摘要:
目的:葎草(Humulus. L)花粉目前已成为中国夏秋季花粉症主要致敏原之一。本次课题专门针对辽沈地区葎草花粉变应原进行了研究,对葎草花粉变应原进行分离、提纯、蛋白组分分析及蛋白含量测定,筛选其主要蛋白。方法:以自然脱落法采集葎草花粉,按常规方法制备葎草花粉变应原浸液,经SDS-PAGE,测量标准蛋白和样品蛋白的迁移距离,求出葎草花粉变应原各蛋白组分的相对分子量。采用传统的凯氏定氮法和考马斯亮蓝G-250染色两种方法,测定出葎草花粉中总的蛋白含量。结果: SDS-PAGE电泳结果可见6条明显区带,分子量分别为87,66,46.8,30,23,16.6kD,其中23kD的蛋白区带颜色较深。凯氏定氮法和考马斯亮蓝染色法测得葎草花粉蛋白含量分别为5.35mg/g和2.05mg/g。结论:葎草花粉变应原含有6种主要蛋白成份,分子量分别为87,66,46.8,30,23,16.6kD,其中23kD的蛋白区带颜色深,提示含量较高。不同方法测葎草花粉蛋白含量为5.35mg/g和2.05mg/g,差别较大,提示凯氏定氮法因检测蛋白同时,还有其他含氮化合物参与反应,因此不如考马斯亮蓝染色法准确,葎草花粉蛋白含量应为2-3mg/g。