牙本质涎磷蛋白

摘要： 目的:探讨miR-589-3p靶向牙本质涎磷蛋白(DSPP)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)肿瘤干细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:对OSCC患者和口腔良性肿物患者组织中miR-589-3p和DSPP的表达进行检测,对miR-589-3p和DSPP的相关性进行分析。双荧光素酶报告实验验证miR-589-3p与DSPP的靶向关系。免疫磁珠分选技术分选OSCC肿瘤干细胞,干预肿瘤干细胞中miR-589-3p和DSPP的表达,将细胞分为mimics control组、mimics miR-589-3p组、inhibitors control组、inhibitors miR-589-3p组、mimics miR-589-3p+pcDNA-DSPP组。随后检测各组上皮间质转化相关因子的表达。MTT、Transwell和流式细胞术分别用来检测各组细胞增殖活力、侵袭以及细胞凋亡情况。结果:相对于口腔黏膜良性肿物患者,OSCC患者miR-589-3p表达下降,DSPP表达增强,miR-589-3p与DSPP表达呈负相关(均P<0.05)。相对于mimics control组,mimics miR-589-3p组中细胞凋亡增多,细胞增殖、侵袭以及上皮间质转化相关因子的表达被抑制(均P<0.05)。相对于inhibitors control,inhibitors miR-589-3p组中细胞凋亡减少,细胞增殖、侵袭以及上皮间质转化相关因子的表达增多(均P<0.05)。miR-589-3p模拟物对OSCC肿瘤干细胞的作用能够被DSPP过表达逆转。结论:miR-589-3p可靶向抑制DSPP,进而抑制OSCC肿瘤干细胞的增殖、侵袭并促进其凋亡。

摘要： 目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine upregulated 1,TUG1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及成骨/牙本质向分化的影响。方法分离培养hDPSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD73、CD90、CD133、STRO-1,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定其分化能力。hDPSCs成骨诱导0、7、14 d收集RNA,qRT-PCR检测TUG1的表达水平。构建携带sh-TUG1的慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA(TUG1)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,并通过感染hDPSCs及嘌呤霉素筛选建立稳定沉默TUG1的hDPSCs细胞系,CCK-8检测hDPSCs增殖能力,ALP和茜素红染色及定量检测hDPSCs的早期ALP活性和晚期矿化结节的形成,qRT-PCR和Western blot检测成牙本质及成骨分化相关的基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白-1(dentine matrix protein 1,DMP-1)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因及蛋白表达变化。结果成功分离、培养和鉴定hDPSCs,hDPSCs成骨向分化过程中TUG1的表达明显增加(P<0.05)。沉默TUG1后hDPSCs的增殖能力下降(P<0.05),ALP活性降低,矿化结节形成减少;成牙本质分化基因DSPP、DMP-1以及成骨分化基因Runx2、OCN、OPN表达也显著降低(P<0.05)。结论沉默TUG1可抑制hDPSCs的增殖及成骨/成牙本质分化。

摘要： 遗传性牙本质发育不全Ⅱ型是一种常见的常染色体显性遗传性牙本质缺陷病,牙本质涎磷蛋白基因(DSPP)的突变已被证明是其致病原因.现今在DSPP编码区已发现了超过30个突变位点,可分为信号肽编码区突变、牙本质涎蛋白基因(DSP)编码区突变和牙本质磷蛋白基因(DPP)编码区突变等3组,本文对以上各组突变位点及突变机制进行综述.

摘要： Objective To investigate the effect of exogenous inhibition of Wnt signaling pathway on the differentiation of human dental pulp cells (HDPCs) into dentin induced by bone morphogenetic protein 2 (BMP-2). Methods HDPCs were randomly divided into the control group, induction group, and inhibitor treatment group. The cells in the control group were not treated. The BMP-2 induction solution was used in the induction group, and the Wnt inhibitors DKK-1 and BMP-2 induction solution were used in the inhibitor treatment group. The expression of β-catenin protein in the nuclei of each group was detected by Western blotting. We detected the alkaline phosphatase activity by PNPP azo method. The number of calcium nodules was detected by Von Kossa staining. The expression of dentin sialophosphoprotein (DSPP) and dentin matrix protein (DMP-1) in cells of each group was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. Results Compared with the control group, the expression of β-catenin protein in the HDPC nuclei was down-regulated in the induction group and the inhibitor treatment group (P ＜ 0. 05), while ALP activity, the number of calcified nodules, DSPP and DMP-1 mRNA and protein expression were up-regulated (all P ＜ 0. 05). Compared with the induction group, the expression of β-catenin protein in the HDPC nuclei was down-regulated in the inhibitor treatment group (P ＜ 0. 05), while ALP activity, the number of calcified nodules, DSPP and DMP-1 mRNA and protein expression were up-regulated (all P ＜ 0. 05). Conclusion Exogenous inhibition of Wnt signaling pathway can promote the differentiation of HDPCs into dentin induced by BMP-2.%目的 探讨外源性抑制Wnt信号通路对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的人牙髓细胞(HDPC)向成牙本质分化的影响.方法 将HDPC随机分为对照组、单纯诱导组、抑制剂处理组,对照组不处理,单纯诱导组采用BMP-2诱导液处理,抑制剂处理组采用Wnt抑制剂DKK-1及BMP-2诱导液处理.采用蛋白免疫印迹技术检测各组细胞核β-catenin蛋白表达,PNPP偶氮法检测各组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa染色检测钙结节数量,实时荧光定量PCR与蛋白免疫印迹技术检测各组细胞中牙本质基质蛋白(DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达.结果 与对照组相比,单纯诱导组、抑制剂处理组中HDPC细胞核β-catenin蛋白表达下调(P均＜0.05),而ALP活性、钙化结节数量、DSPP和DMP-1 mRNA与蛋白表达均上调(P均＜0.05).与单纯诱导组相比,抑制剂处理组中HDPC细胞核β-catenin蛋白表达下调(P ＜0.05),同时ALP活性、钙化结节数量、DSPP和DMP-1 mRNA与蛋白表达上调(P均＜0.05).结论 外源性抑制Wnt信号通路,可促进BMP-2诱导HDPC分化为成牙本质细胞.

摘要： 目的 探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础.方法 采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达.实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达.结果 hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因.与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P<0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P<0.05).3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P<0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),于14 d达到峰值.结论 Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达.

摘要： 目的 研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白(DSPP)和Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)表达的影响.方法 取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达.结果 野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达.小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变.结论vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育.

摘要： 目的探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础。方法采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达。实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达。结果hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因。与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P<0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P<0.05)。3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P<0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),于14 d达到峰值。结论Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达。

摘要： Objective To investigate the reliability of electrochemical enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) for the detection of dentin sialophosphoprotein(DSPP) in gingival crevicular fluid(GCF) of orthodontic patients.Methods GCF were collected from the orthodontic patients,and then the amount of DSPP in GCF were detected by electrochemical ELISA and spectroscopic ELISA respectively.The difference between the results of two methods were analyzed.Results In electrochemical ELISA,the second order derivative linear sweep voltammetric peak current was linear with DSPP concentration in the range from 0.25-800.00 ng/L.It was found that the detection limit of the electrochemical method(0.25 ng/L) was much lower than that of the spectroscopic method.The paired-samples rank sum test showed no significant difference between the DSPP concentrations in human GCF samples measured by spectroscopic ELISA procedure and those measured by electrochemical ELISA procedure(P=0.063).Conclusions Electrochemical ELISA is a viable way of detecting DSPP in GCF with higher sensitivity than spectroscopic ELISA.%目的 探讨电化学酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测正畸患者龈沟液中牙根吸收标志性蛋白牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)含量的可行性.方法 使用线性回归方程建立电化学ELISA和分光光度ELISA检测标准DSPP的曲线图.选取于首都医科大学口腔医学院正畸科就诊的患者20例,提取上颌双侧中切牙龈沟液,分别使用电化学ELISA、分光光度ELISA检测DSPP含量,并使用配对秩和检验比较两种方法精确性的差异.结果 电化学ELISA检测标准DSPP,线性范围为0.25～ 800.00 ng/L,检测下限为0.25 ng/L,灵敏度明显优于分光光度ELISA(线性范围为5～1 500 ng/L,检测下限为5 ng/L).两种方法检测的正畸患者龈沟液DSPP质量浓度差异无统计学意义(P=0.063).结论 电化学ELISA能更灵敏地检测龈沟液中DSPP含量.

摘要： 目的 初探一种检测正畸牙根吸收特异性蛋白的新型电化学酶联免疫分析(ELISA)方法.方法 选取人牙本质涎磷蛋白(DSPP)标准品以辣根过氧化物酶(HRP)为标记酶、四邻联甲苯胺(OT)为酶催化反应的底物,分别用电化学ELISA法及传统光学ELISA法检测酶催化产物.对比研究两种检测方法下DSPP检测的线性范围及检测限的差异.结果 用电化学ELISA法检测酶催化产物,产物在-0.63 V(vs.Ag/AgCl)有一个灵敏的还原峰,进而可以用于游离HRP的检测.应用于DSPP标准品的检测,线性范围为0.5-800.0 pg/mL,检出限为0.5 pg/mL,是传统光度ELISA检测限的1/10.结论 电化学ELISA法可能成为检测牙根吸收特异性蛋白的新型生化检测方法.

摘要： 目的:就天津地区新发现的一个遗传性乳光牙本质回族家系进行牙本质涎磷蛋白(DSPP)致病基因的突变检测,以证实是否有新的突变位点,并进一步阐明该病基因型和表型间的相互关系.方法:对该家系中的10名患者和8名正常人提取外周血DNA,针对DSPP基因外显子3和外显子4设计引物,以进行巢氏PCR扩增.PCR扩增产物经直接测序分析,或用限制性内切酶RsaI酶切鉴定.结果:测序结果显示:遗传性乳光牙本质患者DSPP基因外显子3的3658位核苷酸存在C→T的无义突变,该突变使终止密码子提前出现:RsaI酶切分析也证实:10名患者的DSPP基因发生了终止突变,所有患者在该位点均为杂合子.结论:DSPP基因无义突变可能会严重影响DSPP基因的功能,从而导致牙本质发育不全.

摘要： 本发明公开了一种诊断牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的方法，它包括检测个体的DSPP基因、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体患牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的可能性大于正常人群。本发明还公开了治疗牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的方法和药物组合物。

摘要： 本发明公开了一种诊断牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的方法，它包括检测个体的DSPP基因、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体患牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的可能性大于正常人群。本发明还公开了治疗牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的方法和药物组合物。

摘要： 本发明公开了属于电化学酶联免疫测试技术领域的一种牙本质磷蛋白的检测方法及其装置。在由电解池、检测仪表和储汞瓶串联连接，及外加电源与检测仪表连接构成的装置中采用“双抗体夹心法”酶联免疫反应及“电化学”检测法相结合精确测定牙本质磷蛋白的精确含量，采用“滤纸吸着法”提取患者口腔龈沟液中的牙本质磷蛋白，并采用“蛋白提取液纯化法”提纯提取患者口腔龈沟液中的牙本质磷蛋白，提纯后放入离心密封管作待测样品；本发明可以实现对龈沟液中牙本质磷蛋白变化规律的精确检测，可以实现对患者牙根吸收的早期诊断；本检测方法具有操作简单、灵敏度高、无辐射损伤等优点，在牙根吸收的临床诊断中具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了属于电化学酶联免疫测试技术领域的涉及牙根吸收早期诊断的一种牙本质磷蛋白的生化检测方法及装置。在由三维微柱阵列结构工作电极、铂辅助电极和饱和甘汞参比电极构成的电解池、外加电源与检测仪表连接的装置中，采用“滤纸吸着法”提取患者口腔龈沟液中的牙本质磷蛋白，提纯后放入离心密封管作待测样品；采用“双抗体夹心法”酶联免疫反应及“电化学”检测法相结合精确测定牙本质磷蛋白的精确含量，本发明可以实现对龈沟液中牙本质磷蛋白变化规律的精确检测，可以实现对患者牙根吸收的早期诊断。本检测方法具有操作简单、灵敏度高、无辐射损伤等优点，在牙根吸收的临床诊断中具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种诊断牙本质生成不全Ⅱ型和/或牙本质生成不全Ⅱ型伴耳聋的方法，它包括检测个体的DSPP基因、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体患牙本质生成不全Ⅱ型和/或牙本质生成不全Ⅱ型伴耳聋的可能性大于正常人群。本发明还公开了治疗牙本质生成不全Ⅱ型和/或牙本质生成不全Ⅱ型伴耳聋的方法和药物组合物。

摘要： 本发明公开了一种诊断牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的方法,它包括检测个体的DSPP基因、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异,存在变异就表明该个体患牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的可能性大于正常人群。本发明还公开了治疗牙本质生成不全II型和/或牙本质生成不全II型伴耳聋的方法和药物组合物。

摘要： 本发明公开了属于电化学酶联免疫测试技术领域的涉及牙根吸收早期诊断的一种牙本质磷蛋白的生化检测方法及装置。在由三维微柱阵列结构工作电极、铂辅助电极和饱和甘汞参比电极构成的电解池、外加电源与检测仪表连接的装置中，采用“滤纸吸着法”提取患者口腔龈沟液中的牙本质磷蛋白，提纯后放入离心密封管作待测样品；采用“双抗体夹心法”酶联免疫反应及“电化学”检测法相结合精确测定牙本质磷蛋白的精确含量，本发明可以实现对龈沟液中牙本质磷蛋白变化规律的精确检测，可以实现对患者牙根吸收的早期诊断。本检测方法具有操作简单、灵敏度高、无辐射损伤等优点，在牙根吸收的临床诊断中具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了属于电化学酶联免疫测试技术领域的一种牙本质磷蛋白的检测方法及其装置。在由电解池、检测仪表和储汞瓶串联连接，及外加电源与检测仪表连接构成的装置中采用“双抗体夹心法”酶联免疫反应及“电化学”检测法相结合精确测定牙本质磷蛋白的精确含量，采用“滤纸吸着法”提取患者口腔龈沟液中的牙本质磷蛋白，并采用“蛋白提取液纯化法”提纯提取患者口腔龈沟液中的牙本质磷蛋白，提纯后放入离心密封管作待测样品；本发明可以实现对龈沟液中牙本质磷蛋白变化规律的精确检测，可以实现对患者牙根吸收的早期诊断；本检测方法具有操作简单、灵敏度高、无辐射损伤等优点，在牙根吸收的临床诊断中具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种修复脱矿牙本质并封闭牙本质小管的前驱体溶液及方法，属于生物材料技术领域。本发明可以修复脱矿牙本质并封闭牙本质小管，以基于胶原内矿化的过生长矿化为策略，其为聚合物诱导的磷酸钙液相矿化前驱体，其成分包括聚合物，磷酸钙，氯化钠。该液相矿化前驱体的制备步骤为：分别配制含钙母液与含磷母液，将一定量聚天冬氨酸溶液滴加入含钙溶液并轻轻混匀，再加入与含钙溶液等体积的含磷溶液，混合均匀。本发明原料易得，工艺简便，且能修复脱矿牙本质并深度封闭牙本质小管。

摘要： 本实用新型提供一种后牙即刻种植牙本质备孔钻和牙本质备孔钻组，所述后牙即刻种植牙本质备孔钻包括一体化连接的钻柄(1)和钻头(2)，所述钻头(2)与钻柄(1)相接处形成有止动台阶；沿着远离所述钻柄(1)的方向，所述钻头(2)的横截面积逐渐减小，且所述钻头(2)上设有两个刃瓣和两个螺旋槽，两个所述刃瓣呈螺旋状沿所述钻头(2)的周圈设置。采用本申请中所述的牙本质备孔钻，逐级将牙本质备孔，以便牙根分叉处下面的牙槽骨的种植窝洞预备，从而利于完成牙齿即刻种植，采用这种工具和牙种植方式备孔时不容易偏斜，初期稳定性好，创口小容易愈合。