盐酸苯环壬酯治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的用途及含有其的药物组合物

摘要

本发明涉及盐酸苯环壬酯在制备治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的药物中的作用。在大鼠及兔心肌缺血再灌注损伤动物模型中，盐酸苯环壬酯可显著抑制缺血再灌注所导致的心肌损伤，其作用与阳性治疗药物维拉帕米基本相当，且无维拉帕米所具有的低血压、心率减缓等副作用。

说明书

技术领域

本发明涉及盐酸苯环壬酯在制备用于治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的药物中的用途及含有其的药物组合物。 

背景技术

盐酸苯环壬酯(phencynonate hydrocloride，2′-环戊基-2′-苯基-2′-羟基乙酸-9α-[3-甲基-3-氮杂双环(3.3.1)壬]酯盐酸盐)的结构如下式(I)所示，是一种选择性抗胆碱药物。临床用于预防和治疗晕车、晕船和晕机等各种晕动病。中国专利(CN1089838A)和美国专利(US6028198)中公开了盐酸苯环壬酯作为抗晕动病(晕车、船、机等)药物的用途。中国专利(CN97125424.9)、英国专利(GB2297255)和西班牙专利(ES549796A)中公开了盐酸苯环壬酯的制备方法。 

(I)盐酸苯环壬酯 

心肌梗死是常见致死因素。据世界卫生组织报告，到2020年急性冠脉闭塞将会成为世界上的主要死因。通过溶栓、经皮冠状动脉成形术或搭桥术使缺血区早期再灌是缺血心肌存活的必要前提。然而，再灌注被认为是双刃剑，会导致比单纯缺血更为严重的损伤，即所谓的 缺血再灌注损伤。因此，寻找对心肌缺血再灌注损伤具有明确治疗作用的药物，是今后心血管治疗药物领域的研究重点。 

本发明人经过潜心研究研究发现盐酸苯环壬酯对心肌缺血再灌注损伤具有显著的治疗作用，从而完成了本发明。 

发明内容

本发明的目的是提供治疗或缓解心肌缺血再灌注损伤的药物。 

本发明人经潜心研究发现盐酸苯环壬酯可有效减轻或阻止心肌缺血再灌注所导致的心肌损伤。因此，本发明涉及盐酸苯环壬酯在制备用于治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的药物中的用途。 

本发明还涉及治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的方法，包括将有效剂量的盐酸苯环壬酯给予所需的患者。所述有效剂量在0.1～30mg/kg范围内，优选在0.5～20mg/kg范围内，更优选在1～15mg/kg范围内，进一步优选在1～10mg/kg范围内，最优选在5～10mg/kg范围内。 

本发明还涉及用于治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的药物组合物，其包括盐酸苯环壬酯及药学领域常用的药用辅料。所述药用辅料包括溶剂、共溶剂、助溶剂、乳化剂、螯合剂、抗氧化剂、还原剂、抗菌防腐剂、pH调节剂、缓冲剂、疏松剂、保护剂、稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、崩解剂和润滑剂等。 

所述药用辅料与盐酸苯环壬酯的适当制剂形式可以是注射剂、片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂或口服液等多种制剂形式。 

所述药物组合物可以制成注射剂形式。注射剂例如可以包含与活性化合物盐酸苯环壬酯共用组成注射剂的药用辅料，其中例如有溶剂和共溶剂(如乙醇、甘油及聚乙二醇等)、助溶剂及乳化剂(如羟甲基纤维素、吐温80及山梨醇等)、螯合剂(如EDTA一钠、二钠等)、抗氧化剂和还原剂(如亚硫酸氢钠、谷氨酸钠等)、抗菌防腐剂(如氯丁醇、苯酚等)、pH调节剂和缓冲剂(如乙酸钠、乙酸及冰醋酸等)、 疏松剂和保护剂(如丙氨酸、白蛋白及甘油等)等。 

所述药物组合物可以制成固体口服形式。固体口服形式可以包含与活性化合物盐酸苯环壬酯共用的稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、二糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉或马铃薯淀粉；润滑剂，例如，硅石、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁或钙和/或聚乙二醇；粘合剂，例如淀粉类、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂，例如淀粉、海藻酸、海藻酸盐或淀粉羟乙酸钠；沸腾混合物；染料；增甜剂；湿润剂例如卵磷脂、聚山梨酯、月桂硫酸盐；和药物制剂常用的其它药用无毒性物质。 

所述药物组合物可以制成口服的液体形式。口服的液体形式可以是分散液。分散液可以是例如糖浆、乳剂或混悬液。例如，糖浆可以包含作为载体的蔗糖，或者蔗糖和甘油和/或甘露醇和山梨糖醇。混悬液和乳剂可以包含作为载体的天然胶、琼脂、海藻酸钠、胶质、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。 

上述药物的不同剂型均可以按照药学领域的常规方法制备。例如，通过混合、制粒、制片、糖包衣或膜包衣处理的方法。 

本发明还涉及盐酸苯环壬酯左旋体、右旋体及其同系物在制备治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的药物中的用途。 

具体实施方式

下面的实施例和实验例用来详细说明本发明，但不用来限制本发明。 

在本发明中使用的盐酸苯环壬酯可以通过中国专利(CN97125424.9)、英国专利(GB2297255)或西班牙专利(ES549796A)中公开的盐酸苯环壬酯的制备方法来制备。 

实施例1 

盐酸苯环壬酯注射剂 

制备方法；称取盐酸苯环壬酯200g，置2000ml量瓶中，加注射用水适量使溶解，再加亚硫酸氢钠40g，振摇使溶解，并加注射用水至2000ml，摇匀，加盐酸调节pH值到pH4，摇匀。用0.2μm微孔滤膜过滤。灌封于2ml安瓿中，共灌封1000个安瓿。流通蒸气灭菌(110℃，15分钟)，进行澄明度检查，即得。 

实施例2 

盐酸苯环壬酯片剂 

制备方法；将盐酸苯环壬酯300mg、硬脂酸镁25mg、羧甲基纤维素钠50mg和淀粉125mg混合，通过压片机进行压片，制得500mg片剂。 

实施例3 

盐酸苯环壬酯胶囊剂： 

盐酸苯环壬酯  200g 

淀粉          400g 

共制成1000个胶囊，每个胶囊含主药200mg。 

制备方法：将400g淀粉先干燥，过120目筛，然后与盐酸苯环壬酯混合均匀，再过两次120目筛，充分混匀，分装填入硬胶囊中，即得。 

在评价盐酸苯环壬酯治疗或缓解心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的药效学过程中，采用大鼠及兔模型动物。为了客观地评价药物治疗效果，本研究相继建立大鼠及兔心肌缺血再灌注所诱发的心肌损 伤实验动物模型，以本领域公知的对心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤具有明确治疗作用的药物-维拉帕米作为阳性对照药，比较评价了盐酸苯环壬酯对大鼠及兔心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的保护作用。 

实验例1盐酸苯环壬酯对大鼠心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的保护作用 

1.实验方法 

1.1大鼠心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤模型的建立 

SD雄性大鼠，20％乌拉坦2g/kg腹腔注射麻醉，气管切开，连接小型动物呼吸机机械通气(f 60次/分，VT 20ml/kg)。联接肢体II导联记录心电图，股动脉穿刺置管记录动态血压。左胸第3-5肋打开胸腔，稳定5min，在此期间，股静脉缓慢给药。暴露心脏，在左心耳下1mm左冠状动脉处用眼科用不锈钢小圆针、3-0线穿过心肌浅层，将直径3mm棉线置于冠状动脉表面一起结扎，结扎后左心室心尖部由红色变暗，心电图出现S-T段抬高，说明缺血形成。缺血30min后剪断结扎线，取出棉线，恢复血液灌流120min后处死动物。 

1.2实验分组及给药 

48只SD雄性大鼠共随机分为6组，每组各8只动物。包括：①假手术组：只开胸，股静脉注射生理盐水1ml·kg^-1，不结扎冠状动脉；②模型组：开胸后股静脉注射生理盐水1ml·kg^-1，缺血30min，再灌注120min；③维拉帕米组：缺血前股静脉注射盐酸维拉帕米注射液(以下有时简称维拉帕米)0.3mg·kg^-1；④～⑥盐酸苯环壬酯组：缺血前分别股静脉注射盐酸苯环壬酯4、8和16mg·kg^-1。 

1.3实验仪器 

低温离心机(德国Sigma公司型号：3-18K)，紫外分光光度计(日本GBC公司型号：GZNtRA20)，生物心电图记录仪(南京美易科技有限公司型号：Medlab-u/4CS)，恒温槽(中国重庆银河试验仪器有限公司型号：WC/09-05)，医学图像分析系统(美国Backman公司型号：HP IAS21000)，图像分析仪(日本Nikon公司型号：MP IAS2500)， 人工呼吸机(冀星实验仪器技术开发有限公司型号：DW-2B)。 

1.4给药剂量 

1.4.1盐酸苯环壬酯 

静脉注射给药盐酸苯环壬酯4、8和16mg·kg^-1，按体表面积折算，分别依次相当于人用给药剂量0.64、1.28及2.56mg·kg^-1。 

1.4.2维拉帕米 

盐酸维拉帕米注射液由上海禾丰制药有限公司生产。静脉注射，0.3mg·kg^-1。 

1.5心电图及血压检测 

SD大鼠联接肢体II导联记录心电图，在麻醉气管插管后，开胸后，给药后，结扎冠脉时，结扎10、30min，开放冠脉时，开放后10、30、60、120min记录各时间点心率、血压，ST段及T波幅度的变化。 

1.6心肌梗死面积测定 

各组分别于灌注120min后处死动物，取出心脏，剪除心房、右心室，保留左心室，-18℃冰冻15min，均匀切成2mm共5片，用滤纸脱水，将上述5片心脏切片小心放入1％红四氮唑(TTC)磷酸缓冲液中，37℃避光孵育10～15min，梗死区呈白色，未梗死区因含有完整的乳酸脱氢酶而染成红色，置10％甲醛中固定，数码相机拍照。Med6.0型医学图像分析系统测量每片心肌同侧的梗死区与未梗死区，计算梗死区占左心室总面积的百分比。 

1.7血清酶学指标的检测 

于再灌注120min自颈动脉取血，在4℃按3500转/min离心10min，取血清。根据相应试剂盒(北京中生生物工程技术公司生产)所附说明书检测血清中肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)值。 

1.8统计学分析 

试验数据以 表示，多组间比较采用SPSS16.0软件包的one-way ANOVA分析，方差齐者组建比较采用LSD检验，方差不齐者采用Games-Howell检验。 

2.实验结果 

2.1盐酸苯环壬酯对心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤大鼠梗死面积百分比的影响 

结果如表1所示，与模型组相比，维拉帕米及盐酸苯环壬酯各给药组均可显著抑制心肌缺血再灌注损伤(P＜0.01)；与阳性药维拉帕米比较，8及16mg/kg盐酸苯环壬酯给药组对心肌损伤的抑制作用与维拉帕米基本相当，组间比较无显著差异。 

表1盐酸苯环壬酯(CPG)对心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤大鼠心肌梗死面积百分比的影响( n＝8)

^**P＜0.01，与模型组比较，#P＜0.05，与维拉帕米组比较 

2.2盐酸苯环壬酯对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清CK及LDH变化的影响 

结果如表2所示，与模型组比较，维拉帕米及盐酸苯环壬酯各给药组均可显著抑制LDH的升高(P＜0.05)；但上述各组的LDH并未完全恢复正常水平，与假手术组相比仍有显著差别(P＜0.01)；维拉帕米及盐酸苯环壬酯各给药组组间比较，上述各组对异常升高的LDH的抑制作用无显著差别。此外，尽管各给药组动物血清CK值与模型组动物相比均有降低趋势，但无统计学意义，组间比较无显著差别。 

表2盐酸苯环壬酯(CPG)对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清中肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)的影响( n＝8)

^*P＜0.05，与模型组比较；^△△P＜0.01，与假手术组比较 

2.3盐酸苯环壬酯对心肌缺血再灌注损伤大鼠心率及血压的影响 

结果如表3所示，维拉帕米给药后，给药组动物血压迅速降低，但盐酸苯环壬酯给药组动物血压未见类似显著变化；此后，在给药后的各个时间点上，维拉帕米给药组动物血压始终维持较低水平，与给药前及其他各组相比均具显著差别；而盐酸苯环壬酯给药组动物血压在给药前后各个时间点并无显著变化，表明盐酸苯环壬酯给药后对动物血压无明显影响。 

在对心率影响上，亦观察到类似结果。即维拉帕米给药后，在给药后各个时间点上，其给药组动物心率迅速显著降低，与给药前及同时间点其他各组相比均存在显著差别；而盐酸苯环壬酯给药组动物心率在整个实验过程中未见显著改变。 

实验例2盐酸苯环壬酯对兔心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的保护作用 

兔亦是评价心肌缺血再灌注损伤治疗药物的常用实验动物，为此，在建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型基础上，本研究又建立兔心肌缺血再灌注损伤模型，采用治疗药物维拉帕米作为阳性对照药，观察了盐酸苯环壬酯对兔心肌缺血再灌注所诱发的心肌损伤的保护作用，具体方法和结果如下： 

1.实验方法 

1.1兔心肌缺血再灌注损伤模型的建立 

健康雄性新西兰大耳白兔用戊巴比妥钠35mg·kg^-1耳缘静脉注射麻醉，仰卧固定，常规记录肢体II导联。分离左侧颈静脉用于取血，分离左侧股静脉用于给药，沿胸部中线纵切皮肤，暴露胸骨和软骨部分。沿左胸骨边缘切断3、4肋软骨，避免损伤胸膜和胸廓内血管，暴露心脏，剪开心包膜，在左心耳下缘0.3cm处寻找冠状动脉左前降支，在左前降支下穿线(3/0丝线)，采用推管法结扎左前降支30min，再灌注60min，以心电图T波明显抬高和结扎线以下心肌组织颜色由正常变苍白或深紫色为心肌缺血标志。 

1.2实验分组及给药 

56只兔随机分为7组，每组8只。①假手术组：冠状动脉左前降支只穿线不结扎；②单纯缺血再灌注组：冠状动脉左前降支结扎前，持续15min静脉滴注与给药组等体积的生理盐水，此后结扎30min，再灌注60min；③～⑤盐酸苯环壬酯高、中、低三个剂量组：冠状动脉左前降支结扎前，持续15min静脉滴注不同剂量(12，6及3mg·kg^-1)盐酸苯环壬酯，结扎30min，再灌注60min；⑥维拉帕米(VP)0.2mg·kg^-1组：方法同③～⑤；⑦正常对照组：只抽血测定血清酶值。 

1.3实验仪器 

与“实验例1”在大鼠上进行的药效学试验中所使用的仪器相同。 

1.4给药剂量 

1.4.1盐酸苯环壬酯 

静脉注射盐酸苯环壬酯12、6及3mg·kg^-1，按体表面积折算，分别依次相当于人用给药剂量0.97、1.94及3.89mg·kg^-1。 

1.4.2维拉帕米 

盐酸维拉帕米注射液由上海禾丰制药有限公司生产。静脉注射盐酸维拉帕米0.2mg·kg^-1。 

1.5心肌梗死面积测定及血清酶学指标的检测 

于灌注60min后处死动物，进行心肌TTC染色及血清酶学测定，其方法与“实验例1”在大鼠上进行的药效学试验基本相同，不赘述。 

1.6统计学分析 

与“实验例1”在大鼠上进行的药效学试验中采用的统计学分析相同。 

2.实验结果 

2.1对心肌梗死面积影响 

结果如表4所示，维拉帕米(0.2mg/kg)及盐酸苯环壬酯(12，6及3mg/kg)各给药剂量组均可显著减少心肌梗死面积(P＜0.01)。各给药组组间比较，维拉帕米与盐酸苯环壬酯高、中剂量组作用基本相当，其作用均优于盐酸苯环壬酯低剂量给药组(P＜0.01)，但上述三组组间比较无显著差异。 

表4盐酸苯环壬酯等对心肌缺血再灌注损伤兔心肌梗死面积影响(n＝8)

**P＜0.01，与模型组比较；^#P＜0.05，与盐酸苯环壬酯低剂量组比较 

2.2对LDH及CK影响 

根据相应试剂盒(北京中生生物工程技术公司生产)所附说明书检测血清中CK及LDH值。结果如表5所示，各给药组均可有效降低异常增高的LDH值(P＜0.01)。盐酸苯环壬酯各给药组组间比较，高、中剂量组LDH值低于低剂量组(P＜0.05)，但前两者组间比较无显著统计学差异。此外，尽管与模型组相比，各给药组CK值均显著降低(P＜0.05/0.01)，但维拉帕米、盐酸苯环壬酯中剂量给药组的CK值要显著低于盐酸苯环壬酯低剂量组(P＜0.05)。 

2.3对SOD及MDA影响 

根据相应试剂盒(南京建成生物工程研究所)所附说明书检测超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)。结果如表6所示，模型组动物血清SOD及MDA值与假手术组相比未见显著改变，各给药组动物SOD及MDA值亦无显著增减。 

表5盐酸苯环壬酯等对心肌缺血再灌注损伤兔血清LDH及CK值影响(n＝8)

^●P＜0.05  **P＜0.01，与模型组比较； 

●^#P＜0.05，与盐酸苯环壬酯低剂量组比较 

表6盐酸苯环壬酯等对心肌缺血再灌注损伤兔血清超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)值影响(n＝8)

上述结果综合表明，盐酸苯环壬酯可显著抑制心肌缺血再灌注损伤，其作用与阳性治疗药物维拉帕米基本相当，且无维拉帕米所具有的低血压、心率过缓等明显副作用。因此表明盐酸苯环壬酯是高效、低毒副作用心肌缺血再灌注治疗药物。 

盐酸苯环壬酯有两个手性对映体，即左旋体和右旋体，鉴于盐酸苯环壬酯的药理学作用可能为两个手性对映体药理学作用的叠加，因此表明盐酸苯环壬酯的手性对映体药理学作用可能与其混旋体类似，可能同样具有对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。