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短发夹RNA

短发夹RNA的相关文献在2004年到2022年内共计309篇，主要集中在肿瘤学、基础医学、分子生物学 等领域，其中期刊论文292篇、会议论文5篇、专利文献7729篇；相关期刊155种，包括生物化学与生物物理进展、生物技术通讯、中国病理生理杂志等； 相关会议5种，包括中华医学会第六次全国生殖医学学术会议、中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会等；短发夹RNA的相关文献由1304位作者贡献，包括李龙虎、主余华、于勤等。

短发夹RNA—发文量

期刊论文>

论文：292篇 占比：3.64%

会议论文>

论文：5篇 占比：0.06%

专利文献>

论文：7729篇 占比：96.30%

总计：8026篇

短发夹RNA—发文趋势图

短发夹RNA

-研究学者

  • 李龙虎
  • 主余华
  • 于勤
  • 刘天卿
  • 吕延成
  • 宋扬
  • 张健
  • 张春清
  • 徐韬
  • 智慧兰

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  • 1. 人前列腺癌细胞 PFKFB4 基因RNA干扰慢病毒构建与鉴定
    • 郝南； 农德勇； 李钻； 林俊浩； 黄桂海； 李锡明； 李伟
    • 摘要： 目的构建人前列腺癌细胞PFKFB4基因短发夹RNA(shRNA)干扰慢病毒载体,建立稳定干扰的人前列腺癌细胞株。方法通过GenBank检索人PFKFB4基因序列,根据shRNA引物设计原则,设计并合成PFKFB4-shRNA序列,并与携带绿色荧光蛋白序列的LV3载体连接,获得的重组质粒与慢病毒包装质粒系统共转染293T细胞,收集病毒。使用逐孔稀释滴度测定法对慢病毒滴度进行测定。将LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体感染人前列腺癌细胞设置为空载的LV3 Negative Control组(LV3-NC组)、空白对照组(Blank组)和LV3-shPFKFB4组。采用RT-PCR检测人前列腺癌细胞PFKFB4 mRNA水平。结果重组质粒测序结果显示LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜计数荧光细胞,结合稀释倍数计算病毒滴度为1×108TU/mL。RT-PCR结果显示,与LV3-NC组和Blank组相比,LV3-shPFKFB4组PFKFB4 mRNA水平显著降低(P<0.001),而LV3-NC组与Blank组PFKFB4-mRNA水平比较差异无统计学意义(P=0.271)。结论LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构成功,同时获得稳定感染的人前列腺癌细胞株。
  • 2. 定量沉默c-Met基因表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和化疗敏感性的影响
    • 王金西； 郭晓娟； 程锦红； 张绍东； 焦保庭
    • 摘要： 目的探讨定量沉默c-Met基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、表阿霉素化疗敏感性的影响及其可能机制。方法设计3条针对c-Met基因不同位点短发夹RNA(shRNA)片段,瞬时转染MDA-MB-231细胞,挑选出沉默效率最佳的shRNA,并设定scramble为阴性对照组,MDA-MB-231细胞为空白对照组。将沉默效率最佳的TA-shRNA连接到PSD400慢病毒载体中进行病毒包装,收集病毒液并感染MDA-MB-231细胞,利用嘌呤霉素筛选出稳定表达针对c-Met的shRNA细胞系(PSD400-c-Met-shRNA-MDA-MB-231)及阴性对照组细胞(PSD400-scramble-MDA-MB-231)。利用多西环素(DOX)诱导稳定细胞系,Western blot检测稳定细胞系c-Met蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测敲低c-Met后对稳定细胞系增殖的影响。将诱导的稳定细胞系加入不同浓度表阿霉素,MTT法检测不同浓度表阿霉素作用对稳定细胞系存活率的改变,计算出药物半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞技术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白多聚二磷酸腺苷(ADP)-核糖聚合酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达。结果稳定细胞系PSD400-c-Met-shRNA-MDA-MB-231经DOX诱导后细胞生长受到明显抑制,且加入不同浓度表阿霉素处理细胞后,细胞的存活率和IC_(50)均明显降低(P<0.05);同时G_(0)/G_(1)期细胞百分比明显升高,S期、G_(2)/M期细胞百分比明显降低(P<0.05)。Western blot检测凋亡相关蛋白PARP和caspase-3上调明显。结论定量沉默c-Met基因可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,促进细胞凋亡,并提高了MDA-MB-231细胞的化疗敏感性,靶向c-Met基因可能是治疗乳腺癌的有效方法。
  • 3. STAT3蛋白在三阴性乳腺癌中的作用和临床病理意义
    • 朱清； 张光辉； 赵艳
    • 摘要： 目的:探讨组成型激活信号转导激活剂3(STAT3)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达,分析其作为TNBC病人靶向治疗的分子标志物的意义,探究TNBC的发病机制、指导治疗和临床预后。方法:免疫组织化学方法检测STAT3基因在TNBC中的表达并解析其与临床病理的关系。构建STAT3-shRNA表达载体建立下调STAT3基因表达的TNBC细胞系(MDA-MB-231)。CCK-8和Transwell实验验证转染前后MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移能力的差异。结果:STAT3蛋白在TNBC中的表达水平显著高于正常乳腺(P<0.01),且在TNBC中STAT3阳性表达率与肿瘤体积、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05~P<0.01)。MDA-MB-231细胞转染后实验组STAT3蛋白表达与阴性对照组和空白对照组相比显著降低(P<0.01)。实验组细胞增殖活性与阴性对照组和空白对照组相比缓慢下降(P<0.01)。实验组细胞穿过基底膜的数量与阴性对照组和空白对照组比较显著减少(P<0.01)。结论:STAT3-shRNA表达载体通过RNA干扰有效下调STAT3基因在TNBC中的表达。靶向STAT3-shRNA可抑制MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭和迁移及促凋亡能力。
  • 4. 短发夹RNA介导调节S100A4表达对子宫内膜癌KLE细胞增殖和凋亡的影响
    • 迟言邦； 王琎； 孙静莉
    • 摘要： 目的 探讨应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)调节子宫内膜癌KLE细胞中S100A4基因表达,对KLE子宫内膜癌的细胞增殖和凋亡的影响.方法 通过利用慢病毒shRNA技术,将S100A4-OVER、S100A4-shRNA转染进子宫内膜癌KLE细胞,应用无源性的OVER-NC细胞株和shRNA-NC细胞株作为阴性对照组,以未转染的Control细胞株作为空白对照组.转染48 h后,以实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和Western印迹方法分别检测S100A4 mRNA和蛋白表达情况.分别应用细胞增殖与活性试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、流式细胞仪检测细胞增殖情况与凋亡率.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,验证了 shRNA技术干扰S100A4基因在mRNA水平和蛋白表达水平上转染效能和shRNA靶向性,确定了干扰后S100A4基因在子宫内膜癌细胞S100A4 mRNA和蛋白表达情况.随后应用CCK-8检测和流式细胞仪检测发现,S100A4-OVER组KLE细胞的增殖效率明显高于其他4组细胞,S100A4-shRNA细胞的增殖速率略微下降,S100AR-shRNA组KLE细胞的凋亡率明显上升,S100A4-OVER组细胞凋亡率与阴性对照组对比出现下降.结论 通过特异性调节S100A4基因的表达,S100A4基因表达增强,可促进子宫内膜癌KLE细胞的增殖;S100A4基因表达抑制,可促进子宫内膜癌KLE细胞的凋亡.S100A4表达与子宫内膜癌生物学特性关系密切.
  • 5. GRP78基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定
    • 刘慧晴； 李玄； 孟星圻； 王璇； 赵宗惠； 贺修胜； 李素云
    • 摘要： 目的 构建葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因短发夹RNA表达载体并鉴定,为探讨GRP78对胃癌发生发展作用及机制提供前期基础.方法 运用核糖核酸(RNA)干扰技术构建靶向干扰GRP78蛋白短发夹RNA(GRP78-shRNA)载体,载体经转化、抽提及测序,用脂质体将GRP78-shRNA载体瞬时转染至SGC-7901胃癌细胞中,应用荧光显微镜、反转录定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)观察GRP78表达情况.结果 GRP78-shRNA载体测序显示序列正确;转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞可见绿色荧光;qRT-PCR和Western blot结果显示,转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞中GRP78基因和蛋白表达降低.结论 成功构建并鉴定GRP78基因短发夹RNA表达载体.
  • 6. GRP78基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定
    • 刘慧晴； 李玄； 孟星圻； 王璇； 赵宗惠； 贺修胜； 李素云
    • 摘要： 目的构建葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因短发夹RNA表达载体并鉴定,为探讨GRP78对胃癌发生发展作用及机制提供前期基础。方法运用核糖核酸(RNA)干扰技术构建靶向干扰GRP78蛋白短发夹RNA(GRP78-shRNA)载体,载体经转化、抽提及测序,用脂质体将GRP78-shRNA载体瞬时转染至SGC-7901胃癌细胞中,应用荧光显微镜、反转录定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)观察GRP78表达情况。结果GRP78-shRNA载体测序显示序列正确;转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞可见绿色荧光;qRT-PCR和Western blot结果显示,转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞中GRP78基因和蛋白表达降低。结论成功构建并鉴定GRP78基因短发夹RNA表达载体。
  • 7. shRNA干扰CXCR1基因表达通过抑制NF-κB信号通路活化增强肺癌对顺铂的敏感性
    • 张璐； 陈晓玲
    • 摘要： 目的:探讨短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)干扰CXC趋化因子受体1(CXC chemokine recep-tor 1,CXCR1)基因表达对肺癌顺铂耐药性的影响及其对核转录因子NF-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路的调控作用.方法:qRT-PCR与Western blot分别检测人肺泡上皮细胞HBE与肺癌细胞(A549、H157、H460)中CXCR1 mRNA及蛋白表达水平.收集对数期的A549细胞,分为两组:Ctrl.shRNA组、CXCR1 shRNA组.MTT检测细胞增殖能力,并计算顺铂的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50);流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测CXCR1蛋白表达;利用脂质体转染技术分别将Ctrl.shRNA、CXCR1 shRNA转染至A549/DDP细胞,观察细胞增殖、凋亡能力的变化;Western blot检测CXCR1、CyclinD1、C-caspase-3、MRP1、NF-κB p65蛋白表达量.结果:与HBE细胞相比,肺癌细胞A549、H157、H460中CXCR1 mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);A549细胞中转染CXCR1 shRNA后,与Ctrl.shRNA组相比,细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与A549细胞相比,A549/DDP细胞中CXCR1、MRP1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),顺铂IC50值显著升高(P<0.05);A549/DDP细胞中转染CXCR1shRNA后,与Ctrl.shRNA组相比,MRP1、NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),顺铂IC50值降低(P<0.05).结论:shRNA干扰CXCR1表达能够增强肺癌细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与其抑制NF-κB信号通路活化有关.
  • 8. Reg3β干扰载体的构建及在H9C2心肌细胞中的鉴定 CSTPCD
    • 易波； 蔡玉立； 李俊峰； 包艳； 陈小琳； 文重远
    • 摘要： 目的 构建再生基因蛋白3β(regenerating islet-derived protein 3 beta,Reg3β)干扰载体,并在H9C2大鼠心肌细胞中优化转染条件,鉴定抑制效果,为深入探索Reg3β在心血管疾病的作用提供有利的工具.方法 设计合成Reg3β干扰序列,在5'端加入一个SacⅠ的酶切位点,3'端加入LOOP环序列和反向互补序列,构建pG1.2-Reg3βshRNA沉默载体.接着分别用Li-pofectamine2000和Lipofectamine3000优化摸索转染大鼠H9C2心肌细胞的效率,以q-PCR和Western blot法检测H9C2细胞内Reg3β的表达量.结果 设计合成了3对Reg3β干扰序列,从中筛选出抑制效率最高达67.93％的序列,酶切和测序结果 证实成功构建了pG1.2-Reg3βshRNA.经过优化比较发现,pG1.2-Reg3βshRNA沉默载体Lipofectamine3000比例为1μg:3μl时,其转染效率最高(50％以上).q-PCR和Western blot法检测结果 显示,最佳干扰载体在最高转染条件下可使H9C2细胞Reg3β表达量降低50％以上.结论 成功构建了pG1.2-Reg3βshRNA沉默载体,并在H9C2细胞中有效干扰Reg3β的表达,可用于探讨Reg3β在心血管疾病中的作用.
  • 9. 斯钙素2蛋白在胃癌腹腔转移中作用的实验研究 北大核心 CSCD CSTPCD
    • 黄林飞； 潘晟； 夏甘霖； 陶艳娥； 朱磊； 谢淼； 王伟
    • 摘要： 目的 观察斯钙素2(STC2)蛋白在胃癌腹腔侵袭转移中的作用.方法 2018年6月至2019年4月利用腺病毒载体将短发夹RNA(shRNA)转染人胃癌SGC7901细胞(湖北省重点实验室提供)以沉默STC2,构建沉默STC2的SGC7901细胞株,分为实验组(STC2-shRNA组)及对照组(SGC7901组),并用蛋白质印迹法(Western blot)验证沉默STC2效果.构建裸鼠胃癌模型:选取6～8周龄雌性裸鼠36只(购自武汉大学动物实验中心),实验组及对照组各18只.经胃前壁大弯侧直接注射胃癌细胞SGC7901悬液接种构建鼠胃癌转移模型.接种后两组裸鼠成瘤数量、瘤体大小及重量比较采用t检验;两组裸鼠腹腔各脏器成瘤率、抑瘤率、裸鼠生存时间、存活率、生命延长率等比较采用x2检验,最后Western blot检测两组胃癌肿瘤的血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、白细胞介素-10(IL-10)蛋白表达水平.结果 Western blot实验显示,沉默STC2基因后,实验组细胞STC2蛋白量的表达较对照细胞明显减少,说明STC2沉默成功.接种8～15d后裸鼠均有肿瘤生长,术区可触及质硬且活动不良结节.STC2-shRNA组裸鼠瘤体(0.76±0.14) mm3、重量(1.23±0.14)g、数目(5.25±1.17)个,与SGC7901组[(3.61 ±0.44) mm3、(3.98±0.21)g、(18.65±2.39)个]比较,差异有统计学意义(t=2.364、3.022、2.523,P＜0.05).STC2-shRNA组裸鼠胃、肝脏、脾、肾、肠及肠系膜、腹膜的成瘤率依次为50.0％、33.3％、11.1％、16.7％、22.2％、5.6％,SGC7901组成瘤率依次为100.0％、100.0％、55.6％、67.7％、72.2％、67.7％,STC2-shRNA组抑瘤率达到69.1％,两组各指标比较差异有统计学意义(x2=5.464、5.995、7.281、5.462、9.826,P＜0.05);STC2-shRNA组组裸鼠存活时间上明显延长,30 d后裸鼠存活14只,存活率77.8％,生命延长率达到64.5％,差异有统计学意义(x2=6.044,P＜0.05).免疫组织化学结果显示,STC2-shRNA组VEGF-C、IL-10蛋白蛋白表达水平明显弱于胃癌细胞组,抑瘤率分别达到70.7％、71.4％.结论 沉默STC2后的胃癌细胞SGC7901侵袭转移潜能下降,提示STC2可能有促进胃癌发生侵袭转移的作用.
  • 10. DEAD-box解螺旋酶46基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响 CSTPCD
    • 张杨蕊
    • 摘要： 目的 分析短发夹RNA(shRNA)介导DEAD-box解螺旋酶46(DDX46)基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)测定人正常乳腺上皮细胞系和乳腺癌细胞系中DDX46表达差异.以慢病毒介导的shRNA敲低乳腺癌SK-BR-3细胞中DDX46的表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和sh-DDX46组.RT-qPCR检测各组细胞DDX46 mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测DDX46蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平,克隆形成和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 DDX46 mRNA在各乳腺癌细胞系中的表达量均高于正常乳腺上皮细胞(P<0.05).sh-DDX46组细胞DDX46 mRAN和蛋白表达水平均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).sh-DDX46组的细胞生长增殖能力明显低于两对照组(P<0.05).空白对照组、阴性对照组和sh-DDX46组SK-BR-3细胞凋亡率分别为(4.21±1.65)％、(5.36±1.23)％和(10.21±2.39)％,与空白对照组和阴性对照组相比,sh-DDX46组SK-BR-3细胞凋亡率明显增加(P=0.007;P=0.016).沉默DDX46后凋亡通路蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量明显降低(P<0.05),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3剪切体(cleaved Caspase-3)表达明显增高(P<0.05).结论 DDX46在乳腺癌细胞中高表达,沉默DDX46基因能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进凋亡,凋亡信号通路可能是其作用机制之一.
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