RAW264.7巨噬细胞

摘要： 目的探讨抑制p38MAPK信号转导通路对钛(Ti)颗粒诱导RAW264.7巨噬细胞的影响及可能机制。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞并通过加入不同剂量的p38MAPK信号转导通路抑制剂SB203580,分为对照组、SB20358060 nmol·L^(-1)组、SB203580120 nmol·L^(-1)组、SB203580240 nmol·L^(-1)组;TRAP法检测各组小鼠RAW264.7巨噬细胞转化为破骨细胞的能力;MTT检测各组小鼠RAW264.7巨噬细胞的增殖;ELISA法检测细胞TNF-α和MMP-9含量的表达;实时荧光定量RT-PCR检测SB203580对Ti颗粒刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α、MMP-9 mRNA的表达。结果TRAP染色结果显示,与对照组比较,抑制剂SB203580能够明显抑制小鼠钛颗粒诱导下RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞的增殖、成熟和活化。加入SB203580后,Ti颗粒刺激的RAW264.7巨噬细胞分泌的炎性因子TNF-α和MMP-9的蛋白表达降低(P均<0.01);抑制剂SB203580使TNF-α和MMP-9的mRNA的表达量下调(P均<0.01)。结论抑制p38MAPK信号转导通路能够抑制Ti颗粒刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞转化,从而进一步抑制破骨细胞的增殖、分化和成熟,最终抑制骨溶解。

摘要： 目的 探讨莲心碱(liensinine, lie)在脂多糖(lipid polysaccharides, lPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型中的抗炎抗氧化作用机制。方法 将细胞分为对照组(Control group),LPS组(LPS group),莲心碱(0.5、1、2μmol/L)组。采用CCK-8法筛选莲心碱的无细胞毒性浓度,Griess法检测一氧化氮(NO)的浓度,酶联免疫法(ELISA)检测前列腺素2(PGE2)的浓度以及促炎因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)的含量、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测COX-2和iNOS mRNA的表达,DCFH-DA探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测NF-κB、MAPK和Nrf2/HO-1通路中关键蛋白的表达情况。结果 0~4μmol/L莲心碱对细胞活力无影响,与LPS组相比,莲心碱组(0.5、1、2μmol/L)细胞中的促炎因子含量下降(P<0.05),NO和PGE2浓度下降(P<0.05),COX-2和iNOS mRNA表达降低(P<0.05),NF-κB和MAPK通路被抑制(P<0.05),且具有剂量依赖性,莲心碱处理后ROS和MDA的含量显著低于LPS组(P<0.01),SOD的活性和GSH的含量显著高于LPS组(P<0.01),Nrf2/HO-1通路活性也较于LPS组显著增加(P<0.05)。结论 莲心碱通过抑制NF-κB和MAPK通路与激活Nrf2/HO-1通路发挥抗炎抗氧化作用。

摘要： 太子参是我国传统中药材,为明确其多糖的组成与对Raw 264.7巨噬细胞的保护作用,本研究采用水提醇沉法提取其主要活性成分多糖,并通过阴离子交换柱层析纯化得太子参多糖(Pseudostellaria heterophylla polysaccharide,PHP);利用凝胶渗透色谱(GPC)法、高效液相色谱(HPLC)法测定其分子量、单糖组成,紫外光谱扫描、傅里叶红外光谱扫描初步解析其结构特征。进一步通过小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(Raw 264.7)模型探究了PHP对LPS诱导损伤的保护作用。结果表明,太子参粗多糖的得率为8.23%,纯度为51.47%,而经DEAE-52柱层析分离纯化后得的PHP纯度达到了80.52%;PHP的分子量在500~92×10^(3) Da之间,单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖及葡萄糖醛酸。细胞实验确定80~640μg/mL为PHP的安全剂量,此浓度下可以提高脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导损伤下的细胞存活率,640μg/mL的PHP剂量下存活率最大提升了7.21%,并且PHP可改善Raw 264.7巨噬细胞形态。综上,本研究提纯了太子参中多糖,对PHP进行了结构表征,并初步证实了PHP对LPS诱导损伤的Raw 264.7巨噬细胞有保护作用,这为太子参多糖的功能活性探索及构效、量效等深入研究奠定了基础。

摘要： 该文探讨了毛酸浆果提取物(Physalis pubescens L.Fruits Extract,PPFE)对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用。采用噻唑蓝比色法(MTT)确定细胞毒性和增殖活性,格里斯法(Griess)、酶联免疫法(ELISA)、荧光探针法、中性红吞噬实验测定体外培养的巨噬细胞中一氧化氮(NO)、肿瘤因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、活性氧(ROS)含量以及吞噬率;流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡情况,荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TNF-α、IFN-γ以及IL-6等细胞因子mRNA表达水平。结果显示:运用UHPLC-Q-TOF-MS测定PPFE化学成分分析,共鉴定出14种黄酮类物质。PPFE作用RAW264.7细胞的安全浓度在25~250μg/mL范围内,与空白组相比,毛酸浆果提取物质量浓度为25μg/mL时免疫增强效果最佳,其细胞增殖率、NO释放量、吞噬率、相对活性氧水平、TNF-α、IFN-γ、IL-6的分泌量分别为130.53%、27.79μmol/L、189.88%、137.75%、150.54 pg/mL、119.36 pg/mL、15.41 pg/mL。PPFE治疗组的细胞周期的G0/G1期、S期、G2/M期百分比分别为53.08%、17.40%、29.52%。细胞凋亡率与空白组相比降低了52.80%,同时极显著(p<0.01)上调TNF-α、IFN-γ、IL-6的表达。综上可知,PPFE通过调节RAW264.7细胞吞噬功能、分泌免疫因子、细胞周期分布及凋亡情况,以及上调细胞因子mRNA表达水平,增强RAW264.7细胞免疫调节作用。

摘要： 为了研究葡萄籽粗多糖(crude polysaccharides from grape seeds,GSCPs)体外抗氧化作用及对秀丽隐杆线虫的体内抗氧化作用,采用水提醇沉法提取GSCPs,检测GSCPs对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟自由基的清除作用及对DNA氧化损伤的抑制作用;建立RAW 264.7巨噬细胞氧化损伤模型,在细胞水平探讨GSCPs的抗氧化能力;同时利用秀丽隐杆线虫研究GSCPs的体内抗氧化功能。体外实验结果表明:GSCPs可有效清除自由基,抑制DNA的氧化损伤,质量浓度为0.4 mg/mL的GSCPs对DPPH自由基的清除率达84%,对羟自由基清除率为89%;GSCPs可以下调H_(2)O_(2)诱导的RAW 264.7巨噬细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,正向调节细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GS H-Px)活性,质量浓度为0.2 mg/mL的GSCPs处理组可使细胞内SOD活性从H_(2)O_(2)处理组的81.1%升至96.3%,GS H-Px活性从H_(2)O_(2)处理组的92.1%升至99.6%。此外,GSCPs可延长秀丽隐杆线虫寿命,提高其对抗急性氧化应激的能力,有效清除秀丽隐杆线虫体内的ROS。质量浓度为0.8 mg/mL GSCPs处理组秀丽隐杆线虫的平均寿命较对照组延长27.67%,将急性氧化应激的秀丽隐杆线虫平均存活时间延长33.58%,秀丽隐杆线虫体内ROS生成量较对照组可降低56.33%。因此,葡萄籽粗多糖在体内外均表现出良好的抗氧化性,可用于抗氧化功能产品的开发。

摘要： 目的探讨溴域和末端外结构域(BET)选择性抑制剂38号化合物对CCl_(4)诱导的小鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其机制。方法使用脂多糖(LPS)刺激Raw264.7巨噬细胞,诱导急性细胞炎症模型,设对照组、LPS处理组和LPS与38号化合物共培养组,提取细胞RNA,采用RT-qPCR法检测炎症相关细胞因子mRNA水平。构建CCl_(4)诱导的ALI模型,将24只小鼠随机分为对照组、模型组和药物干预组。采用免疫组化法检测肝组织抗F4/80和抗Ly-6G阳性细胞。结果LPS刺激细胞模型组IL-1βmRNA水平为(23246.0±1185.0),显著高于对照组【(1.1±0.1),P<0.05】,细胞IL-6 mRNA水平为(7740.0±322.2),显著高于对照组【(1.1±0.4),P<0.05】,TNF-αmRNA水平为(132.2±2.7),显著高于对照组【(1.0±0),P<0.05】,而38号化合物干预处理后细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平均显著降低,在80 nM处理组分别为(2409.0±147.6)、(66.0±2.1)和(36.7±1),在40 nM处理组分别为(4790.0±206.4)、(314.1±10.7)和(47.0±1.5),在20 nM处理组分别为(10079.0±500.3)、(1112.0±22.0)和(73.0±1.8),在10 nM处理组分别为[(13794.0±1025.0)、(2576.0±46.3)和(96.8±7.2),P<0.05],呈现浓度依赖性;ALI小鼠血清ALT和AST水平分别为(8281.0±2710.0)U/L和(5330.0±2435.0)U/L,显著高于对照组[分别为(51.5±7.0)U/L和(215.3±12.4)U/L,P<0.05],而干预组分别为(3634.0±713.9.0)U/L和(2876.0±667.1)U/L,较模型组显著降低(P<0.05);ALI小鼠模型肝组织结构紊乱,炎症反应明显,肝细胞大片坏死,大量的炎症细胞聚集,而药物干预组上述病理学变化均较模型组减轻。结论BET选择性抑制剂38号化合物能减轻由CCl_(4)诱导的小鼠急性肝损伤,改善肝功能和肝组织结构的破坏,对小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能与抑制了炎症相关的细胞因子表达,从而减少了炎症细胞的聚集有关。

摘要： [目的]通过构建脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮(QGDY)的抗炎作用及其机制。[方法]采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和RAW264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反应元件(ARE)和核因子-κB(NF-κB)双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响。建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型,将RAW264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组(1、10、100μg/mL),倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异;采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平;利用免疫荧光法观察核因子-κB p65(p65)核移位情况;采用Western blot法检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)和p65蛋白表达情况。[结果]0.01~10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响,1~10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性,清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响。初步证明清感冬饮具有抗炎作用,而无明显抗氧化作用。0.01~100μg/mL清感冬饮干预24 h对RAW264.7巨噬细胞无细胞毒性作用。与模型组相比,1~100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放;10~100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,抑制p65核移位;100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达,显著促进浆蛋白p65表达。[结论]清感冬饮可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关。

摘要： 桉叶资源丰富且生物活性高,但少有研究对桉叶多酚提取物进行系统的抗氧化活性评价.本实验旨在研究纯化后桉叶多酚提取物体内外抗氧化活性.以化学法、RAW264.7巨噬细胞模型、秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)模型为评价方法,以自由基清除率、抗氧化酶活力及线虫寿命等为指标,评价桉叶多酚提取物的抗氧化能力.结果 表明,桉叶多酚提取物具有良好的自由基清除能力和还原能力,在一定质量浓度下效果接近抗坏血酸.桉叶多酚提取物能显著提高氧化损伤RAW264.7巨噬细胞内抗氧化酶(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶)活力和谷胱甘肽含量,并显著降低丙二醛含量(P＜0.05),呈量效关系.此外,桉叶多酚提取物显著降低常规培养和氧化损伤条件下线虫体内活性氧积累量(P＜0.05),提高线虫抗氧化能力,起到延长线虫寿命的作用.桉叶多酚提取物在体内外均表现出良好的抗氧化活性,具备开发食品抗氧化剂或功能食品的潜力.

摘要： 目的 通过网络药理学和分子对接技术,探索藏药西藏猫乳治疗类风湿性关节炎(RA)"多成分-多靶点-多途径"的作用机制.方法 结合文献和本课题组前期研究获取西藏猫乳的化学成分,通过Swiss Target Prediction数据库查询化学成分对应靶点.通过Drug Bank和Therapeutic Target Database等数据库以"rheumatoid arthritis"为关键词搜索RA靶点;运用Cytoscape3.7.2构建"化学成分-靶点-通路"网络图,通过DAVID进行基因本体(GO)功能富集分析和KEGG通路富集分析,预测其作用机制.采用Maestro version 11.5软件,对核心化学成分与潜在作用靶点进行分子对接验证.用Griess法测定山奈素、芹菜素和鼠李柠檬素对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞一氧化氮(NO)释放的影响,验证其抗炎活性.结果 西藏猫乳化学成分可能作用于原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白和胰岛素样生长因子1受体等关键靶点,GO功能富集分析得到GO条目318个(P<0.05),KEGG通路富集筛选得到80条信号通路(P<0.05).以"化学成分-靶点-通路"网络图设置等级值(degree)≥14为核心化学成分,筛选出了西藏猫乳中9个主要化学成分,通过选取等级值(degree)≥22为潜在作用靶点,得到9个靶点.将上述9个主要化学成分与9个靶点分别进行分子对接,结果显示,鼠李柠檬素与雄激素受体,芹菜素与热休克蛋白90AA1和胰岛素样生长因子1受体,柚皮素与丝裂原活化蛋白激酶8、表皮生长因子受体和人源重组蛋白RELA,山奈素与原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、Tristin和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1,槲皮素与磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1结合最稳定.山奈素、鼠李柠檬素和芹菜素对脂多糖所致RAW264.7巨噬细胞NO释放具有明显的抑制作用(P<0.05),表明该3个化合物确有抗炎作用.结论 西藏猫乳通过"多成分-多靶点-多途径"发挥抗RA作用,该作用可能与其调控炎症、免疫、内分泌等相关靶点和通路有关,可为其临床研究提供参考.

摘要： 目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)对高糖(HG)诱导的RAW264.7巨噬细胞向M1型及M2型表型转化的影响作用.方法:①Griess法测定一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐(NO2)含量,以确定可诱导巨噬细胞向M1型转化的HG浓度.②CCK-8法确定HSYA在HG中的安全作用浓度.③Western blot检测M1型极化标志物TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及M2型极化标志物CD206、精氨酸酶-1(Arg-1)的蛋白表达.④ELISA检测IL-1β含量.结果:①与11.1 mmol/L葡萄糖对照组相比,33.3 mmol/L HG的NO2-含量显著升高(P＜0.05).②HSYA在200 μmol/L以下时,细胞在33.3 mmol/L HG中的存活率均在95.0％以上.③与HG模型组相比,HSYA可抑制HG诱导的TNF-α、iNOS蛋白表达并增加Arg-1、CD206表达,其中对TNF-α、iNOS及Arg-1的作用显著(P＜0.05).④HSYA可显著抑制NO、IL-1β等炎症因子生成(P＜0.05).结论:HSYA通过抑制HG诱导的M1型巨噬细胞极化促进M2型标志分子Arg-1表达,抑制NO、IL-1β等炎症因子生成.

摘要： 本发明涉及十二烷基癸烯酸BDSF在提升RAW264.7巨噬细胞吞噬能力中的应用，属于生物药品技术领域技术领域。加入BDSF的浓度为3～300μmol/L时可以提升RAW264.7巨噬细胞吞噬C.albicans的能力，BDSF提升RAW264.7巨噬细胞吞噬C.Albicans的作用时间为2h，3h，4h，5h，6h。BDSF具有低生物毒性，且对免疫细胞RAW264.7巨噬细胞吞噬能力的提升有显著效果。

摘要： 本发明提供了一种巨噬细胞专属嵌合抗原受体、表达该受体的可控极化单核/巨噬细胞及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。本发明提供了一种嵌合抗原受体，包括依次连接的胞外抗原结合域、跨膜结构域和胞内激活结构域，其中胞外抗原结合域包括信号肽和/或scFv，能够异性识别GBM特异表达的细胞膜表面蛋白EGFRvIII；跨膜结构域包括CD8α，链接胞外抗原结合域和胞内激活结构域；胞内激活结构域包括TIR、CD3ZETA或GM‑CSFRα/β，促进巨噬细胞向M1型极化，将本发明的嵌合抗原受体引入到巨噬细胞中，赋予了该巨噬细胞对GBM的靶向杀伤作用，有效的促进并维持其M1极化状态。

摘要： 本发明提供了一种嵌合性抗原受体及表达其的巨噬细胞、调节巨噬细胞极化的方法和应用，涉及生物技术领域。该嵌合性抗原受体的胞内结构域中含有IFN‑γ受体，表达该嵌合性抗原受体的免疫细胞对IFN‑γ的响应能力增强。表达该嵌合性抗原受体的巨噬细胞可以相对较长时间保持M1型状态，增强肿瘤细胞抗原与嵌合性抗原受体结合后巨噬细胞M1型活性。

摘要： 本发明公开了一种检测巨噬细胞中RFX1表达水平的试剂在制备巨噬细胞分型检测制剂中的应用。通过巨噬细胞中RFX1的表达水平判断巨噬细胞分化类型，在M1型巨噬细胞中RFX1的表达水平高于M0和M2型巨噬细胞。提示该基因可作为M1型巨噬细胞的生物标志物，在巨噬细胞的分型鉴定中具有较好的应用价值。

摘要： 本发明涉及十二烷基癸烯酸BDSF在提升RAW264.7巨噬细胞吞噬能力中的应用，属于生物药品技术领域。加入BDSF的浓度为3～300μmol/L时可以提升RAW264.7巨噬细胞吞噬C.albicans的能力，BDSF提升RAW264.7巨噬细胞吞噬C.Albicans的作用时间为2h，3h，4h，5h，6h。BDSF具有低生物毒性，且对免疫细胞RAW264.7巨噬细胞吞噬能力的提升有显著效果。

摘要： 本发明公开了烟草花叶病毒在刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞中应用。在该用途中，烟草花叶病毒可以促进巨噬细胞向M1型极化，使其具有杀伤作用，为肿瘤免疫治疗提供治疗方案。

摘要： 本发明公开了一种巨噬细胞消化液及专用于巨噬细胞的消化方法，包括下列组份：乙二胺四乙酸3‑6份、乙二醇双(2‑氨基乙基醚)四乙酸4‑8份、胎牛血清8‑12份和磷酸缓冲缓冲液90‑100份，一种专用于巨噬细胞的消化方法，消化方法包括如下步骤：配置成消化液原液，过滤后低温保存6个月，然后得到巨噬细胞消化液；将巨噬细胞培养瓶中加入巨噬细胞消化液；将加入巨噬细胞消化液的巨噬细胞培养瓶摇晃，使得巨噬细胞消化液均匀覆盖培养瓶；将DMEM培养基加入到静置后的巨噬细胞培养瓶中，对巨噬细胞消化液进行中和，转移到离心管中；将转移到离心管中的溶液进行室温离心3min；离心后，在离心管中加入DMEM培养基完成巨噬细胞的消化。本发明使巨噬细胞消化率高、分化率低。

摘要： 本发明涉及生物材料合成及应用技术领域，具体公开了一种仿生靶向巨噬细胞光学成像剂的制备方法及其在巨噬细胞相关疾病诊断的应用，制备方法包括以下步骤：步骤a：合成聚集诱导发光效应的2‑(2’‑羟基苯基)苯并唑类化合物(AIEgen)；步骤b：提取主要成分为β‑1,3‑D的酵母微囊(GPs)；步骤c：将步骤a中的AIEgen溶于无水乙醇中配置1mM母液，4°C保存，将步骤b中GPs溶于PBS配置成10mg/mL的混悬液，孵育1h，随后，以体积比1:10的比例将AIEgen与GPs混匀，孵育24h，离心，洗涤，收集样品。该系统通过模拟真菌感染途径可被体内巨噬细胞特异性吞噬，受病变部位急剧增多趋化因子的招募，携载酵母微囊光学成像剂的巨噬细胞会大量迁移至病变部位，实现巨噬细胞相关疾病的无创诊断。

摘要： 本发明涉及一种巨噬细胞的CRISPR/Cas9表观编辑系统、方法、编辑后的巨噬细胞和应用，属于抗肿瘤技术领域。本发明所述巨噬细胞的CRISPR/Cas9表观编辑系统包括以下组分：PCP‑EZH2、sgRNA‑X‑PP7和dCas9；所述PCP‑EZH2为PCP基因和EZH2基因的融合基因；所述sgRNA‑X‑PP7为用于插入sgRNA的含PP7适配子茎环的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述编辑系统能够从多方面增强巨噬细胞的抗肿瘤效应，促进T细胞等免疫应答，抑制肿瘤生长，显著改善肿瘤的治疗效果。

摘要： 本发明提供了一种巨噬细胞专属嵌合抗原受体、表达该受体的可控极化单核/巨噬细胞及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。本发明提供了一种嵌合抗原受体，包括依次连接的胞外抗原结合域、跨膜结构域和胞内激活结构域，其中胞外抗原结合域包括信号肽和/或scFv，能够异性识别GBM特异表达的细胞膜表面蛋白EGFRvIII；跨膜结构域包括CD8α，链接胞外抗原结合域和胞内激活结构域；胞内激活结构域包括TIR、CD3ZETA或GM‑CSFRα/β，促进巨噬细胞向M1型极化，将本发明的嵌合抗原受体引入到巨噬细胞中，赋予了该巨噬细胞对GBM的靶向杀伤作用，有效的促进并维持其M1极化状态。