体外代谢

摘要： 采用体外肝微粒体孵育实验研究氯丙嗪在鼠、猪、鸡肝微粒体的代谢速率及代谢产物。利用液相色谱-串联质谱测定不同时间点氯丙嗪的峰面积,计算氯丙嗪的体外代谢率、代谢半衰期(T_(1/2))及固有清除率(CLint),通过氯丙嗪及其代谢产物的保留时间、碎片离子等信息,推断氯丙嗪的代谢产物和代谢途径。结果表明,在猪、鼠、鸡肝微粒体孵育体系中,氯丙嗪的T_(1/2)分别为18.2、173.3、346.5 min,CLint分别为76.2、8.0、4.0μL/(min·mg)。在3种肝微粒体孵育体系中共发现8种代谢产物,在鼠、猪和鸡肝微粒体孵育体系中分别发现5种、7种和4种氯丙嗪代谢产物,均检测出产物氯丙嗪亚砜、去甲基氯丙嗪、6-羟基氯丙嗪和7-羟基氯丙嗪。氯丙嗪在肝微粒体孵育体系中的代谢途径以氧化、羟基化和去甲基反应为主,其在猪肝微粒体孵育体系中代谢和清除速度最快,其次是鼠、鸡,在不同种属肝微粒体孵育体系中代谢产物的种类和含量存在差异。

摘要： 目的研究狼毒大戟中4种二萜类成分在大鼠肝微粒体中的代谢产物并探讨其代谢规律。方法运用大鼠肝微粒体体外孵育法,将岩大戟内酯A、岩大戟内酯B、17-羟基岩大戟内酯A、17-羟基岩大戟内酯B加至由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸启动的大鼠肝微粒体孵育体系中,于37°C条件下孵育30 min,再用乙腈终止反应。以阴性组(先加乙腈再启动孵育30 min)为参考,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术,利用Analyst^(■)TF 1.7.1、PeakView^(■)2.2、MetabolitePilot 1.5、MasterView 1.2软件对其质谱裂解规律和代谢产物进行推测与鉴定。结果4种二萜类成分在二级质谱中均易丢失H_(2)O和CO等中性碎片。岩大戟内酯A和17-羟基岩大戟内酯A在肝微粒中的代谢反应主要为二羟基化、脱氢和一羟基化反应,分别鉴定出6、5个代谢产物。岩大戟内酯B和17-羟基岩大戟内酯B在肝微粒体中的代谢反应主要为一羟基化、水合和同分异构化反应,均鉴定出5个代谢产物。结论岩大戟内酯A和17-羟基岩大戟内酯A在大鼠肝微粒体中均产生了羟基化及脱氢代谢产物,岩大戟内酯B和17-羟基岩大戟内酯B在大鼠肝微粒体中均产生了羟基化、水合及同分异构化代谢产物。4种二萜类成分的代谢产物均是Ⅰ相代谢产物。

摘要： 目的 研究炒莱菔子中萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐的肠道菌群体外代谢。方法 采集健康SD大鼠新鲜粪便,制备肠菌培养液,与炒莱菔子提取液在厌氧环境下共孵育。HPLC法测定萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐含量,分析采用InertSuatain AQ-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温27°C;检测波长225、326 nm。对2种成分的质量浓度与降解时间进行动力学方程拟合。结果 萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐在大鼠肠道菌群中均被代谢,12 h时两者降解率分别为80.35%、96.31%,并且其代谢转化均符合非线性动力学。结论 萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐在大鼠肠道菌群作用下可发生转化,以后者转化速率更快,推测其肠道菌群代谢产物可能为芥子酸。

摘要： 运用Orbitrap高分辨质谱仪,评估了人体肝微粒体(HLM)代谢V6的转化规律.除5种已被报道过的O-脱烷基、氧化性去磷酸化和氧化脱氯产物外,首次发现了6种新型产物.基于其MS/MS质谱图,该6种代谢产物被鉴定为醛基和羧基产物.其中,5种代谢物生成量随孵育时间呈线性增加趋势,具有累积性.此外,推导的代谢途径表明,脱烷基化和羟基化代谢物进一步转化为次级代谢物,即醛和羧基代谢物.

摘要： 目的研究人肠道菌群对桃叶珊瑚苷体外转化代谢的作用。方法采用体外肠道菌孵育方法,在厌氧条件下,将桃叶珊瑚苷分别与3位健康人肠道菌群共同培养48 h,采用高效液相色谱-串联质谱(HPLCMS/MS)联用技术检测不同时间点孵育体系中桃叶珊瑚苷的相对含量及其代谢产物。结果健康人肠道菌群可转化代谢桃叶珊瑚苷,其主要代谢产物为桃叶珊瑚苷苷元和aucubmines A;其主要代谢途径为脱糖基、氨基化及氧化作用。不同受试者肠道菌群对桃叶珊瑚苷代谢速率存在差异,而桃叶珊瑚苷苷元和aucubmines A在共孵育2 h和4 h后可分别被检测到。结论桃叶珊瑚苷可被健康人肠道菌群代谢,4~8 h主要代谢产物为桃叶珊瑚苷苷元,8 h后代谢产物主要为aucubmines A。

摘要： 目的 探讨注射用血栓通对人CYP450酶的体外抑制作用及其对阿托伐他汀体外代谢的影响.方法 取人肝微粒体6种细胞色素P450(CYP450)亚酶(1A2,2C9,2C19,2D6,3A4,2E1)与系列注射用血栓通(0.01％,0.1％,0.5％,1％,10％,20％)溶液预孵育,检测各CYP450亚酶底物代谢产物的减少程度.在有、无注射用血栓通的条件下,阿托伐他汀分别与辅酶和微粒体孵育,通过检测经肝微粒体代谢后的阿托伐他汀的母体剩余率,评价注射用血栓通对酶的抑制作用.结果 注射用血栓通浓度在0.01％ ～20％范围内对CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4的酶活性抑制作用存在浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)分别为>20％,>20％,10.7％.注射用血栓通的浓度在0.1％ ～20％范围内对人肝微粒体中的CYP3A4酶活性抑制作用存在浓度依赖性,IC50为1.76％.结论 在体外孵育系统中,注射用血栓通可通过抑制CYP3A4酶活性与阿托伐他汀产生药物相互作用,这2种药物临床合用时需引起重视.

摘要： 目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法测定体外样品中托莫西汀(ATX)及其活性代谢产物4-羟基托莫西汀(4-HAT)的浓度;研究15个黄酮类化合物对ATX在体外代谢的影响,为体内代谢研究提供一定的实验基础.方法:(1)采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×50 mm,1.7 μm)进行色谱分离,以0.1％甲酸-乙腈为流动相,流速0.4 mL· min-1采用电喷雾离子源,正离子模式进行检测,用于定量分析的离子对为m/z 256.3→44(ATX)、m/z 272.3→44(4-HAT),建立ATX及其活性代谢产物4-HAT的UPLC-MS/MS检测方法.(2)建立ATX大鼠肝微粒体(RLM)孵育体系.分别在孵育体系内加入二甲基亚砜(DMSO)和15个12.5 mmol· L-1黄酮类化合物溶液各1.6 μtL进行孵育,检测4-HAT的生成量并进行分析与比较.结果:ATX质量浓度在1～100 ng· mL-1范围内与峰面积的线性关系良好(r2=0.999 6),定量下限为0.2 ng·mL-1(S/N=10);4-HAT质量浓度在0.01～2.5 ng·mL-1范围内与峰面积的线性关系良好(r2=0.999 3),定量下限为0.01 ng· mL-1(S/N=10).15个黄酮类化合物中,杨梅素对ATX的体外代谢影响最显著,表现为抑制作用;与DMSO组相比,其抑制率为93.44％.结论:该方法可用于测定ATX及其活性代谢产物4-HAT的含量;体外实验表明杨梅素对ATX代谢影响最显著.本实验结果可以为体内代谢研究提供一定的实验基础.

摘要： 抗生素因具有抗菌谱广、杀菌性强等特点而被广泛应用于人类医药、畜牧业、农业和水产养殖业.其进入水生生物体内后,会在药物代谢酶的作用下发生代谢转化,产生生态毒性.采用鲫鱼肝微粒体体外孵育法,探究恩诺沙星细胞色素P450酶作用下的代谢转化过程,并通过代谢抑制实验确定关键的代谢酶.结果表明,恩诺沙星体外代谢过程符合一级动力学方程,当恩诺沙星暴露浓度为1 mg·L-1时,其在肝微粒体中的消除速率常数(k)最大为0.00303 min-1,半衰期(t1/2)最短为228.8 min,应用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)技术,检测到了恩诺沙星脱乙基产物和羟基化产物;代谢抑制实验结果表明,CYP3 A4在恩诺沙星代谢过程中起主要作用,是恩诺沙星代谢的关键酶.本研究结果为深入了解恩诺沙星在水生生物体内的代谢转化及其生态风险提供了基础数据.

摘要： 采用不同体积分数(0.3％、0.6％、1.5％、3.0％和4.5％)H2O2溶液对野皂荚半乳甘露聚糖(GMG)进行氧化降解预处理,得到的产物(GMG-0.3、GMG-0.6、GMG-1.5,GMG-3.0和GMG-4.5)用于模拟体外远端盲肠代谢实验,探究SD大鼠肠道菌群对GMG的体外代谢情况.结果表明:经过不同体积分数H2 O2预处理后,GMG相对分子质量差异明显,由未处理(GMG)的1039400降至4.5％H2O2处理(GMG-4.5)的32060;红外光谱分析发现H2O2预处理并没有改变GMG的结构.测定了代谢0、6、12、24和48 h时代谢产物的pH值、总糖消耗率、还原糖以及短链脂肪酸(SCFAs)和支链脂肪酸(BCFAs)浓度,综合评价了肠道微生物菌群在48 h内对半乳甘露聚糖的利用情况,结果发现:预处理GMG实验组代谢情况显著优于空白对照组和未经过预处理GMG实验组,GMG-0.6代谢情况最佳,代谢产生乙酸浓度较高为25.36 mmoL/L,总SCFAs浓度为45.05 mmol/L,总糖消耗率最大为(52.86±3.11)％,还原糖质量浓度先上升后下降至(0.002±0.003)g/L.研究结果表明氧化降解野皂荚半乳甘露聚糖可作为降低血糖、调控胰岛素分泌、改善肠道健康的一种功能性食品添加剂.

摘要： 目的:探讨姜黄素和吉马酮在大鼠肝微粒体(RLMs)中的体外生物转化及对姜黄素和吉马酮体外代谢产物研究的影响.方法:(1)采用苯巴比妥钠(80mg/kg)连续对雄性SD大鼠腹腔注射4d,大鼠禁食12h后第5天处死,冰浴上取肝,匀浆离心,得到大鼠肝微粒体.(2)采用超高效液相—液质联用技术(UPLC-MS/MS),使用Acquity UplcbehC18色谱柱(50 mm×2.1mm,id:1.7 μm),柱温箱为30°C,自动注射器温度为4°C.流动相由0.1％的甲酸水溶液(溶剂A)和乙腈(溶剂B)组成,梯度洗脱程序如下:0～2 min为95％溶剂A洗脱,2～22 min溶剂A从95％到0％,22.1～26 min采用95％溶剂A洗脱,流速设为0.3 mL/min,对姜黄素在大鼠肝微粒体中的代谢产物进行检测.结果:采用UPLC-MS/MS分析姜黄素和吉马酮在大鼠肝微粒体反应体系中的代谢产物,与空白灭活肝微粒体反应体系相比,未失活的肝微粒体代谢下姜黄素和吉马酮均增加5个新的色谱峰,通过质谱分析推测这5个峰分别是二氢姜黄素、四氢姜黄素、六氢姜黄素、单去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素.结论:姜黄素和吉马酮能在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸介导下与大鼠肝微粒体进行生物转化,为姜黄素和吉马酮体内生物转化、作用物质基础及二次开发利用提供可行性依据.

摘要： 黏着斑激酶(FAK)是一种与细胞的迁移、增殖和凋亡等行为密切相关的细胞质酪氨酸蛋白激酶,并促进肿瘤进展和转移.FAK抑制剂分子能够有效抑制FAK活性,对肿瘤细胞增殖和迁移有明显的抑制效果,被认为是新的抗癌途径而受到广泛关注.研究FAK抑制剂分子与FAK相互作用的详细信息，有助于深入阐述抑制剂分子的作用机制。确定体外代谢产物和代谢途径可预测FAK抑制剂体内的生物转化。

摘要： 亲脂性外源化合物,比如溴代阻燃剂(BFRs)进入生物体后,往往会被肝脏中的代谢酶催化生成亲水性的代谢产物,通过尿和胆汁排泄出体外,其中细胞色素P450酶系(CYP450)是BFRs的主要代谢酶系之一.本研究开展了部分典型BFRs的肝微粒体(鸡和猫)体外代谢实验.鸡的微粒体代谢实验结果可以为鸟类的BFRs代谢提供参考数据.猫不仅可以代表猫科动物,由于其生活环境和人类一致,也可以用来指示人的室内污染物暴露情况,通过猫肝微粒体代谢的实验结果可以初步了解猫对于多溴联苯醚PBDEs和HBCD的代谢能力和代谢产物模式,也为猫是否能作为室内污染的指示生物的研究提供有用信息.

摘要： 本文研究了猪肝微粒体对2,4,4'-三溴联苯醚(BDE-28 )的代谢及5种CYP450亚型酶系的抑制剂对BDE-28代谢的影响，对BDE-28代谢产物进行了初步鉴定。得出以下结论:猪肝微粒体均可以体外代谢BDE-15,BDE-28和BDE-47，在同一时间下，随着澳原子数目增加，微粒体对三种PBDEs的降解率下降;BDE-15,BDE-28和BDE47均可以通过轻基化代谢途径生成带一个OH的PBDEs，这说明在猪肝微粒体中，轻基化可能是低溴代PBDEs的主要转化途径;猪肝微粒体在降解BDE-15,BDE-28和BDE-47过程中，CYP1A、CYP3A亚型起主要作用，而CYP2C9、CYP2E1、CYP2D6作用不显著。

摘要： 研究表明中药中的化学成分只有经代谢后才具有生物活性.因此,近年来对中药代谢化学的研究方法逐步深入,为中药化学成分及其产生的生物活性有效成分的研究、中药新药的研究及中药质量的评价都提供了依据.本文综述了近些年来有关中药代谢化学的研究概况,介绍和评述了有关中药代谢研究方法,目前主要有两种中药代谢研究方法，体内代谢研究和体外代谢研究。体内代谢研究方法是指在动物或人给药后，经过一段时间后收集血、尿、粪、胆汁等生物样品，然后通过气相色谱、高效液相色谱、质谱等技术分析、分离样品中的中药原型及其代谢产物。体外代谢多以肝脏为基础，常见的方法有:肝微粒体体外温孵法、肝细胞体外温孵法、离体肝灌流法等。并以三七为例,对三七皂苷的体内代谢的进行研究，三七皂苷并不是完全以原药形式吸收入血的，而是通过酸碱水解、肠道菌群代谢或肝脏代谢变成水解物或代谢物，进而产生疗效。

摘要： 目的：研究雄性大鼠体内浙贝母提取物对克拉霉素的药物动力学及体外代谢影响.方法：建立快速测定大鼠血浆中克拉霉素的液相色谱-串联质谱法,在单剂量给*浙予贝母提取物后,比较克拉霉素在大鼠体内药物动力学过程及AUC、Cmax等主要参数变化;通过体外孵育探究浙贝母提取物对克拉霉素代谢影响.结果：与单剂量给予浙贝母提取物后相比较,克拉霉素药动学主要参数Cmax和AUCo-∞值均成下降趋势,但是没有显著性差异,t1/2明显延长(P＜0.05);代谢实验结果表明,贝母提取物在1～1000μg.ml-1范围内,当浓度为10μg.ml-1时,对克拉霉素代谢的剩余酶活力降至75％以下.结论：浙贝母提取物能影响克拉霉素的药物动力学,浙贝母提取物对克拉霉素的代谢有一定的竞争性抑制作用.

摘要： 毛发移植术发展至今从打孔法、微株移植法、显微移植法、毛囊单位移植法以及到单一毛囊移植法，毛囊分离技术要求越来越高，需时也越来越长，手术中需要注意将毛囊正确保存，这是术后毛囊健康存活至关重要的一点，在毛发移植手术中，一般要求将毛囊保存于低温的环境(1°C～4°C)以降低毛囊的体外代谢，延长其体外成活时间。在这长时间的手术过程中怎样为毛囊提供一个低温、无菌的保存环境是关键，我科使用3L无菌病理标本袋将非无菌的冰块保护起来，达到了既无菌又低温的要求。

摘要： 采用高效液相色谱法,以ODS(250mm×4.6mm×5μmn)色谱柱、乙腈-水(V/V=45/55)(加0.22g醋酸钠)为流动相,研究甲苯二异氰酸酯在小鼠胃中的代谢情况.结果表明,在1.2～5.2mol/L范围内,甲苯二异氰酸酯的峰面积与浓度线性关系良好(r=0.9998),甲苯二异氰酸酯在雄性小鼠胃中代谢生物半衰期为67.94min,而在雌性小鼠胃中代谢生物半衰期为108.62min。

摘要： 试验选用A、B和C三种不同公司的复合酶制剂利用离体消化技术和动物实验相结合，以体外消化率和还原糖生成量为标识，对以上三种复合酶制剂进行评定。进而验证离体消化法与动物实验的相关关系。离体消化实验以饲料作为底物，加入相应比例的复合酶制剂后，用乙酸缓冲液调节样品至胃内酸度后，以食糜在胃内停留的平均时间恒温消化。用NaOH调pH为中性，模拟肠内消化环境，恒温消化后，过滤、洗涤，分别收集滤渣、滤液和洗液。滤液和洗液用于测定还原糖。滤渣经干燥后，测定剩余干物质的量。测定结果表明，加入复合酶制剂A、B和C的情况下，还原糖分别增加了8.77％，32.54％和43.70%，消化率分别提高了6.4％，8.1％和9.8％。体外实验部分，选择56体重相近仔猪。分为对照组、试验I组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组，分别对应离体实验选用的A，B和C组复合酶制剂产品,每组设2个重复，每个重复组7头，公母各半。试验预饲期为7d，一天饲喂4次，自由饮水。停喂24h后称重，计算出试验猪的日采食量、日增重和料重比。结果表明，试验I组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组日增重比对照组分别提高7.65％，14.09％和15.50%。从饲料增重比上看，试验组比对照组也有较大程度的改善，试验I纽、试验Ⅱ组和试验IⅡ组较对照组分别降低8.26％、9.63%和9.17％。饲料消耗量和日采食量三个试验组比对照纽略有提高，但差异不显著。

摘要： 目的：研究雪菊黄酮在体外模拟消化道内的代谢情况.方法：从雪菊中分离获得总黄酮及其中主成分黄诺玛苷(1)、马里苷(2),分别在不同pH值的人工胃液和小肠液中37°C温育24h,不同时间点取样后进行HPLC检测,对未知代谢产物进行分离鉴定.结果：总黄酮中的黄诺玛苷在人工胃肠液中较稳定;马里苷在人工胃液中较稳定,在人工肠液中快速代谢并转化成黄诺玛苷和新代谢产物海生菊苷(3).结论：雪菊黄酮及其中的马里苷在人工小肠液中会发生代谢.

摘要： 目的：研究雪菊黄酮在体外模拟消化道内的代谢情况.方法：从雪菊中分离获得总黄酮及其中主成分黄诺玛苷(1)、马里苷(2),分别在不同pH值的人工胃液和小肠液中37°C温育24h,不同时间点取样后进行HPLC检测,对未知代谢产物进行分离鉴定.结果：总黄酮中的黄诺玛苷在人工胃肠液中较稳定;马里苷在人工胃液中较稳定,在人工肠液中快速代谢并转化成黄诺玛苷和新代谢产物海生菊苷(3).结论：雪菊黄酮及其中的马里苷在人工小肠液中会发生代谢.

摘要： 本发明提供了一种通过调控代谢促进体外胚胎发育的方法，涉及生物技术领域。经发明人研究发现，在体外胚胎培养过程中，加入L‑2‑羟基戊二酸会阻碍组蛋白甲基化的擦除和胚胎的发育，而胚胎中L‑2‑羟基戊二酸含量的降低会促进组蛋白甲基化的擦除和胚胎的发育，据此，本发明提供了一种调控哺乳动物体外胚胎发育的方法，包括通过降低胚胎中L‑2‑羟基戊二酸的含量促进胚胎发育，或者通过升高胚胎中L‑2‑羟基戊二酸的含量抑制胚胎发育。采用本发明提供的方法能够有效实现对体外胚胎发育的调控，为早期胚胎发育过程中的分子调控机制提供新的视野。

摘要： 本发明公开血清作为在体外肝微粒体代谢体系中溶解卤代有机污染物试剂的用途，还提供了一种体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的方法。本发明解决现有技术中有机溶剂抑制代谢酶活性的问题，使体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的反应能更加真实地模拟出肝微粒体在体内的代谢转化情况，更能真实地反映出卤代有机污染物在动物体内的代谢特征。

摘要： 本发明属医药技术领域，涉及一套体外动态的药物代谢孵育系统，该系统由具有药物代谢酶的孵育体系、恒温装置、蠕动泵、效应细胞体系和采样系统构成，并进行串联循环灌注；其中，孵育体系由具有温敏特性3D结构的水凝胶作为载体，包封具有代谢能力的微粒体、重组酶或肝细胞等，加上启动因子等反应物质；采样系统由具有半透膜的微透析系统构成，进行实时游离态的取样。本系统充分考虑了在动态环境下药物的扩散，在体系中的分布与转运，与代谢酶的结合与反应，最终对效应细胞影响的全过程。本发明适用于估算药物在机体内的药动学参数，清除率CL和抑制速率常数Ki，Kinact，KI等，真实地反映药物的药代动力学(PK)、药物相互作用(DDI)和药效学(PD)。

摘要： 本发明公开了一种研究药物的肠道菌群代谢的体外模型的构建和分析方法，包括以下步骤：S1、粪便收集；S2、加入匀浆液，浸泡、匀浆；S3、离心，取上清液，得到肠道菌群溶液；S4、将受试物溶液、溶解受试物的溶剂、奥美拉唑溶液分别加入一定量的步骤S3得到的肠道菌群溶液中制备获得受试物组、空白对照组和阳性对照组；S5、将受试物组、空白对照组和阳性对照组放入厌氧培养密封盒，再放入二氧化碳培养箱进行培养，培养温度为37°C；S6、到需要的培养时间点后，取出，并加入有机试剂停止厌氧培养；S7、所得样品进行LC‑MS/MS分析。本发明有效提高肠道菌群代谢研究结果的可操作性，从而有助于解决个体药物反应导致的不良。

摘要： 本发明公开了一种体外药物代谢实时检测方法，包括如下步骤：将未经前处理的含大黄素的代谢体系溶液稀释后作为检测溶液，以亲脂胶束‑纳米均孔膜修饰的ITO电极作为工作电极，铂电极和银/氯化银电极分别作为对电极和参比电极，采用电化学方法，将待测溶液搅拌富集后，实现对代谢体系中的大黄素的快速、灵敏检测。本发明使用的亲脂胶束‑纳米均孔膜修饰电极集选择性富集和电化学检测功能于一体，检测的灵敏度高，检测限低；同时工作电极制备简单，无需对样品进行复杂的前处理，通过二氧化硅纳米孔道的尺寸选择性，即可实现代谢体系中其他成分存在下对大黄素的快速筛分和定量检测。

摘要： 本发明属于细胞模型构建技术领域，公开了一种代谢相关脂肪性肝病体外细胞模型及其构建方法，以OA或PA或其混合物分别处理HepG2和LO2细胞，以CCK8检测细胞存活率；以油红O染色及甘油三酯酶法检测细胞脂质积累程度；以qRT‑PCR检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和Cleaved caspase‑3，纤维化相关蛋白α‑SMA和Col.I，自噬相关蛋白LC3‑II、P62/SQSTM1和Beclin‑1，以及炎症因子NLRP3和TNF‑α的表达水平。本发明利用饱和脂肪酸PA处理HepG2细胞可引起一定程度的脂质积累，诱导显著的细胞损伤及纤维化发生，是合适的MAFLD体外细胞模型。

摘要： 本发明公开血清作为在体外肝微粒体代谢体系中溶解卤代有机污染物试剂的用途，还提供了一种体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的方法。本发明解决现有技术中有机溶剂抑制代谢酶活性的问题，使体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的反应能更加真实地模拟出肝微粒体在体内的代谢转化情况，更能真实地反映出卤代有机污染物在动物体内的代谢特征。

摘要： 本发明属于小分子化合物的药理毒理分析技术领域，具体公开了一种单分子操纵检测体外药物代谢酶催化形成DNA加合物的方法，包括步骤：a)将双链DNA分子固定在固定表面和可移动表面之间；b)力学拉伸测量双链DNA分子的长度；c)施加包含小分子化合物和药物代谢酶组分的反应液，并进行反应；d)洗去小分子化合物和药物代谢酶组分；e)力学拉伸检测双链DNA的长度变化，从而基于长度的变化，判断该小分子化合物是否与DNA形成嵌入型加合物，或者判断该小分子化合物与DNA形成嵌入型加合物的数量和/或反应动力学。本发明用单分子力学操纵的方法可检测药物代谢酶催化小分子化合物和DNA形成嵌入型加合物的数量和反应动力学。

摘要： 本发明公开了冬眠动物多能干细胞分化为肝细胞的方法，该方法采用ActivinA和CHIR99021分别激活TGFβ和Wnt信号通路，将多能干细胞诱导分化成内胚层细胞,随后以肝细胞生长因子使其向肝样细胞分化，最后以含制瘤素M及地塞米松的培养液促进其成熟。该方法能够有效缩短多能干细胞分化成肝样细胞的时间，提高诱导分化效率，并能够实现冻存复苏，可持续传代，为研究冬眠模式动物冷适应‑复温、缺氧‑复氧等实验模型中的代谢调控机制提供了工具基础。本发明还提供一种利用上述肝细胞筛选为体外冷保存人体细胞提供保护的代谢产物的方法。

摘要： 本发明提供一种基于人源化肝细胞的体外共培养细胞组合，至少含有人源化的肝细胞系HepG2/C3A细胞和人源化肝非实质细胞和人源化其他器官细胞；所述的人源化肝非实质细胞是HUVEC脐静脉内皮细胞。本发明还提供基于所述体外共培养细胞组合的体外代谢活化系统，它是由所述的体外共培养细胞组合与共培养培养基组成的共培养模型。本发明还提供基于人源化肝细胞的体外共培养方法及所述共培养模型在化学物质毒理学安全评价中的应用。本发明的基于所述体外共培养细胞组合的体外代谢活化系统可以通过体外共同培养来更好地实现机体本来的细胞之间的关联，而且能更好地模拟在体微环境的代谢酶水平。