抗病毒药物齐多夫定的离子色谱分离积分脉冲安培检测分析的方法

摘要

本发明涉及抗病毒药物齐多夫定的离子色谱分离分析方法，特别涉及抗病毒药物齐多夫定的等度分离积分脉冲安培检测分析检测方法。包括以下步骤：实际样品处理、基线测绘、进样和离子交换、洗脱、电化学检测分析。本发明对抗病毒药物齐多夫定能进行良好的分离分析，保留时间、峰高、峰面积的相对标准偏差均小于2.0％，分析时，将试样直接注入离子色谱分离柱分离，从色谱分离柱输出的齐多夫定溶液通过电化学检测池经过电化学检测器就能获得灵敏度高的谱图，使工艺流程大为简化；本方法还可用于血液样品中的抗病毒药物齐多夫定含量的检测。

说明书

技术领域

本发明涉及抗病毒药物齐多夫定的离子色谱分离分析方法，特别涉及抗病毒药物齐多夫定的等度分离积分脉冲安培检测分析检测方法。 

背景技术

核苷逆转录酶抑制剂是第一个对治疗感染人类免疫缺陷病毒病人安全有效的药物，齐多夫定是其中第一个用于治疗AIDS及AIDS相关的的药物。在众多检测生物样品中的AZT分析方法中，大多数都是高效液相色谱与紫外联用，此外，HPLC-MS/MS和HPLC-MS也应用于检测。比光谱导数光度法、胶束电动色谱、高效薄层色谱，荧光色谱，免疫法检测AZT也有相关报道。但是所有的LC/UV方法都需要大量的血浆，而且灵敏度对于新药配方的药动学研究显得不足。LC与质谱联用在生物体液中的检测应用很广，这个灵敏度很高的方法由于需要很复杂的仪器设备而不能在众多实验室普及。 

发明内容

本发明正是针对现有技术、方法存在的不足，提供一种抗病毒药物齐多夫定的离子色谱分离积分脉冲安培检测分析方法，此方法既能保证分析效果，又能简化工艺流程。 

本发明的具体技术方案如下： 

本发明是一种抗病毒药物齐多夫定的离子色谱分离积分脉冲安培检测分析方法，包括以下步骤： 

(1)实际样品处理：血浆用出离子水稀释后加入乙腈沉淀蛋白，混合旋涡1min，在离心机上以1000转/分离心10min，吸取上清液在氮气流下30℃左右蒸 发近干，残留物用水稀释装载到固相萃取柱上，洗脱后样品通过0.45μm滤膜过滤； 

(2)基线测绘：将配制的洗脱液用泵输入色谱分离柱使其达到平衡，从色谱分离柱输出的洗脱液流入电导流通池，由电化学检测器转化为电信号，从而形成基线被测绘； 

(3)进样和离子交换：被测试样在碱性洗脱液的推动下进入色谱分离柱产生离子交换；

(4)洗脱：将洗脱液连续输入色谱分离柱中，使齐多夫定洗脱并与其他杂质分离； 

(5)电化学检测分析：从色谱分离柱输出的齐多夫定溶液通过电化学检测池经过电化学检测器转化为电信号，从而形成谱图被记录。 

本发明所述的洗脱液为11mM NaOH溶液，采用等度洗脱。 

本发明所述的分离柱为Dionex AG18(50mm×2mm)和AS18(250mm×2mm)阴离子交换柱，进样量为10μL。 

本发明积分脉冲安培检测波形为：T1：0.00-0.03s，E1范围为-0.6V--0.25V；T2：0.04-0.20s，E2范围为-0.45V--0.25V；T3：0.21-0.47s，E3范围为0.00V-0.08V；T4：0.48-0.57s，E4＝-0.04V；T5：0.58-0.59s，E5＝-2.00V；T6＝0.60s，E6＝0.55V。积分区间：0.20-0.57s。 

本发明具有以下有益效果： 

1.对抗病毒药物齐多夫定能进行良好的分离分析，保留时间、峰高、峰面积的相对标准偏差均小于2.0％，最低检测限可达到10^-6g/L，在0.01-10.0μg/mL浓度范围内，峰高对浓度、峰面积对浓度呈良好的线性关系，相关系数在0.9992以上； 

2.分析时，将试样直接注入离子色谱分离柱分离，从色谱分离柱输出的齐多夫定溶液通过电化学检测池经过电化学检测器就能获得灵敏度高的谱图，使工艺流程大为简化； 

3.本方法可用于血液样品中的抗病毒药物齐多夫定含量的检测。 

附图说明

图1是根据本发明提供的方法获得的齐多夫定标准溶液色谱图； 

图2是根据本发明提供的方法获得的健康人体血浆实际样品对照图； 

图3是根据本发明提供的方法获得的健康人体血浆加标实际样品中抗病毒药物齐多夫定含量检测的色谱图。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步具体说明： 

工艺步骤依次包括实际样品处理、测绘、进样和离子交换、洗脱、积分脉冲安培检测分析： 

(1)实际样品处理：血浆用出离子水稀释后加入乙腈沉淀蛋白，混合旋涡1min，在离心机上以1000转/分离心10min，吸取上清液在氮气流下30℃左右蒸发近干，残留物用水稀释装载到固相萃取柱上，洗脱后样品通过0.45μm滤膜过滤； 

(2)基线测绘：将配制的洗脱液用泵输入色谱分离柱使其达到平衡，从色谱分离柱输出的洗脱液流入电导流通池，由电化学检测器转化为电信号，从而形成基线被测绘； 

(3)进样和离子交换：被测试样在碱性洗脱液的推动下进入色谱分离柱产生离子交换；

(4)洗脱：将洗脱液连续输入色谱分离柱中，使齐多夫定洗脱并与其他杂质分离； 

(5)电化学检测分析：从色谱分离柱输出的齐多夫定溶液通过电化学检测池经过电化学检测器转化为电信号，从而形成谱图被记录。 

分析上述抗病毒药物齐多夫定溶液时，分离柱为Dionex AG18(50mm×2mm)和AS18(250mm×2mm)阴离子交换柱，进样量为10μL；洗脱液为11mMNaOH溶液，采用等度洗脱；优化后的积分脉冲安培检测波形为T1：0.00-0.03s，E1＝-0.5V；T2：0.04-0.20s，E2＝-0.4V；T3：0.21-0.47s，E3＝0.01V；T4：0.48-0.57s，E4＝-0.04V；T5：0.58-0.59s，E5＝-2.00V；T6＝0.60s，E6＝0.55V。积分区间：0.20-0.57s。 

下面结合附图详细说明本发明。 

实施例： 

本实施例是对人体血浆加标抗病毒药物齐多夫定含量进行分析检测使用仪器：DX-600离子色谱仪(戴安，美国)，GP50梯度泵，LC25色谱柱温箱和ED50A电化学检测器；Dionex AG18(50mm×2mm)和AS18(250mm×2mm)阴离子交换柱，10μL定量环；流速：0.25mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL； 

检测方式：积分脉冲安培检测；数据处理：Chrome 6.8的变色龙软件；洗脱液：11mM NaOH溶液； 

分析步骤： 

(1)基线测绘：将混合配制的洗脱液用泵输入色谱分离柱使其达到平衡，从色谱分离柱输出的洗脱液流入电导流通池，由电化学检测器转化为电信号，从而形成基线被测绘； 

(2)进样和离子交换：被测试样在碱性洗脱液的推动下进入色谱分离柱产生离子交换；

(3)洗脱：将洗脱液连续输入色谱分离柱中，将齐多夫定在色谱分离柱上洗脱，并与实际样品中其他杂质分离开； 

(4)电化学检测分析：从色谱分离柱输出的齐多夫定溶液通过电化学检测池经过电化学检测器转化为电信号，从而形成谱图被记录，如图1所示，是根据本发明提供的方法获得的齐多夫定标准溶液色谱图；图2是根据本发明提供的方法获得的健康人体血浆实际样品对照图；图3是根据本发明提供的方法获得的健康人体血浆加标实际样品中抗病毒药物齐多夫定含量检测的色谱图。 

分析结果： 

三次重复进样后齐多夫定回收率为95.3％-1011％，相对标准偏差为2.21％。 

上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权力要求保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。