致病性试验

摘要： 多杀巴氏杆菌是一种革兰氏阴性菌,能感染家禽、猪、牛、羊等多种动物,其中,牛、羊感染多杀巴氏杆菌通常表现为出血性败血症,家禽感染可引起禽霍乱,猪感染可引起猪肺疫,成为危害畜牧行业的病原之一[1]。本研究以广西某养殖场出现呼吸道症状的病牛为研究对象,采集肺脏组织,采用细菌的分离培养、多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt扩增、血清型扩增鉴定、毒力基因(转铁蛋白tbpA、编码4型菌毛基因ptfA、血红色获得受体hasR、脂蛋白plpE、外膜蛋白ompH)的扩增、药敏试验、致病性试验等方法对细菌特性进行研究。

摘要： 为了筛选猪链球菌血清9型(SS9)强毒株并研究其生物学特性,对全国各地发病猪的病料中进行猪链球菌分离培养。通过形态学观察、革兰氏染色镜检、PCR鉴定及血清型分型确定了29株猪链球菌血清9型菌株,分别命名为SS9-1~SS9-29。通过玉米大蜡螟幼虫和Balb/c小鼠对29株猪链球菌血清9型菌株进行初筛和复筛,筛选出2株猪链球菌血清9型强毒株,分别为SS9-20、SS9-22。为进一步了解SS9-22的生物学特性,对其进行生长曲线绘制、毒力基因检测及小鼠致病性试验。结果显示,SS9-22菌株在37°C培养6 h时,菌液密度可达到最高值。毒力基因检测发现SS9-22的毒力基因型为gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(^(+))/orf2^(+)/mrp﹣/89K﹣/gdh^(+)/epf^(+)。SS9-22菌株经腹腔接种Balb/c小鼠,24 h内可引起小鼠精神萎靡、扎堆、被毛耸立、运动迟缓、死亡等临床症状,该菌株的LD50为3.2×10^(7)CFU,表明该菌株为强毒株。研究结果丰富了猪链球菌的菌种库,为猪链球菌血清9型的防控提供研究材料,为后续猪链球菌9型的致病机制研究及疫苗的开发奠定了基础。

摘要： 为确定引起哈尔滨某鸡场雏鸡死亡病原菌及其致病性和耐药性,本研究对20日龄病死雏鸡中分离到的1株疑似绿脓杆菌进行生理生化特征和分子生物学鉴定,用纸片法进行药敏试验和雏鸡攻毒试验。结果显示:该分离菌株为绿脓杆菌,具有多重耐药性,在浓度为1.0×10^(8)/mL时,仅需0.2mL就可引起21日龄雏鸡100%死亡。

摘要： 为了解副鸡禽杆菌引起的鸡传染性鼻炎在国内不同地区的流行情况及其分布,对河南、山东、河北疑似鸡传染性鼻炎发病鸡场采集的样品进行病原菌分离,通过形态、生化特性、PCR鉴定及序列比对分析、血清学分型,最终分离得到副鸡禽杆菌A型10株、B型6株、C型6株。将分离菌株接种SPF鸡进行动物回归试验,SPF鸡表现出不同程度的眶下窦及面部肿胀、流鼻涕等典型的鸡传染性鼻炎症状,发病率达到3/5~5/5,表明分离的副鸡禽杆菌毒力均较强。在组织病理学检测中,观察到呼吸道病理损伤,进一步明确了所分离菌株的致病性特点。本研究从不同地区分离到不同血清型菌株,说明副鸡禽杆菌不同血清型菌株引起的鸡传染性鼻炎在不同地区均有流行,这为后续鸡传染性鼻炎的人工感染模型建立、疫苗研发及应用奠定了基础。

摘要： 【目的】了解河南地区副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)血清7型流行菌株的毒力及耐药情况。【方法】以Hps血清7型参考菌株为对照,对6株Hps血清7型临床分离菌株进行16S rRNA基因扩增、序列分析、毒力基因检测、致病性试验和药敏试验研究。【结果】16S rRNA基因测序及相似性比对结果显示,菌株1436与参考菌株0007相似性为100%,菌株1565、1624与参考菌株0007相似性均为98.6%。系统发育树分析表明,菌株1436与参考菌株0007亲缘关系最近;菌株1624与参考菌株0007亲缘关系最远。6株临床菌株与参考菌株表现为2种毒力基因型,菌株均携带有vta1、vta2、vta3、wza、nanH、cdtA、cdtB、cdtC和espP2毒力基因,其中5株临床菌株还携带ompP2毒力基因。豚鼠致病性试验结果显示,临床菌株毒力较参考菌株表现出不同程度的增强,参考菌株不能感染豚鼠发病,未表现任何临床症状;临床菌株可感染豚鼠发病,表现出一定的临床症状,发病率为20%~40%,死亡率为0。参考菌株和临床菌株均对头孢他啶和头孢噻呋敏感,对强力霉素、氟苯尼考中介,对新霉素、卡那霉素、阿米卡星、红霉素、替米考星等耐药,且均表现出多重耐药现象。【结论】Hps血清7型临床菌株有一定的致病性,但毒力较弱,对头孢类药物敏感,有明显的多重耐药现象,临床上应注意对该血清型的防控。本研究为Hps血清7型流行病学、致病机制研究奠定了基础,为Hps血清7型的临床防控提供了参考依据。

摘要： 从青海省某养殖场牦牛肺脏中分离出3株细菌,通过生化试验、16S rDNA序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验检测。结果发现,这3株细菌为革兰氏阳性链球菌,与副乳房链球菌(Spu)同源性为99%;分离株在TSA琼脂培养基上呈光滑圆形,半透明的菌落,在血琼脂上呈α溶血;其中Spu-1分离株对小鼠具致病性;药敏试验显示,分离菌株均对链霉素耐药,对红霉素、阿奇霉素、万古霉素和麦迪霉素敏感。研究结果为了解牦牛副乳房链球菌的流行情况提供了新资料。

摘要： 大肠杆菌感染是蛋鸡养殖过程中一种常见的细菌性传染性疾病,通常会导致蛋雏鸡出现急性败血症,成年蛋鸡感染后会出现滑膜炎症、腹腔膜炎症以及输卵管炎症等,严重降低了蛋鸡的机体健康状况和产蛋性能.本文将对蛋鸡养殖过程中大肠杆菌感染的实验室诊断措施进行介绍,旨在为蛋鸡大肠杆菌感染疾病的精准诊断以及科学防治带来帮助.

摘要： 为探究从四川某动物园1例病死浣熊肝脏中分离到的1株细菌的特性和耐药程度,本试验采用病原分离、革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA测序、致病性试验、药敏纸片扩散法及耐药基因扩增的方法对该分离株进行了形态学及生化鉴定、致病能力和耐药程度分析.结果显示,分离株在普通LB培养基上呈现表面光滑、圆形凸起、边缘整齐、针尖大小的半透明菌落.经革兰氏染色在油镜下观察到蓝紫色球菌,测序结果与GenBank登录号为KY003107.1粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的同源性高达99.5％,形态学与生化鉴定特性与粪肠球菌特性相符.致病性试验表明,该菌可导致肝细胞肿胀、变性,具有一定的致病能力;药敏纸片和耐药基因扩增试验表明,该菌对14种常见的抗生素头孢西丁、头孢哌酮、头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、氨苄西林、卡那霉素、链霉素、奈替米星、丁胺卡那、阿奇霉素、红霉素、多西环素、四环素耐药,仅对万古霉素和庆大霉素中度敏感.四环素耐药基因tetC检测为阳性;tetM、tetA检测为阴性,氨基糖苷类耐药基因aac(6′)/aph(2″)检测为阳性,aph(3')-Ⅲ、ant(6)-Ⅰ检测为阴性;大环内酯类耐药基因ermB检测为阳性,ermA、ermC检测为阴性;万古霉素耐药基因vanA、vanB和β-内酰胺类耐药基因TEM检测均为阴性.该试验从浣熊肝脏分离的粪肠球菌表现出多重耐药特性并具有一定的致病能力,结果可为动物园临床肠球菌感染的病例提供一定的药物选择参考,制定合理的感染防治方案.

摘要： 为了解猪链球菌血清9型菌株KQ-1株、KQ-2株的生物特性,对其进行了菌种鉴定、生长曲线绘制、毒力因子鉴定和小鼠致病性试验.首先采用革兰氏染色、PCR鉴定的方法对2株菌进行菌种鉴定,然后利用猪链球菌的主要毒力基因mrp、epf、sly、gadph、orf2、fbps、89k的引物对2株菌的毒力基因进行鉴定;将2株菌在TSB培养基(含10％新生牛血清)中进行培养,绘制其生长曲线,初步了解这2株菌的生长特性;选取45只健康的昆明鼠注射2株菌的菌液,进行致病性试验,了解其致病性.结果显示,KQ-1株、KQ-2株革兰氏染色呈阳性,PCR鉴定结果为猪链球菌血清9型;2株菌均在37°C培养6 h时菌液密度达到最高值.对2株菌毒力基因的鉴定结果如下:KQ-1株的基因型为mrp+/epf-/sly+/gadph+/orf2-/fbps-/89k-,KQ-2株的基因型为mrp-/epf-/sly-/gadph+/orf2+/fbps-/89k-;对2株菌的小鼠致病性试验表明,2株菌均为强毒株.

摘要： 从青海省某养殖场牦牛肺脏中分离出3株细菌,通过生化试验、16S rDNA序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验检测.结果发现,这3株细菌为革兰氏阳性链球菌,与副乳房链球菌(Spu)同源性为99％;分离株在TSA琼脂培养基上呈光滑圆形,半透明的菌落,在血琼脂上呈α溶血;其中Spu-1分离株对小鼠具致病性;药敏试验显示,分离菌株均对链霉素耐药,对红霉素、阿奇霉素、万古霉素和麦迪霉素敏感.研究结果为了解牦牛副乳房链球菌的流行情况提供了新资料.

摘要： 从济南某猪场急性死亡的病例中,采集猪心血、肺、肝、脾和淋巴结等组织器官,通过病原分离,药敏试验,猪链球菌2型荚膜多糖基因(cps2J)的PCR检测及动物试验分别对其进行病原、药物敏感性、血清型和生物学特性等初步研究。结果表明:分离菌的形态、培养特性及生化特性符合链球菌的特点,cps2J基因PCR扩增均出现长度为675bp的特异性条带,其核苷酸序列与GenBank中猪链球菌2型参考菌株的cps2J基因序列同源性达98%～100%,由此证明其病原菌为猪链球菌2型。对小鼠的致病性试验表明能100%致死小鼠。

摘要： 为了鉴定引起雏鸡关节炎及死亡的病原菌,无菌采集病死雏鸡的肝脏、关节渗出液等病料组织,通过细菌常规的分离鉴定和16SrRNA PCR等方法进行分离鉴定,分离菌株被鉴定为金黄色葡萄球菌.致病性试验结果表明,分离菌株对雏鸡具有很强的致病性.药敏试验结果显示,分离菌株对头孢曲松、头孢拉啶、环丙沙星等5种药物敏感,对氨苄西林、阿莫西林、丁胺卡娜等5种药物中敏,对青霉素、新霉素、庆大霉素等4种药物耐药.

摘要： 经分离、鉴定确认北京平谷地区的桃褐腐病菌是果生丛梗孢(Monilia fructicola),通过致病性试验表明:桃褐腐病菌的粗果胶酶液和粗角质酶液及其液体培养滤液对离体桃无致病作用,而病原菌菌片、病原菌的孢子悬液、病桃组织滤液均能使离体桃发病.桃褐腐病菌不但可以从伤口侵染,而且可以直接侵染表皮导致桃果实发病,但发病时间,病斑直径、发病率有差异.测定桃果实中果胶质含量,发现病桃组织中果胶质含量比未发病的少,说明病原菌分泌的果胶酶分解了桃组织中的果胶,由此可以初步断定,果胶酶是桃褐腐病菌的一个致病因子.

摘要： 本文从疑似鸡传染性支气管炎的病料中分离到1株鸡传染性支气管炎病毒,命名为JS3,对分离病毒进行了鸡胚致病性试验、对鸡新城疫病毒的干扰试验、血凝特性试验、动物回归试验等生物特性鉴定.对IBV S1基因高变区特异性片段RT-PCR扩增、克隆和序列分析.结果显示:分离毒株的传代物均有明显的致鸡胚矮小化作用；分离病毒在鸡胚上可干扰新城疫病毒Lasota株的增殖；病毒无直接血凝性,经1％胰酶处理后可凝集鸡红细胞；动物同归试验死亡鸡肾脏病变明显；从死亡鸡肾脏中扩增出特异的S1基因片段.序列分析显示,分离株JS3与其它毒株的同源性均较低,说明分离毒株JS3和其它毒株(包括疫苗株)存在差异。

摘要： 白菜[Brassica campestris L.spp.chinensis(L.)Makino var.communis Tsen et Lee]属于十字花科( Cruciferae)芸薹属(Brassica),俗称小白菜、青菜.目前国内外已报道白菜上的真菌病害15种.2012年2月在安徽省多个白菜种植地进行病害发生情况调查,发现一种“叶腐病”在当地普遍严重发生.发病植株叶部有不规则形灰白色病斑,呈萎蔫腐烂状,发生严重时,60％～70％的白菜叶部有此症状,严重影响其商品价值.因此采集病样标本进行显微诊断、病原菌分离及致病性试验,旨在明确其致病菌,为其防治提供理论依据.

摘要： 氟喹诺酮类药物是第三代喹诺酮类药物，是自1984年诺氟沙星上市以来相继涌现出的一大类含氟的喹诺酮类衍生物的总称，环丙沙星和氧氟沙星等都属于该类药物。目前，鸡杆菌对氟喹诺酮类药物已产生耐药性，致使药物治疗效果较差，本研究选取对诺氟沙星和环丙沙星的耐药及敏感的鸡杆菌菌株，利用PCR方法分别扩增其相关的耐药基因片段gyrA和parC并进行对比，以期对鸡杆菌氟喹诺酮类药物耐药性与gyrA和parC基因突变之间的关系进行研究。

摘要： 为了解动物园动物及其环境中常见病原菌的分布情况,采用菌落计数、细菌分离培养及动物致病性试验等方法,对南京市红山森林动物园的部分动物生存环境的空气、土壤、水进行检测。结果表明，动物舍内外环境空气中不同的培养基上细菌菌落总数：在NA培养基上平均是4.53×103cfu/m3，在MSA上平均3.46×103 cfu/m3，在MAC上平均1.45×103 cfu/m3，在SS上平均0.41×103 cfu/m3，在血培养基上平均5.01×103 cfu/m3。各种动物舍内菌落总数均大于舍外菌落总数。环境水中在各种培养基细菌菌落总数：在NA上平均0.063×103cfu/ml，在MSA上平均0.064×103cfu/ml，在MAC上平均0.08×103 cfu/ml，在SS上无菌生长，在血培养基上平均0.126×103 cfu/ml。环境土壤中在各种培养基细菌菌落总数：在MAC上平均15.48×103 cfu/g，在SS上平均11.57×103cfu/g，在血培养基上平均28.95×103cfu/g。从126份样品中分离到16个菌种127个菌株，其中葡萄球菌有69株，占54.33%（69/127）；肠杆菌有51株，占40.16%（51/127）；链球菌有7株，占5.51%（7/127）。通过动物实验得知，分离得到的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、臭鼻克雷伯氏菌、粘质沙雷氏菌、假结核耶氏菌、福氏志贺氏菌1-5型、聚团肠杆菌和血链球菌等8种致病性较强，松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌、解糖葡萄球菌和变异链球菌等4种致病性较弱，耳葡萄球菌、头葡萄球菌、施莱福葡萄球菌和唾液链球菌等无致病性。动物舍内外环境中葡萄球菌是主要污染菌。

摘要： 本文研究了鸭疫里默氏杆菌的生化特性、药敏情况、血清型和致病性。从扬州郊区发病鹅场分离到一株细菌，经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定、玻片凝集试验，确定为Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌。进行了病毒分离试验，经过血凝试验和琼脂扩散试验，没有发现鹅的新城疫、禽流感和小鹅瘟病毒。动物致病性试验表明，鸭疫里默氏杆菌分离菌株可以通过静脉注射、皮下注射和滴鼻三种途径感染鹅，出现100%的死亡率，说明分离株对扬州鹅具有很强的致病性，同时提示我们对于鹅的免疫计划中也应该充分考虑到鸭疫里默氏杆菌的致病和传播。

摘要： 本研究从广东省某猪场患有明显呼吸道症状的仔猪肺脏组织中分离到一株病毒,利用RT-PCR、基因序列分析,确定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为TM株。Nsp2基因序列分析发现,与美洲型标准毒株VR-2332相比,在481位和532-560位共有30个氨基酸缺失。此外,TM株较之近年来国内出现的PRRSV变异株在22-42位氨基酸出现22个氨基酸的独有缺失。病毒猪体回归试验表明,该分离株可引起仔猪出现明显的临床症状和病毒血症,证实我国已经出现新缺失高致病性PRRSV毒株。

摘要： 将AEV Van Roekel(VR)株毒种用雏鸡及鸡胚进行繁殖与传代，制备了不同批次的鸡源及胚源毒种，将这些毒种以不同接毒剂量经脑内接种8-10周龄的SPF鸡，进行致病性试验。结果表明，不同批次鸡源毒种，其致病性均很强，接种后可引起SPF鸡出现严重的禽脑脊髓炎症状，而不同批次胚源毒种，其致病性存在着明显的差异，有强有弱。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠致病性大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑2，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12661BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明属于海水养殖病害防控技术领域，具体涉及一种强致病性美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的快速鉴定方法。通过设计的特异性引物进行荧光定量PCR反应，根据荧光出现的结果定性检测强致病性和非强致病性美人鱼发光杆菌美人鱼亚种。本发明可以实现对强致病性和非致病性美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的快速区分，从而为养殖生产中有效防控强致病性美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的感染提供保障技术。

摘要： 本发明公开一种可区分检测低致病性和高致病性莫氏巴贝虫的引物及检测试剂盒。本发明的引物序列和试剂盒内的引物分别为：SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5的引物和探针引物SEQ ID No.3和SEQ ID No.6。使用本发明进行检测具有灵敏度高、速度快、特异性强等优点，可在病原体的定性和定量检测方面得到了广泛应用。

摘要： 本发明适用于微生物技术领域，提供了一种致病性大肠杆菌检测试剂盒及致病性大肠杆菌检测方法。该试剂盒包括含有引物与荧光探针的PCR反应液。本发明致病性大肠杆菌检测试剂盒及致病性大肠杆菌检测方法能与传统的培养法相比具有快速、灵敏、安全等优点，可应用于致病性大肠杆菌的检测。

摘要： 本申请公开涉及局部病变疾病通过局部给药的治疗，非致病性细胞相关组分的应用以及包含非致病性细胞相关组分的药物组合物。具体而言，本申请公开涉及细胞相关组分作为可提供包括协同作用在内的治疗作用的活性成分应用于局部病变疾病治疗、包含该细胞相关组分的药物组合物、以及药物试剂盒。

摘要： 本发明涉及5种致病性沙门氏菌(鼠沙门氏菌、乙型副沙门氏菌、甲型副沙门菌、伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌)的flic基因的特异性片段，设计用于特异扩增的5对上下游引物，以及不同大小的扩增产物(鼠沙门氏菌‑376bp、乙型副沙门氏菌‑257bp、甲型副沙门菌‑306bp、伤寒沙门氏菌‑474bp、肠炎沙门氏菌‑170bp)，5对引物可以单独或组合进行使用，分别对对应的致病性沙门氏菌进行扩增。5种引物可用于致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒、多重致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒、多重致病性沙门氏菌PCR检测试剂盒中，以及采用以上试剂盒的PCR扩增方法以及PCR检测试剂盒。

摘要： 本发明涉及5种致病性沙门氏菌(鼠沙门氏菌、乙型副沙门氏菌、甲型副沙门菌、伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌)的flic基因的特异性片段，设计用于特异扩增的5对上下游引物，以及不同大小的扩增产物(鼠沙门氏菌‑376bp、乙型副沙门氏菌‑257bp、甲型副沙门菌‑306bp、伤寒沙门氏菌‑474bp、肠炎沙门氏菌‑170bp)，5对引物可以单独或组合进行使用，分别对对应的致病性沙门氏菌进行扩增。5种引物可用于致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒、多重致病性沙门氏菌PCR扩增试剂盒、多重致病性沙门氏菌PCR检测试剂盒中，以及采用以上试剂盒的PCR扩增方法以及PCR检测试剂盒。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠致病性大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑2，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12661BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明公开一种可区分检测低致病性和高致病性莫氏巴贝虫的引物及检测试剂盒。发明的引物序列和试剂盒内的引物分别为：SEQ ID No.1、SEQ ID No.2 、SEQ ID No.4、 SEQ ID No.5的引物和探针引物 SEQ ID No.3和SEQ ID No.6。使用发明进行检测具有灵敏度高、速度快、特异性强等优点，可在病原体的定性和定量检测方面得到了广泛应用。

摘要： 本发明适用于微生物技术领域，提供了一种致病性大肠杆菌检测试剂盒及致病性大肠杆菌检测方法。该试剂盒包括含有引物与荧光探针的PCR反应液。本发明致病性大肠杆菌检测试剂盒及致病性大肠杆菌检测方法能与传统的培养法相比具有快速、灵敏、安全等优点，可应用于致病性大肠杆菌的检测。