人血管内皮细胞

摘要： 目的利用体外人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)实验研究核转录因子-κB(NF-κB)参与感染诱导诱骗受体3(DcR3)表达升高的信号转导机制。方法针对购置的商品化HUVEC,分别采用低、中、高3种浓度的脂多糖(LPS)0.1、1.0、10.0μg/mL、脂磷壁酸(LTA)5、50、500 ng/mL和酵母聚糖(zymosan)10、100、1000μg/mL刺激HUVEC,设置4个处理组:LPS组、LTA组、zymosan组和正常对照组(未经过LPS、LTA和zymosan刺激的HUVEC)。流式细胞术检测细胞表面Toll样受体2(TLR2)和TLR4的表达,采用特异性抑制剂阻断NF-κB和MAPK信号通路后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中DcR3的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测细胞内DcR3 mRNA表达水平,Western-blot法检测细胞内DcR3蛋白的表达。结果流式细胞术检测HUVEC细胞表面TLR2和TLR4的表达分别为(82.23%±2.15%)和(77.87%±1.06%)。以低、中、高3个浓度刺激HUVEC细胞后,与对照组相比,低浓度组上清液中DcR3水平无明显升高;中、高浓度组DcR3水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);高浓度组DcR3水平比中浓度组明显增高,差异有统计意义(均P<0.05);随着时间延长,高浓度刺激后的HUVEC细胞上清液中DcR3的表达与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、高浓度LPS组、高浓度LTA组以及高浓度zymosan组细胞内DcR3 mRNA的相对表达水平分别为(1.00±0.05)、(2.28±0.26)、(1.98±0.30)、(2.10±0.16)。3种刺激物组的DcR3 mRNA和DcR3蛋白表达明显升高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。刺激12 h后,细胞内DcR3 mRNA的表达即明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。加入NF-κB抑制剂PDTC后,细胞上清液以及细胞内DcR3表达较未加抑制剂组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),而加入P38 MAPK抑制剂U0126和PD9859后,细胞上清液及细胞内DcR3的表达无明显影响。结论LPS、LTA以及zymosan通过激活NF-κB信号通路诱导HUVEC表达DcR3。

摘要： 目的证明白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)在人血管内皮细胞(human vascular endothelial cells,HECV)的受体表达,评估IL-24对人血管内皮细胞迁移及生长的影响。方法通过细胞功能试验,检测重组人白细胞介素24(recombinant human interleukin 24,rhIL-24)对人血管内皮细胞的生长、迁移、跨内皮阻力的影响。结果IL-24和受体分子被发现在人血管内皮细胞中有表达。用rhIL-24对这一细胞株进行处理,发现能促进细胞迁移率但不影响细胞生长或测试浓度的渗透性。结论rhIL-24能促进人血管内皮细胞的迁移,但不影响细胞生长或测试浓度的渗透性。本研究证实这些影响与IL-24和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)或者阻断磷脂酶Cγ(blocking phospholipase C,PLCγ)相关通道之间的潜在联系有关。

摘要： 目的:检测冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清外泌体中微小核糖核酸-141-3p(miR-141-3p)的表达变化,并分析miR-141-3p对人血管内皮细胞损伤的影响.方法:收集冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清(n=8)和健康人对照(n=8),用外泌体提取试剂盒提取血清外泌体RNA,使用qRT-PCR的方法检测血清外泌体中miR-141-3p的表达变化;将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)转染NC mimic或miR-141-3p mimic后使用ox-LDL诱导损伤,MTT法检测细胞活性,检测Annexin-V/PI染色结果评价细胞凋亡情况;生物信息学分析预测并验证miR-141-3p作用的靶基因.结果:与健康人的对照血清外泌体相比,冠状动脉粥样硬化患者的血清外泌体中miR-141-3p的表达显著增加(P＜0.01).在HUVECs中过表达miR-141-3p可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡,维持细胞活性(P＜0.05);靶基因预测结果显示与细胞凋亡和增殖相关的基因PTEN可能是miR-141-3p的靶基因,进一步验证结果显示miR-141-3p过表达导致PTEN表达的下调(P＜0.05).结论:冠心病患者血清外泌体中miR-141-3p的表达上调,miR-141-3p可通过下调靶基因PTEN发挥抑制血管内皮细胞凋亡的保护性作用.miR-141-3p可能成为抗动脉粥样硬化治疗的新靶点.

摘要： 目的 探讨缺氧环境下维替泊芬抑制Yes-相关蛋白1(Yes-associated protein1,YAP1)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡、迁移、侵袭能力和血管生成能力的影响,以及影响子痫前期胎盘血管形成的可能机制.方法 MTT法检测缺氧环境下不同质量浓度(0、4、8、12、16μg/mL)维替泊芬处理HUVEC 12、24 h时的细胞活性并计算IC50值,以选择后续实验药物浓度.流式细胞术分析缺氧环境下维替泊芬对HUVEC凋亡的影响;细胞划痕实验和Transwell小室实验检测缺氧环境下维替泊芬对HUVEC迁移、侵袭能力的影响;小管形成实验检测缺氧环境下维替泊芬对HUVEC血管生成能力的影响.Western blotting检测常氧及缺氧环境下维替泊芬对Hippo信号通路中YAP1、TEA转录因子1(TEAD1)蛋白表达的影响.结果 缺氧环境下,维替泊芬处理HUVEC 12、24 h的IC50值分别为13.26、16.74μg/mL;使用维替泊芬可抑制HUVEC增殖(P<0.01).流式细胞术结果显示,与对照组相比,在缺氧环境下维替泊芬能诱导HUVEC凋亡(P<0.01).细胞划痕、Transwell小室及小管形成实验结果显示,与对照组相比,在缺氧环境下使用维替泊芬抑制YAP1表达能够抑制HUVEC迁移、侵袭及血管形成能力(P<0.05).Western blotting结果显示,在常氧环境下及缺氧环境下,维替泊芬处理HUVEC 24 h后YAP1及TEAD1蛋白表达均降低(P<0.01).结论 在缺氧环境下,维替泊芬通过抑制YAP1及TEAD1的蛋白表达而抑制HUVEC细胞增殖、促进细胞凋亡,并降低其迁移、侵袭能力和血管生成能力.证实Hippo-YAP1信号通路可能通过调控血管内皮细胞增殖和侵袭、影响子痫前期胎盘血管形成,参与子痫前期的发生.

摘要： 目的:分析丹参多酚酸盐对人血管内皮细胞迁移的临床影响.方法:运用单核细胞-内皮细胞联合培养,详细观察丹参多酚酸盐对单核细胞诱导的内皮细胞迁移的影响.依次运用酶联免疫吸附测定法,以及逆转录聚合酶链反应法检测丹参多酚酸盐干预后单核细胞分泌血管内皮细胞生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子水平和mRNA的变化.结果:迁移实验结果可看出,经丹参多酚酸盐处理后内皮细胞的迁移数不断递增,具有显著不同.经丹参多酚酸盐处理后,单核细胞VEGF mRNA以及bFGF mRNA多有所提升,VEGF和以及bFGF蛋白水平也出现提高,组间数据对比具有明显的差异,具备统计学意义(P<0.05).结论:丹参多酚酸盐促进单核细胞诱导的内皮细胞迁移,其主要目的 在于推动单核细胞合成以及分泌VEGF和bFGF,其可能属药物促内皮细胞迁移的作用机制.

摘要： 目的 探讨红花注射液对野百合碱(MCT)损伤的血管内皮细胞一氧化氮(NO)产生、内皮型NO合成酶(eNOS)及结缔组织生长因子(CTGF)表达及活性的影响.方法 人血管内皮细胞(HUVECs)分为空白对照组、MCT组、红花注射液组.以CCK-8法检测红花注射液对HUVECs增殖的抑制作用,硝酸还原酶法检测NO含量,荧光定量PCR和Western blot法检测eNOS和CTGF的mRNA和蛋白表达情况.结果 红花注射液有效抑制HUVECs增殖,呈浓度依赖性.与空白对照组相比,MCT组eNOS表达降低,NO生成降低(均P<0.05),而CTGF表达增加(P<0.05);与MCT组比较,红花注射液组eNOS活性及NO的生成均增加(均P<0.05),而CTGF表达降低(P<0.05).结论 红花注射液可促进MCT损伤的血管内皮细胞eNOS活性增加及NO产生,抑制CTGF的表达和分泌.

摘要： 目的 探讨磷酸二酯酶4D交互蛋白(PDE4DIP)基因对布加综合征(BCS)隔膜形成的影响.方法 通过小干扰RNA特异性沉默人血管内皮细胞(HUVECs)中的PDE4DIP基因,应用CCK8实验、划痕实验及血管形成实验分别检测转染后各组的增殖、迁移及血管形成能力,分析其改变情况.结果 沉默该基因后,其mRNA及蛋白水平表达均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);各组细胞增殖的差异无统计学意义(P=0.51),迁移能力(P =0.003)及血管形成能力(P=0.001)明显降低.结论 在HUVECs细胞中,PDE4DIP基因沉默具有抑制HU-VECs细胞迁移及血管形成能力的作用,可能与BCS隔膜形成有关.

摘要： 目的:研究登革2型病毒NGC株(DEN2)感染人血管内皮细胞(HUVEC)后对HUVEC自噬的影响.方法:采用免疫组织化学法检测Ⅷ因子表达,鉴定HUVEC,50％组织细胞感染量(TCID50)测定DEN2 NGC株对白纹伊蚊C6/36细胞的毒力,实时荧光定量PCR检测感染DEN2的HUVEC中病毒mRNA表达水平的变化,Western-blot检测DEN2感染对HUVEC自噬标记性蛋白LC3B表达的影响,激光共聚焦显微镜观察DEN2感染HUVEC自噬现象.结果:免疫组织化学法结果显示,细胞表达Ⅷ因子,符合HUVEC特点;接种DEN2后5～7dC6/36细胞出现肿胀、融合、产生空泡等典型的细胞病变,TCID50为10-5.6;随着感染DEN2量增加,HUVEC中DEN2 mRNA相对表达量呈上升趋势,在加入1×104TCID50病毒量时DEN2 mRNA相对表达量最高(P＜0.05);用巴伐洛霉素A1 (Baf)抑制后,与未用Baf相比,相同TCID50 DEN2感染HUVEV后DEN2 mRNA表达减少(P＜0.05).Western-blot结果显示,与空白对照组比较,1×102、1×103、1×104TCID50 DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值升高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度值增加(P＜0.05);用Baf抑制后,与未用Baf相比,1×102、1 ×103、1×104TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值上高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度增加(P＜0.05).激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示,在正常HUVEC胞浆内有LC3B(绿色荧光)及LAMP1(红色荧光),荧光融合后绿色、红色荧光重叠;用Baf抑制后,HUVEC胞浆内绿色红色荧光强度增加,荧光融合后绿色、红色荧光重叠部分减少;与正常HUVEC相比,1×104TCID50 DEN2感染组HUVEC胞浆内可观察到绿色、红色及橘黄色荧光(DEN2 NS1),绿色、红色荧光强度增加,在荧光融合后绿色、红色与橘黄色荧光重叠.结论:HUVEC在DEN2感染后24 h,随着感染量增加,病毒载量增加,加Baf抑制后DEN2增殖被抑制;DEN2感染HUVEC后,在胞浆内DEN2 NS1与LC3B、溶酶体标记蛋白LAMP1共定位;DEN2可诱导HUVEC白噬增强,Baf可抑制DEN2感染HUVEC白噬的发生.

摘要： 目的:研究人血管内皮细胞与丝素材料粘附初期细胞微管骨架和整合素β3的变化,以认识材料内皮细胞化的过程中内皮细胞与丝素材料之间的粘附机理。rn 方法:以未铺丝素膜的聚苯乙烯板为对照,采用细胞间接免疫荧光的方法观察在材料上生长不同时间的细胞微管形态变化,并采用流式细胞术检测不同时间点细胞表面整合素β3的量变。rn 结果:微管骨架系统会随着生长时间的推移而逐渐在其所粘附的材料表面进行铺展,而整合素β3在粘附初始阶段和完全粘附阶段的表达量大致持平,而在粘附加深阶段,整合素β3大量表达。

摘要： 本研究选取细胞与材料在粘附初期24h内的4个时间点，采用间接免疫荧光技术对细胞的微管骨架形态进行观察，并依据观察结果，选取代表性的三个时间点，通过流式细胞术对介导细胞与材料粘附的细胞表面受体整合素β3的变化进行了定量。结果显示在细胞与材料发生粘附的早期，细胞的微管骨架系统会随生长时间的推移而逐渐在材料表面进行铺展，且由微观组织中心向四周呈辐射状分布。在微管结构铺展过程中，通过不断的解聚和重构，逐渐形成了24时丝状结构明显且极为伸展的微管骨架形态。

摘要： 本文提出了一种控温微波水相合成CdTe量子点的新方法,其表面包被MPA(3-mercaptopropionicacid).该法所用的条件温和,设备简单,成本低廉;制得的量子点水溶性和稳定性好,量子产率高达40％.由于CdTe量子点表面被MPA包覆,易与生物大分子连接.UEA-1(Ulexeuropeausagglutinin-1,荆豆凝集素)是一种糖蛋白,可特异性与人血管内皮细胞膜表面的α-L-fucoSe(α-L-岩藻糖)结合.本文将UEA-1与量子点连接,作为荧光探针,成功用于活细胞成像.

摘要： 本发明提供了CD34阴性祖细胞，用于保护处在血管炎症疾病风险或患有血管炎症疾病的受试者的血管内皮细胞避免免疫介导的细胞毒性反应。也提供了人CD34阴性祖细胞的制造方法，和测定CD34阴性祖细胞保护血管内皮细胞避免免疫介导的细胞毒性反应的能力的方法。

摘要： 本发明属于基因工程领域，涉及一种人重组血管内皮细胞生成抑制因子的制备方法及其制品在抗肿瘤血管生成治疗中的应用，它是通过PCR方法从人胎儿肾脏细胞cDNA文库中筛选得到的基因片段，通过基因克隆方法在酵母菌中发酵、表达、及纯化过程得到纯品，其具有高效表达、可溶性、无需复性、修饰及糖基化的特性，能抑制肿瘤血管内皮细胞增殖，对多种肿瘤具有治疗作用。

摘要： 一种人实体肿瘤血管内皮细胞增殖抑制因子的基因克隆方法及在抗肿瘤血管再生治疗中的应用，其特征在于：a.人endostatin基因是从人胶原蛋白十八基因1503至2055cDNA活性片段通过PCR从人肝脏cDNA库中筛选得到；b.人endostatin基因通过内切酶酶切所得到的两种基因片段；c.人endostatin基因及其b项所述2个基因片段通过基因克隆方法在大肠杆菌中表达，具有抑制血管内皮细胞增殖和抗肿瘤血管再生活性而作为生物制品用于治疗实体肿瘤。

摘要： 本发明提供了永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子在制备修复组织皮肤全层缺损生物制剂和制备治疗缺血缺氧性组织损伤生物制剂中的应用，所述的复合细胞因子为低氧培养永生化人肺微血管内皮细胞所分泌的细胞因子，所述的复合细胞因子不含有遗传物质（DNA或RNA）。用低氧培养的永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子局部应用，促进局部血管的形成，具有明显的效果。并且对于皮肤组织缺损等损伤疾病具有明显的组织再生作用。复合细胞因子具有多种促进血管生成的有效成分，能够促进血管再生，并对损伤组织进行修复，促进损伤组织的生长愈合，调节免疫反应等等。

摘要： 本发明提供一种原代脊髓微血管内皮细胞的分离培养方法及由其得到的脊髓微血管内皮细胞，所述方法包括如下步骤：（1）将脊髓组织与平衡盐溶液混合，进行研磨，离心，收集沉淀；（2）将步骤（1）得到的沉淀与富集试剂混合，离心，弃上清，得富集的脊髓微血管片段；（3）将得到的脊髓微血管片段与酶混合，消化，得脊髓微血管内皮细胞；（4）将脊髓微血管内皮细胞与增殖培养基混合，接种于蛋白质和/或多肽包被的细胞培养板上，进行一次培养，后换用选择培养基进行二次培养，即得。所述方法稳定性高、可重复性好、简便快速、成本低、得到的脊髓微血管内皮细胞纯度高且产量高，具有重要的应用价值。

摘要： 本说明书提供：一种分离血管内皮细胞的纯培养物的方法，该方法能够在从由人多能干细胞分化的内皮细胞谱系的细胞系中分离在特定时间粘附在基质上的同质内皮细胞；一种维持血管内皮细胞特性的培养基，其包括通过该方法分离的高纯度血管内皮细胞，4ng/ml至6ng/ml的FGF2、5ng/ml至10ng/ml的EGF、10ng/ml至30ng/ml的VEGF‑A、20ng/ml至50ng/ml的抗坏血酸和DMEM/F‑12作为活性成分；以及包括它们的培养方法。

摘要： 本发明提供了CD34阴性祖细胞，用于保护处在血管炎症疾病风险或患有血管炎症疾病的受试者的血管内皮细胞避免免疫介导的细胞毒性反应。也提供了人CD34阴性祖细胞的制造方法，和测定CD34阴性祖细胞保护血管内皮细胞避免免疫介导的细胞毒性反应的能力的方法。

摘要： 本发明属于基因工程领域,涉及一种人重组血管内皮细胞生成抑制因子的制备方法及其制品在抗肿瘤血管生成治疗中的应用,它是通过PCR方法从人胎儿肾脏细胞cDNA文库中筛选得到的基因片段,通过基因克隆方法在酵母菌中发酵、表达、及纯化过程得到纯品,其具有高效表达、可溶性、无需复性、修饰及糖基化的特性,能抑制肿瘤血管内皮细胞增殖,对多种肿瘤具有治疗作用。

摘要： 一种人实体肿瘤血管内皮细胞增殖抑制因子的基因克隆方法及在抗肿瘤血管再生治疗中的应用,其特征在于:a.人endostatin基因是从人胶原蛋白十八基因1503至2055cDNA活性片段通过PCR从人肝脏cDNA库中筛选得到;b.人endostatin基因通过内切酶酶切所得到的两种基因片段;c.人endostatin基因及其b项所述2个基因片段通过基因克隆方法在大肠杆菌中表达,具有抑制血管内皮细胞增殖和抗肿瘤血管再生活性而作为生物制品用于治疗实体肿瘤。

摘要： 本发明提供了永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子在制备修复组织皮肤全层缺损生物制剂和制备治疗缺血缺氧性组织损伤生物制剂中的应用，所述的复合细胞因子为低氧培养永生化人肺微血管内皮细胞所分泌的细胞因子，所述的复合细胞因子不含有遗传物质（DNA或RNA）。用低氧培养的永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子局部应用，促进局部血管的形成，具有明显的效果。并且对于皮肤组织缺损等损伤疾病具有明显的组织再生作用。复合细胞因子具有多种促进血管生成的有效成分，能够促进血管再生，并对损伤组织进行修复，促进损伤组织的生长愈合，调节免疫反应等等。