脱噬作用

摘要： 目的 观察环状RNATADA2A在结直肠癌组织中的表达及其对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测58对结直肠癌组织及癌旁组织中circTADA2A的相对表达量,分析其与患者临床病理特征间的关系.构建circTADA2A过表达质粒及对照质粒并分别转染结直肠癌细胞株(人结直肠癌细胞LoVo、HCT116).采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验及流式细胞术检测过表达circTADA2A对LoVo和HCT116细胞增殖能力、凋亡水平的影响.体内实验:将12只裸鼠采用随机数字表法分为2组,分别皮下注射转染circTADA2A(过表达组)及空载质粒(对照组)的结直肠癌细胞株HCT116,比较两组皮下瘤体积和质量.定性资料采用x2检验或Fisher's精确检验.定量资料采用t检验或非参数检验.结果 circTADA2A在结直肠癌组织中的相对表达量(1.12±0.45)显著低于癌旁组织(0.48±0.22,t=9.620,P＜0.01),且其表达量与与肿瘤T分期(x2=6.855,P＜0.05)、淋巴结转移(x2=10.952,P＜0.05)、TNM分期(x2=6.023,P＜0.05)、肿瘤分化程度(x2=5.376,P＜0.05)显著相关,差异均有统计学意义.CCK-8实验结果表明,过表达组LoVo和HCT116细胞48,72 h时增殖能力均显著低于对照组,48 h过表达组[LoVo为,(0.34±0.02);HCT116为,(0.31±0.03)比对照组LoVo为,(0.64±0.03);HCT116为,(0.53±0.04),tLovo=11.190,tHCT116=7.510,P 值均＜0.01];72 h 过表达组[LoVo为,(0.71±0.02);HCT116为,(0.60±0.15)比对照组LoVo为,(0.92±0.03);HCT116为,(0.79±0.02),tLovo=10.060,tHCT116=12.050,P值均＜0.01].流式细胞结果显示,过表达组细胞凋亡率[LoVo为,(23.93±1.51)％;HCT116为,(20.97±2.36)％]均显著高于对照组[LoVo为,(7.60±0.57)％;HCT116为,(6.83±2.36)％,tLoVo=-17.420,tHCr116=-10.210,P值均＜0.01],差异均有统计学意义.体内实验结果显示,过表达组皮下肿瘤[体积(500.1±71.0)mm3、质量(488.1±77.6)mg]均显著小于对照组[(940.8±51.6)mm3、(871.0±73.3)mg,t体积=12.280,t质量=8.780,P值均＜0.01],差异均有统计学意义.结论 circTADA2A在结直肠癌中发挥抑癌作用,通过促进细胞的凋亡水平进而抑制肿瘤细胞的增殖能力.

摘要： 目的 探讨臭椿酮对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 根据检测结果实施分组,采用低(0.2 μmolL)、中(0.4 μmol/L)、高剂量(0.6 μmol/L)的臭椿酮干预结直肠癌SW1116细胞24 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,集落形成实验检测克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ENST0000441270和微小RNA-149(miR-149)的表达水平.转染ENST00000441270小干扰RNA(si-ENST00000441270)至SW1116细胞,采用上述方法检测干扰ENST00000441270表达对SW1116细胞活力、克隆形成以及凋亡的影响.双荧光素酶报告基因实验验证ENST00000441270与miR-149之间靶向关系.两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验.结果 臭椿酮低剂量组SW1116细胞的活力[(0.84±0.05)比(0.84±0.05),t=0.529,P＞0.05]、克隆形成数[(110.00±3.56)个比(111.33±3.86)个,t=0.499,P＞0.05]、凋亡率[(7.56±0.80)％比(7.35±0.63)％,t=0.307,P＞0.05]、ENST00000441270[(0.98±0.06)比(0.99±0.06),t=0.238,P＞0.05]和 miR-149[(1.01±0.07)比(0.99±0.07),t=0.303,P＞0.05]表达与对照组比较,差异均无统计学意义.臭椿酮中、高剂量组SW1116细胞的活力(0.63±0.04,0.40±0.03比0.84±0.05,t=7.667、12.667,P＜0.05]、克隆形成数[(85.67±2.87)个、(58.33±2.62)个比(111.33±3.86)个,t=9.487、24.666,P＜0.05]、ENST00000441270表达[(0.69±0.05)、(0.41±0.03)比(0.99±0.06),t=7.138、13.799,P＜0.05]低于对照组,差异均有统计学意义,细胞凋亡率[(12.61±0.91)％、(21.66±0.97)％比(7.35±0.63)％,t=7.715、12.036,P＜0.05]、miR-149表达[(1.48±0.08)、(1.92±0.10)比(0.99±0.07),t=7.415、14.074,P＜0.05]高于对照组,差异均有统计学意义.si-ENST00000441270组SW1116细胞活力[(0.35±0.02)比(0.88±0.05),t=17.047,P＜0.05]、克隆形成数[(49.67±2.87)个比(112.67±3.40)个,t=24.525,P＜0.05]低于阴性对照(si-NC)组,细胞凋亡率[(22.62±0.82)％比(7.58±0.65)％,t=24.896,P＜0.05]高于si-NC 组,差异均有统计学意义.miR-149是ENST00000441270的靶基因.结论 0.4、0.6 μmol/L的臭椿酮能够抑制结直肠癌细胞SW1116增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制ENST00000441270/miR-149分子轴有关.

摘要： 目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-205-5p靶向调节轴抑制蛋白2(AXIN2)基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制.方法 收集2017年1月至2019年1月山西省人民医院手术切除结肠癌组织组织标本并购买结肠癌细胞系,分别以距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织和人正常结肠黏膜上皮细胞系为对照.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测分别检测组织和细胞中miR-205-5p和AXIN2表达水平.荧光素酶报告实验验证miR-205-5p与AXIN2的靶向关系.细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测各组转染细胞增殖和凋亡变化,两组和多组间比较分别采用t检验和单因素方差分析.结果 结肠癌组织及细胞系中miR-205-5p 低表达(2.16±0.24比1.00±0.04,t=10.660,P＜0.01),AXIN2高表达(mRNA,0.21±0.02比 1.00±0.04,t=30.600,P＜0.01;蛋白,0.64±0.03比 1.44±0.06,t=26.670,P＜0.05),差异均有统计学意义.AXIN2是miR-205-5p的靶基因.mimic组AXIN2蛋白表达量显著低于Blank 组和NC 组,差异有统计学意义(0.33±0.03,t=116.490,P＜0.05);miR-205-5p 抑制剂(inhibitor)组AXIN2蛋白表达量显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义(1.67±0.11,t=11.270,P＜0.05)o miR-205-5p mimic 组(增殖,48 h 0.82±0.09,t=5.375,P＜0.05;72 h 1.46±0.13,t=3.333,P＜0.05;凋亡,28.71±2.27,t=12.350,P＜0.05)和AXIN2沉默表达(siRNA-AXIN2)组(增殖,48 h 1.11±0.11,t=2.814,P＜0.05;72 h 1.68±0.06,t=4.959,P＜0.05;凋亡,4.45±0.64,t=5.090,P＜0.05)结肠癌细胞增殖率显著低于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义;而miR-205-5p inhibitor组(增殖,48 h 2.11±0.18,t=4.386,P＜0.05;72 h 2.66±0.19,t=4.898,P＜0.05;凋亡,4.71±0.26,t=5.155,P＜0.05)和AXIN2过表达(OE-AXIN2)组(增殖,48 h 0.44±0.05,t=0.002,P＜0.05;72 h 0.88±0.11,t=7.446,P＜0.05;凋亡,25.65±2.12,t=10.900,P＜0.05)结肠癌细胞增殖率显著高于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著低于Blank组和NC组,差异有统计学意义.结论 miR-205-5p在结肠癌中异常升表达,AXIN2呈低表达.miR-205-5p抑制表达靶向上调AXIN2表达可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡.

摘要： 目的 探讨川乌提取物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及其机制.方法 分别用2.5 g/L(AR 2.5g/L组)、5.0 g/L(AR 5.0 g/L组)和7.5g/L(AR 7.5 g/L组)川乌提取物处理HUVECs(购自中国科学院上海细胞库),对照组(Con)未行川乌提取物处理.将微小RNA(miRNA,miR)-NC(miR-NC组)、miR-589(miR-589组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)和anti-miR-589(anti-miR-589组)分别转染至HUVECs中;将anti-miR-NC、anti-miR-589、pcDNA3.1、pcDNA3.1-蛋白激酶B1(Akt1)转染至HUVECs细胞后用5.0 g/L的川乌提取物处理,分别标记为AR5.0 g/L+ anti-miR-NC组、AR 5.0 g/L+ anti-miR-589组、AR 5.0 g/L+ pcDNA3.1组和AR 5.0 g/L+pcDNA3.1-Akt1组.噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-589的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-589和Akt1的靶向关系.两组间比较采用t检验.多组间比较采用SNK-q检验.结果 不同浓度川乌提取物组HUVECs细胞增殖活性、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和miR-589表达均显著低于Con组(F=107.822、86.321、136.234,P＜0.05),凋亡率、p21和bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达显著高于Con组(F=95.875、124.365、107.541,P＜0.05).miR-589组HUVECs增殖活性、Cyclin D1和bcl-2蛋白表达显著高于miR-NC组(t=15.358、31.109、8.971,P＜0.05),凋亡率、p21和bax蛋白表达显著低于miR-NC组(t=23.124、21.175、11.364,P＜0.05),抑制miR-589表达可逆转川乌提取物对HUVECs增殖和凋亡的作用.miR-589可靶向调控Akt1的表达.结论 川乌提取物可抑制HUVECs增殖并促进细胞凋亡,可能与调控miR-589/Akt1有关.

摘要： 目的 观察槲皮素对急性脑梗死(ACI)大鼠神经功能和氧化应激水平的影响.方法 2018年9月到12月,100只SD雄性大鼠(购自北京大学医学部实验动物科学部)采用数字随机法分为假手术组、模型组、槲皮素低剂量组、槲皮素中剂量组、槲皮素高剂量组.槲皮素低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠分别给予25、50、100 mg/kg槲皮素灌胃,假手术组和模型组大鼠给予等体积的生理盐水灌胃,每天1次.12d后制备ACI大鼠模型.采用Longa法对大鼠神经功能进行评分;采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法比较大鼠脑梗死面积;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测大鼠脑组织细胞凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠脑组织氧化应激水平.计量资料比较采用单因素方差分析.结果 与假手术组[(0.13±0.01)分]比较,模型组大鼠神经功能评分[(4.71±0.33)分]明显上升(t=8.544,P＜0.05),差异有统计学意义;与模型组比较,槲皮素低剂量组[(3.97±0.30)分]、中剂量组[(2.96±0.24)分]及高剂量组[(2.04±0.15)分]大鼠神经功能评分逐渐下降(t=3.758、5.164、6.629,P＜0.05),差异有统计学意义.TTC结果显示,与假手术组(0％)比较,模型组[(33.28±3.08)％]大鼠脑梗死面积增加(t=7.813,P＜0.05),差异有统计学意义;与模型组比较,槲皮素低剂量组[(27.66±2.26)％]、中剂量组[(20.51±2.04)％]、高剂量组[(13.26±1.10)％]大鼠脑梗死面积呈剂量依赖性下降(t=2.255、3.717、4.984,P＜0.05),差异有统计学意义.TUNEL染色显示,与假手术组[(34.66±3.71)个]比较,模型组[(126.79±10.84)个]大鼠脑组织细胞凋亡数目上升(t=6.477,P＜0.05);与模型组比较,槲皮素低剂量组[(103.08±8.81)个]、中剂量组[(80.35±7.21)个]、高剂量组[(59.67±5.40)个]大鼠脑组织细胞凋亡数目呈剂量依赖性降低(t=2.080、3.604、5.416,P＜0.05),差异有统计学意义.假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠脑组织ROS、MDA和SOD水平分别为(61.21±5.35)、(180.44±16.18)、(155.88±11.74)、(130.27±10.68)、(97.79±8.84) U/ml;(2.35±0.18)、(9.34±0.67)、(7.15±0.51)、(5.69±0.49)、(4.18 ±0.29) μmol/L;(68.80±4.77)、(13.93±1.08)、(21.79±1.40)、(35.16±2.75)、(50.04±3.68) U/ml.与假手术组比较,模型组大鼠脑组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平下降;与模型组大鼠比较,槲皮素低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠脑组织ROS和MDA水平下降,SOD水平增加,且均呈明显的剂量依赖效应(t =4.525、6.736、7.840,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 槲皮素可通过抑制细胞凋亡和氧化应激水平,改善ACI大鼠受损神经功能.

摘要： 目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) LINC01234对前列腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其分子机制.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测收集2017年5月至2018年7月郑州大学第一附属医院收治的20例前列腺癌患者的前列腺癌组织及癌旁组织中LINC01234、微小RNA(miRNA,miR)-940的表达水平.分别将LINC01234小干扰RNA(si-LINC01234)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、微小RNA-940模拟物(miR-940 mimics)、阴性对照基因(miR-NC)、si-LINC01234+阴性对照(anti-miR-NC)、si-LINC01234+微小RNA 940特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-940)转染至DU145细胞.分别记作si-NC、si-LINC01234、miR-NC、miR-940、si-LINC01234+ anti-miR-NC、si-LINC01234+ anti-miR-940组.噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell法检测各组细胞的迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证LINC01234与miR-940的靶向关系.两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 LINC01234在前列腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(1.00±0.08比2.61±0.25,t=27.430,P＜0.05),miR-940在前列腺癌组织中的表达水平低于癌旁组织(1.00±0.09比0.56±0.05,t=19.112,P＜0.05),差异有统计学意义;转染si-LINC01234、miR-940 mimics后细胞活力显著降低(1.29±0.11比0.71±0.06;1.24±0.09比0.79±0.07,t=13.886,P＜0.05),迁移细胞数[(84.36±8.12)个比(39.41±4.22)个;(86.25±8.14)个比(44.37±4.48)个]与侵袭细胞数[(67.25±6.74)个比(28.44±3.58)个;(69.48±6.25)个比(33.47±4.18)个]显著减少(t=14.735、15.309,P＜0.05),细胞凋亡率[(6.58±0.61)％比(20.36±2.14)％;(7.11±0.71)％比(18.26±1.36)％]显著升高(t=18.577,P＜0.05),差异均有统计学意义;双荧光素酶报告实验证实miR-940过表达可抑制野生型(WT)-LINC01234细胞的荧光活性,LINC01234可负向调控miR-940的表达(t=328.298,P＜0.05),差异有统计学意义;干扰miR-940表达可逆转抑制LINC01234表达对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其对凋亡的促进作用.结论 lncRNA LINC01234可能通过靶向miR-940促进前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡.

摘要： 目的 观察转录因子特异性蛋白1 (SP1)对三阴乳腺癌细胞株HCC1806增殖凋亡以及β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响.方法 人正常乳腺上皮细胞株MCF10A和三阴乳腺癌细胞株HCC1806购自中国科学院上海细胞所,通过定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Westernblot分析MCF10A和HCC 1806细胞中SP1的表达水平,采用Lipofectamine 2000瞬转技术对HCC 1806细胞转染SP1小干扰RNA (siRNA)(实验组)和无义siRNA(对照组),通过噻唑蓝(MTT)实验检测SP1对细胞增殖的影响,流式细胞术检测SP1对细胞凋亡的影响,Western blot法检测SP1对细胞β-catenin信号通路相关蛋白[β-catenin、糖原合成酶激酶β(Gsk3β)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p53和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3]表达水平的影响.应用SPSS19.0统计软件进行分析.结果 SP1在三阴乳腺癌细胞株HCC 1806中的表达水平(3.09±0.26)明显高于正常乳腺上皮细胞株MCF10A(1.06±0.09,t=0.008,P＜0.01).HCC1806细胞转染SP1siRNA后,实验组SP1 mRNA相对表达量为(0.37 ±0.10),SP1 mRNA表达量较对照组下降(66.90±3.79)％,差异有统计学意义(t =0.002,P＜0.05).转染SP1 siRNA后HCC1806细胞实验组增殖率为(40.82±2.67)％,明显低于对照组[(72.72±5.90)％,t=0.000,P＜0.05],降低了(43.39±7.65)％,实验组凋亡率为(42.14±4.54)％,显著高于对照组[(22.25±3.07)％,t=0.002,P＜0.05],升高了(19.89±5.52)％.实验组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量分别为(0.21±0.08)、(0.70±0.04),对照组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量分别为(0.61±0.09)、(0.92±0.03),实验组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量显著降低(t=0.002、0.001,P＜0.05),实验组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量降低分别为(65.80±7.76)％和(23.88±4.99)％,实验组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量分别为(0.73±0.05)、(0.74±0.05)和(0.62±0.11),对照组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量分别为(0.48±0.03)、(0.25±0.03)和(0.36±0.05),实验组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量显著升高(t=0.001、0.001、0.010,P＜0.05),实验组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量升高分别为(52.79±11.29)％、(202.60±39.41)％和(77.12 ±35.20)％.结论 SP1在三阴乳腺癌细胞株HCC1806中高表达,SP1表达下调可通过β-catenin信号通路有效抑制HCC1806细胞生长并促进其凋亡.

摘要： 目的 探讨二甲双胍对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养甲状腺乳头状癌(TPC-1)细胞(美国ATCC公司)分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别采用0、3、15和75 mmol/L二甲双胍处理24h.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞增殖;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)分析细胞凋亡;收集细胞进行RNA测序,分析二甲双胍对微小RNA(miRNA,miR)表达水平的影响;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析差异表达miRNA的靶蛋白.蛋白质印迹法(Western blot)分析靶蛋白表达水平.计量数据比较采用单因素方差分析.结果 对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组吸光度(A)值分别为1.79±0.25、1.34±0.20、1.09 ±0.13和0.72 ±0.10,各组间比较差异有统计学意义(t=2.348、2.954、3.185、2.502、2.991、2.647,P＜0.05),对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组凋亡率分别为(3.87±1.12)％、(10.34±2.59)％、(25.63 ±4.65)％和(54.33±7.28)％,各组间比较差异有统计学意义(t =3.089、4.519、6.315、3.817、4.958、5.012,P＜0.05),且呈随药物浓度增加,细胞增殖逐渐下降,细胞凋亡逐渐增加的趋势.二甲双胍影响miR-15表达水平,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组miR-15表达水平分别为1.23±0.21、1.46±0.23、1.89±0.30和2.54±0.34,各组间比较差异有统计学意义(t=2.078、3.114、3.947、3.817、4.958、4.015,P＜0.05),且随着药物浓度增加,miR-15表达水平显著增高.PELP1基因是miR-15的靶基因,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组PELP1蛋白表达水平分别为2.54±0.16、2.16±0.13、1.65 ±0.11和1.25 ±0.11,各组间比较差异有统计学意义(t =2.314、2.948、3.289、2.514、3.024、2.921,P＜0.05),且随着二甲双胍浓度的增加,PELP1蛋白表达水平逐渐降低.结论 二甲双胍通过靶向miR-15/PELP1影响乳头状甲状腺癌细胞的增殖和凋亡.

摘要： 目的 观察沉默载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物3B(APOBEC3B)基因对胰腺癌细胞PATU8988(购自美国典型菌种保藏中心)细胞周期、增殖及侵袭能力的影响.方法 通过构建重组靶向干扰APOBEC3B基因的短发卡RNA (shRNA)慢病毒表达质粒PGC-shRNA-APOBEC3B沉默APOBEC3B基因.分为空白对照组、阴性对照组及转染组.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞APOBEC3B基因和蛋白的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化;平板克隆实验检测细胞增殖;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力.组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验.结果 APOBEC3B基因和蛋白表达空白对照组为2.28±0.27和3.51±0.32,阴性对照组为2.32±0.21和3.33±0.29,转染组(0.26±0.09和0.31±0.12)明显低于上述两组(t=6.230、5.640,P＜0.01);细胞周期结果显示G0/G1期与S期细胞空白对照组为(55.16±4.19)％、(31.21±1.92)％,阴性对照组为(52.35±3.53)％、(32.17±4.21)％,转染组为(75.12±5.34)％、(13.55±2.01)％,细胞周期阻止于G0/G1期(t=5.230,P＜0.01),S期细胞数减少(t=5.830,P＜0.01);平板克隆实验显示转染组细胞克隆形成数[(135.77±12.14)个]明显低于空白对照组和阴性对照组[(254.00±12.31)、(247.00±14.51)个,t=11.210,P＜0.01];穿膜细胞数转染组[(92.41±18.42)个]明显低于空白对照组和阴性对照组[(215.00±23.83)、(227.00±21.25)个,=6.480,P＜0.01].结论 APOBEC3B基因沉默显著抑制SW1990细胞的增殖,减少S期细胞,降低细胞侵袭能力.

摘要： 目的 观察前列腺癌基因表达标志物1(PCGEM1)对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制.方法 选取2016年6月到2019年6月南阳中心医院收集的159例膀胱癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象.采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和膀胱癌组织中PCGEM1表达水平.采用RNA干扰技术在膀胱癌细胞T24和BIU-87(购自上海中国科学院细胞库)建立PCGEM1敲降和对照细胞株,分别为PCGEM1 KD/T24组、T24对照组、PCGEM1 KD/BIU-87组和BIU-87对照组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析每组细胞增殖;采用流式细胞术分析每组细胞凋亡水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析每组细胞Rho超家族成员A(RhoA)和B细胞淋巴瘤/白血病(bcl)-xL表达水平.采用t检验.结果 与癌旁组织(1.34±0.21)比较,膀胱癌组织中PCGEM1表达水平(3.91 ±0.29)显著增加,差异有统计学意义(t=3.109,P＜0.05).与T24对照组和BIU-87对照组(1.80±0.17、1.97±0.21)比较,PCGEM1 KD/T24组和PCGEM1 KD/BIU-87组细胞吸光度值(1.06±0.14、0.96±0.11)显著下降,差异有统计学意义(t=2.701、2.481,P＜0.05).与T24对照组和BIU-87对照组细胞凋亡率[(5.39±1.14)％、(4.90±1.22)％]比较,PCGEM1 KD/T24组和PCGEM1 KD/BIU-87组细胞凋亡率[(31.49±6.12)％、(35.92±5.09)％]显著增加,差异有统计学意义(t=3.081、3.815,P＜0.05).与T24对照组和BIU-87对照组细胞RhoA(1.14 ±0.15、1.21±0.21)和bcl-xL(0.98±0.11、0.93 ±0.18)表达水平比较,PCGEM1 KD/T24组和PCGEM1 KD/BIU-87组细胞RhoA(0.31 ±0.10、0.29±0.09)和bcl-xL (0.38±0.13、0.41±0.11)表达水平显著下降,差异有统计学意义(t =2.517、2.419、2.754,P＜0.05).结论 PCGEM1在膀胱癌中呈高表达,通过调节RhoA和bcl-xL蛋白表达,调节膀胱癌细胞增殖和凋亡.

摘要： 本发明公开了IL‑35抑制剂在制备促进效应性T细胞自噬的制剂中的应用。另外，本发明还公开了促进效应性T细胞自噬的方法。本发明的创新点在于发现了IL‑35与效应性T细胞自噬存在相关性，通过抑制IL‑35可以促进效应性T细胞自噬，增强细胞免疫反应。本发明的研究成果为体内、体外抑制效应性T细胞自噬提供了新的方法并为临床上治疗炎症性疾病、感染性疾病、肿瘤及自身免疫性疾病提供了新的药物靶点。

摘要： 本发明公开黑腹果蝇中自噬作用关键基因表达水平检测的引物组合物、试剂盒及其使用方法。本发明引物组合物包括10种自噬作用关键基因与RNA内参的RT扩增引物和PCR扩增引物。试剂盒包括DEPC水、5×RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、Z溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品。本发明可同时针对黑腹果蝇10种自噬作用关键基因进行检测，一天内可完成192个样品的检测，既节约生产和检测成本，又提高检测效率；RNA内参提供样品RNA完整性的对照内参，确保检验过程中对样品质量的判断，避免假阴性，使得检测具有更好灵敏度和特异性，从而避免其他检测方法特异性不高的问题。

摘要： 本发明涉及细胞自噬领域，更具体涉及一种诱导椎间盘细胞自噬的诱导物。本发明提供的椎间盘细胞自噬作用的诱导物包括雷帕霉素、氯化锂和硫酸镍。本发明提供的诱导物对椎间盘细胞自噬诱导成功率高，诱导效果稳定，且与传统诱导剂相比，诱导的自噬水平显著提高，极大地提高了本领域技术人员的实验成功率，节省了实验时间。

摘要： 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种贪噬菌、贪噬菌菌剂及贪噬菌的应用。所述贪噬菌分类命名为Variovorax soil，保藏单位为：CGMCC，保藏中心保藏编号为：CGMCCNo.24867，保藏日期为：2022年5月9日。本发明贪噬菌能够非常有效地促进草莓苗的水平根系发育并控制土壤中的养分水平，并促进草莓植株冠部的扩展发育，减少田间荫蔽作用，使得草莓果实的品质以及单果重得到显著的提升，同时贪噬菌有利于提高草莓苗的早期成活率。

摘要： 本发明涉及吮噬虫的特异性检测领域，公开了吮噬虫SSU rRNA基因及其引物在检测吮噬虫中的应用及检测吮噬虫的试剂盒和方法，本发明的检测方法对吮噬虫的检测特异性强、灵敏度高，最低浓度可达到7.851拷贝/μl SSU rRNA基因的存在；利用本发明的方法对栅藻培养系统中的吮噬虫进行基因组DNA的提取并定量监测，最终得到的总拷贝数与显微镜计数得到的数量变化趋势是基本一致，以上结果说明本发明建立的荧光定量PCR方法具有高效性和重复性。此外，该方法反应快速，检测过程相对简单，可以快速高效的用于微藻培养系统中出现的吮噬虫。而且随着技术的不断发展，实时荧光定量PCR所用的仪器会越来越简便，快速，成本降低。

摘要： 本发明公开了IL‑35抑制剂在制备促进效应性T细胞自噬的制剂中的应用。另外，本发明还公开了促进效应性T细胞自噬的方法。本发明的创新点在于发现了IL‑35与效应性T细胞自噬存在相关性，通过抑制IL‑35可以促进效应性T细胞自噬，增强细胞免疫反应。本发明的研究成果为体内、体外抑制效应性T细胞自噬提供了新的方法并为临床上治疗炎症性疾病、感染性疾病、肿瘤及自身免疫性疾病提供了新的药物靶点。

摘要： 本发明涉及细胞自噬领域，更具体涉及一种诱导椎间盘细胞自噬的诱导物。本发明提供的椎间盘细胞自噬作用的诱导物包括雷帕霉素、氯化锂和硫酸镍。本发明提供的诱导物对椎间盘细胞自噬诱导成功率高，诱导效果稳定，且与传统诱导剂相比，诱导的自噬水平显著提高，极大地提高了本领域技术人员的实验成功率，节省了实验时间。

摘要： 本发明涉及脆弱拟杆菌在制备增强吞噬细胞对致病菌的吞噬作用的药物或食品中的应用。本发明通过大量实验证明，脆弱拟杆菌对巨噬细胞吞噬不同致病菌均具有很好的增强效果，从而预示了脆弱拟杆菌具有很好的食用和药用前景。脆弱拟杆菌作为一种肠道菌，其活菌、灭活菌、裂解物或培养上清液均可用于制备增强吞噬细胞对致病菌吞噬作用的食品或药物组合物，进而为临床提供一种适合人体服食的保健以及防治良品。

摘要： 本发明公开黑腹果蝇中自噬作用关键基因表达水平检测的引物组合物、试剂盒及其使用方法。本发明引物组合物包括10种自噬作用关键基因与RNA内参的RT扩增引物和PCR扩增引物。试剂盒包括DEPC水、5×RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、Z溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品。本发明可同时针对黑腹果蝇10种自噬作用关键基因进行检测，一天内可完成192个样品的检测，既节约生产和检测成本，又提高检测效率；RNA内参提供样品RNA完整性的对照内参，确保检验过程中对样品质量的判断，避免假阴性，使得检测具有更好灵敏度和特异性，从而避免其他检测方法特异性不高的问题。

摘要： 本发明属于生物技术领域，本发明提供了铋化合物具有引发细胞自噬的作用。同时提供了铋化合物在制备细胞自噬模型中的应用及构建细胞自噬模型的方法。通过MTT实验检测铋化合物对细胞毒性作用，结果显示，铋化合物对人肝癌细胞、人静脉内皮细胞、非小肺癌细胞或人胚胎肾细胞具有一定的细胞毒性，尤其是对人胚胎肾细胞的毒性最大。采用铋化合物处理细胞，通过Western Blot技术提取自噬标记物蛋白LC3蛋白，发现经过铋化合物处理的细胞，LC3蛋白的表达量明显上升。表明铋化合物能够引起人胚胎肾细胞等细胞的自噬效应产生。可广泛应用于医药领域或化妆品领域，用于制造药品或护肤品。