细菌分离鉴定

摘要： 为确定东莞市某养殖场罗非鱼发病的原因,有针对性制定防治措施,采集发病罗非鱼的脑、肝脏、脾脏、肾脏等组织样品进行细菌分离培养鉴定,通过VITEK-2 Compact进行生化鉴定和16S rRNA基因序列分析以及系统进化树构建,并对分离菌株(DG210721)进行药敏试验。结果显示:分离纯化培养的菌株特征、形态和生化鉴定结果均与无乳链球菌相符;16S rRNA基因序列分析发现,分离菌株与罗非鱼无乳链球菌(JQ039371)同源性高达100%且亲缘关系最近;分离菌株对药物的敏感性由高到低依次是盐酸多西环素、恩诺沙星、甲砜霉素、氟苯尼考、氟甲喹、磺胺甲噁唑+甲氧苄啶、磺胺间甲氧嘧啶钠、硫酸新霉素。结果表明:该养殖场罗非鱼发病的原因之一是无乳链球菌感染;分离菌株遗传序列较稳定,并对部分临床使用的药物产生了一定的耐药性。结果提示,需要加强罗非鱼无乳链球菌感染的防控,定期采样检测,及时确诊,选用敏感药物进行科学防治。

摘要： 室内散养的苏卡达陆龟因误食水仙球茎后出现胃肠道症状前来就诊,进行外周血涂片检查发现外周血单核细胞吞噬杆菌现象,对患龟的血液进行常规细菌分离培养和鉴定,经飞行质谱鉴定和16S rDNA序列分析,确定分离菌株为阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)和甘蔗科萨克氏菌(Kosakonia sacchari)。综合各项检查结果后判断患龟为水仙中毒继发阿氏肠杆菌和甘蔗科萨克氏菌感染。

摘要： 为了解辽宁省锦州地区副猪嗜血杆菌病流行情况,对37个疑似样本进行分离鉴定。采用多重PCR方法进行血清型鉴定,并对分离菌株进行药敏试验,结果分离到23株副猪嗜血杆菌,分别为血清4型11株,5型6株,1、2、14型各1株,不可分型菌株为3株,对头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松、阿莫西林、阿米卡星高度敏感。

摘要： 对四川某猪场仔猪病料进行细菌分离纯化、16S rRNA基因扩增、血清分型检测,分离鉴定出一株猪链球菌2型。将分离株菌液接种小白鼠24 h后出现转圈、发抖、精神萎靡等神经症状,从接种菌液的小白鼠大脑、肝脏、肺脏等组织中分离出链球菌。表明导致该猪场仔猪发病的病原可能是本试验所分离鉴定的2型猪链球菌。对该分离菌株进行药敏试验,结果表明,该菌株对β-内酰胺类和喹诺酮类药物高度敏感;对氨基糖苷类和林可胺类药物不敏感;对四环素类和磺胺类药物中度敏感。本研究为猪链球菌2型的诊断和防治提供参考。

摘要： 采集8匹患子宫内膜炎母马的子宫灌洗液并进行细菌的分离鉴定,分离出的病原菌有大肠埃希氏菌、马链球菌兽疫亚种、葡萄球菌、肺炎链球菌和无乳链球菌。选取上述病原菌对小鼠进行攻毒试验,攻毒后的小鼠分别于16 h(大肠埃希氏菌)、10.5 h(马链球菌兽疫亚种)、18 h(肺炎链球菌)和20 h(无乳链球菌)后死亡。剖检病死小鼠发现肝脏、肺脏、肾脏和脾脏都有不同程度的充血、淤血及肿大。采集小鼠组织石蜡包埋后切片观察,发现组织破碎并且伴有严重的充血及淤血现象。药敏试验结果显示,大肠埃希氏菌对四环素耐药,对氨苄西林、头孢哌酮、头孢噻肟等敏感;葡萄球菌对青霉素、氨苄西林耐药,对红霉素、左氧氟沙星、头孢唑林等敏感;肺炎链球菌对青霉素、红霉素、四环素、克拉霉素、头孢唑林、链霉素耐药,对左氧氟沙星敏感;马链球菌兽疫亚种对氨苄西林有一定耐药,对青霉素、红霉素、头孢类以及左氧氟沙星等敏感;无乳链球菌对青霉素、红霉素、万古霉素、氨苄西林、四环素耐药,对氧氟沙星敏感。研究结果对预防和治疗马子宫内膜炎有一定的指导意义。

摘要： 为了解青海某规模化牛场奶牛乳房炎的的发病状况,笔者共走访调查采集5个规模化牛场牛乳样品150份,通过应用细菌分离鉴定、生化实验及药敏试验等方法对该区域奶牛乳房炎致病菌进行分析鉴定.结果显示:150份样品中检出大肠杆菌22株,检出率为14.7％(22/150);金黄色葡萄球菌8株,检出率为5.3％(8/150);链球菌4株,检出率为2.7％(4/150).大肠杆菌对头孢他啶敏感,对其他药物耐药;金黄色葡萄球菌对阿莫西林、头孢他啶敏感,对其他药物耐药;链球菌对阿莫西林、氨苄西林敏感,对其他药物耐药.

摘要： 2020年8月份,青海省大通种牛场1.5岁"阿什旦"育成牦种公牛发生腹泻,为了确诊其病因,无菌采取18头腹泻犊牛粪便进行细菌分离鉴定、生化试验、PCR鉴定、致病性实验、虫卵检测和药敏试验等.实验结果(病料编号为10#)的样品:生化结果表明:符合大肠杆菌生化特性;PCR结果表明:引物能有效扩增大肠杆菌16SrRNA基因;致病性实验表明:将纯化后的细菌在营养肉汤培养24 h,将其腹腔注射昆明系小白鼠,每只0.2 mL,注射两只,白鼠24 h死亡,且小鼠腹腔呈现肠道炎症状样,该菌具有致病性,为致病性大肠杆菌.病毒性腹泻(BVDV)RT-PCR阴性,沙门氏菌PCR阴性.虫卵检测14/18线虫阳性.药敏结果表明:分离纯化的大肠杆菌对恩诺沙星、氨苄青霉素、呋喃妥因、阿米卡星、先锋霉素、庆大霉素、畜痢灵高度敏感;采自(编号为10#)1头犊牛为大肠杆菌感染,本研究为该牛场犊牛腹泻的病因分析和防治提供了指导.

摘要： 为了确定引起杨凌地区某肉牛场发生犊牛腹泻的病原菌种类和药物的敏感性,采集腹泻犊牛粪便数份,对其进行细菌学分离鉴定、致病性试验和药物敏感性试验分析.结果表明:分离到革兰氏阴性(G-)杆菌3株,其中沙门氏菌1株、致病性大肠埃希氏菌1株、铜绿假单胞菌1株;动物致病性试验表明所分离到的沙门氏菌和大肠埃希氏菌对小白鼠均有较强致病性,对先锋噻肟、先锋必、菌必治、阿米卡星等抗生素敏感.可见,沙门氏菌和大肠埃希氏菌为该牛场发生犊牛腹泻的主要致病菌,药物敏感试验结果对该养殖场犊牛腹泻提供了诊断和治疗依据.

摘要： 某熊场近期出现黑熊死亡病例.为了更好的诊断和预防圈养黑熊的疾病,实验以死亡黑熊的脏器作为实验材料,通过对分离出来的病原体使用细菌分离培养,革兰氏染色、细菌生化鉴定、16S rRNA分子鉴定等方法进行鉴定,并对已分离出来的菌株进行药物敏感性试验.最终的实验结果显示:分离出来的菌株为革兰氏阳性球菌,生化鉴定结果显示分离菌株分解葡萄糖、半乳糖等.16S rRNA序列分析显示与葡萄球菌的同源性为100％.综合以上实验结果可以确定,死亡黑熊感染葡萄球菌.该实验对于延边圈养黑熊流行病的防治具有重要的参考价值与临床意义.

摘要： 羊猝狙是由C型魏氏梭菌引起的一种毒血症,特征为急性死亡、发生腹膜炎和溃疡性肠炎。病羊十二指肠和空肠出现严重充血、糜烂,有的有大小不等的溃疡灶散在;胸腹腔和心包大量积液,全身黏膜有出血点;死后由于细菌繁殖在骨骼肌间有血样液体,肌肉间有出血和气性裂孔。该病常与羊快疫合并发生,两者很难区别。确诊须进行涂片镜检、细菌分离鉴定及动物接种等细菌学检查。

摘要： 本试验用从自然病例分离纯化的鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡，通过形态学、PCR、荧光定量PCR和ELISA等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器和血清进行细菌分离鉴定和抗体水平检测，以便为鸡杆菌的流行病学、致病机理及防治研究等提供理论依据。采用从自然病例分离纯化的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡，通过形态学、PCR和荧光定量PCR等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定，用ELISA对其血清抗体水平进行了检测。结果表明，通过比较鸡杆菌感染组、同居组和对照组SPF鸡的细菌分离结果、血清抗体水平和组织内细菌含量，发现感染组和同居组与对照组差异明显，说明雏鸡早在4日龄就可以感染鸡杆菌。

摘要： 子宫蓄脓是指子宫腔内积有脓液。本该病一年四季均可发病，无明显的季节性。化脓性子宫内膜炎及急、慢性子宫内膜炎，化脓性乳房炎可引起本病，其他部位化脓灶转移亦为诱因之一。本试验利用B超的实时显像技术，通过腹腔穿刺子宫，采集临床确诊为犬子宫蓄脓的子宫内容物50份，进行细菌的分离培养及生化鉴定，以确定子宫内容物中细菌的种类。同时对分离出的细菌进行药物敏感性试验，筛选出细菌敏感性药物，为犬子宫蓄脓的临床治疗参考。

摘要： 本研究对患病鲫鱼进行了细菌分离鉴定,经过临床诊断和病理解剖观察到发现病鱼体色发黑,鳍条充血，溃烂,腹部膨胀,病鱼鳃丝肿胀出血,鳃耙颜色变深,腹腔内有大量积水,肝、脾肿大,颜色变深,肾脏颜色较淡,呈贫血状。镜下检查看到可见C-短小杆菌,呈单双排列,两端钝圆。分离培养得到圆形、圆滑、湿润边缘整齐、微凸、半透明、灰白色至淡黄色中等大小的菌落,生化试验结果显示发酵葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、七叶苷和水杨苷。鉴定此细菌为嗜水气单胞菌。动物易感试验结果与结论相符。

摘要： 本文对两只死亡的种羊进行了病理解剖,经细菌分离鉴定、形态学特征及动物接种试验,认为多杀性巴氏杆菌是种羊死亡的主要病原.

摘要： 采集某奶牛场的29头子宫内膜炎患病牛子宫内容物,对样品中细菌进行分离、鉴定,并依据药物敏感性试验结果筛选出五组治疗方案,通过子宫分泌物的细菌计数结果和子宫的恢复情况对药物治疗效果进行评价.29份样品共分离出18种(52株)细菌,其中革兰氏阴性细菌有28株占53.8％；革兰氏阳性菌有24株,占46.2％.五组治疗方案在使用剂量内均有较好的治疗效果,但替米考星在治疗剂量(5g/次)时,会在奶中出现药物残留.因此,在使用替米考星治疗奶牛子宫内膜炎时应保证有足够的休药期.

摘要： 采集某奶牛场的29头子宫内膜炎患病牛子宫内容物,对样品中细菌进行分离、鉴定,并依据药物敏感性试验结果筛选出五组治疗方案,通过子宫分泌物的细菌计数结果和子宫的恢复情况对药物治疗效果进行评价.29份样品共分离出18种(52株)细菌,其中革兰氏阴性细菌有28株占53.8％；革兰氏阳性菌有24株,占46.2％.五组治疗方案在使用剂量内均有较好的治疗效果,但替米考星在治疗剂量(5g/次)时,会在奶中出现药物残留.因此,在使用替米考星治疗奶牛子宫内膜炎时应保证有足够的休药期.

摘要： 采集某奶牛场的29头子宫内膜炎患病牛子宫内容物,对样品中细菌进行分离、鉴定,并依据药物敏感性试验结果筛选出五组治疗方案,通过子宫分泌物的细菌计数结果和子宫的恢复情况对药物治疗效果进行评价.29份样品共分离出18种(52株)细菌,其中革兰氏阴性细菌有28株占53.8％；革兰氏阳性菌有24株,占46.2％.五组治疗方案在使用剂量内均有较好的治疗效果,但替米考星在治疗剂量(5g/次)时,会在奶中出现药物残留.因此,在使用替米考星治疗奶牛子宫内膜炎时应保证有足够的休药期.

摘要： 采集某奶牛场的29头子宫内膜炎患病牛子宫内容物,对样品中细菌进行分离、鉴定,并依据药物敏感性试验结果筛选出五组治疗方案,通过子宫分泌物的细菌计数结果和子宫的恢复情况对药物治疗效果进行评价.29份样品共分离出18种(52株)细菌,其中革兰氏阴性细菌有28株占53.8％；革兰氏阳性菌有24株,占46.2％.五组治疗方案在使用剂量内均有较好的治疗效果,但替米考星在治疗剂量(5g/次)时,会在奶中出现药物残留.因此,在使用替米考星治疗奶牛子宫内膜炎时应保证有足够的休药期.

摘要： 为了观察硫酸头孢喹肟钠子宫灌注剂对奶牛急、慢性子宫内膜炎的临床疗效，本试验选取60例患子宫内膜炎奶牛病例(20例急性子宫内膜炎，40例慢性子宫内膜炎)随机分成2组，试验组患病奶牛子宫灌注硫酸头孢喹肟钠，对照组奶牛子宫灌注氟苯尼考子宫注入剂(清宫素)。给药前后对子宫内容物进行细菌的分离鉴定，观察奶牛的临床症状并进行评分，来评价硫酸头孢喹肟钠对奶牛子宫内膜炎的临床疗效。结果表明，硫酸头孢喹肟钠对子宫内膜炎的治愈率和有效率分别达到80％和90％以上，并且对急性和慢性子宫内膜炎都有很好的疗效。

摘要： 为了观察硫酸头孢喹肟钠子宫灌注剂对奶牛急、慢性子宫内膜炎的临床疗效，本试验选取60例患子宫内膜炎奶牛病例(20例急性子宫内膜炎，40例慢性子宫内膜炎)随机分成2组，试验组患病奶牛子宫灌注硫酸头孢喹肟钠，对照组奶牛子宫灌注氟苯尼考子宫注入剂(清宫素)。给药前后对子宫内容物进行细菌的分离鉴定，观察奶牛的临床症状并进行评分，来评价硫酸头孢喹肟钠对奶牛子宫内膜炎的临床疗效。结果表明，硫酸头孢喹肟钠对子宫内膜炎的治愈率和有效率分别达到80％和90％以上，并且对急性和慢性子宫内膜炎都有很好的疗效。

摘要： 一种氨氧化细菌筛选鉴定试剂盒、筛选鉴定及菌样分离方法，试剂盒包括菌株富集管；氨氧化鉴定管1，2，3；菌株保藏液；显色剂A，B；筛选鉴定方法是将待检测菌种经菌株富集管富集后接种到氨氧化鉴定管1、2、3培养，同时用菌株保藏液将富集菌液保存；氨氧化鉴定管经培养后加入显色剂A、B，根据显色状态判断菌株氨氧化能力，菌样分离方法是将培养菌样稀释涂布分离。本发明的优点是实现氨氧化细菌快速、高通量筛选鉴定的效果，实现菌种培养、鉴定、保藏一站式操作。

摘要： 本发明涉及的寡核苷酸，含有对好气性产芽孢细菌的16 S核糖体RNA基因特异的碱基序列或该碱基序列的互补序列，且上述特异性碱基序列是序列号1～6中所示的碱基序列的任一个。此寡核苷酸用作，以由鉴定对象的被鉴定菌制备的核酸为被检样本，以该被检样本为模板进行PCR反应时的引物。由此，以特定的DNA片段的扩增为指标，可鉴定被鉴定菌是否是好气性产芽孢细菌。

摘要： 本发明提供从阳性血中分离细菌的试剂，包括用于溶解来自血液培养物的血液样品中的血细胞的A剂，还包括用作清洗剂的B剂和用于破碎病原菌细胞壁、促进细胞中的蛋白释放的C剂；所述A剂为皂素溶液和SDS中至少一种或其它能裂解血细胞的表面活性剂。本发明还提供从阳性血中分离细菌的方法及细菌鉴定方法，先用A剂裂解血细胞，然后B剂洗去细胞碎片和杂质，最后C剂破碎病原菌细胞壁，让细菌的蛋白质释放出来并取含有细菌蛋白质的上清液坐位后续鉴定的样品；将用于鉴定的样品点样到靶板的空位上，室温干燥后覆盖基质于样品上，室温干燥，然后上机检测。可实现快速鉴定细菌，半小时内即可结果，且检测结果可靠性高，干扰小。

摘要： 本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种快速鉴定果园高效解磷细菌的特异性引物及其试剂盒、分离鉴定方法。本发明所提供的特异性引物为pqqB1‑F和pqqB1‑R引物对：所述pqqB1‑F的序列如SEQ ID NO:1所示；所述pqqB1‑R的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明采用改良后的PVK培养基，同时，使用百里溴酚蓝作为指试剂，阳性解磷菌菌株易于观察和计数，快速且易于操作和观察。本发明设计的引物pqqE1‑F和pqqE1‑R能够快速检测溶磷细菌，具有特异性好，能够准确的检测溶磷细菌，解决了常规方法耗时且成本高，基因特异性研究针对目标功能组进行研究，可以解决细菌中众多的未知机制。

摘要： 一种氨氧化细菌筛选鉴定试剂盒、筛选鉴定及菌样分离方法，试剂盒包括菌株富集管；氨氧化鉴定管1、2、3；菌株保藏液；显色剂A、B；筛选鉴定方法是将待检测菌种经菌株富集管富集后接种到氨氧化鉴定管1、2、3培养，同时用菌株保藏液将富集菌液保存；氨氧化鉴定管经培养后加入显色剂A、B，根据显色状态判断菌株氨氧化能力，菌样分离方法是将培养菌样稀释涂布分离。本发明的优点是实现氨氧化细菌快速、高通量筛选鉴定的效果，实现菌种培养、鉴定、保藏一站式操作。

摘要： 本发明的目的在于，提供对于进一步提高利用PCR法检出或鉴定被检样品中的细菌菌种的灵敏度有用的引物组，使用了其的用于PCR的试剂盒及检出或鉴定被检样品中的细菌菌种的方法，以及通过使细菌来源的核酸的混入量为最小限度、并进行使用了上述的引物组的PCR法，从而达成检出或鉴定被检样品中的细菌菌种的方法的灵敏度的进一步的提高。为了达成上述目的，本发明涉及的用于扩增细菌DNA的PCR中使用的引物组包含：从包含特定的引物对的第S1组～第S7组的各组中分别选择1对引物对而得到的7对引物对中的至少1对引物对。此外，本发明涉及的用于检出细菌菌种的试剂盒包含：从包含特定的引物对的第K1组～第K7组的各组中分别选择1对引物对而得到的7对引物对中的至少1对引物对。

摘要： 本发明涉及的寡核苷酸，含有对好气性产芽孢细菌的16S核糖体RNA基因特异的碱基序列或该碱基序列的互补序列，且上述特异性碱基序列是序列号1～6中所示的碱基序列的任一个。此寡核苷酸用作，以由鉴定对象的被鉴定菌制备的核酸为被检样本，以该被检样本为模板进行PCR反应时的引物。由此，以特定的DNA片段的扩增为指标，可鉴定被鉴定菌是否是好气性产芽孢细菌。

摘要： 本发明公开了一种烟草细菌性黑斑病病原菌的分离和鉴定方法，该方法包括以下步骤：S1：病样采集；S2：病原菌分离；S3：病原菌培养和筛选；S4：菌落PCR菌悬液制备；S5：PCR扩增与鉴定；S6：16S rRNA基因扩增与验证。本发明能快速而准确地获得烟草黑斑病病原菌，有效排除其他杂菌，提高分离纯化效率，分离纯化率在87％以上；通过采用细菌性黑斑病病原菌的特异引物对灰色菌落进行PCR扩增确认，增强了目标菌株的选择性，可以快速鉴别病原菌。

摘要： 一种用于鉴定和分离趋磁细菌的磁泳分离仪。包括二个通过联接板固定的磁泳槽，在联接板上方设置有盖板，盖板上固定有毛细管，毛细管用以连通或隔开两边的液体；毛细管一端弯成一定角度，联接板靠近磁泳槽的二端点处分别设置有光电检测装置，在二个磁泳槽中设置有带温度反馈调节的电加热装置；在放置有弯角毛细管的磁泳槽端设置磁场。采用本实用新型，可以在液体培养基中将具有不同趋磁性的细菌分离而获得纯培养，既避免了一些趋磁细菌不易在固体培养基上生长，又弥补了普通的液体培养基难以分离趋磁细菌的不足，从而解决了趋磁菌难以获得纯培养的问题；可以有效判断细菌是否具有趋磁性以及对具有趋磁性的细菌在磁场作用下泳动的速率进行测定。

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株海洋细菌分离鉴定及其应用。该海洋细菌命名为Notoacmeibacter marinus IMDGXO 109，保藏号为CCTCC NO：M 2018148；保藏地点为：中国，武汉，武汉大学，中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年03月22日。通过本申请的操作步骤能提高该菌种目的产物灵菌红素的产率和稳定性，所产的代谢产物纯度高、安全性好，可以应用于医药行业。