病毒鉴定

摘要： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术最早由田中耕一于1987年提出[1-2],之后逐渐发展并应用于病原微生物的鉴定[3]。MALDI-TOF MS技术凭借其简单快速、高效准确等优点[4],已广泛应用于食品[5]、水产[6]、人类及兽医临床[7-8]等多个领域的病原微生物鉴定工作,在细菌、真菌和病毒鉴定方面,展现了巨大的应用潜力[9]。

摘要： 为探明广东省韶关市某大口黑鲈(Micropterus salmoides)养殖场的大口黑鲈幼鱼大量死亡的原因,对患病鱼进行临床观察,并从细菌学、寄生虫学、病毒学三方面进行检测,排除细菌和寄生虫感染的可能性后,通过RT-PCR检测、细胞分离培养、人工感染、组织病理切片苏木精-伊红(H&E)染色、超薄切片透射电镜观察、系统发育树分析,初步确定分离得到1株大口黑鲈弹状病毒(micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV),命名为大口黑鲈弹状病毒韶关株(MSRV-SG01)。人工感染试验结果显示,试验鱼2 d内出现死亡,并伴随出血、烂尾、拖便等临床症状,7 d内死亡率达100%,通过组织病理学切片观察到病鱼的肝脏、脾脏均呈现大面积坏死,与自然患病鱼症状相符。根据G蛋白氨基酸序列,将分离到的MSRV-SG01毒株与GenBank中已报道的其他的弹状病毒进行系统发育树分析比对,结果显示,MSRV-SG01毒株与MSRV-FJ985、MSRV-YH01、SCRV聚为一类,且与已报道的MSRV-FJ985毒株、MSRV-YH01毒株同源性高达97%以上。通过以上的试验分析,确定幼鱼大量死亡的原因为MSRV感染。

摘要： 为明确上海地区'红美人'柑橘的病毒种类,2020年4月在崇明、金山、奉贤、嘉定、闵行和浦东采集疑似病毒感染的叶片样品11份,采用小RNA深度测序技术结合RT-PCR对不同来源的混合样品进行病毒种类鉴定.结果 表明,样品中含有柑橘衰退病毒Citrus tristeza virus (CTV)、柑橘黄化脉明病毒Citrus yellow vein clearing virus(CYVCV)、柑橘树皮裂纹类病毒Citrus bark cracking viroid(CBCVd)和柑橘类病毒Ⅴ Citrus viroid Ⅴ(CVd-Ⅴ).同时发现,上海地区'红美人'柑橘病毒复合侵染现象普遍.基于CTV和CYVCV的CP全长基因及CBCVd和CVd-Ⅴ全基因组序列系统进化分析结果表明:除了CYVCV的分离物与地理来源具有明显的相关性外,其余病毒及类病毒均没有严格的地域相关性.研究结果为开展'红美人'柑橘种苗病毒检测及病毒病的防治奠定基础.

摘要： 对我国江苏地区养殖锦鲤暴发性鲤疱疹病毒病(koiherpes virus disease,简称KHVD)的病原进行鉴定.2018年5月,江苏省一锦鲤养殖场暴发不明原因传染疾病,病鱼肝、脾、肾脏中未分离到细菌.透射电镜观察发现大量球状病毒粒子.提取自然发病鱼的鳃、肾、脾、肝组织DNA作为模板进行PCR检测,结果显示为阳性.Blast比对结果显示,扩增序列与锦鲤疮疹病毒(koi herpesvirus,简称KHV)胸苷激酶(thymidine kinase,简称TK)基因和KHV DNA聚合酶(SPH)基因核苷酸序列同源性为99％.对病毒株的TK基因全长序列进行系统发育分析,证实该毒株属于KHV亚洲型毒株.

摘要： 为明确侵染广东省冬种马铃薯的病毒种类及优势病毒,结合小RNA深度测序技术及RT-PCR检测方法,对采集于广东省冬种马铃薯7个主产区的189份疑似病样进行检测分析.结果 表明,经小RNA深度测序技术检测马铃薯病毒病混合样,发现存在马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)和马铃薯卷叶病毒(Potato leaf-roll virus,PLRV)3种病毒.进一步设计3种病毒的特异性引物并利用国内已报道的其它5种马铃薯病毒的特异性引物进行RT-PCR检测,发现189份马铃薯病毒病疑似病样中仅检测到PVY、PVS和PLRV这3种病毒,检出率依次为75.13％、10.05％和4.76％,且3种病毒在马铃薯上还存在复合侵染,复合侵染率为14.19％,其中PVY在各马铃薯产区均可检测到.表明侵染广东省冬种马铃薯的病毒为PVY、PVS和PLRV,其中PVY是优势病毒.

摘要： 近年来水产养殖生产中病毒性疾病的发生越来越严重,所以对水产动物病毒的深入研究成为水产研究者的一个重要课题.随着宏基因组学技术的不断发展,以及测序成本的快速下降,基于宏基因组学技术的水产动物病毒鉴定技术逐渐成为水产动物病毒鉴定的主要技术之一.本文总结了基于宏基因组学的水产动物病毒鉴定技术的主要方法,详细综述了鉴定技术的实现流程,评述了几种基于宏基因组学的水产动物病毒鉴定技术的优缺点,并对基于宏基因组学的水产动物病毒鉴定技术的未来发展方向进行了展望.

摘要： The 284 cucumber samples affected by virus in the fields of Shunyi and Changping Districts of Beijing,Shouguang of Shandong Province,and Shenzhen of Guangdong Province,were identified on their species of virus diseases and detected them with virus antibodies against 5 cucumber viruses,including Cucumber mosaic virus,Watermelon mosaic virus,Zucchini yellow mosaic virus,Cucumber green mottled mosaic virus and Papaya ring spot virus by ELISA method.The results showed that CMV,WMV,ZYMV were detected on the infected leaves of 126 and 124 samples collected in Shunyi and Changping Districts of Beijing.Among them the detection rate of CMV was the highest,all was 100.00% in Shunyi and Changping.The detection rate of ZYMV were 80.95% and 66.94%,respectively.The detection rate of WMV was the lowest - 51.59% and 53.22%,respectively.Only CMV was detected on the infected fruit.CMV,WMV,ZYMV,PRSV 4 viruses were detected on the infected leaves of 28 samples collected in Shouguang of Shandong Province.The detection rates of these 4 viruses were 100.00%,35.71%,35.71% and 17.86%,respectively.CMV,WMV,PRSV were detected on the infected leaves of 6 infected cucumber samples collected in Shenzhen.The detection rates were 100.00%,50.00% and 50.00%,respectively.Investigation discovered that the phenomenon of 2 and over 2 kinds of virus mixed infection on cucumber was very common in Shunyi and Changping Districts of Beijing, Shouguang of Shandong and Shenzhen of Guangdong.%采集北京顺义和昌平、山东寿光及广东深圳等地田间感染病毒病的黄瓜材料284份,利用黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒(WMV)、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)及番木瓜环斑病毒(PRSV)5种黄瓜病毒抗体采用酶联免疫吸附(ELISA)法对其进行病毒病种类鉴定.结果表明,顺义和昌平采集到的126份和124份病毒样品,均在其叶片上检测到CMV、WMV、ZYMV 3种病毒,其中CMV检出率最高,均为100.00%;其次是ZYMV,检出率分别为80.95%和66.94%;WMV检出率最低,分别为51.59%和53.23%;在感病果实上只检测到CMV.在寿光采集的28份发病叶片中,检测到CMV、WMV、ZYMV、PRSV 4种病毒,其检出率分别为100.00%、35.71%、35.71%、17.86%.在深圳采集的6份黄瓜感病材料中,检测到CMV、WMV、PRSV 3种病毒,其检出率分别为100.00%、50.00%、50.00%.调查结果还发现,在北京顺义和昌平、山东寿光及广东深圳均存在2种或2种以上病毒复合侵染的现象.

摘要： 旨在从牛、羊监控动物群中,对流行于我国的帕利亚姆血清群病毒(PALV)进行分离、鉴定与序列特征分析,明确我国流行毒株与国外毒株之间的关系.自监控动物采集的PALV阳性血液接种BHK-21细胞进行病毒分离;对所分离PALV毒株的Seg-7与Seg-2基因节段进行扩增、测序与序列分析;通过高分辨率琼脂糖凝胶电泳分析不同血清型PALV代表毒株基因组的“电泳带型”特征;通过免疫荧光与中和试验分析不同血清型PALV的阳性血清之间的交叉反应特性与中和活性.试验结果如下:2012-2016年,在云南、广西、广东共计分离出19株PALV;Seg-2与Seg-7测序与系统发育分析显示,分离毒株分属Chuzan virus(CHUV)、D'Aguilar virus(DAV)与Bunyip Creek virus(BCV)三种血清型,不同血清型毒株均与日本毒株具有最近的亲缘关系,而与澳洲、非洲毒株亲缘关系较远.病毒基因组电泳结果显示PALV基因组呈现“3-3-4”的电泳带型特征.免疫荧光结果显示针对CHUV的多克隆抗体可使感染CHUV、DAV与BCV的BHK-21细胞呈现特异性荧光.血清学中和试验显示,CHUV、DAV与BCV三种病毒的阳性血清之间无交叉中和保护作用.本研究报道了2012-2016年中国PALV的分离与Seg-2、Seg-7序列特征,并首次报道了PALV的DAV与BCV两种血清型病毒在我国的分离,研究结果将有助于掌握我国PALV的分布与遗传特征,为诊断试剂的开发、流行病学调查与致病性研究提供科学依据.%The aim of this study was to isolate and identify the Palyam serogroup virus (PALV) prevalent in China from the sentinel herds and to clarify the relationship between the native strains and the foreign strains.For virus isolation,PALV-positive blood samples were collected from sentinel herds and blind passed on BHK-21 cells.Specific primers targeting Seg-2 and Seg7 of PALV were designed for identification and sequence analysis of the isolated virus by RT-PCR amplification.Genomic RNA of the isolated virus was extracted from the infected cells and determined by high resolution agarose gel electrophoresis.Cross-reactivity and cross-neutralizing activity of positive sera from different serotypes of PALV were analyzed by immunofluorescence and serum neutralization test.The results were as follows:During 2012 to 2016,a total of 19 strains of PALV were isolated form Yunnan,Guangxi and Guangdong provinces.Seg-2 and Seg7 sequencing and phylogenetic analysis showed that the Chinese strains of PALV belonged to Chuzan virus (CHUV),D'Aguilar virus (DAV) and Bunyip Creek virus (BCV) and showed closest genetic relationship with the Japanese strains,but showed relative far relationship with the Australian and African strains.High resolution agarose gel electrophoresis showed that the genomic dsRNA of different serotypes of representative PALV strains presenting "3-3-4" banding characteristics.Immunofluorescence results showed that BHK-21 cells infected with CHUV,DAV or BCV presented specific fluorescence when using polyclonal antibody against CHUV as detection antibodies.Serological neutralization tests showed that there was no cross-neutralization protection between the positive sera of CHUV,DAV and BCV viruses.This study reported the molecular characteristics of PALV isolated in China from 2012 to 2016.It's the first time,we reported the DAV and BCV isolated in China.These results will be helpful to better understand the distribution and genetic characteristics of Chinese PALV and provide basis for development of diagnosis reagent and carried out epidemiological and pathogenic research on PALV.

摘要： 草莓是蔷薇科多年生草本植物，果实柔软多汁，营养丰富，素有“水果皇后”的美称。但由于栽培草莓都是通过无性繁殖，病毒侵染之后，随同无性繁殖材料传播扩散。无性繁殖数量越大，病毒传播速度也越快，且无有效的药物进行防治。病毒病已成为草莓主要病害，严重阻碍了草毒产业的发展，通过简述了草莓病毒病的研究现状,并就草莓的脱毒技术及病毒鉴定、防治等方面进行了综述.

摘要： 从2010年4月起,中国东南部分省份的部分鸭场发生一种以产蛋严重下降为主要特征的传染病,并迅速蔓延至我国各主要养鸭地区,给养鸭业造成巨大的经济及损失.本文通过对该病的流行病学调查、病原分离和动物感染回归实验证明其病原为一种与Tembusu病毒密切相关的黄病毒,并参照黄病毒命名惯例将其暂命名为BYD病毒,并在国际上率先给予报道,引起了广泛关注.本研究以BYDV-JX-SP分离株为基础,构建了该病毒的感染性cDNA克隆,以期为深入开展病毒的分子致病机制和防治技术研究奠定了基础.

摘要： Ⅰ亚群禽腺病毒(FAVⅠ)主要引起的病症是鸡的包涵体肝炎(IBH),是一种急性传染病,以病鸡死亡突然增多,严重贫血、黄疽、肝脏肿大出血,肝细胞核内有包涵体为主要特征.该病在我国目前已呈现多发,严重危害我国养殖业,造成巨大的经济损失,成为人们关注的重点.本研究通过对疑似出现包涵体肝炎的发病鸡群进行病毒分离鉴定,获得一株Ⅰ亚群腺病毒,并将该病毒回归鸡体,对病变器官进行病理切片观察,为该病的研究提供了理论基础.

摘要： Ⅰ亚群禽腺病毒(FAVⅠ)主要引起的病症是鸡的包涵体肝炎(IBH),是一种急性传染病,以病鸡死亡突然增多,严重贫血、黄疽、肝脏肿大出血,肝细胞核内有包涵体为主要特征.该病在我国目前已呈现多发,严重危害我国养殖业,造成巨大的经济损失,成为人们关注的重点.本研究通过对疑似出现包涵体肝炎的发病鸡群进行病毒分离鉴定,获得一株Ⅰ亚群腺病毒,并将该病毒回归鸡体,对病变器官进行病理切片观察,为该病的研究提供了理论基础.

摘要： Ⅰ亚群禽腺病毒(FAVⅠ)主要引起的病症是鸡的包涵体肝炎(IBH),是一种急性传染病,以病鸡死亡突然增多,严重贫血、黄疽、肝脏肿大出血,肝细胞核内有包涵体为主要特征.该病在我国目前已呈现多发,严重危害我国养殖业,造成巨大的经济损失,成为人们关注的重点.本研究通过对疑似出现包涵体肝炎的发病鸡群进行病毒分离鉴定,获得一株Ⅰ亚群腺病毒,并将该病毒回归鸡体,对病变器官进行病理切片观察,为该病的研究提供了理论基础.

摘要： Ⅰ亚群禽腺病毒(FAVⅠ)主要引起的病症是鸡的包涵体肝炎(IBH),是一种急性传染病,以病鸡死亡突然增多,严重贫血、黄疽、肝脏肿大出血,肝细胞核内有包涵体为主要特征.该病在我国目前已呈现多发,严重危害我国养殖业,造成巨大的经济损失,成为人们关注的重点.本研究通过对疑似出现包涵体肝炎的发病鸡群进行病毒分离鉴定,获得一株Ⅰ亚群腺病毒,并将该病毒回归鸡体,对病变器官进行病理切片观察,为该病的研究提供了理论基础.

摘要： Ⅰ亚群禽腺病毒(FAVⅠ)主要引起的病症是鸡的包涵体肝炎(IBH),是一种急性传染病,以病鸡死亡突然增多,严重贫血、黄疽、肝脏肿大出血,肝细胞核内有包涵体为主要特征.该病在我国目前已呈现多发,严重危害我国养殖业,造成巨大的经济损失,成为人们关注的重点.本研究通过对疑似出现包涵体肝炎的发病鸡群进行病毒分离鉴定,获得一株Ⅰ亚群腺病毒,并将该病毒回归鸡体,对病变器官进行病理切片观察,为该病的研究提供了理论基础.

摘要： 猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征的急性传染病,猪为其主要宿主和传染源,一旦发生就会给畜牧养殖业造成巨大损失.该文采集某疑似病猪伪狂犬病料,分别进行细胞培养、电镜观察、PCR电泳、酶联免疫等方法进行检验,结果表明该病猪确认感染了伪狂犬病毒,本文还对PR实验室检测的主要方法进行对比,分析其优缺点,以供同行参考.

摘要： 猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征的急性传染病,猪为其主要宿主和传染源,一旦发生就会给畜牧养殖业造成巨大损失.该文采集某疑似病猪伪狂犬病料,分别进行细胞培养、电镜观察、PCR电泳、酶联免疫等方法进行检验,结果表明该病猪确认感染了伪狂犬病毒,本文还对PR实验室检测的主要方法进行对比,分析其优缺点,以供同行参考.

摘要： 猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征的急性传染病,猪为其主要宿主和传染源,一旦发生就会给畜牧养殖业造成巨大损失.该文采集某疑似病猪伪狂犬病料,分别进行细胞培养、电镜观察、PCR电泳、酶联免疫等方法进行检验,结果表明该病猪确认感染了伪狂犬病毒,本文还对PR实验室检测的主要方法进行对比,分析其优缺点,以供同行参考.

摘要： 本发明公开了一种用于鉴定牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。本发明保护引物对甲和引物对乙和引物对丙组成的引物组合。引物对甲由序列1所示的引物F1和序列2所示的引物R1组成。引物对乙由序列3所示的引物F2和序列4所示的引物R2组成。引物对丙由序列5所示的引物F3和序列6所示的引物R3组成。采用引物对甲和引物对乙和引物对丙，通过三重二温式PCR检测牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒，具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点，可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明为牛病的防控提供了新的技术方法，具有很高的临床应用价值。

摘要： 本发明公开了一种肠道病毒分型鉴定用引物探针和鉴定方法；该方法针对肠道病毒中A组、B组和C组所有血清型的VP1基因，以及柯萨奇病毒A组16型和肠道病毒71型的VP1基因保守区域设计三组引物探针SEQ ID No.1～SEQ ID No.9所示，三条探针选择不同的荧光标记，实现了一管反应体系中同时对肠道病毒及两种血清型的肠道病毒进行鉴定，简化了肠道病毒流行血清型实验室检测流程。同时公开了待检样本的处理、荧光RT‑PCR反应体系及反应条件。本发明可以实现对我国大陆流行的肠道病毒及常见两种血清型的检测，操作简单、应用方便，为肠道病毒感染病原学和临床流行病学研究提供了可行的技术方法。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴定牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。本发明保护引物对甲和引物对乙和引物对丙组成的引物组合。引物对甲由序列1所示的引物F1和序列2所示的引物R1组成。引物对乙由序列3所示的引物F2和序列4所示的引物R2组成。引物对丙由序列5所示的引物F3和序列6所示的引物R3组成。采用引物对甲和引物对乙和引物对丙，通过三重二温式PCR检测牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒，具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点，可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明为牛病的防控提供了新的技术方法，具有很高的临床应用价值。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴定病毒TuMV的引物组合及鉴定方法，本发明的引物组合包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明以西红花、山药的病株和组培材料作为检测样品，用BioTeke通用植物总RNA快速提取试剂盒提取RNA，针对病毒基因序列进行新引物的设计，改进PCR程序和检测方法，优化后的引物和方法检测效果灵敏度高且电泳条带清晰易辨认。

摘要： 本发明公开了鉴定或辅助鉴定葫芦科作物种传病毒的多重PCR引物对组合物与应用。该鉴定或辅助鉴定葫芦科作物种传病毒的多重PCR引物对组合物可为鉴定或辅助鉴定葫芦科作物5种种传病毒中5种以下病毒的多重PCR引物对组合物，由ZYMV‑FR、MNSV‑FR、CGMMV‑FR、CMV‑FR和SqMV‑FR这5种引物对组成。该多重PCR引物对组合物能在一个PCR体系中特异性地检测ZYMV、MNSV、CGMMV、CMV和SqMV这5种葫芦科作物种传病毒，能准确地鉴定ZYMV、MNSV、CGMMV、CMV和SqMV这五种病毒的任意组合侵染。

摘要： 本发明公开了一种鉴定非洲猪瘟病毒的特异性引物及其鉴定方法与检测试剂盒，根据非洲猪瘟病毒的VP‑72蛋白编码基因为模板如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示，设计特异性引物序列，用特异性引物以DNA为模板进行PCR扩增，若DNA中含有非洲猪瘟病毒则扩增出得到目的基因条带,将筛选得到的目的基因条带插入到载体中进行克隆，克隆成功的载体采用双酶切的方法鉴定并筛选阳性重组质粒；阳性重组质粒送去目的基因测序，测序后与特异性引物序列以及VP‑72蛋白编码基因序列对比，若对比结果同源性为100％，则证明扩增出的所述目的基因条带是非洲猪瘟病毒基因，可以用于非洲猪瘟病毒的鉴定，快速准确鉴定非洲猪瘟病毒，及时定点清除感染源，避免交叉感染。

摘要： 本发明实施例公开了一种用于病毒鉴定的训练方法和计算机病毒鉴定方法及相应装置，所述用于病毒鉴定的训练方法包括：提取纯黑样本中的一个程序的特征；根据所述程序的特征，获取所述程序的数学特征；判断所述数学特征是否符合预置的病毒的数学特征的要求，如果符合，获取所述程序的数学特征与所述预置的病毒的数学特征的共同特征；如果所述数学特征不符合所述预置病毒的数学特征的要求，则记录所述程序的所述数学特征，作为新增病毒的数学特征。能够快速扫描病毒。

摘要： 本发明实施例公开了一种用于病毒鉴定的训练方法和计算机病毒鉴定方法及相应装置，所述用于病毒鉴定的训练方法包括：提取纯黑样本中的一个程序的特征；根据所述程序的特征，获取所述程序的数学特征；判断所述数学特征是否符合预置的病毒的数学特征的要求，如果符合，获取所述程序的数学特征与所述预置的病毒的数学特征的共同特征；如果所述数学特征不符合所述预置病毒的数学特征的要求，则记录所述程序的所述数学特征，作为新增病毒的数学特征。能够快速扫描病毒。

摘要： 本发明公开了一种金针菇褐化病毒鉴定用引物探针，其由SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示的引物对，以及SEQ ID No.3所示的探针组成。本发明还公开了一种金针菇褐化病毒的鉴定方法。本发明的金针菇褐化病毒鉴定用引物探针为生产上早期筛选无褐化病毒的金针菇菌种以及鉴定采收期金针菇子实体病毒提供技术支持。