荧光PCR

摘要： 目的:探讨保存液类型及56°C灭活前处理30~60 min对经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果的影响。方法:将灭活的呼吸道病毒作为质控品,分别以非灭活型病毒保存液和含胍盐的灭活型病毒保存液为基质,制备成两种不同保存液类型的中、低、较低浓度的临床模拟样本。分别在常温与56°C下对样本进行30~60 min的灭活前处理,然后统一采用核酸提取试剂盒(磁珠法)和呼吸道病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)对样本进行检测,并采用SPSS18.0软件分别对三个稀释梯度样本的ORF1ab、N基因Ct值进行统计学分析。结果:两种病毒保存液经磁珠法提取核酸,呼吸道病毒核酸检测的Ct值相比有统计学差异(ORF1ab基因:P0.05)。结论:含胍盐的灭活型病毒保存液可提高经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果的灵敏度,56°C灭活前处理30~60 min未对经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果产生影响。

摘要： 非洲猪瘟在我国已经暴发近3年零5个月了,病毒已经形成一定的污染面。为精准防控非洲猪瘟,国家鼓励猪场实验室开展非洲猪瘟自检工作,非洲猪瘟病毒荧光PCR检测为猪场实验室常规检测项目。荧光PCR检测是一种技术含量很高的工作,要想做好并不容易,为保证检测结果的准确性和可靠性,笔者结合自身工作对检测环节的一些常见问题进行总结,供猪场试验室人员参考。

摘要： 驼乳具有较高的营养价值和医学保健功能,近年来,驼乳需求量呈现“爆发式”增长,供不应求,价格一路攀升。与此同时,驼乳质量安全受到广大消费者的关注。金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病微生物,可造成严重的食物中毒,严重危害消费者的身体健康。生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌污染报道较多,但驼乳中有关金黄色葡萄球菌的报道较少。为了解生鲜驼乳中金黄色葡萄球菌的污染状况,本研究使用荧光PCR方法快速检测生驼乳中的金黄色葡萄球菌,为预防和控制生驼乳中金黄色葡萄球菌引起的突发公共卫生事件提供技术支持。

摘要： 为建立一种快速检测鉴别非洲猪瘟病毒(ASFV)基因缺失株和非缺失株的荧光PCR鉴别方法,通过查询Genbank数据库中收录的相关基因组序列,应用相关软件设计针对ASFV不同毒株序列的引特异性物,用荧光PCR技术检测ASFV的不同病毒毒株,并对该方法进行敏感性、精密性和特异性试验。结果显示,该方法能在最低1.3×103copies/ml检出ASFV P27基因质粒、ASFV CD2v基因缺失质粒和ASFV MGF360-505R基因缺失质粒3种毒株的核酸片段;使用该技术重复检测10次,3种毒株的检测CV均<1%,提示有较好的稳定性。利用国家标准品非洲猪瘟病毒B646L基因质粒和无菌无核酶水分别做阳性和阴性对照,测得该技术灵敏度为100%(10/10)、特异度为100%(20/20)。本研究建立的PCR技术能快速准确鉴定ASFV的不同毒株,为防控疫情提供流行病学依据。

摘要： 日期:2022年03月22日来源:科技部生物中心实时荧光PCR技术是目前应用最为广泛的核酸检测技术。然而,由于主流荧光PCR仪器检测通道数目的限制,单个反应所能检测的靶基因数目很难超过6个,限制了该技术在检测涉及多靶点的复杂疾病上的应用。2月24日,厦门大学研究团队在《美国国家科学院院刊》(PNAS)杂志上发表了题为“Highly multiplex PCR assays by coupling the 5’-flap endonuclease activity of Taq DNA polymerase and molecular beacon reporters”的文章。

摘要： 非洲猪瘟(ASF)具备高度接触性、急性的特征,是因非洲猪瘟病毒导致的传染病。国内基层兽医实验室等场所皆落实非洲猪瘟病毒检测工作,其中以荧光PCR检测最为普遍。本研究探讨了分子生物实验室非洲猪瘟荧光PCR试验操作要点,梳理与总结了各环节注意事项,为深度了解ASF疫病特征与监测提供借鉴。

摘要： 目的对PCR-电化学基因芯片法检测人乳头瘤病毒(HPV)核酸进行方法学评价。方法收集贵州省某三甲医院309例宫颈脱落细胞有效样本,采用PCR-电化学基因芯片法检测人乳头瘤病毒并分型,以Sanger测序法为金标准,并与临床常用的荧光PCR法作比较,分别统计分析PCR-电化学基因芯片法与Sanger测序法和荧光PCR法检测结果的一致性和差异,并比较PCR-电化学基因芯片法和荧光PCR法的诊断效能。结果采用3种方法分别对309例有效样本进行HPV检测,均检测到20种不同的HPV基因型;PCR-电化学基因芯片法与Sanger测序法(Kappa=0.955,P<0.001)和荧光PCR法(Kappa=0.944,P<0.001)检测结果均有较高的一致性;与测序法金标准相比,PCR-电化学基因芯片法出现4例假阴性,1例分型结果不一致;PCR-电化学基因芯片法的敏感性为98.44%、特异性为100%、阳性预测值为100%、阴性预测值为92.86%、符合率为98.71%,荧光PCR法敏感性为100%、特异性为98.08%、阳性预测值为99.61%、阴性预测值为92.86%和符合率为99.68%。结论PCR-电化学基因芯片法与Sanger测序法和荧光PCR法的一致性良好,且具有高特异性和阳性预测值,可作为临床HPV感染检测方法的补充。

摘要： 为了解兵团六师地区规模化猪场疾病的发生情况,2021年笔者采用荧光RT-PCR和荧光PCR法对六师范围内的25家规模化猪场采集的1478份全血、扁桃体、鼻拭子、肛拭子、病死猪组织(心、肝、脾、肺、肾、淋巴)等样品进行了7种主要疾病的病原检测,包括:猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、支原体(MYCO)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪流感病毒(SIV)、传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)。结果表明,25家规模化养殖场7种猪病的病原学样品总阳性率由高至低分别为MYCO 11.46%、PEDV 2.97%、PCV22.74%、APP 1.26%、SIV 1.06%、PRV 0.64%、TGEV 0;场阳性率从高至低依次为MYCO 88%、APP 32%、PCV224%、PEDV 20%、SIV 16%、PRV 12%、TGEV 0;活体猪样品检出率依次为MYCO 12.96%、PEDV 3.7%、PCV23.25%、SIV 1.32%、APP 1.29%、PRV 0.53%、TGEV 0;多数猪场存在两种及两种以上猪病的混合感染,MYCO可和多种猪病混合感染。说明六师地区规模化猪场感染疾病以MYCO、APP、PCV2、PEDV、SIV、PRV为主,且多呈混合感染趋势,MYCO可作为评估猪场疾病发生的监控者。活体样品检出率及排序与总检出率相近,建议用活体样品检测。

摘要： 很多检验检测机构人员认为,荧光定量PCR是一项非常简单的检测工作,检验检测人员只要将样品采集完毕,送往实验室处理好,加样品,上机器,等时间,出结果就可以了,但事实并非如我们想象的那么简单。虽然检测人员把试验做了,但是检测结果的准确性是不敢保证的。实践证明,一个准确的检测需要注意的事项和细节非常多,下面笔者就样品采集、实验室操作和常见问题分析三大项进行详细叙述。

摘要： 为评价不同厂家非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒的效果,选择当前市场上6个厂家的商品化试剂盒,检测不同类型样品,结合统计学方法对试剂盒的特异性、敏感性和重复性等性能指标进行比对分析。结果显示:6个厂家的试剂盒ROC曲线下区域面积(AUC)为0.826~0.951,Youden指数为0.76~0.90,说明试剂盒的排他性和包含性等特异性指标总体表现较好;最低检出限(LOD)等敏感性数据显示,6个厂家试剂盒的LOD为10^(-1)~10^(2) copies/μL,说明各试剂盒的敏感性均较理想;用高、低浓度样品对试剂盒分别进行批内、批间重复性试验,发现高浓度样品的批内、批间变异系数(CV)为0.10%~1.28%,说明重复性较好,仅有2个厂家的试剂盒在检测低浓度样品时表现较好,批内CV为2.25%~6.12%,批间CV为2.93%和4.93%,说明不同试剂盒检测低浓度样品时稳定性较差。本研究为商品化荧光PCR检测试剂盒的评价提供了参考。

摘要： 鉴于传统检测方法的诸多缺点，为了深入研究山羊痘病毒(GPV)，利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列，选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段，设计并合成了一对PCR引物和一条TaqMan-MGB探针，建立了FQ-PCR和标准曲线，并利用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材料和人工感染动物材料进行GPV核酸检测.结果表明，构建的PQ-PCR具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性.该方法的建立为山羊痘临床快速高效的诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展及转归研究提供一种重要的手段.

摘要： 鉴于传统检测方法的诸多缺点，为了深入研究山羊痘病毒(GPV)，利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列，选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段，设计并合成了一对PCR引物和一条TaqMan-MGB探针，建立了FQ-PCR和标准曲线，并利用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材料和人工感染动物材料进行GPV核酸检测.结果表明，构建的PQ-PCR具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性.该方法的建立为山羊痘临床快速高效的诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展及转归研究提供一种重要的手段.

摘要： 鉴于传统检测方法的诸多缺点，为了深入研究山羊痘病毒(GPV)，利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列，选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段，设计并合成了一对PCR引物和一条TaqMan-MGB探针，建立了FQ-PCR和标准曲线，并利用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材料和人工感染动物材料进行GPV核酸检测.结果表明，构建的PQ-PCR具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性.该方法的建立为山羊痘临床快速高效的诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展及转归研究提供一种重要的手段.

摘要： 鉴于传统检测方法的诸多缺点，为了深入研究山羊痘病毒(GPV)，利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列，选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段，设计并合成了一对PCR引物和一条TaqMan-MGB探针，建立了FQ-PCR和标准曲线，并利用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材料和人工感染动物材料进行GPV核酸检测.结果表明，构建的PQ-PCR具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性.该方法的建立为山羊痘临床快速高效的诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展及转归研究提供一种重要的手段.

摘要： 鉴于传统检测方法的诸多缺点，为了深入研究山羊痘病毒(GPV)，利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列，选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段，设计并合成了一对PCR引物和一条TaqMan-MGB探针，建立了FQ-PCR和标准曲线，并利用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材料和人工感染动物材料进行GPV核酸检测.结果表明，构建的PQ-PCR具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性.该方法的建立为山羊痘临床快速高效的诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展及转归研究提供一种重要的手段.

摘要： 目的：比较两个厂家流感荧光PCR试剂盒对甲型H1N1流感检测结果的差异，为结果的解释和试剂的选择提供参考。方法：对2009年8—12月间167份流感样标本同时采用两种荧光PCR核酸检测试剂，按照国家监测方案检测，定性结果进行卡方分析，定量结果采用配对t检验。结果：两种试剂定性检测结果没有差异(x2=0.625，P>0.05)，但定量检测结果差异有统计学意义(t=-26.124，P<0.001)。结论：不同试剂对于甲型H1N1流感样品检测结果存在差异，实际工作中应谨慎选择。

摘要： 目的：比较两个厂家流感荧光PCR试剂盒对甲型H1N1流感检测结果的差异，为结果的解释和试剂的选择提供参考。方法：对2009年8—12月间167份流感样标本同时采用两种荧光PCR核酸检测试剂，按照国家监测方案检测，定性结果进行卡方分析，定量结果采用配对t检验。结果：两种试剂定性检测结果没有差异(x2=0.625，P>0.05)，但定量检测结果差异有统计学意义(t=-26.124，P<0.001)。结论：不同试剂对于甲型H1N1流感样品检测结果存在差异，实际工作中应谨慎选择。

摘要： 目的：比较两个厂家流感荧光PCR试剂盒对甲型H1N1流感检测结果的差异，为结果的解释和试剂的选择提供参考。方法：对2009年8—12月间167份流感样标本同时采用两种荧光PCR核酸检测试剂，按照国家监测方案检测，定性结果进行卡方分析，定量结果采用配对t检验。结果：两种试剂定性检测结果没有差异(x2=0.625，P>0.05)，但定量检测结果差异有统计学意义(t=-26.124，P<0.001)。结论：不同试剂对于甲型H1N1流感样品检测结果存在差异，实际工作中应谨慎选择。

摘要： 为了满足贝类派琴虫病的快速检测需要，本研究选择派琴虫保守的核糖体DNA ITS-2区域设计引物，通过对反应体系和反应条件的优化，首次建立了LUX荧光PCR检测派琴虫的方法。试验表明，所建立方法检测质粒模板DNA的动态范围为1.0×101～1.0×108，敏感性为10拷贝质粒DNA。采用模拟阳性样品试验，可检测到100拷贝质柱DNA.rn 而且与贝类的包拉米原虫、隐孢子虫等其它寄生性原虫无交叉反应，也不受组织DNA的干扰.50份采集样品的检测结果与RFTM培养方法一致。本研究所构建的派琴虫LUX荧光PCR检测方法具有快速、灵敏，特异等优点，可满足国内养殖场及进出口水生动物携带派琴虫的检测需要。

摘要： 为了满足贝类派琴虫病的快速检测需要，本研究选择派琴虫保守的核糖体DNA ITS-2区域设计引物，通过对反应体系和反应条件的优化，首次建立了LUX荧光PCR检测派琴虫的方法。试验表明，所建立方法检测质粒模板DNA的动态范围为1.0×101～1.0×108，敏感性为10拷贝质粒DNA。采用模拟阳性样品试验，可检测到100拷贝质柱DNA.rn 而且与贝类的包拉米原虫、隐孢子虫等其它寄生性原虫无交叉反应，也不受组织DNA的干扰.50份采集样品的检测结果与RFTM培养方法一致。本研究所构建的派琴虫LUX荧光PCR检测方法具有快速、灵敏，特异等优点，可满足国内养殖场及进出口水生动物携带派琴虫的检测需要。

摘要： 本发明涉及一种非洲猪瘟荧光PCR检测试剂、非洲猪瘟荧光PCR检测试剂盒及其应用，属于生物工程领域。本发明以p72基因为参考，设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针，并以p72基因的全长设计引物，扩增p72基因，克隆到pGEM‑T载体中，其阳性质粒作为标准品进行标准曲线的制作，其检测范围为10到1.0×107拷贝。本发明的非洲猪瘟荧光PCR方法在检测非洲猪瘟的整个过程中，从DNA提取到出现检测结果，则只需2.5‑3 h，大大减少手工操作和缩短时间。且本发明一次可检测多个样品，特别适合于大批样品的检测。

摘要： 本发明提供了一种三重荧光定量PCR引物探针组与三重荧光定量PCR试剂盒，涉及生物技术领域。本发明的PCR引物探针组包括SEQ ID NO.1所示的APP‑F、SEQ ID NO.2所示的APP‑R、SEQ ID NO.3所示的APP‑探针，SEQ ID NO.4所示的HPS‑F、SEQ ID NO.5所示的HPS‑R、SEQ ID NO.6所示的HPS‑探针，SEQ ID NO.7所示的Pm‑F、SEQ ID NO.8所示的Pm‑R、SEQ ID NO.9所示的Pm‑探针。将该引物探针组制备成试剂盒，可特异的同时检测APP、HPS和Pm，灵敏度能达到10拷贝/μl。

摘要： 本发明公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。本发明还公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测试剂盒，可以用于定性检测蔬菜中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。

摘要： 一种用于检测水貂圆环病毒的荧光定量PCR引物组和荧光定量PCR试剂盒，涉及水貂圆环病毒检测领域，包括：MiCV荧光定量PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品；MiCV荧光定量PCR反应液包括上下游引物、TBPremix Ex TaqTMII和ddH2O；上游引物：5'‑AGGGCCTTTGGGCATCATTG‑3'；下游引物：5'‑CCCGCCTGCAAACTGAAGAA‑3'。本发明根据水貂圆环病毒的Cap基因保守序列设计引物，通过反应体系和条件优化建立了基于SYBR Green II的实时荧光定量PCR技术并组装试剂盒，该试剂盒具有稳定性好、敏感性和特异性较高等优点。

摘要： 本发明属于D型流感病毒检测技术领域，具体涉及D型流感病毒荧光定量PCR与LAMP荧光定量PCR引物对及其应用。D型流感病毒主要感染动物中包括猪和牛，对畜牧业的发展具有一定的威胁，提供稳定可靠的检测方法具有重要的意义。本发明提供了一种用于D型流感病毒实时荧光定量PCR检测的引物序列及相应的试剂盒，该引物针对D型流感病毒HE基因中的保守序列进行设计，能够实现良好的检测特异性和灵敏度，敏感性比普通PCR和荧光定量LAMP均高100倍，可以实现大量通用样品的检测，可对D型流感病毒进行快速、高敏感度的实时荧光定量PCR检测，对于提高D型流感病毒的检测精度具有重要的意义。

摘要： 本发明涉及一种非洲猪瘟荧光PCR检测试剂、非洲猪瘟荧光PCR检测试剂盒及其应用，属于生物工程领域。本发明以p72基因为参考，设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针，并以p72基因的全长设计引物，扩增p72基因，克隆到pGEM‑T载体中，其阳性质粒作为标准品进行标准曲线的制作，其检测范围为10到1.0×107拷贝。本发明的非洲猪瘟荧光PCR方法在检测非洲猪瘟的整个过程中，从DNA提取到出现检测结果，则只需2.5‑3 h，大大减少手工操作和缩短时间。且本发明一次可检测多个样品，特别适合于大批样品的检测。

摘要： 本发明提供了一种鉴别肝螺杆菌的荧光定量PCR方法，将包含有PCR引物的反应体系进行荧光定量PCR反应；PCR引物包括上游引物和下游引物；反应体系包括以下组分：上游引物，下游引物，SYBR Premix Ex TaqⅡ，ROX Reference DyeⅡ，样品DNA模版，ddH

摘要： 本实用新型涉及一种PCR荧光检测装置及多通道PCR荧光检测设备。该PCR荧光检测装置包括：安装座，具有一光线进出口；激发光处理组件，安装于安装座上，且用于发射激发光；二向色镜，安装于安装座上，且位于激发光的光路上，用于将激发光朝向光线进出口反射；荧光处理组件，安装于安装座上，且位于二向色镜背离所述光线进出口的一侧，用于接收由光线进出口射入并透过所述二向色镜的荧光信号。透镜，设置在光线进出口内，以对由光线进出口射出的激发光进行聚焦，并对由光线进出口射入的荧光信号进行准直；透镜相对二向色镜的距离可调节。

摘要： 本实用新型提供了一种PCR荧光检测仪的光学系统和PCR荧光检测仪，在PCR荧光检测仪的光学系统内设置至少两个激光器、准直超透镜、透反元件、检测样品和多个接收元件，由于使用了准直超透镜，所以无需针对每个激光器设置与其配套使用的光学元件，大大降低了PCR检测仪使用的光学系统的复杂程度；而且，在需要增加一个激光器来发出新的波长的光线对检测样品进行激发时，只需在准直超透镜一侧增加一个发出不同波长光线的激光器即可，无需再针对新增加的激光器设计一套与其配合的光学元件，降低了PCR检测仪使用的光学系统的复杂度。

摘要： 本实用新型公开了一种荧光定量PCR光学激发装置及成像装置、荧光定量PCR仪，其中荧光定量PCR光学激发装置包括光源，该光源的出光方向上设有激发光滤光片和二向色镜，还包括设于激发光滤光片与二向色镜之间的光均匀化透镜组；所述光均匀化透镜组包括平行透镜、复眼透镜和积分透镜，激发光滤光片、平行透镜、复眼透镜、积分透镜、二向色镜沿光源的出光方向依次设置；所述光源为宽光谱光源。本实用新型能够获得照度均匀的激发光，并能够在不同的光谱通道进行检测，使用寿命长，光源更换次数少；成像效果好；尤其适用于微流体芯片的荧光定量PCR检测。