体的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)对兔桡骨骨折愈合中细胞增殖的影响。方法：在兔桡骨骨折动物模型中，以透明质酸钠凝胶(sodium hyaluronate，SH)为载体，外源性应用bFGF于骨折局部。分别于术后2、4、8、12周时取材，采用DAB方法进行增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)免疫组化染色。结果：术后第2、4周时bFGF/SH组骨痂内PCNA阳性细胞比率明显高于对照组(P＜0.05)。结论：bFGF/SH在兔桡骨骨折愈合早期，能明显促进细胞的增殖。

摘要： 本发明提供能高效且简便地使单核细胞增殖的手段。本发明提供了一种在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖剂，其含有Flt‑3L、IL‑3或IFN‑γ中的一种以上。另外本发明还提供了在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖用培养基，其含有Flt‑3L、IL‑3或IFN‑γ中的一种以上。本发明的单核细胞增殖用培养基也可含有GM‑CSF。

摘要： 本发明涉及单核细胞增殖剂、单核细胞增殖用培养基、及单核细胞的制造方法。本发明提供能高效且简便地使单核细胞增殖的手段。本发明提供了一种在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖剂，其含有Flt‑3L、IL‑3或IFN‑γ中的一种以上。另外本发明还提供了在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖用培养基，其含有Flt‑3L、IL‑3或IFN‑γ中的一种以上。本发明的单核细胞增殖用培养基也可含有GM‑CSF。

摘要： 本发明针对癌细胞诱导细胞死亡，并抑制细胞增殖。本发明包含抑制GST‑π的药物和抑制稳态维持相关蛋白的药物作为有效成分，所述稳态维持相关蛋白在与GST‑π同时被抑制时呈现协同致死性。

摘要： 针对癌细胞诱导细胞死亡、抑制细胞增殖。含有抑制GST‑π及MRPL17的药物作为有效成分；或者含有抑制GST‑π的药物和抑制MRPL17的药物作为有效成分。

摘要： 本发明提供能高效且简便地使单核细胞增殖的手段。本发明提供了一种在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖剂，其含有Flt-3L、IL-3或IFN-γ中的一种以上。另外本发明还提供了在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖用培养基，其含有Flt-3L、IL-3或IFN-γ中的一种以上。本发明的单核细胞增殖用培养基也可含有GM-CSF。

摘要： 本发明针对在BRAF基因中具有突变的细胞而诱导细胞死亡及/或抑制细胞增殖。本发明含有抑制GST‑π的药物作为有效成分。

摘要： 本发明涉及细胞死亡诱导试剂、细胞增殖抑制试剂及用于治疗由细胞增殖异常导致的疾病的医药组合物。本发明针对癌细胞诱导细胞死亡，并抑制细胞增殖。本发明包含抑制GST‑π的药物和抑制稳态维持相关蛋白的药物作为有效成分，所述稳态维持相关蛋白在与GST‑π同时被抑制时呈现协同致死性。

摘要： 本发明涉及细胞死亡诱导试剂、细胞增殖抑制试剂及用于治疗由细胞增殖异常导致的疾病的医药组合物。本发明针对癌细胞诱导细胞死亡，并抑制细胞增殖。本发明包含抑制GST‑π的药物和抑制稳态维持相关蛋白的药物作为有效成分，所述稳态维持相关蛋白在与GST‑π同时被抑制时呈现协同致死性。

摘要： 针对癌细胞诱导细胞死亡、抑制细胞增殖。含有抑制GST‑π及MRPL17的药物作为有效成分；或者含有抑制GST‑π的药物和抑制MRPL17的药物作为有效成分。

摘要： 本发明涉及单核细胞增殖剂、单核细胞增殖用培养基、及单核细胞的制造方法。本发明提供能高效且简便地使单核细胞增殖的手段。本发明提供了一种在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖剂，其含有Flt‑3L、IL‑3或IFN‑γ中的一种以上。另外本发明还提供了在从单核细胞到树突状细胞的分化处理前使用的单核细胞增殖用培养基，其含有Flt‑3L、IL‑3或IFN‑γ中的一种以上。本发明的单核细胞增殖用培养基也可含有GM‑CSF。