MG132

摘要： 目的探讨免疫蛋白酶体抑制剂MG132对缺氧/复氧(H/R)条件下心肌细胞的保护作用及其与核因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated Bcells,NF-κB)信号通路的相关性。方法分离培养新生SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞H/R模型。将心肌细胞随机分为对照组、MG132组、H/R组和H/R+MG132组。应用CCK-8比色法检测各组细胞增殖与活力,用二硝基苯肼法测定培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,用TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR法测定细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)mRNA水平,Western blot法测定细胞中p-IκB和p-P65的蛋白水平。结果与对照组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡增加,IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA水平升高,p-IκB和p-P65蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组相比,H/R+MG132组细胞活力明显提高,LDH活性和细胞凋亡率降低,IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平降低,p-IκB和p-P65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论心肌细胞的H/R过程能激活NF-κB,IL-1β、IL-6及TNF-α的表达也相应增加,导致细胞损伤;而MG132能抑制NF-κB的活化,继而降低NF-κB调控的IL-1β、IL-6及TNF-α的表达,减轻炎症反应,改善H/R损伤。

摘要： 目的研究蛋白酶抑制剂BMS-345541和MG-132对人脑胶质瘤细胞凋亡及活力的影响。方法将15株人脑胶质瘤细胞平均分为对照组、BMS-345541组和MG-132组,每组5株。对照组进行传代培养,BMS-345541组加入BMS-345541进行传代培养,MG-132组加入MG-132进行传代培养。采用MTT比色法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用荧光定量PCR法检测GRP78 mRNA相对表达量,采用蛋白质免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果对照组、BMS-345541组、MG-132组细胞数量分别为(730000±154)、(257000±256)、(210000±333)个,BMS-345541组和MG-132组的细胞数量明显少于对照组,且MG-132组的细胞数量明显少于BMS-345541组,差异有统计学意义(P<0.05);BMS-345541组和MG-132组细胞活力明显低于对照组,细胞凋亡率明显高于对照组,MG-132组的细胞活力高于BMS-345541组,细胞凋亡率低于BMS-345541组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、BMS-345541组、MG-132组的细胞GRP78 mRNA表达水平分别为(2.21±0.08)%、(15.98±1.58)%、(13.55±1.12)%,BMS-345541组和MG-132组的细胞GRP78 mRNA表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);BMS-345541组和MG-132组GRP78、JNK1蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论蛋白酶抑制剂BMS-345541和MG-132对人脑胶质瘤细胞的凋亡有诱导作用,可增强患者疗效。

摘要： 目的探讨抑制TGF-β_(1)/Smads通路中Smad7泛素化降解改善小鼠肺纤维化的作用机制。方法将30只雄性C57小鼠按随机数表法分为对照组、模型组及MG132干预组,每组10只。模型组及MG132干预组采用一次性气管滴入博来霉素构建肺纤维化模型,空白组小鼠不做处理。MG132干预组于造模第2天起给予Smad7泛素蛋白酶体抑制剂MG132腹腔注射,对照组及模型组给予等量生理盐水腹腔注射。28 d后观察各组小鼠肺纤维化程度(HE染色观察肺组织形态学、Masson染色观察肺组织胶原含量、ELISA检测肺组织羟脯氨酸含量);Western blotting法检测小鼠肺组织α-SMA、Smad7、CollagenⅠ蛋白表达;qRT-PCR法检测小鼠肺组织α-SMA、Smad7、CollagenⅠ、TGF-β_(1) mRNA表达;免疫沉淀Smad7蛋白,免疫印迹检测各组小鼠肺组织中Smad7泛素化水平。结果HE染色结果显示,对照组小鼠肺组织结构完整,模型组小鼠肺组织正常结构遭到破坏,MG132干预组小鼠肺组织结构破坏程度减轻;Masson染色结果显示,对照组镜下蓝紫色面积(胶原纤维沉积)最小,模型组镜下见大片蓝紫色视野,MG132干预组蓝紫色视野面积较模型组缩小;羟脯氨酸含量检测结果显示,小鼠肺组织羟脯氨酸含量模型组>MG132干预组>对照组(P均MG132干预组>对照组;Smad7蛋白表达比较,对照组>MG132干预组>模型组(P均MG132干预组>对照组(P均MG132干预组>对照组。结论抑制Smad7泛素化降解可通过上调Smad7蛋白水平增强Smad7对TGF-β1/Smads信号通路的负向调控作用,减轻肺纤维化病变。

摘要： 目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)和蛋白酶体抑制剂(MG132)对不同孕激素受体(PR)表达卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8法检测MPA、MG132单独作用后HO-8910和SKOV3细胞的增殖情况,筛选出合适的药物作用浓度和作用时间。将细胞分为对照组、MPA组、MG132组、MPA+MG132组,采用CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;倒置显微镜下观察形态学变化;免疫组化检测PR表达;Western blot检测PR-A、PR-B表达。结果:MPA对HO-8910细胞的增殖抑制作用明显强于SKOV3细胞,而MG132对两种细胞的作用相似。联合用药时,MG132可增强MPA对SKOV3细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并且伴随着明显的形态学改变,而在HO-8910细胞中不存在此作用。免疫组化及Western blot结果显示,与对照组相比,MG13、MG132+MPA组PR、PR-A和PR-B表达均提升(P<0.05)。结论:MG132可增强MPA对SKOV3细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,这可能与PR、PR-A和PR-B表达增加有关。

摘要： 目的:研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)介导SEB-1皮脂细胞凋亡中MG-132的促进机制.方法:将实验SEB-1皮脂细胞随机分为正常组、MG-132组及siRNA+MG-132组.正常组正常培养传代,MG-132组加入蛋白酶体抑制剂MG-132,siRNA+MG-132组在干扰处理TRAIL基因以后加入蛋白酶体抑制剂MG-132.采用MTT法检测细胞凋亡率.分别使用免疫印迹法(Western blotting)及实时荧光定量PCR(qPCR)法对蛋白及基因表达量进行检测.结果:24 h时正常组和MG-132组的细胞数量明显高于12 h,且正常组较高(P<0.05).12 h至24 h内,siRNA+MG-132组细胞的细胞数量较MG-132组升高幅度更大(P<0.05);随着培养时间的延长,MG-132组细胞的凋亡率逐渐升高,且高于正常组(P<0.05);相比于MG-132组,siRNA+MG-132组培养12 h和24 h后细胞凋亡率则明显降低(P<0.05).与正常组相比,MG-132组及siRNA+MG-132组细胞Bik、Bid基因表达量明显升高(P<0.05),siRNA+MG-132组的Bik、Bid凋亡基因表达量低于MG-132组(P<0.05);MG-132组及siRNA+MG-132组细胞的Caspase8、TRAIL和Bax蛋白表达量明显升高,Bcl-2蛋白表达量明显降低(P<0.05),siR-NA+MG-132组细胞蛋白表达量变化明显低于MG-132组(P<0.05).结论:蛋白酶体抑制剂MG-132对TRAIL介导的SEB-1皮脂细胞凋亡有促进作用.

摘要： 目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖与凋亡的影响.方法 qRT-PCR检测9株血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达.利用shRNA干扰HL60细胞内ADRM1表达,将不同浓度的MG132作用于ADRM1干扰前后的HL60细胞24 h,CCK-8法检测各组细胞增殖与活力;Western blot检测各组细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达;流式细胞仪分析不同浓度MG132作用下,HL60、NB4细胞凋亡情况.结果 血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达上调.成功构建ADRM1 shRNA与scrambled shRNA HL60细胞株.ADRM1基因干扰及给予MG132后,各实验组细胞增殖抑制,活力下降,此时细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达下调.随着MG132浓度提高,HL60、NB4细胞凋亡增加;MG132对HL60细胞的促凋亡作用强于NB4细胞.结论 血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA过表达;ADRM1蛋白下调后,UCH37蛋白亦下调,细胞增殖抑制;MG132通过下调ADRM1、UCH37蛋白表达,诱导AML细胞凋亡,抑制细胞增殖与活力;MG132对不同分型AML细胞的促凋亡作用存在个体差异.

摘要： 目的:观察运动后小鼠脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)蛋白酶体活性变化,探讨运动促进神经发生的机制.方法:应用荧光分光光度法检测新生小鼠(Postnantal day 0,P0)、成年小鼠(Postnantal day 90,P90)及老年小鼠(Postnantal day 540,P540)SVZ蛋白酶体活性.成年小鼠自主跑轮运动4周后检测蛋白酶体活性,通过Ki67、DCX免疫荧光染色检测SVZ神经发生水平;小鼠注射MG132,观察抑制蛋白酶体活性是否影响运动对神经发生的促进作用.结果:随年龄增长,P90、P540小鼠SVZ蛋白酶体活性较P0小鼠分别下降50.9％(P<0.01)、70.4％(P<0.01).运动后小鼠SVZ蛋白酶体活性较安静组增加39.8％(P<0.01),蛋白酶体亚单位PSMB1、PSMB2、PSMB5及PSMA3的表达水平也较安静组分别增加9.1％(P<0.05)、21.7％(P<0.01)、25.4％(P<0.01)和10.1％(P<0.05),神经发生相关指标Ki67+、DCX+细胞数量较安静组分别增加32.4％(P<0.01)和78.3％(P<0.001).小鼠侧脑室注射MG132后再进行跑轮运动,MG132-运动组SVZ区Ki67+、DCX+细胞数量较DMSO-运动组分别下降27.6％(P<0.001)和51.5％(P<0.001).结论:随年龄增长,蛋白酶体活性下降.运动可能通过提高SVZ蛋白酶体活性促进神经发生.