胞外酶

摘要： 为探究耐高温萌发菌在模拟夏季高温条件下漆酶、木聚糖酶、淀粉酶和纤维素酶的活性与天麻种子萌发的关系。对4株萌发菌进行递增式耐高温驯化,采用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)法、二硝基水杨酸(DNS)法测定萌发菌胞外酶活性,水琼脂法进行天麻种子萌发试验。结果表明,各菌株之间的酶活性及各菌株之间天麻种子萌发率存在明显差异,经过驯化的耐高温萌发菌4种酶活性和天麻种子萌发率均极显著高于各自对应亲本萌发菌(P<0.01),其中漆酶、木聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶活性最高的分别是耐高温萌发菌SH-1、MDA-1、MDC-1、SH-1,酶活性依次为1 000.00、1062.35、402.90、40.91 U/L,天麻种子萌发率最高的是耐高温萌发菌SH-1,萌发率为71.76%,酶活性与天麻种子萌发率相关性最高的是木聚糖酶,相关系数为0.720。说明天麻种子萌发受温度、胞外酶种类及活性等多种因素共同调控,耐高温萌发菌表现出了更高的酶活性,促进天麻种子萌发,且木聚糖酶是影响天麻种子萌发的关键胞外酶。

摘要： 生物土壤结皮在增强土壤抵抗水蚀风蚀能力、改善土壤养分等方面发挥着重要作用,土壤胞外酶活性可作为土壤生化反应强度的微生物指标,对理解荒漠生态系统微生物参与的养分循环过程具有重要意义。选取黄土高原神木县六道沟小流域5个生物结皮发育阶段(裸沙地、全藻结皮、藻-藓混生结皮、藓-藻混生结皮、全藓结皮)的土壤作为研究对象,研究生物结皮发育过程中土壤胞外酶活性(β-1,4-葡萄糖苷酶、β-1,4-N-乙酰基氨基葡萄糖苷酶、亮氨酸氨基多肽酶和碱性磷酸酶)及其化学计量的变化特征。结果表明:(1)土壤4种胞外酶活性均随生物结皮发育序列变化显著增加,全藓结皮土壤显著大于全藻结皮土壤(P<0.05)。(2)生物土壤结皮层胞外酶活性显著高于下层土壤,且胞外酶活性随着土层深度的加深不断降低。(3)相关性分析表明,土壤C、N、P、土壤C:P、土壤N:P均与土壤胞外酶活性呈极显著正相关关系(P<0.05)。(4)有结皮覆盖土壤的养分含量及土壤胞外酶活性显著高于裸沙地,全藓结皮土壤的养分含量及土壤胞外酶活性显著高于全藻结皮土壤。(5)标准化主轴估计表明,土壤胞外酶活性随着生物结皮的发育均有明显增强并呈现稳态特征,N-获取酶和P-获取酶相对于C-获取酶之间的斜率呈现等容关系,这一结果表明土壤微生物通过稳态调控胞外酶化学计量特征,在干旱半干旱生态系统养分循环过程中具有重要作用。

摘要： 森林土壤碳库对全球变暖的响应是气候变暖下预测CO;不确定性的潜在主要来源。然而,不同植被带上各粒径团聚体的SOC矿化的温度敏感性(Q10)及机理尚不明确。收集了中国太白山4个不同海拔的植被带的土壤,将土壤按粒径大小筛分为大、中、小3类团聚体,并进行了100天的土壤培养实验,以监测在3个恒定温度(5°C、15°C和25°C)下土壤呼吸速率、微生物量碳和胞外酶活性等指标。研究表明(1)团聚体占全土比例随粒径增大而增大,而有机碳含量随粒径的增大而减小。(2)随着海拔的升高,大团聚体、中团聚体、小团聚体的惰性碳库比例分别从45.11%、36.37%、64.72%升高到45.71%、38.11%、67.12%,缓效碳库比例分别从28.81%、37.20%、14.54%下降到28.41%、36.16%、13.78%,活性碳库比例从26.06%、26.42%、20.73%下降到25.35%、25.72%、19.09%。(3)各团聚体温度敏感性(Q10)表现出随海拔升高而增加,随温度升高而降低(T1Q10>T2Q10),并且具有惰性碳库Q10>缓效碳库Q10>活性碳库Q10的规律。(4)团聚体的微生物量碳(MBC)随着培养时间,各海拔、各温度下均呈现先升高后下降的趋势。(5)影响碳库和Q10的环境因素包括植被类型、土壤特性、土壤环境、土壤底物,其中植被表现较其他更强。

摘要： 为探讨退化和复壮后蜜环菌(Armillaria mellea)菌株几个胞外酶活性的变化情况,将野生蜜环菌菌株连续伴栽天麻4次获得退化菌株,退化菌株经过氨水诱变选育后获得复壮菌株。以野生菌株为对照,将野生菌株、退化菌株、复壮菌株伴栽天麻,分别记录菌索萌发时间,计算平均生长速率,同时观察菌索的密度、粗细、分枝数和颜色,测定天麻产量和天麻素含量以及蜜环菌的漆酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶活性,并进行蜜环菌野生菌株、退化菌株、复壮菌株转录组测序和分析,测定漆酶相关差异基因的相对表达量。结果表明:与野生菌株相比,退化菌株的菌索密度下降,菌索变细,分枝数量减少,菌索变成黑褐色,而复壮菌株的基本没有变化;与野生菌株相比,退化菌株伴栽天麻的产量和天麻素含量均显著下降,而复壮菌株无显著性差异;退化菌株的漆酶活性显著下降,活性仅为野生菌株的1/3,而复壮菌株的漆酶活性无显著性差异;在菌株退化、复壮过程中,漆酶活性与天麻产量和天麻素含量密切相关,变化规律一致;与野生菌株相比,退化菌株的淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶活性无显著性差异,而复壮菌株的果胶酶、木聚糖酶活性显著增加;与野生菌株相比,退化菌株显著差异表达的基因有6153个,其中上调表达的基因有3285个,下调表达的基因有2858个,筛选得到漆酶相关基因35个,退化菌株上调表达的基因有3个,下调表达的基因有8个,在复壮菌株中基因Unigene15885和Unigene19647上调表达量降低,且基因Unigene29569由退化菌株的上调表达变为下调表达,基因Unigene38073、Unigene34671、Unigene35295和Unigene31859下调表达量降低,基因Unigene31095、Unigene 8137、Unigene 33525和Unigene 23435由退化菌株的下调表达变为上调表达。

摘要： 双孢蘑菇菌丝从营养生长阶段转入生殖生长阶段需要一个最佳的“冷却-降温”催蕾过程,诱导其原基形成。通过设计4 d、6 d、8 d三个时间段内完成21.5°C到17.5°C的降温刺激试验,以漆酶、半纤维素酶、羧甲基纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶的酶活性,可溶性多糖含量,以及单糖组分为测定指标,对双孢蘑菇生长代谢能力进行评价。结果表明,4 d处理下半纤维素和淀粉酶活性更强,6 d处理下漆酶酶活性更强,8 d处理下羧甲基纤维素酶活性更高,4 d和8 d处理下蛋白酶活性更强;4 d内完成降温更能使双孢蘑菇具有高产和富含多糖成分的优势。Pearson相关系数分析发现,淀粉酶对多糖的积累呈现显著负相关,蛋白酶表现强正相关;羧甲基纤维素酶对产量的影响呈现显著负相关,半纤维素酶表现强正相关。确定最佳的“冷却-降温”时间,可更好地为工厂化双孢蘑菇催蕾期的环境调控提供科学参考。

摘要： 耐冷菌在原料乳低温贮藏、加工和运输等过程中广泛存在,通过产生耐热蛋白酶和脂肪酶等胞外酶,水解牛奶中的乳清蛋白、牛血清白蛋白、酪蛋白和甘油三脂,导致乳制品品质显著下降。本文从原料乳中分离出29株假单胞菌和1株芽孢杆菌,90°C处理5 min使耐冷菌Z8、Z14、P4、P5和P8胞外脂肪酶活性分别提高1.88倍、2.20倍、2.00倍、2.25倍和3.67倍,使菌株P11、P15和Z7胞外蛋白酶活性分别提高1.89倍、1.81倍和2.11倍,表明耐冷菌能够分泌耐热胞外酶。培养温度对耐冷菌产胞外酶有显著影响,4°C和37°C培养能够抑制耐冷菌产酶能力。本研究为原料乳中耐冷菌及其胞外酶的控制提供理论依据。

摘要： 为了明确黄柄曲霉ASD对辣椒疫霉菌的生防机理,开展了ASD粗酶液在不同含量致病疫霉菌胁迫下四种胞外酶活性变化,并测定其酸碱稳定性与溶解性。结果表明,胁迫后纤维素酶与木聚糖酶活性显著提高到较高水平,且与底物含量正相关,第3~4 d时酶活性最高;蛋白酶及β-1,3葡聚糖酶活性虽也提高,但幅度小于纤维素酶与木聚糖酶活性变化,且酶活性低。结果说明纤维素酶与木聚糖酶的溶菌作用是ASD抑制辣椒疫霉生长的主要生防机制。此外,ASD粗酶液具有较好的耐酸碱性,在中性与微酸环境中抑菌活性较高;抑菌物质为亲水性物质,但会被乙醇破坏。研究结果可为黄柄曲霉ASD的开发应用提供依据。

摘要： 金属离子在食用菌生长发育过程中发挥着重要作用.适当浓度的金属离子对食用菌的生长发育有促进作用,而金属离子的过度使用以及在食用菌自然生长过程中的过度富集,又会造成食用菌的重金属污染.该文综述金属离子对食用菌菌丝生长、胞外酶分泌以及营养价值与功能活性成分的影响,分析金属离子在食用菌子实体中的富集规律,为在食用菌栽培过程中充分利用好金属离子提供参考依据.

摘要： 为筛选得到对稻瘟病有良好防效的拮抗细菌,为稻瘟病的生物防治提供更多的菌源.采用稀释涂布法从对节白蜡(Fraxinus hupehensis Chiu,Shang et Su)及其根际分离细菌,通过平板对峙、离体叶片试验和盆栽试验筛选稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的拮抗菌株,测定其产胞外酶活性,并经16S rDNA序列分析对其进行鉴定.结果显示,从对节白蜡及其根际共分离得到193株细菌,经平板筛选得到7株对稻瘟病菌具有抑制作用的细菌,其抑制率为62.53％～75.47％,其中菌株YZU-S033和YZU-S061对稻瘟病菌的抑制率最高,在离体叶片试验中对稻瘟病的防效较强,分别为81.7％和69.4％.在盆栽试验中,菌株YZU-S033和YZU-S061的菌体悬浮液显著降低了稻瘟病的发病率,减轻了该病害的发病程度,其防效分别可达69.8％和64.0％,与对照药剂(枯草芽孢杆菌可湿性粉剂)的防效相当.这2株拮抗细菌均能产生蛋白酶和纤维素酶,其中YZU-S061还可分泌嗜铁素.经系统发育分析将菌株YZU-S033和YZU-S061均鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis).结果表明菌株YZU-S033和YZU-S061对稻瘟病均具有良好的生防潜力和应用前景.

摘要： 为探究森林土壤微生物呼吸对温度的敏感性及其影响因素,在太白山选取典型的4个不同海拔的林带(锐齿栎林、辽东栎林、红桦林、牛皮桦林)的0-10 cm表层土壤为对象,分别在15、25、35°C下进行控温培养实验并测量其土壤呼吸速率、微生物量和胞外酶活性等指标.结果表明:1)在1-20 d与20-72 d时的微生物呼吸速率分别呈现波动下降趋势与缓慢下降趋势,相比于其初始速率平均下降了68％与90％;表明高温在短期内促进土壤呼吸;2)太白山地区土壤温度敏感系数(Q10)随温度的升高而降低;3)在培养过程中,出现15°C和25°C下微生物量先增多后减少,35°C下微生物量一直减少的现象,并且胞外酶是影响土壤微生物呼吸的重要因素,其中BG(β-葡萄糖苷酶)是胞外酶中最重要的影响因子;4)培养72 d以后,BG已无法为微生物生长繁殖提供充足的碳,在25°C和35°C下,由BX(β-木糖苷酶)提供的碳已成为微生物生长繁殖的重要碳源之一.在15°C和25°C下,N是培养前期限制土壤呼吸的因素,C是后期限制因素;在35°C下,N一直是限制土壤呼吸的因素.在15°C和35°C下,土壤呼吸不存在P限制;在25°C的培养前期,P是限制土壤呼吸的因子,而在培养后期不存在P限制.本研究结果阐明抑制土壤碳排放的关键在于抑制土壤微生物呼吸,揭示了在胞外酶驱动下的土壤碳循环特征,为准确预测全球未来气候变化的趋势提供理论基础.

摘要： 对尖顶羊肚菌产菌核及不产菌核单孢菌株、粗柄羊肚菌单孢菌株的胞外酶进行了测定和比较,得出了尖顶羊肚菌单孢菌株胞外酶活性特征,且不产菌核菌株的蛋白酶、过氧化氢酶和木聚糖酶的平均活性高于产菌核菌株,而漆酶活性却低于产菌核菌株,但未达到显著差异;粗柄羊肚菌胞外可溶性淀粉酶活性极显著高于尖顶羊肚菌,其它酶活性在均值上有差别,但都未达到显著水平.

摘要： 从发酵样品提取胞外酶是应用宏蛋白组学技术研究普洱茶发酵过程酶组成的第一步.本文通过对不同提取时间(超声2、4、6、8、10 min)与4 种提取方法(TCA/丙酮沉淀法、Tris/酚抽提-甲醇/醋酸铵沉淀法、Tris-HCl法和尿素/ 硫脲法) 提取样品蛋白含量以及十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳( Sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果比较,建立了以5×Tris-HCl(pH 7.4)为缓冲液,冰浴超声提取2min,酚抽提2 次,﹣20°C甲醇/醋酸铵沉淀过夜,预冷丙酮洗涤的从普洱茶发酵样品提取胞外酶的方法.应用建立的方法提取蛋白,双向电泳,获得了符合宏蛋白组学要求的图谱,为进一步开展普洱茶发酵样品的宏蛋白组学研究提供了前期基础.

摘要： 目的:胶质瘤相关免疫抑制是胶质瘤侵袭进展的关键因素之一,也是胶质瘤治疗的重要靶点.尽管胞外酶CD39/CD73介导的腺苷能信号通路已证明能够调控调节性CD4+Foxp3+T细胞功能与肿瘤免疫,然而这一通路如何诱导人恶性胶质瘤相关免疫抑制尚未得到揭示.方法:在本研究中,利用Realtime PCR、流式细胞术、免疫组织化学法、生物信息学统计等手段,先后检测了胶质瘤细胞与新诊断恶性胶质瘤患者肿瘤浸润CD4+T淋巴细胞中胞外酶表达情况,并分析了这两群细胞的胞外酶核苷酸水解活性.共培养实验验证了胞外酶CD39-CD73协同效应对应答CD4+T细胞扩增的调控效应.结果:发现CD39-CD73+胶质瘤细胞与肿瘤浸润CD4+CD39highCD73lowT淋巴细胞表现出互补的胞外酶表型与功能特性.只有当T细胞来源CD39与肿瘤细胞来源CD73协同作用时,外源性ATP能够被级联水解为免疫抑制性腺苷.当与CD73+胶质瘤细胞共培养时,CD4+CD39+T细胞抑制应答CD4+T扩增的效应得到增强,而这一协同效应可被CD39抑制剂ARL67156、CD73抑制剂APCP与A2aR腺苷受体阻断剂SCH58261所阻断.此外,基于TCGA数据库的大样本患者生存分析发现CD73表达下调的胶质母细胞瘤患者群体无病生存期得到延长.结论:胶质瘤微环境中,肿瘤来源CD73通过与浸润CD4+T细胞来源CD39协同作用,共同诱导局部腺苷能免疫抑制.这一机制的阐明有望成为恶性胶质瘤与其他免疫抑制性疾病提供潜在治疗靶点.

摘要： 蜜蜂球囊菌是蜜蜂白垩病的病原真菌。一般病原真菌对宿主昆虫的侵染都涉及到胞外酶的作用，胞外酶是重要的致病因子。体外实验表明蜜蜂的球囊菌也可以分泌胞外酶，但在蜜蜂体内是否涉及到胞外酶的作用则没有工作涉及。这里采取正常健康蜜蜂幼虫的血淋巴和染蜜蜂球囊菌的蜜蜂幼虫血淋巴进行SDS-PAGE电泳和蛋白酶、酯酶的活性染色。结果表明，正常蜜蜂幼虫血淋巴内蛋白组分含量丰富，主要由4种高分子量的蛋白组成。而染蜜蜂球囊菌的蜜蜂有血淋巴内蛋白含量急剧减少，且主要蛋白组分被降解。染病幼虫血淋巴内可以检测到多种蛋白酶和酯酶的活性。这些胞外酶的活性参与降解蜜蜂的组织，为蜜蜂球囊菌的生长提供营养。这时第一次通过试验确证蜜蜂球囊菌在蜜蜂幼虫体内的生长涉及到胞外酶的作用，该结果对于我们理解蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼虫的过程和致病机理具有重要的意义。

摘要： 在工厂化生产的食用菌品种中,金针菇产量位居第一,在现有的工厂化生产条件下,通过技术提升是实现金针菇高产高效的重要途径.本试验将小分子水用于栽培料制备、培养加湿、搔菌、生育加湿等单元操作,可显著提高菌株胞外漆酶、多酚氧化酶、羧甲基纤维素酶、半纤维素酶的活性,提高菌株的生物转化率,缩短培养周期0.5～1天,缩短生育周期1天,提高金针菇产量2g/瓶以上;小分子水处理组的培养料含水量、菌株含水量、细菌污染瓶数及超重瓶数极显著低于生产对照组(P＜0.01),菌株整齐度、紧实度较好,切根后根部裂纹较少,产品等级率提高.

摘要： 随着城市工业的发展,污泥排放量也急剧增加,对污泥的有效处理也显得十分必要.其处理方法包括物理法,化学法和生物法等,而利用生物干化法处理污泥在技术及经济等方面都具有一定的优势.嗜热微生物作为污泥生物干化过程的主要热源,在污泥生物干化过程中,既可以有效地降解有机物并在此过程中释放热量,又能够分泌对污泥生物干化具有重要作用的胞外酶有助于结合水的破除.本文对嗜热微生物进行了简单的介绍.并了解到嗜热微生物在生物化学、酶学和分子生物学等领域的应用.同时详细阐述了嗜热微生物在污泥生物干化过程中能有效降解污泥的原理.同时描述了其所具有的操作方便、易于管理、污染少等能够使污泥减量化和资源化的优势.但是在干化过程中,由于嗜热微生物的种类繁多且微生物的活性和主体种群都有变化,因此也面临着哪种嗜热微生物在污泥生物干化过程中更具有优势以及怎样能够保证各个菌种都处于最佳的生长状态等亟待解决的问题.

摘要： 剩余污泥溶胞技术对于剩余活性污泥的生物处理和污泥物质的资源化回收利用具有重要意义.利用嗜热菌溶解污泥中的微生物细胞是生物法污泥溶胞技术的重要分支.本文研究了污泥堆肥中分离出的1株嗜热菌(SY-9)溶解E. coli细胞的特性.该嗜热菌培养上清液对E. coli细胞的溶解受温度、pH、金属离子浓度等因素的影响.SY-9产生的溶胞酶在60～70°C较稳定,而在80°C下0.5小时内即失活.但SY-9的培养上清液在55-80°C温度范围内,都表现出较高的溶胞活性.SY-9培养上清液在酸性条件下的溶胞活性不高,而在pH8左右的碱性条件下具有较高的溶胞活性,当pH升至9.5左右时,溶胞酶的活性迅速下降.投加金属离子后,E. coli细胞的自溶和被SY-9培养上清液溶解的速率下降,该结果可能与金属离子对E. coli细胞外膜的稳定作用有关.

摘要： 剩余污泥溶胞技术对于剩余活性污泥的生物处理和污泥物质的资源化回收利用具有重要意义.利用嗜热菌溶解污泥中的微生物细胞是生物法污泥溶胞技术的重要分支.本文研究了污泥堆肥中分离出的1株嗜热菌(SY-9)溶解E. coli细胞的特性.该嗜热菌培养上清液对E. coli细胞的溶解受温度、pH、金属离子浓度等因素的影响.SY-9产生的溶胞酶在60～70°C较稳定,而在80°C下0.5小时内即失活.但SY-9的培养上清液在55-80°C温度范围内,都表现出较高的溶胞活性.SY-9培养上清液在酸性条件下的溶胞活性不高,而在pH8左右的碱性条件下具有较高的溶胞活性,当pH升至9.5左右时,溶胞酶的活性迅速下降.投加金属离子后,E. coli细胞的自溶和被SY-9培养上清液溶解的速率下降,该结果可能与金属离子对E. coli细胞外膜的稳定作用有关.

摘要： 剩余污泥溶胞技术对于剩余活性污泥的生物处理和污泥物质的资源化回收利用具有重要意义.利用嗜热菌溶解污泥中的微生物细胞是生物法污泥溶胞技术的重要分支.本文研究了污泥堆肥中分离出的1株嗜热菌(SY-9)溶解E. coli细胞的特性.该嗜热菌培养上清液对E. coli细胞的溶解受温度、pH、金属离子浓度等因素的影响.SY-9产生的溶胞酶在60～70°C较稳定,而在80°C下0.5小时内即失活.但SY-9的培养上清液在55-80°C温度范围内,都表现出较高的溶胞活性.SY-9培养上清液在酸性条件下的溶胞活性不高,而在pH8左右的碱性条件下具有较高的溶胞活性,当pH升至9.5左右时,溶胞酶的活性迅速下降.投加金属离子后,E. coli细胞的自溶和被SY-9培养上清液溶解的速率下降,该结果可能与金属离子对E. coli细胞外膜的稳定作用有关.

摘要： 本发明公开了一种土壤胞外酶检测装置，涉及土壤检测技术领域。该土壤胞外酶检测装置，包括主体机构以及震荡机构，所述主体机构包括承载箱、固定槽、固定套、缓冲垫圈、分离管、加热器、胶环，固定槽开设在承载箱顶部的正中，固定套的底部固定连接在承载箱顶部的正中，缓冲垫圈设置在固定套内腔的中部，分离管设置在固定套顶部的正中，加热器设置在承载箱底部的正中，所述震荡机构包括电动机、固定架、转动轴、承载板、偏心转子、第一轴承、环形转动槽、第二轴承、转动槽。该土壤胞外酶检测装置，通过震荡使土壤与胞外酶完全分离，并通过保温手法保持酶的活性，为进一步的测定提供坚实的基础，提高了测定的准确度。

摘要： 本发明公开了一种基于胞外酶的人工湿地生物膜发育状态测定方法，属于人工湿地水处理技术领域。该方法包括以下步骤：测定人工湿地根系表面、根区基质和非根区基质生物膜中与氮、磷和有机质降解相关的胞外酶活性，应用酶种类数、酶多样性指数和酶综合指数等评价指标评价人工湿地生物膜发育状态和过程。利用本发明的方法，可以简单、快速、全面地对启动运行过程中人工湿地生物膜的活性和降解能力进行解析和评价，能够剖析人工湿地启动期的生物膜发育程度和稳定过程，预测湿地生物膜成熟稳定状态和处理效能，为处理养殖尾水人工湿地的快速启动和应用优化提供理论依据和实践参考。

摘要： 本发明涉及一种连续胞外酶生物法制备海藻糖的方法，该方法利用全细胞固定化或分泌海藻糖合酶基因工程菌连续高效生产海藻糖并连续色谱分离、纯化、结晶制备海藻糖。本发明首次建立了一套连续性强的产酶及制备海藻糖生产工艺，该工艺以全细胞表面展示或胞外分泌的海藻糖合酶或麦芽寡糖基海藻糖合成酶‑麦芽寡糖基海藻糖水解酶融合酶进行转化，避免了细胞的破碎和分离纯化成本，酶液或固定化酶方便获取，操作简便。

摘要： 本发明公开了一种胞外酶反应生成乙酰丙酮的方法，属于生物工程技术领域。该方法包括以下步骤：1)将乙酰丙酮裂解酶突变体基因Dke1K15Q连接到表达载体，获得重组载体；2)将步骤1)所得重组载体转化宿主菌中，获得重组菌，重组菌发酵培养，获得培养液；3)将步骤2)所得培养液经过处理，获得酶液；4)将步骤3)所得酶液与反应底物混合后反应，制备得到乙酰丙酮。本发明提供的方法，能够在体外利用酶反应将甲基乙二醛和乙酸铵转化为乙酰丙酮，产量达到388.9mg/L，对于解决全细胞合成体系中乙酰丙酮对于细胞的毒性抑制问题提供了新的思路。

摘要： 本发明公开了一种基于胞外酶的人工湿地生物膜发育状态测定方法，属于人工湿地水处理技术领域。该方法包括以下步骤：测定人工湿地根系表面、根区基质和非根区基质生物膜中与氮、磷和有机质降解相关的胞外酶活性，应用酶种类数、酶多样性指数和酶综合指数等评价指标评价人工湿地生物膜发育状态和过程。利用本发明的方法，可以简单、快速、全面地对启动运行过程中人工湿地生物膜的活性和降解能力进行解析和评价，能够剖析人工湿地启动期的生物膜发育程度和稳定过程，预测湿地生物膜成熟稳定状态和处理效能，为处理养殖尾水人工湿地的快速启动和应用优化提供理论依据和实践参考。

摘要： 本发明提供一种基于多维数据驱动的传统发酵鱼露滋味形成功能微生物胞外酶挖掘方法，分别构建鱼露发酵过程滋味物质变化数据集和发酵鱼露微生物功能基因数据库，对unigene翻译的蛋白质以及鉴定到的蛋白质进行物种注释分析，通过反向遗传学推测氨基酸序列获得相应的编码基因信息，追踪复杂环境中微生物群体的功能，挖掘影响滋味形成的微生物胞外酶，相对于传统纯培养盲目筛选，具有通量高、目的性强和和预测性高等优势，为实现传统发酵海洋食品品质靶向调控提供技术支撑。

摘要： 本发明公开了微生物基因丰度及胞外酶活性在秸秆还田固碳中的应用。属于固碳技术领域。利用BG、AP、MBC、酸杆菌丰度和变形菌丰度的变化表征新碳的生成，BG、AP、MBC、酸杆菌丰度和变形菌丰度越高，则新碳生成量越多。针对养分可利用性与土壤新碳生成强度的关系，本发明又通过先进的多因子分析方法，定量分析微生物生物量、胞外酶活性和微生物分类单元等关键因子对土壤新碳生成的贡献率及潜在微生物机制。增强和扩展了对不同土壤状况、不同N、P和S养分添加水平下，秸秆添加对土壤新碳生成潜在微生物机制的理解，为揭示SOC动态变化的关键微生物步骤和优化农业生态系统中的养分管理提供了新的证据。

摘要： 本发明公开了胞外酶催化合成鼠李糖脂的方法，利用鼠李糖基转移酶RhlB在胞外催化鼠李糖脂前体dTDP‑L‑鼠李糖和HAAs合成鼠李糖脂。其中dTDP‑L‑鼠李糖和HAAs基于基因改造菌株生产，其中一株菌可合成dTDP‑L‑rhamnose但不能合成HAAs，另外一株菌只能合成HAAs不能合成dTDP‑L‑rhamnose。将这两株菌合成的鼠李糖脂前体进行混合后，可在胞外利用鼠李糖脂合成酶RhlB在胞外催化前体dTDP‑L‑rhamnose和HAAs间连接合成鼠李糖脂。本发明的方法在实施过程中仅需短暂摇匀混合，可以解决鼠李糖脂发酵过程中大量起泡的问题，在鼠李糖脂生物合成领域具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种微生物胞外酶全海深保压酶学测定装置，包括保压采样瓶、保压转移设备、保压酶学反应器和酶活检测设备。保压酶学反应器包括筒体、堵头、四氟垫圈、O型圈、活塞、高压直通阀及高压接口。保压酶学反应器为密闭桶状，内部设有活塞，两端均设有堵头和阀门，阀门以高压接口与保压转移设备连接。本发明可以实现全海深(0‑11000米)样品保压采样、转移；可进行样品采集、转移和酶学反应均在原位压力和温度条件下进行。本发明涉及的保压酶学反应器，其结构简单、方便、可靠，能与保压转移设备、保压采样瓶快速连接，并已经海试成功，为进行全海深微生物胞外酶保压酶活测定提供了一种可靠装置，应用前景良好。

摘要： 本实用新型公开了一种微生物胞外酶全海深保真酶学测定装置，包括保压采样瓶、保压转移设备、保压酶学反应器、保温设备和酶活检测设备。保压酶学反应器包括筒体、堵头、四氟垫圈、O型圈、活塞、高压直通阀及高压接口。保压酶学反应器为密闭桶状，内部设有活塞，两端均设有堵头和阀门，阀门以高压接口与保压转移设备连接。本实用新型可以实现全海深(0‑11000米)样品保压采样、转移；可进行样品采集、转移和酶学反应均在原位压力和温度条件下进行。本实用新型的保压酶学反应器，其结构简单、方便、可靠，能与保压转移设备、保压采样瓶快速连接，并已经海试成功，为进行全海深微生物胞外酶保压酶活测定提供了一种可靠装置，应用前景良好。