内转录间隔区

摘要： 为了解不同年份山羊源捻转血矛线虫内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因的遗传变异情况,提取2015年-2020年间陕西省咸阳地区44株山羊源捻转血矛线虫的核糖体DNA(rDNA),对其ITS基因进行扩增、测序与分析。结果显示,44株捻转血矛线虫的ITS-1序列长度为400 bp~404 bp,种内变异率为0~4.1%,与GenBank中英国捻转血矛线虫ITS-1参考序列LS997563的相似性为97.01%~99.75%;ITS-2序列长度为231 bp,种内变异率为0~6.3%,与GenBank中尼日利亚捻转血矛线虫ITS-2参考序列LC368048的相似性为96.97%~100%。结果表明,2015年-2020年间咸阳地区山羊源捻转血矛线虫ITS-1、ITS-2基因均有不同程度的遗传变异,但未出现新的种群分化。此外,基于虫体代表性样本ITS-1、ITS-2序列构建的遗传进化树结果显示,不同国家和地区的分离株进化关系均较为接近,在ITS-1进化树中,只有捻转血矛线虫样本SX17-3与GenBank中陕西ITS-1序列(KX534100)汇于同一支上,在ITS-2进化树中,也只有SX15-8、SX17-9、SX17-113株捻转血矛线虫样本分离株与陕西ITS-1序列(KX534100)距离最近,表明捻转血矛线虫ITS基因序列的变异情况与地理条件之间无明显相关性。

摘要： 皮肤癣菌病是一种常见于动物的浅表性真菌性皮肤病,其病原真菌种类繁多,在兽医临床中对病原真菌进行准确的种属鉴定具有重要意义。内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)作为非编码区域,一般在种内高度保守,在不同真菌种间则具有序列多态性。分析ITS序列可将真菌鉴定到种水平,在动物皮肤癣菌的分类鉴定中得到广泛应用。文章就ITS序列的结构特点及其在常见动物皮肤癣菌分类鉴定中的应用展开综述,为相关研究及应用提供参考。

摘要： 该研究以采集的河南南阳魔芋种植土壤样品为试验材料,通过富集培养、测定产β-甘露聚糖酶酶活力,分离筛选高产β-甘露聚糖酶的菌株,并通过形态观察、内转录间隔区(ITS)基因和β-微管蛋白基因BenA序列分析对其进行菌种鉴定。结果表明,筛选得到一株高产β-甘露聚糖酶真菌菌株HKS016,其β-甘露聚糖酶酶活力为2.67 U/mL,该菌株被鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger),保藏于中国普通微生物学菌种保藏中心(CGMCC),保藏编号为CGMCC No.22413。

摘要： 目的:比较并评价基于基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF MS)技术的两种质谱检测系统安图Autof ms1000和布鲁克Microflex LT在临床菌株鉴定中的应用。方法:选取2018年11月-2019年2月苏州市立医院临床分离的菌株共3312株(50个菌属和156个菌种)。临床常见细菌2397株、念珠菌570株、其他真菌15株,厌氧菌170株、其他细菌160株。同时采用两个质谱系统对上述菌株进行鉴定,结果不一致的菌株采用16/18S rDNA或内转录间隔区(ITS)序列测序确认结果。结果:安图Autof ms1000和布鲁克Microflex LT对上述所有临床菌株属水平总鉴定准确性分别为96.4%和94.3%,而二者种水平总鉴定准确性分别为85.0%和69.9%。570株念珠菌中,二者种水平鉴定准确性分别为81.6%和27.2%。15株其他真菌中,二者种水平鉴定准确性分别为86.7%和6.7%。误鉴定菌株数分别为5株和6株。结论:安图Autof ms1000和布鲁克Microflex LT在细菌鉴定应用方面具有一定的一致性。在真菌的鉴定中,Autof ms1000有一定的优势。二者质谱数据库均有改善优化的空间。

摘要： 目的:比较不同产地柴胡药材的皂苷含量和内转录间隔区(ITS)序列,从有效成分含量和遗传基础2个层面为柴胡药材生产和利用提供借鉴。方法:产地收集柴胡药材,采用高效液相色谱法(HPLC)测定样品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量;提取DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增ITS序列并比较分析序列差异。结果:各产地柴胡有效成分含量差异较大,柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d总质量分数最高可达4.165%,最低为0.118%。不同产地柴胡种质依据ITS序列可分为三大类,其中第Ⅱ类产于甘肃省,第Ⅲ类产于四川省、山西省和甘肃省。第Ⅲ类含有的柴胡样品较多,又可分a和b类,b类又可分为i、ii、iii类,含量较高的样品主要存在于iii小类,主要来源于甘肃、山西。结论:尽管柴胡自然分布广、生产适应性强,但从成分含量和遗传差异角度分析,有必要对柴胡的种植品种和产地进行规范。

摘要： 在对山西省历山国家自然保护区野生大型真菌资源物种多样性的调查研究中,在落叶松林下采集到一份铦囊蘑属标本,对其进行了形态学和分子生物学鉴定。其主要特征为:菌盖直径3.2~4.3 cm,近圆形,菌盖中央灰褐色,向边缘颜色逐渐变浅;菌褶近白色,密集,边缘波状;菌柄长5.2~6.8 cm,粗0.3~0.5 cm,中空,菌柄上部黄棕色,向基部逐渐变白;孢子(6.5~9.1)μm×(3.6~5.9)μm,椭圆形,无色有疣状物;担子(20.4~29.2)μm×(6.3~10.3)μm;缘囊体(43.6~63.1)μm×(9.6~17.5)μm,纺锤形至烧瓶形;侧囊体与缘囊体相似;柄囊体(43.1~63.0)μm×(5.5~7.7)μm,烧瓶形,顶端有结晶。经ITS区序列比对,此标本与模式种Melanoleuca dirensis F.Nawaz,S.Jabeen&A.N.Khalid的序列(KU575243)相似度高达99.84%。基于ITS区序列采用最大似然法(ML)和贝叶斯分析法(BI)构建的系统发育树也支持此物种为下迪铦囊蘑(Melanoleuca dirensis)。综合形态学和分子系统学研究,确定此物种为中国新记录种下迪铦囊蘑(Melanoleuca dirensis)。

摘要： 为评估DNA条形码基因核糖体内转录间隔区(ITS)和核糖体大亚基(LSU)在红曲菌分类鉴定中的有效性,从NCBI的GenBank数据库中下载现阶段红曲菌属所有物种的ITS和LSU基因序列,采用系统发育和遗传距离的方法对其进行分析,并用该研究所保存的部分红曲菌株的DNA序列进行验证.结果表明,同种红曲菌的不同菌株在基于ITS序列的邻接树中分别聚为单系;紫色红曲菌(Monascus purpureus)、佛罗里达红曲菌(Monascus floridanus)和蜂蜜红曲菌(Monascus mellicola)的同种不同菌株在基于LSU序列的邻接树中分别聚为单系.新月红曲菌(Monascus lunisporas)的ITS和LSU序列以及红色红曲菌(Monascus ruber)和累西腓红曲菌(Monascus recifensis)的LSU序列的条形码间隙不明显,其他红曲菌的ITS和LSU序列条形码间隙明显.同种红曲菌ITS序列的最小及最大种间遗传距离均高于LSU序列.研究表明ITS基因在红曲菌的分类鉴定中具有高效性,LSU基因在红曲菌分类鉴定中的分辨力有限.

摘要： 盖表皮或菌柄表皮具有褐色色素这一特征在乳菇属小红乳菇亚属Lactarius subg. Russularia中较为少见。文中描述了产于中国南部的2个子实体褐色、表皮中具有褐色色素的乳菇新种:暗褐乳菇L. atrofuscus和橄榄褐乳菇L. olivaceofuscus。其中,暗褐乳菇L. atrofuscus的孢子球形,盖表皮为(子实层)球囊型,缺乏大囊体;除褐色色素外,盖表皮和菌柄表皮中所具有的树脂样皮壳物质也是识别该种的关键特征。橄榄褐乳菇L.olivaceofuscus的表皮内色素为深橄榄褐色,缺乏树脂样皮壳物质;菌盖强烈皱缩,盖表皮末端菌丝细长,较大的孢子具有较高的条脊和翼,这些特征可以将其与暗褐乳菇和其他相近种相区别。文中提供了该2种的宏观形态和显微特征描述,以及与相近种的形态对比和真菌条形码ITS序列。

摘要： 盖表皮或菌柄表皮具有褐色色素这一特征在乳菇属小红乳菇亚属Lactarius subg.Russularia中较为少见.文中描述了产于中国南部的2个子实体褐色、表皮中具有褐色色素的乳菇新种:暗褐乳菇L.atrofuscus和橄榄褐乳菇L.olivaceofuscus.其中,暗褐乳菇L.atrofuscus的孢子球形,盖表皮为(子实层)球囊型,缺乏大囊体;除褐色色素外,盖表皮和菌柄表皮中所具有的树脂样皮壳物质也是识别该种的关键特征.橄榄褐乳菇L.olivaceofuscus的表皮内色素为深橄榄褐色,缺乏树脂样皮壳物质;菌盖强烈皱缩,盖表皮末端菌丝细长,较大的孢子具有较高的条脊和翼,这些特征可以将其与暗褐乳菇和其他相近种相区别.文中提供了该2种的宏观形态和显微特征描述,以及与相近种的形态对比和真菌条形码ITS序列.

摘要： 盖表皮或菌柄表皮具有褐色色素这一特征在乳菇属小红乳菇亚属Lactarius subg.Russularia中较为少见.文中描述了产于中国南部的2个子实体褐色、表皮中具有褐色色素的乳菇新种:暗褐乳菇L.atrofuscus和橄榄褐乳菇L.olivaceofuscus.其中,暗褐乳菇L.atrofuscus的孢子球形,盖表皮为(子实层)球囊型,缺乏大囊体;除褐色色素外,盖表皮和菌柄表皮中所具有的树脂样皮壳物质也是识别该种的关键特征.橄榄褐乳菇L.olivaceofuscus的表皮内色素为深橄榄褐色,缺乏树脂样皮壳物质;菌盖强烈皱缩,盖表皮末端菌丝细长,较大的孢子具有较高的条脊和翼,这些特征可以将其与暗褐乳菇和其他相近种相区别.文中提供了该2种的宏观形态和显微特征描述,以及与相近种的形态对比和真菌条形码ITS序列.

摘要： 利用两株伊氏锥虫的核糖体基因内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)的序列分析和系统进化学分析来研究来两株水牛伊氏锥虫的分类学地位。通过对我们从水牛分离到的锥虫(广西株)和湖北株水牛伊氏锥虫的ITS基因的扩增、克隆和测序及分析并用CLUSTALW1.83软件多重比对分析序列的差别，MEGA4.0软件处理数据绘制系统进化树。结果表明，这两种水牛伊氏锥虫的ITS1-5.8S-ITS2 rRNA基因大小分别为1102bp和1095bp，两种伊氏锥虫的ITS序列存在多态性，其中广西株的ITS-1序列长为340bp，ITS-2序列长为582bp，湖北株的ITS-1序列长为339bp，ITS-2序列长为587bp。系统发育分析显示，这两株伊氏锥虫分布在同一大枝的不同亚群上。

摘要： 目的:研究以16S-23S rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列为靶基因设计分支杆菌菌种寡核苷酸探针,应用PCR-反向杂交技术快速鉴定分支杆菌菌种.方法:应用PCR-反向杂交技术检测26种36株分支杆菌标准株,24株分支杆菌临床分离株.结论:16S-23S rDNA ITS PCR-反向杂交鉴定分支杆菌菌种简便、快速、准确,具有较高应用价值.

摘要： 目的:鉴别冬虫夏草与人工发酵菌丝体.方法:基于对核糖体基因内转录间隔区ITS的分析,采用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性法(PCR-RFLP);同时聚合酶链式反应(PCR)扩增线粒体基因COI.结果:冬虫夏草ITS的PCR产物能够被XhoI切割成两个片段,全部扩增得到COI条带.5种人工发酵菌丝体,除百令胶囊外,余4种均不能够被XhoI切开;5种人工发酵菌丝体均未扩增出COI条带.结论:结合PCR-RFLP以及COI的PCR扩增,可鉴别冬虫夏草与人工发酵菌丝体.

摘要： 蛔虫总科的寄生线虫可感染主要的脊椎动物种类,这些蛔虫不仅严重危害动物健康及生命,而且许多蛔虫还可感染人,引起严重的临床疾病,具有重要的公共卫生学意义.例如,犬弓首蛔虫的幼虫可以侵入人体各组织,引起内脏幼虫移行症(visceral larva migrans,VLM)、眼睛幼虫移行症(ocular larva migrans,OLM)和隐性弓首蛔虫病.具有重要公共卫生学意义的人蛔虫仍在世界上许多国家广泛流行.由于食入寄生在海鱼体内的、属于异尖线虫科(Anisakidae)某些种的活的第三期幼虫而引起的异尖线虫病,已成为重要的食源性人兽共患寄生虫病,严重威胁人类的健康,是我国禁止入境的二类寄生虫病. 鉴于蛔虫对人和动物健康的重要意义,开展蛔虫的研究无疑是十分必要的,而对蛔虫的各个生长发育阶段进行准确的鉴定是研究它们的生活史、流行病学、种群生物学和系统学的一个必要前提,同时也是对蛔虫感染进行诊断的一个重要条件.过去,对蛔虫的鉴定主要根据成虫的形态学特征、宿主特异性及特定的寄生部位.但是对于形态上难于区别的虫卵和幼虫阶段,形态学方法有时则具有局限性. 近年来一些基于PCR的分子生物学方法(如PCR-RFLP及PCR-SSCP),以核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)作为遗传标记,已成功用于蛔虫的分子分类学及分子遗传学研究.本文从:(1)蛔虫PCR鉴别和诊断方法中目的DNA的选择;(2)对ITS序列的初步评价以及用于蛔虫特异性鉴定的PCR方法的建立;(3)PCR-SSCP:一种用于鉴定蛔虫和检测种群变异的基因突变检测方法;(4)弓首蛔虫分子分类学的研究;(5)人源及猪源蛔虫的分子分类学的研究;(6)异尖线虫的分子分类学的研究等方面,主要概述近年来作者利用ITS序列作为遗传标记,将基于PCR的多种分子生物学方法在人兽共患蛔虫的虫种特异性鉴定、感染的诊断、种群遗传变异研究中应用的研究成果.

摘要： 本研究通过对来自青海湖的鲁道夫对盲囊线虫(Contracaecum rudolphii)核糖体DNA第一、第二内转录间隔区(ITS-1、ITS-2)进行PCR扩增、DNA单链构象多态性(SSCP)分析及序列分析,并与来自欧洲的2个姊妹种鲁道夫对盲囊线虫进行比较,旨在阐明来自我国青海湖的鲁道夫对盲囊线虫的分子分类地位.结果显示:我国青海湖的鲁道夫对盲囊线虫与来自意大利的C.rudolphiiB具有一样的SSCP带型及ITS序列,但不同于C.rudolphiiA,因此属于C.rudolphiiB.本研究在国内首次证实了ITS片段可作为遗传标记来鉴别鲁道夫对盲囊线虫的姊妹种,从而为鲁道夫对盲囊线虫的进一步研究奠定了基础.

摘要： 本文以侧耳属Pleurotus15个种的15个菌株为材料，根据GenBank上侧耳属细胞色素c氧化酶亚基I基因(cytochromec oxidase subunit 1 gene，C01)序列信息，设计引物CO332F，CO332R，进行第一轮PCR扩增，结果显示所有菌株都能得到单一条带，根据条带大小，15个菌株可分为4组。随后针对每个种设计特异性引物，进行第二轮PCR扩增，结果显示每个菌株只有在自己特异的引物中出现目的条带。通过两轮扩增，根据扩增条带的大小和有无，即可对15个种进行快速鉴定。

摘要： 本文以侧耳属Pleurotus15个种的15个菌株为材料，根据GenBank上侧耳属细胞色素c氧化酶亚基I基因(cytochromec oxidase subunit 1 gene，C01)序列信息，设计引物CO332F，CO332R，进行第一轮PCR扩增，结果显示所有菌株都能得到单一条带，根据条带大小，15个菌株可分为4组。随后针对每个种设计特异性引物，进行第二轮PCR扩增，结果显示每个菌株只有在自己特异的引物中出现目的条带。通过两轮扩增，根据扩增条带的大小和有无，即可对15个种进行快速鉴定。

摘要： 本文以侧耳属Pleurotus15个种的15个菌株为材料，根据GenBank上侧耳属细胞色素c氧化酶亚基I基因(cytochromec oxidase subunit 1 gene，C01)序列信息，设计引物CO332F，CO332R，进行第一轮PCR扩增，结果显示所有菌株都能得到单一条带，根据条带大小，15个菌株可分为4组。随后针对每个种设计特异性引物，进行第二轮PCR扩增，结果显示每个菌株只有在自己特异的引物中出现目的条带。通过两轮扩增，根据扩增条带的大小和有无，即可对15个种进行快速鉴定。

摘要： 本文以侧耳属Pleurotus15个种的15个菌株为材料，根据GenBank上侧耳属细胞色素c氧化酶亚基I基因(cytochromec oxidase subunit 1 gene，C01)序列信息，设计引物CO332F，CO332R，进行第一轮PCR扩增，结果显示所有菌株都能得到单一条带，根据条带大小，15个菌株可分为4组。随后针对每个种设计特异性引物，进行第二轮PCR扩增，结果显示每个菌株只有在自己特异的引物中出现目的条带。通过两轮扩增，根据扩增条带的大小和有无，即可对15个种进行快速鉴定。

摘要： 本文以侧耳属Pleurotus15个种的15个菌株为材料，根据GenBank上侧耳属细胞色素c氧化酶亚基I基因(cytochromec oxidase subunit 1 gene，C01)序列信息，设计引物CO332F，CO332R，进行第一轮PCR扩增，结果显示所有菌株都能得到单一条带，根据条带大小，15个菌株可分为4组。随后针对每个种设计特异性引物，进行第二轮PCR扩增，结果显示每个菌株只有在自己特异的引物中出现目的条带。通过两轮扩增，根据扩增条带的大小和有无，即可对15个种进行快速鉴定。

摘要： 本发明提供确定miR‑27a基因的核心启动子的方法，从小鼠血液基因组DNA中扩增8条miR‑27a启动子缺失片段，构建重组双荧光素酶表达载体pGL3‑D1到pGL3‑D8，转入CHO细胞后检测8个缺失片段的荧光素酶活性，获得核心启动子区；该方法鉴定了miR‑27a的核心区，为基因工程和分子育种提供了新的启动子资源；本发明还提供确定miR‑27a基因核心启动子内转录因子Myod结合位点的方法，通过超表达转录因子Myod和定点突变核心启动子区内的转录因子结合位点，构建突变型荧光表达载体，检测荧光素酶活性，确定转录因子结合位点；为miR‑27a的表达调控运用于家畜高繁殖力分子调控机制的研究提供依据。

摘要： 本发明公开了一种用于宏内转录间隔序列的高通量测序的复合标签及其应用，复合标签的序列如编号NO.1～NO.48所示。标签的应用方法包括：提取每一个样本的总DNA；对每一个样本，从48对且未被选择过的序列中选择任一一对序列作为引物，对对应样本的总DNA进行扩增；对每一个样本的扩增产物进行电泳检测，对扩增产物进行纯化回收；对每个样本纯化回收后的产物紫外分光光度计精确定量；将所有样本等量混合后建立一个测序文库；对所建测序文库进行高通量测序。本发明提高超高通量测序的样本通量，有效降低超高通量测序成本，有效富集样本中整个微生物种群中的真菌种群，为探明环境中真菌多样性研究提供高通量分析途径。

摘要： 本发明涉及套式PCR技术扩增单条植物寄生线虫核糖体rDNA转录间隔区(Internal Transcribed Spacer，ITS)的核酸序列，属于植物寄生线虫检测领域。本发明筛选了3条引物，建立了套式PCR扩增技术，包括2套不同的PCR扩增体系和2套不同的PCR扩增程序，免去了引物大量合成的成本和管理保存的麻烦。本发明的有益效果是：所涉及的技术成熟、操作简单，所用引物少，目前只有3条就基本解决问题，与实时荧光PCR技术相比，该技术成本低，操作简单，可重复性强，假阳性结果出现概率低，可用于单条植物寄生线虫幼虫或通过常规PCR无法扩增的单条植物寄生线虫ITS核酸序列的扩增。非常适合于口岸日常检疫鉴定使用。

摘要： 本发明公开了一种基于流式细胞术定量分析细胞核内转录因子含量的方法，涉及生物技术领域。该方法包括：细胞核分离步骤、转录因子染色步骤以及流式细胞术分析步骤。采用该方法可以对细胞内的转录因子进行定量分析或分布情况分析，其具有高通量和更准确的量化分析特点。

摘要： 本发明提供确定miR‑27a基因的核心启动子的方法，从小鼠血液基因组DNA中扩增8条miR‑27a启动子缺失片段，构建重组双荧光素酶表达载体pGL3‑D1到pGL3‑D8，转入CHO细胞后检测8个缺失片段的荧光素酶活性，获得核心启动子区；该方法鉴定了miR‑27a的核心区，为基因工程和分子育种提供了新的启动子资源；本发明还提供确定miR‑27a基因核心启动子内转录因子Myod结合位点的方法，通过超表达转录因子Myod和定点突变核心启动子区内的转录因子结合位点，构建突变型荧光表达载体，检测荧光素酶活性，确定转录因子结合位点；为miR‑27a的表达调控运用于家畜高繁殖力分子调控机制的研究提供依据。

摘要： 本发明涉及一种可用于快速鉴别鲽形目鳎科鱼类的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物及设计和扩增方法，所提供的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物可以高效和特异地扩增弯鲽形目鳎科鱼类蛸的ITS2，并能够一次性对多个物种同时进行扩增，具有高效快速和便捷的优点，且由于ITS2序列在鳎科鱼类不同物种中长度差异明显，可以通过凝胶电泳技术直接肉眼观察，进而高效快捷对形态相似或者形态损伤的物种进行鉴定。

摘要： 本发明涉及一种后睾科吸虫核糖体内转录间隔区的通用引物，所述正向引物序列为：ACAATGACGGTTTCAGCGAGT(SEQ ID No.1)，反向引物序列为：CACAAACAACCCGACTCCAAGG(SEQ ID No.2)。本发明还公开了该通用引物的设计和扩增方法以及用途。本发明的通用引物是基于核糖体内转录间隔区(ITS)两端保守的18S rDNA和28S rDNA序列设计，所得到的引物特异性极强，扩增的ITS1和ITS2进化速率相对较快，在种间存在显著的差异；将该引物用于后睾科吸虫华支睾吸虫和东方次睾吸虫的扩增，准确度高，克服了形态特征鉴定的缺陷，解决了种质混杂的问题。

摘要： 本发明公开了鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区1（ITS1）通用引物设计方法及应用。有益效果为：本发明所公开的引物设计方法是基于核糖体内转录间隔区1(ITS1)两端保守的18S rDNA和5.8S rDNA序列设计，所得到的引物特异性极强，扩增的ITS1进化速率相对较快，在种内基本趋于相似，而在种间则表现出显著的差异；将该引物用于鳎科鱼类，准确度高，克服了形态特征鉴定的缺陷，解决了种质混杂的问题。

摘要： 本发明涉及一种可用于快速鉴别鲽形目鳎科鱼类的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物及设计和扩增方法，所提供的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物可以高效和特异地扩增弯鲽形目鳎科鱼类蛸的ITS2，并能够一次性对多个物种同时进行扩增，具有高效快速和便捷的优点，且由于ITS2序列在鳎科鱼类不同物种中长度差异明显，可以通过凝胶电泳技术直接肉眼观察，进而高效快捷对形态相似或者形态损伤的物种进行鉴定。

摘要： 本发明公开了一种多样本真菌内转录间隔区高通量测序的复合标签及其应用，复合标签的序列如编号NO.1～NO.48所示。标签的应用方法包括：提取每一个样本的总DNA；对每一个样本，从48对且未被选择过的序列中选择任一一对序列作为引物，对对应样本的总DNA进行扩增；对每一个样本的扩增产物进行电泳检测，对扩增产物进行纯化回收；对每个样本纯化回收后的产物紫外分光光度计精确定量；将所有样本等量混合并建立一个测序文库；对所建测序文库进行高通量测序。本发明提高超高通量测序的样本通量，有效降低超高通量测序成本，有效富集样本中整个微生物种群中的真菌种群，为探明环境中真菌多样性研究提供高通量分析途径。