贝类派琴虫LUX荧光PCR检测方法的建立

摘要

为了满足贝类派琴虫病的快速检测需要，本研究选择派琴虫保守的核糖体DNA ITS-2区域设计引物，通过对反应体系和反应条件的优化，首次建立了LUX荧光PCR检测派琴虫的方法。试验表明，所建立方法检测质粒模板DNA的动态范围为1.0×101～1.0×108，敏感性为10拷贝质粒DNA。采用模拟阳性样品试验，可检测到100拷贝质柱DNA.rn 而且与贝类的包拉米原虫、隐孢子虫等其它寄生性原虫无交叉反应，也不受组织DNA的干扰.50份采集样品的检测结果与RFTM培养方法一致。本研究所构建的派琴虫LUX荧光PCR检测方法具有快速、灵敏，特异等优点，可满足国内养殖场及进出口水生动物携带派琴虫的检测需要。