左旋盐酸去甲基苯环壬酯对MPTP诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

摘要

目的 探究M4受体选择性拮抗剂左旋盐酸去甲基苯环壬酯(R-DM8021)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导人多巴胺能神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用.方法 预先给予不同浓度R-DM8021(1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6 mol·L-1)孵育SH-SY5Y细胞1 h后,加入MPTP 1 mmol·L-1共孵育24 h,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量,TUNEL法观察细胞凋亡形态,Western蛋白印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和胱天蛋白酶3前体蛋白表达水平.结果 MTT结果显示,与细胞对照组相比,MPTP 1 mmol·L-1作用SH-SY5Y细胞24 h,细胞存活率显著降低至(44.5±2.7)％(P<0.01);与MPTP组相比,预先给予R-DM8021(1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6 mol·L-1)均可逆转MPTP对SH-SY5Y细胞的损伤作用,细胞存活率分别提高至(80.5±4.7)％,(71.5±8.1)％,(74.4±6.5)％和(61.3±3.2)％(P<0.01).流式细胞检测结果显示,与细胞对照组相比,MPTP 1 mmol·L-1作用SH-SY5Y细胞24 h,细胞内ROS含量显著升高至129±22(P<0.01);与MPTP组相比,预先给予R-DM8021(1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6 mol·L-1)显著降低MPTP诱导的胞内ROS释放,细胞内ROS含量降低至84±12,86±15,86±6和88±8(P<0.05).TUNEL检测显示,与细胞对照组相比,MPTP 1 mmol·L-1作用SH-SY5Y细胞24 h,贴壁细胞染色质皱缩,核膜裂解,并产生大量凋亡小体;与MPTP组相比,预先给予R-DM80211 nmol·L-1可显著改善MPTP诱导的细胞凋亡,凋亡小体显著减少.Western蛋白印迹结果显示,与MPTP组相比,R-DM80211 nmol·L-1可显著抑制MPTP诱导SH-SY5Y细胞凋亡,降低Bax和胱天蛋白酶3前体蛋白的表达(P<0.01).结论 R-DM8021能有效对抗MPTP诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制与提高细胞存活率,降低胞内ROS含量,抑制细胞凋亡有关.