山羊痘病毒

摘要： 以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板,用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列,并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析;优化合成059基因编码序列,连接载体pET42a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌,采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白,并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度;将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层,分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育,利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0 h的细胞黏附GTPV的量,研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响。结果表明:成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列,其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域,显示出肝素结合活性;该蛋白羧基端有2个跨膜区,不利于蛋白质的表达,但优化DNA序列构建的重组质粒菌,经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达;免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性;Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06 mg/mL;荧光定量PCR检测数据显示,不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同,表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用,能降低病毒黏附到细胞的拷贝数。

摘要： 牛结节性皮肤病又称牛结节疹、牛结节性皮炎,致病病原为牛结节性皮肤病病毒,属痘病毒科、山羊痘病毒属,该属病毒还包括绵羊痘病毒和山羊痘病毒。患牛临床主要表现为体表皮肤出现结节,触碰结节处患牛疼痛,结节硬而凸起,界限清楚,其体表淋巴结肿大。随着病程的延长,结节扩散,结节主要出现在头部、颈部、四肢、乳房、生殖器和会阴部。病牛还会出现发热、病毒血症,母牛可出现流产、产奶量下降,公牛则可不育等。本病传染性极强,病程可达1个月左右,是世界动物卫生组织(OIE)规定必须通报的动物疫病之一。

摘要： 试验旨在研究山羊痘病毒晚转录因子VLTF-1的特性。研究以山羊痘病毒SS基因组株为模板,采用PCR方法扩增晚转录因子VLTF-1基因,采用基因克隆常规方法与pET-42b表达载体相连接构建原核表达载体,经菌液PCR、双酶切和测序鉴定,阳性克隆转化大肠杆菌BL21,以0.1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳和Western Blot检测表达情况;同时对VLTF-1基因及其蛋白特性进行生物信息学分析。结果显示,PCR扩增的目的基因全长783 bp,与参考株Pellor同源性为100%,推测其编码261个氨基酸。遗传进化树分析表明,羊痘病毒属的3个种各分成一个分支,目的基因与山羊痘毒株位于同一分支。测序结果显示,目的基因表达载体构建正确,SDS-PAGE检测表达了27 kDa的蛋白,Western Blot鉴定表明目的蛋白得到表达。生物信息学分析结果显示,SS株的VLTF-1基因与山羊痘病毒聚于一支,该蛋白是一个跨膜亲水蛋白,具有26个磷酸化位点,二级结构是其结构连接5个α-螺旋。研究表明,试验成功克隆晚转录因子VLTF-1基因,并诱导表达蛋白,预测该蛋白的生物学信息。

摘要： 牛结节性皮肤病(Lumpyskindisease,缩写为LSD)又称牛疙瘩皮肤病或牛结节疹,是由痘病毒科山羊痘病毒属牛结节性皮肤病病毒引起的。笔者将在临床中接触的多例牛结节性皮肤病情况分享如下:1发展趋势该病于1929年在赞比亚发生。随后一路向西北方向蔓延,2015年以来,该病已传到欧洲东南部迅速流行。

摘要： 牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)引起的牛的一种急性、亚急性传染病[1]。LSDV为双链DNA病毒,有囊膜,全基因组由约156个假定基因组成,只有一个血清型,代表毒株为南非Neethling株。LSDV与绵羊痘病毒(sheeppox virus,SPV)和山羊痘病毒(goatpox virus,GPV)共同构成山羊痘病毒属,该属成员之间同源性很高,血清学有很强的交叉反应。

摘要： 牛结节性皮肤病简称LSD,也叫牛结节疹、牛疙瘩皮肤病、牛结节性皮炎,是由痘病毒科、山羊痘病毒属的LSD病毒(LSDV)引起的一种急性、热性、全身性感染疫病。山羊痘病毒属还包括山羊痘病毒和绵羊痘病毒,三者之间亲缘关系很近,并存在交叉免疫保护。该病主要危害养牛业,是OIE法定报告的疫病之一,我国将其列为二类传染病管理。

摘要： 1病原引起本病的病原是山羊痘病毒属牛结节性皮肤病病毒,它抗酸性强,耐低温,对热敏感,在pH 6.6~8.8之间存活时间长,即使是-80°C的条件也能存活十多年,在55°C环境中存活时间不超过2 h。一般采用乙醚、氯仿等能杀灭该病毒,醛类消毒剂对其也有较好的杀灭效果。2流行特点该病不感染人,只感染牛(水牛、黄牛、奶牛均易感),牛不分季节、年龄均易感。病牛的皮肤结节、脓液、唾液,被污染的饲草、饲料都可传染本病。

摘要： 羊痘又被称为“羊出花”“羊天花”等,是一类人畜共患病,是由羊痘病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,病原包含绵羊痘病毒和山羊痘病毒两种。该病具有广泛传播、高发病率和高死亡率的特点,可感染任何品种、任何年龄段的羊只,且羊只对痘病毒的易感性与性别无关。目前该病没有特效药物可以治疗,一旦暴发将面临严重死亡,因此一经发现应严格进行封锁、隔离、扑杀等无害化处理。

摘要： [目的]确定内蒙古某规模化奶山羊养殖场部分引进羔羊发病死亡的原因,为该场加强重点疫病免疫防控提供科学依据。[方法]对出现典型临床症状的发病羊只进行病理解剖学观察,无菌采集肺脏病变样本,制备病理组织切片;无菌采集发病羊只的血液制备血清,采用高敏荧光技术检测血清中的山羊痘病毒抗体;无菌采集发病羊只的肺组织、鼻拭子、眼拭子,利用PCR技术检测山羊痘病毒P32基因,对测序获得的序列进行BLAST比对并进行同源性分析。[结果]剖检可见病羊口腔、鼻腔、喉头、气管黏膜有圆形疹痘;肺部明显水肿,表面存在红色疹痘,切开后呈不透明、灰白色胶冻样;瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃黏膜均出现疹痘。病理组织学检查可见肺泡红色深染,间质变宽,腔内存在脱落的上皮细胞,Ⅱ型肺泡上皮细胞增生,并化生为腺泡样状;支气管腔内存在大量的炎性细胞。发病山羊血清经高敏荧光技术检测,判定为山羊痘病毒抗体阳性。采集肺组织(GTPV-YP1)、鼻拭子(GTPV-YP2)、眼拭子(GTPV-YP3)样品各1份,3份样品经P32基因PCR检测均获得983 bp的扩增片段,与预期大小一致;GTPV-YP1、GTPV-YP2样品P32基因序列与山羊痘病毒中国分离株KC951854.1、Oman分离株MN072621.1 P32基因的同源性为100%,GTPV-YP3与山羊痘病毒中国分离株EF514892.1、HM572329.1、JN596275.1、MG817382.1的同源性为99.0%。[结论]经病理解剖学观察、病理组织学检查、血清学检测以及病原PCR鉴定,确定引起该场引进奶山羊羔羊发病的原因为山羊痘病毒感染。

摘要： 牛结节性皮肤病(Lumpyskin disease,LSD)是由牛结节性皮肤病病毒引起的牛全身性感染疫病。牛结节性皮肤病病毒属于痘病毒科山羊痘病毒属。该病主要通过吸血昆虫(蚊、蝇、蜢、虻、蜱等)叮咬传播,发病具有季节性,多发生在吸血虫媒活跃季节。易感各类牛,潜伏期28天,发病率达2%~45%,病死率低于10%。

摘要： 为了研制安全有效的预防羊口疮的重组山羊痘病毒活载体疫苗。本研究通过PCR技术从ORFV-shz分离株基因组中扩增目的基因F1L，将获得的基因片段与载体pUC-TK12连接，同时酶切插入LacZ筛选报告基因和Pb56双向启动子，构建重组转移载体pUC-TK12-LacZ-F1L，将其转染至己感染山羊痘病毒疫苗株的BHK-21细胞，进行同源重组。通过蚀斑筛选挑取蓝色蚀斑，收获重组山羊痘病毒并进行PCR初步鉴定。结果显示获得了全长1023bp的F1L基因，并构建了重组转移载体，转染BHK-21细胞后进行同源重组，成功获得了携带F1L基因的重组山羊痘病毒。本研究成功获得了含有羊传染性脓疽病毒F1L基因的重组山羊痘病毒疫苗候选株rGPV-F1L，为羊传染性脓疱病基因工程活载体疫苗的研制奠定基础。

摘要： 研究选择GPV作为病毒载体，构建可高效表达F1L蛋白的重组山羊痘病毒，并对其生物学特性进行初步研究。首先将F1L基因与转移载体pUC-TK12-LacZ连接;转染己接种山羊痘病毒的BHK-21细胞，通过蓝白斑筛选、纯化，对重组病毒进行连续传代培养，应用PCR、间接免疫荧光和Western免疫印迹等方法进行鉴定，并对重组病毒进行不同温度、酸碱度、有机溶剂和紫外照射等处理，进行TCID50评价;rGPV-F1L免疫小鼠后，经酶联免疫吸附实验检测其特异性抗体水平。结果显示成功构建重组病毒转移载体pTL-F1L，将其转染BHK-21细胞后，通过蚀斑纯化获得了可稳定遗传的重组病毒rGPV-F1L。间接免疫荧光和Western免疫印迹检测发现其可稳定表达F1L蛋白。55°C30min或紫外照射1h即可灭活重组病毒，且其对强酸、强碱、有机溶剂等较敏感。接种重组山羊痘病毒的小鼠40d内机体可持续产生高水平的特异性抗体。以上结果表明获得了可稳定表达羊传染性脓疱病毒F1L的重组山羊痘病毒疫苗候选株，其具有良好的抗原性和生物学活性，这为同时预防羊传染性脓疱病和羊痘提供新途径。

摘要： 山东某山羊养殖场出现一种以全身皮肤出现痘疹为典型特征的接触性、热性传染病,根据临床症状疑似为羊痘.将待检病料接种到单层Vero细胞上培养,传代9次后方出现明显病变,接种鸡胚3代后在绒毛尿囊膜上出现明显痘斑,用电子显微镜观察绒毛尿囊膜超薄切片可见成熟的病毒粒子,确诊为山羊痘病毒.提取病毒DNA并参照GenBank上山羊痘病毒P32基因序列设计一对引物,成功扩增出一条995bp的特异性DNA条带,测序后进行序列分析,山羊痘山东分离株与GenBank已发表的四株病毒P32基因的同源性在99.5％上.

摘要： 本研究分别采用常规方法制备了绵羊睾丸细胞、绵羊肾细胞、犊牛睾丸细胞三种原代细胞，接种山羊痘病毒细胞弱毒AV41株进行传代培养，比较该病毒株在三种细胞上的病变时间、病变形态、病毒传代稳定性等增殖特性，并进行特异性、安全性、效力测定，为山羊痘病毒疫苗生产选择细胞提供研究数据。试验结果显示，AV41株在三种原代细胞上均可增殖，但细胞病变形态、病变时间、最高传代次数等增殖特性存在一定差异。三种不同细胞培养的AV41株其特异性、安全性均符合兽药典要求，TCID50浓度分别达到10-6.125，10-5.5，10-5.875／ml。

摘要： 构建靶向山羊痘病毒DNA聚合酶基因的RNAi质粒载体，研究其对山羊痘病毒DNA聚合酶基因表达的沉默作用。本研究针对山羊痘病毒基因组高度保守的DNA聚合酶区段，选取了5个干扰靶位点。rn 根据RNAi技术原理，构建了包括对照在内的6个shRNA重组表达质粒，转染细胞后接种病毒，提取细胞毒液RNA，应用实时荧光定量PCR检测siRNA重组质粒对羊痘病毒DNA聚合酶基因表达的抑制作用。结果显示，重组表达质粒组的抑制率在63％至93.8％之间，其中以pSI-W2最为明显，抑制率为93.8％。本研究应用RNAi技术在细胞水平筛选出了能够高效抑制山羊痘病毒在体外增殖的干扰片段，为抗山羊痘病毒转基因羊的研究奠定了基础。

摘要： 为验证山羊痘病毒诱导BHK-21细胞出现凋亡现象的存在，本研究分别采用H.E染色法、凋亡试剂盒检测法、流式细胞仪检测法和DNA Ladder检测法，对山羊痘病毒感染的BHK-21细胞培养物进行细胞凋亡检测。结果显示，山羊痘病毒确能诱导BHK-21细胞发生凋亡，本研究结果对山羊痘病毒引起的某些病理变化的解释提供了依据。

摘要： 使用毕赤酵母系统表达山羊痘病毒P32基因，为进一步羊痘病毒亚单位疫苗及诊断试剂盒研究奠定基础。试验证实使用毕赤酵母菌表达载体pPICZαA能实现P32蛋白的分泌表达，且表达量可观，这对GPV P32基因表达产物用于鉴别诊断试剂、亚单位疫苗的研究提供保障。

摘要： 鉴于传统检测方法的诸多缺点，为了深入研究山羊痘病毒(GPV)，利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列，选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段，设计并合成了一对PCR引物和一条TaqMan-MGB探针，建立了FQ-PCR和标准曲线，并利用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材料和人工感染动物材料进行GPV核酸检测.结果表明，构建的PQ-PCR具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性.该方法的建立为山羊痘临床快速高效的诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展及转归研究提供一种重要的手段.

摘要： 目的和方法:对发生在贵州省的山羊痘皮肤病变进行了透射电镜观察。结果:发现有髓神经纤维被山羊痘病毒和被病毒感染的巨噬细胞所波及。可见节段性脱髓鞘、轴索和雪旺氏细胞变性。结论:有髓神经纤维被病毒侵犯可能是山羊痘病羊虽然出现全身痘疹，但临床上却表现为迟钝、沉郁、痛觉减弱甚至痛感缺失的原因。

摘要： 目的：为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门氏菌诱导山羊免疫应答效果。方法：本研究将60只黑山羊随机分为3组即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门氏菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后7d、15d、30d和45d的山羊消化道SIgA含量中,重组细菌组明显高于弱毒疫苗组(P＜0.05),45d时到达最高值(21.924±1.122 ug/L);(2)在消化道/呼吸道粘膜肥大细胞数量上,重组细菌组与弱毒疫苗组基本一致,从大到小依次是十二指肠、空肠、回肠、真胃和气管;(3)在诱导产生P32抗体上,重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但差异不明显(P＞0.05);(4)在淋巴细胞转化效率上,免疫15d前重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但免疫30 d后重组细菌组高于弱毒疫苗组,但差异均不显著(P＞0.05);(5)在诱导产生细胞因子上,重组细菌组山羊血清IL-2含量低于弱毒疫苗组,差异极显著(P＜0.01),血清IL-5含量高于弱毒疫苗组,差异极显著(P＜0.01),血清TNF-β高于弱毒疫苗组,差异显著(P＜0.05),而血清IFN-γ和TNF-α含量与弱毒疫苗组差异不明显(P＞0.05).结论：上述实验结果表明,构建的携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门氏菌能诱导山羊产生较好的免疫应答反应。

摘要： 本发明提供一种牛结节性皮肤病病毒LSDV、山羊痘病毒GTPV和绵羊痘病毒SPPV的快速检测方法，以及应用于检测方法的Taqman‑MGB探针三重荧光PCR引物对和探针组。其中用于羊痘病毒属CaPV检测的正向引物，其序列为SEQ ID NO：1、用于羊痘病毒属CaPV检测的反向引物，其序列为SEQ ID NO：2；用于检测牛结节性皮肤病病毒LSDV的探针，其序列为SEQ ID NO：3；用于检测山羊痘病毒GTPV的探针，其序列为SEQ ID NO：4；用于检测绵羊痘病毒SPPV的探针，其序列为SEQ ID NO：5。本发明的方法检测的灵敏度高、特异性好、快速高通量；且检测方法操作简便。

摘要： 本发明公开一种用于鉴别检测绵羊痘病毒和山羊痘病毒的试剂盒。本发明的鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒检测盒内包括有三组引物：SEQID№1、SEQID№2、SEQID№3、SEQID№4、SEQID№5、SEQID№6、SEQID№7、SEQID№8、SEQID№9、SEQID№10、SEQID№11和SEQID№12。本发明可快速鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒，并在羊痘病毒流行病学研究中应用。

摘要： 本发明公开了一种用于山羊痘病毒和绵羊痘病毒双重PCR检测试剂盒和用于山羊痘病毒和绵羊痘病毒快速鉴别检测的双重PCR方法。根据山羊痘病毒和绵羊痘病毒的基因组序列各设计一对PCR引物，可以扩增出相对应的特异性片段，实现对山羊痘病毒和绵羊痘病毒的检测与鉴别。本发明利用双重PCR技术，单管同步检测山羊痘病毒和绵羊痘病毒，降低了对山羊痘和绵羊痘的检测成本和工作量，实现了对山羊痘和绵羊痘的鉴别检测。本发明建立了一种特异性强、灵敏度高、节时省力并且易于观察结果的双重PCR方法，操作简便，特异性强、灵敏度高、可重复性高，且没有复杂的后处理。

摘要： 本发明提供了一种山羊痘病毒的增殖方法、山羊痘活疫苗及其制备方法和应用，涉及疫苗制备技术领域。本发明提供的山羊痘病毒的增殖方法，包括以下步骤：将山羊痘病毒在悬浮培养细胞系上传代驯化，得到驯化病毒；将细胞系进行悬浮扩大培养；将驯化后病毒接种至扩大培养的细胞系上，经培养得到增殖病毒。本发明的病毒增殖方法实现了细胞系的大规模悬浮培养，提高了病毒对细胞的适应性，能够获得毒价高而稳定的山羊痘病毒。本发明提供的山羊痘病毒活疫苗的制备方法，工艺简单，成本低，缓解了疫苗制备过程中损伤病毒，疫苗稳定性差，保存时间短的技术问题。本发明提供的山羊痘活疫苗安全有效，能够应用于山羊痘的防控。

摘要： 本发明提供一种牛结节性皮肤病病毒LSDV、山羊痘病毒GTPV和绵羊痘病毒SPPV的快速检测方法，以及应用于检测方法的Taqman‑MGB探针三重荧光PCR引物对和探针组。其中用于羊痘病毒属CaPV检测的正向引物，其序列为SEQ ID NO：1、用于羊痘病毒属CaPV检测的反向引物，其序列为SEQ ID NO：2；用于检测牛结节性皮肤病病毒LSDV的探针，其序列为SEQ ID NO：3；用于检测山羊痘病毒GTPV的探针，其序列为SEQ ID NO：4；用于检测绵羊痘病毒SPPV的探针，其序列为SEQ ID NO：5。本发明的方法检测的灵敏度高、特异性好、快速高通量；且检测方法操作简便。

摘要： 本发明公开一种用于鉴别检测绵羊痘病毒和山羊痘病毒的试剂盒。本发明的鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒检测盒内包括有三组引物：SEQID№1、SEQID№2、SEQID№3、SEQID№4、SEQID№5、SEQID№6、SEQID№7、SEQID№8、SEQID№9、SEQID№10、SEQID№11和SEQID№12。本发明可快速鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒，并在羊痘病毒流行病学研究中应用。

摘要： 本发明公开了一种用于山羊痘病毒和绵羊痘病毒双重PCR检测试剂盒和用于山羊痘病毒和绵羊痘病毒快速鉴别检测的双重PCR方法。根据山羊痘病毒和绵羊痘病毒的基因组序列各设计一对PCR引物，可以扩增出相对应的特异性片段，实现对山羊痘病毒和绵羊痘病毒的检测与鉴别。本发明利用双重PCR技术，单管同步检测山羊痘病毒和绵羊痘病毒，降低了对山羊痘和绵羊痘的检测成本和工作量，实现了对山羊痘和绵羊痘的鉴别检测。本发明建立了一种特异性强、灵敏度高、节时省力并且易于观察结果的双重PCR方法，操作简便，特异性强、灵敏度高、可重复性高，且没有复杂的后处理。

摘要： 本发明提供了一种山羊痘病毒的增殖方法、山羊痘活疫苗及其制备方法和应用，涉及疫苗制备技术领域。本发明提供的山羊痘病毒的增殖方法，包括以下步骤：将山羊痘病毒在悬浮培养细胞系上传代驯化，得到驯化病毒；将细胞系进行悬浮扩大培养；将驯化后病毒接种至扩大培养的细胞系上，经培养得到增殖病毒。本发明的病毒增殖方法实现了细胞系的大规模悬浮培养，提高了病毒对细胞的适应性，能够获得毒价高而稳定的山羊痘病毒。本发明提供的山羊痘病毒活疫苗的制备方法，工艺简单，成本低，缓解了疫苗制备过程中损伤病毒，疫苗稳定性差，保存时间短的技术问题。本发明提供的山羊痘活疫苗安全有效，能够应用于山羊痘的防控。

摘要： 本发明涉及一种病毒检测试剂盒及其使用方法，特别是一种用于检测鉴别山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒，绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒)的试剂盒及用于非疾病诊断目的的使用方法。本发明的检测鉴别山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒)的试剂盒内包括序列为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的特异性引物。本发明具有高特异性和高灵敏度；其性价比高，只需一对特异性引物，即可对任何扩增子上的未知突变进行筛查，相比Taq‑man探针法而言，成本大大降低，操作简便。

摘要： 本发明提供一种用于重组山羊痘病毒构建的重组转移载体。所述的转移载体主要包含：TK基因的左臂和右臂、两个逆向的p7.5K启动子及其分别调控的羊口疮病毒B2L基因和F1L基因、p11K启动子、增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因、两个顺向Loxp序列。所述的转移载体与山羊痘病毒在羊睾丸细胞内发生同源重组，获得表达eGFP的重组山羊痘病毒，在Cre酶作用下，eGFP基因及p11K启动子被特异性敲除，获得潜在共表达羊口疮病毒B2L和F1L蛋白的重组山羊痘病毒。