Apelin通过Akt/eNOS机制促进肺血管内皮细胞一氧化氮释放

摘要

目的 探讨Apelin对肺血管内皮细胞释放一氧化氮(NO)的影响及其机制.方法 培养新生鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs).(1)以1×105个IqL密度接种至24孔板,80%融合后,无血清培养24 h.分为2组:Apelin组,加入Apelin至终浓度为10-5mol/L;对照组.加入等量无血清DMEM培养液.每组设立4个复孔.继续培养,并分别在0 min、2 min、5 min、15 min、30 min时间点取培养液测NO浓度.(2)以5 × 105个/孔密度接种至6孔板,80%融合后,无血清培养24 h.分为3组:Apelin组,加入Apelin至终浓度为10-5mol/L.Apelin+Akt抑制剂(Akt inhibitor)组,加入Apelin前用5 μmol/L浓度的Akt抑制剂预处理30 min.对照组加入等量DMEM培液.每组设立3复孔.继续培养5 min后立即提取总蛋白,用于Western blot检测磷酸化Akt和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达.结果 与0 min时间点比较,培养液中NO浓度分别在2 min、5 min、15 min时间点增加(P<0.01或P<0.05),其中在5 min时间点达到高峰.与对照组比较,Apelin组磷酸化Akt和磷酸化eNOS表达增加(P<0.01),与Apelin组比较,Apelin+Akt inhibitor组磷酸化eNOS表达降低(P<0.01).结论 Apelin促进PMVECs释放NO,Akt/eNOS磷酸化参与Apelin促进NO释放机制.