反向斑点杂交

摘要： 目的研究自动核酸分子杂交鉴别女性人乳头状瘤病毒(HPV)感染患者基因分型的临床价值。方法回顾性分析2019年3月至2021年3月于本院进行HPV分型检测的71例女性患者临床资料。患者均接受自动核酸分子杂交、反向斑点杂交(RDB)进行HPV基因分型检测。以RDB检测结果作为参照,计算自动核酸分子杂交诊断高危型HPV感染敏感度、特异度及准确率,并计算自动核酸分子杂交诊断结果与RDB诊断结果的一致性。结果以RDB检测结果作为参照,自动核酸分子杂交诊断高危型HPV感染敏感度、特异度及准确率分别为85.71%(18/21)、96.00%(48/50)、92.96%(66/71);自动核酸分子杂交诊断结果与RDB检测结果一致性极好(Kappa值=0.829);RDB检测、自动核酸分子杂交分别检测15种高危型HPV,自动核酸分子杂交诊断1种及2种HPV型别与RDB检测完全一致共16例,分型符合率为76.19%(16/21);其中1种型别完全相同13例,占比为81.25%(13/16),2种型别完全相同3例,占比为18.75%(3/16)。结论自动核酸分子杂交诊断高危型HPV感染与RDB检测结果一致性极好,诊断敏感度及特异度、准确率较高,能够提高HPV感染基因分型鉴别效能,有利于早期发现宫颈癌,为临床早期诊治提供参考。

摘要： 目的 了解江西萍乡市人群α和β珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)的基因型携带和分布特点.方法 采用PCR扩增和反向斑点杂交技术对江西萍乡2558例地贫初筛阳性孕妇进行α和β地贫基因携带分析.结果 地贫基因携带者共1222例,携带检出率47.8％.其中α地贫基因携带者(包括纯合患者)645例,携带检出率25.2％,占总携带率52.8％,按分布高低依次是-SEA/αα、-3.7/αα、-4.2/αα;β地贫基因携带者539例,携带检出率为21.1％,占比由高至低依次是IVS-II-654、CD41-42、CD17、CD28、CD27-28、βE、CD71-72;α复合β地贫基因携带者38例,占比1.5％.结论 江西萍乡地区的α和β地贫基因携带患者比例较高,应注意孕前地贫筛查,将地贫筛查项目纳入出生缺陷防控体系中,有效控制和降低中重度地贫患儿的出生.

摘要： 为建立动物性食品中三种牛源性成分的检测体系,采用自动微流控薄膜芯片方法进行了研究.先将3种牛特定的DNA探针,固定于尼龙薄膜上,放入自动微流控薄膜芯片装置的微反应池.然后将生物素标记的含有靶DNA片段的PCR产物通过微流控系统模块加入反应池.PCR产物通过尼龙薄膜,经DNA互补作用捕获靶DNA片段,信号通过链霉亲和素连接碱性磷酸酶级联放大后显色出来.试验证明,本方法对牛源性成分检测的敏感性达到了1％的质量百分比,其稳定性和一致性可以满足实际应用的要求.

摘要： 目的：探索使用全自动核酸分子杂交平台进行人乳头瘤病毒（HPV ）基因分型检测。方法与传统反向斑点杂交（RDB）方法进行试验对比分析。结果全自动核酸分子杂交平台与传统 RDB 方法检测 HPV 分型结果一致，试验结果的各项指标达到要求。结论全自动核酸分子杂交平台自动化程度高、准确、无交叉污染，可以推广应用于 HPV 基因分型检测。

摘要： Objective To investigate the population distribution characteristics of human papillomavirus (HPV) in Yan′an area to provide a theoretical reference for the early prevention of cervical cancer and the national epidemiological survey .Methods The PCR‐reverse dot blot hybridization method was adopted to detect and classified the HPV genotypes in 4 733 cases of cervical tissues collected from the outpatients ,inpatients and women undergoing the physical examination .Results Among 4 733 screened samples ,856 cases(18 .09% ) were HPV positive .The top 5 HPV genotypes were HPV‐16(3 .8% ) ,HPV‐58(2 .3% ) ,HPV‐52(2 .0% ) ,HPV‐53(1 .5% ) and HPV‐51(1 .2% ) . The main infected subtype in various age groups was HPV‐16 ,HPV‐52 was the predominant type in the age group of 20 years old or below .In the positive samples ,the single subtype infection (82 .47% ) and the age group of over 40 years old groups(42 .86% ) were predominant .Conclusion The high risk HPV‐16 infection is the most common pat‐tern in Yan′an area .The HPV infection rate and its high‐risk subtype infection rate demonstrate the increasing trend with age increase .Women aged over 40 years old are susceptible to HPV high risk types .%目的：探讨延安地区妇女感染人乳头瘤病毒的人群分布特征，为宫颈癌的早期预防和全国的流行病学调查提供理论参考。方法采用 PCR‐反向点杂交法对4733例门诊、住院、体检妇女宫颈组织进行 HPV 基因检测及分型。结果4733例筛查样本中，HPV 阳性标本856例（18．09％）。排在前五位的 HPV 型别分别是 HPV‐16（3．8％）、HPV‐58（2．3％）、HPV‐52（2．0％）、HPV‐53（1．5％）、HPV‐51（1．2％）。各年龄组主要感染亚型是HPV‐16，20岁及以下组以 HPV‐52为主。阳性标本中以单一亚型感染（82．47％）和40岁以上年龄组为主（42．86％）。结论延安地区总体以高危型 HPV‐16感染为主，HPV 感染率和高危亚型感染率随年龄增加呈现增高趋势。40岁以上妇女为 HPV 高危型易感人群。

摘要： 目的 探讨秦皇岛地区女性感染人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)的流行和型别分布情况,为预防HPV的感染和宫颈癌的诊治提供理论依据.方法 应用导流杂交(RDB)方法对2014-10-2015-10在秦皇岛市第一医院、秦皇岛市第四医院妇科门诊及住院治疗的1 561例患者标本进行HPV分型检测.结果 1561例女性中HPV感染阳性检出率为38.57％,其中高危型别的阳性检出率29.60％(包括多重高危感染),低危型别的阳性检出率为9.03％(包括多重低危感染).在高危HPV亚型中,前三位的依次为HPV16(21.4％),52(9.47％),58(7.97％),低危型别中依次是HPV6 (11.6％),HPV11(6.15％),HPVcp8304 (4.15％).在不同的年龄段人群中,HPV阳性率有明显的差异,17～21岁年龄段人群HPV阳性率最高为44.4％,与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.05).HPV高危型单一感染检出357例,检出率为77.44％,多重感染104例,检出率为22.56％;随着宫颈病变级别的增高,高危型HPV多重感染的检出率也增高,宫颈炎组32.55％,CIN Ⅰ 37.90％,CINⅡ42.06％,CINⅢ54.81％,宫颈癌组69.14％各组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HPV16、52、58是秦皇岛地区的高危HPV感染的主要型别,HPV6是HPV低危型感染的主要型别.随着宫颈病变的恶性程度的增加,高危HPV的检出率也随之增加,多重感染的检出率也随之增加.

摘要： 目的:对82例结核杆菌痰培养阳性耐药菌株进行5种抗结核药物的耐药基因检测.方法:采用PCR-反向斑点杂交技术来检测耐药结核患者的痰标本临床分离株和耐药结核患者痰标本直接进行基因的突变检测.结果:对20例结核患者耐药菌株进行了5种药物的敏感实验,耐药高发种类以SM、RFP、INH为主,耐多药结核病(MDR-TB)的发生率也很高.结论:应用PCR-反向斑点杂交技术可快速检测结核分支杆菌对异烟肼(INH)、吡嗪酰胺(PZA)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)的耐药性,及时检测出结核突变菌株能为临床快速的治疗提供有效的治疗依据,是患者进一步治疗以及控制耐药结核病的重要手段.

摘要： 目的 建立快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization,RDBH)技术,并观察其效果.方法 针对结核分枝杆菌gyrA基因序列及常见的突变位点,分别设计1条野生型和7条突变型探针,建立RDBH技术,对临床分离结核分枝杆菌菌株进行喹诺酮耐药性检测,以比例法药敏试验和DNA测序做对照.结果 应用比例法药敏试验、DNA测序、RDBH三种方法分别检测59株喹诺酮耐药株和51株喹诺酮敏感株,与比例法相比,RDBH试验灵敏度和特异度分别为69.49％ (41/59)、100％ (51/51),符合度为83.63％;而RDBH与DNA测序结果比较,敏感度和特异度分别为97.56％ (40/41),98.55％ (68/69),符合度达98.18％.结论 RDBH技术检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药具有良好的灵敏度、特异度和符合度.

摘要： Objective To understand the gene carrying rate ,gene mutation types and distribution characteristics of thalassemia in the northeast area of Chongqing .Methods 28 633 specimens collected from the patients and individuals with physical examina‐tion in our hospital from January to December 2013 were performed the RBC parameters detection and hemoglobin electrophoresis screening .The specimens with phenotype positive were definitely verified the thalassemia type by using Gap‐PCR and reverse dot blot(RDB) .Results Among 28 633 specimens ,1 358 specimens were finally diagnosed as thalassemia with the thalassemia carrying rate of 4 .74% ,including 589 cases(2 .06% ) of α‐thalassemia and 741 cases (2 .59% ) of β‐thalassemia cases .Among the α‐thalasse‐mia genotypes ,‐αα/‐‐SEA genotype(1 .38% ) was most common ,the next was ‐αα/‐α3 .7 genotype (0 .37% ) and αα/‐α4 .2 genotype (0 .20% ) .Among the β‐thalassemia genotypes ,CD41‐42 genotype (1 .27% ) had the highest constituent ratio ,followed by IVS‐2‐654 genotype(1 .27% ) and CD17 genotype(0 .30% ) .28 cases were found to be the double heterozygote with α‐thalassemia and β‐thalassemia .Conclusion The northeast area of Chongqing is a region with the high incidence rate of thalassemia and complicated heredity .Therefore this research provides the reference information for the prevention of thalassemia ,genetic counseling and prena‐tal diagnosis .%目的：了解渝东北区人群地中海贫血（简称地贫）基因携带率、基因突变类型及分布特征。方法对2013年1～12月来该院就诊及体检共计28633例样本进行红细胞参数及血红蛋白电泳过筛，表型阳性的标本再用 Gap‐PCR 和反向斑点杂交（RDB）基因检测方法确诊地贫类型。结果28633例样本中，检出α和β地贫共1358例，地贫总携带率为4．74％。其中589例（2．06％）α地贫以αα／‐‐SEA （1．38％）型最常见，其次为‐αα／‐α3．7（0．37％） 和 αα／‐α4．2（0．20％） ；741例（2．59％）β地贫中检出14种基因突变类型，以 CD41‐42（1．27％）型构成比最高，其次为 IVS‐2‐654（0．69％）和 CD17（0．30％） ；α地贫复合 β地贫双重杂合子28例。结论渝东北区是地贫发生率较高且遗传较复杂的地区，该研究为该区预防地贫、遗传咨询、诊断等提供了参考借鉴资料。

摘要： 反向斑点杂交技术是一种可以简单、快速检测基因突变和基因缺失的技术手段。本研究应用反向斑点杂交技术检测温州地区Mtb临床分离菌株及其对4种一线抗结核药物耐药相关的基因突变(利福平耐药基因rpoB、异烟脱耐药基因katG和inhA ,链霉素耐药基因rpsL、乙胺丁醇耐药基因embB )，并与液体培养药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果进行对比，探讨其在检测Mtb及耐药性方面的临床应用价值。

摘要： 近年来结核分枝杆菌分子药敏试验新技术新方法层出不穷，如PCR-SSCP、PCR-RFLP等，但大都通过凝胶分析，一次只能分析一个基因型，不能实现连续性、集成性、高通量、一次性检测多个耐药基因而限制其推广应用。rn 鉴于此，本文通过16S rRNA PCR-SSCP对脊柱结核临床分离株进行分枝杆菌菌种鉴定，对鉴定为结核分枝杆菌的临床分离株rpsL和rrs基因进行复合PCR扩增，通过PCR-单链构象多态性(SSCP)和 PCR-反向斑点杂交及PCR-直接测序(PCR-DS)技术分析脊柱结核临床分离株rpsL和rrs基因基因，探索应用反向斑点杂交方法在快速测定结核分枝杆菌SM耐药性方面的可行性，以期深入研究rpsL和rrs基因突变与SM耐药之间的关系。

摘要： 为在没有基因芯片点样仪和扫描仪的诊断实验室操作低密度DNA反向杂交检测，将已建立的玻片为基质的芯片检测方法转换成膜基质反向斑点杂交。将玻片为基质的芯片所用25-30 mer探针修改加长到30-38mer,点于0.2μm孔径尼龙膜。扩增23SrRNA基因片段的2对PCR引物序列不变，下游引物改用地高辛标记，目标细菌DNA在常规PCR后与膜上探针杂交，结果初步证明探针特异性好，23S rRNA基因反向斑点杂交方法能够用于检测多种仔猪常见致病菌。

摘要： 鞘翅目Coleoptera长蠹科Bostriychidae和长小蠹科Platypodidae昆虫是一类危害木材的害虫，其食性复杂，钻蛀力强，具有较大的破坏性。上述两科昆虫主要分布于热带、亚热带地区，但随着国际贸易的快速增长，大大加速了其扩散和分布。

摘要： 本研究应用反向斑点杂交技术(RDB)检测本院受检对象的β地贫基因突变类型,并用SysmexXE2100血液分析仪检测了β地中海贫血患者的4个血液学指标,以了解地处β地贫高发地区的广东顺德人群的β地贫基因突变类型及其发生频率.

摘要： 本实用新型涉及一种斑点免疫或斑点杂交试剂盒。它是在一盒中装有透明板1和凹孔板2,其中透明板1上有不干胶层3、凸起4、标记6、固相载体膜片7、保护膜8;凹孔板2上有无底凹孔和孔10,两板相互匹配。使用该试剂盒能避免交叉污染,操作省时方便,结果的准确性、可比性高,且成本低,结果又可获得良好保护,运输保存方便,适用于现场和基层操作。

摘要： 本实用新型提供了一种斑点杂交反应装置和分子杂交实验系统，涉及分子杂交实验装置技术领域。该斑点杂交反应装置包括加样渗滤模块和用于给加样渗滤模块内部提供负压环境的抽滤模块；其中加样渗滤模块包括设置有样品通孔的微孔加样板，还设置有与样品通孔对应的渗滤通孔的支撑层，以及抽滤槽体；微孔加样板中设置有第一吸合单元，抽滤槽体中设置有与第一吸合单元相配合的第二吸合单元；通过配合的吸合单元吸附固定形成封闭的内腔；以及使杂交膜层和支撑层依次固定于微孔加样板下方。该装置携带方便，操作简单，能够有效防止样品间交叉污染的斑点杂交反应装置的问题。

摘要： 本发明涉及到一种多重PCR-反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法，即是一种基于多重PCR的反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法，包括了引物的设计、探针的设计、杂交试验、结果判定，能够同时检测结核分枝杆菌对RIF、INH和EMB三种药的耐药性，大大缩短了检测的时间，结果可靠。

摘要： 本发明涉及一种改进的反向斑点杂交方法，本方法通过对常规的反向斑点杂交方法在步骤上的优化，减少了反向斑点杂交实验操作的步骤和时间，而两者方法在检测效果上无差异。本发明方法在反向斑点杂交产品上的应用有助于其在临床检测领域的推广。

摘要： 本发明公开了一种新型恒温PCR‑反向斑点杂交基因检测方法，该方法利用恒温PCR法对目的基因进行扩增，并对扩增结果进行分子杂交检测。恒温PCR采用T7 RNA聚合酶、特异性T7引物和nT7引物、M‑MLV反转录酶等试剂，并以RNA为模板进行扩增，进而对扩增产物采用反向斑点杂交技术进行检测。本发明方法能够对目的基因RNA进行快速有效的检测，且具有高特异性、高灵敏度、低污染、快速、操作简单等特点，能够对各种基因的RNA进行检测，可应用于多个领域，如基因分型，耐药性检测及致病菌检测等，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种高灵敏度反向斑点杂交方法，该方法通过在金属膜表面上实现核酸杂交过程与碱性磷酸酶联过程合二为一进行，从而可以在金属膜表面直接形成碱性磷酸酶标记核酸杂交体的偶联物。本发明通过一步反应后的显色反应，根据着色的深浅以及杂交信号与金属膜的强烈色差，可以用肉眼快速判断核酸杂交的结果，极大提高了反向斑点杂交的检测灵敏度与分辨能力。

摘要： 本发明公开了一种结核分枝杆菌反向斑点杂交检测的引物、探针及其试剂盒和使用方法。所述试剂盒由PCR引物组、固定有结核分枝杆菌特异性探针的尼龙杂交膜及其他反向斑点杂交反应试剂构成。引物组由序列为TACGGTGCCCGCAAAGTG的IS1’引物和序列为AGGCGTCGGTGACAAAGG的IS2’引物构成，探针由序列为GCCTTTGTCACCGACGCCTA的Probe-B-3’探针构成。所述试剂盒的使用方法，其特征在于，可在室温下将结核分枝杆菌与其他常见病原菌鉴别开来，灵敏度高，特异性强，操作简便，对温度要求较低，为结核分枝杆菌的鉴别诊断提供了技术保障。

摘要： 本发明涉及到一种多重PCR-反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法，即是一种基于多重PCR的反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法，包括了引物的设计、探针的设计、杂交试验、结果判定，能够同时检测结核分枝杆菌对RIF、INH和EMB三种药的耐药性，大大缩短了检测的时间，结果可靠。

摘要： 本发明涉及医学体外诊断技术，具体地讲是一种反向斑点杂交基因芯片。它是在尼龙膜上分布有多个不同区域的微阵列，在每个微阵列区域中，分别固定有常见的术后颅内感染致病菌的特异性探针。可以鉴定包括：肠球菌(屎肠，粪肠)、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎伯雷克、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌。还包括有革兰氏阴性细菌通用探针、革兰氏阳性细菌通用探针。这种芯片能同时检测多种致病菌存在与否，具有诊断快速准确、特异性高、信息量大的特点，对临床诊断和流行病学筛查都有很大帮助。

摘要： 本发明涉及一种改进的反向斑点杂交方法，本方法通过对常规的反向斑点杂交方法在步骤上的优化，减少了反向斑点杂交实验操作的步骤和时间，而两者方法在检测效果上无差异。本发明方法在反向斑点杂交产品上的应用有助于其在临床检测领域的推广。