Aβ25-35

摘要： 目的探讨鹿茸多肽(VAP)32对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞阿尔茨海默病(AD)模型的建立及对其治疗作用。方法以Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞,构建AD模型,分为正常(NOR)组,诱导(MOD)组和VAP32组。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)酶活性。Western印迹测定BACE1与ADAM10的蛋白表达水平,RT-聚合酶链反应(PCR)检测p-JNK的基因表达水平。结果0、50、100、200μg/ml VAP32加入后,随着培养时间的延长,细胞的活力差异无统计学意义(P>0.05)。3组细胞凋亡率随时间的延长,均显著升高(均P<0.05)。同一时间点,MOD组细胞凋亡率均显著高于NOR组和VAP32组(均P<0.05)。与NOR组比较,MOD组SOD水平显著下降,而MDA水平显著上升(均P<0.05)。与MOD组比较,VAP32组SOD水平显著上升,而MDA水平显著下降(均P<0.05)。与NOR组p-JNK基因、BACE1表达水平比较,MOD组均显著升高(P<0.05),与MOD组比较,VAP32组均显著下降(P<0.05)。与NOR组BACE1表达水平比较,MOD组显著升高,与MOD组BACE1表达水平比较,VAP32组显著下降(P<0.05)。与NOR组ADAM10表达水平比较,NOD组显著下降,与MOD组ADAM10表达水平比较,VAP32组显著升高(P<0.05)。结论VAP32可治疗Aβ_(25-35)诱导的AD。

摘要： 目的观察不同浓度β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein25-35,Aβ_(25-35))和六味地黄丸含药血清(medicated serum of Liuwei Dihuang Pill,MSLDP)对PC12(pheochromocytoma cells)细胞及FoxO3a(Forkhead box protein O 3a)、p-FoxO3a蛋白表达的影响,研究六味地黄丸含药血清预处理对Aβ_(25-35)损伤AD(Alzheimer’s disease)细胞模型的保护作用。方法配制Aβ_(25-35)母液和制备六味地黄丸含药血清,用含有不同浓度的Aβ_(25-35)(10μmol·L^(-1)、20μmol·L^(-1)、40μmol·L^(-1))和六味地黄丸含药血清(2.5%、5%、10%、20%、30%)的培养基培养PC12细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,同时观察细胞形态的变化,免疫印迹法检测细胞中FoxO3a及p-FoxO3a蛋白表达量的变化。取合适浓度的六味地黄丸含药血清预处理Aβ_(25-35)诱导的AD细胞模型,观察细胞形态、活力及FoxO3a、p-FoxO3a表达量的变化。结果①Aβ_(25-35)显著降低PC12细胞存活率(P<0.01),并造成细胞形态的改变,细胞内p-FoxO3a表达量降低,而FoxO3a的表达升高。②六味地黄丸含药血清显著提高PC12细胞存活率(P<0.01),并促使细胞增加分化趋势,细胞内FoxO3a表达降低,而p-FoxO3a的表达随着血清浓度的增加而增加。③六味地黄丸含药血清预处理能够明显降低Aβ_(25-35)对PC12细胞的损伤,与模型组相比,六味地黄丸含药血清干预组FoxO3a的蛋白表达降低(P<0.01),p-FoxO3a的蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论六味地黄丸含药血清能够提高AD细胞模型的细胞活性,对PC12细胞具有明显的保护作用,磷酸化FoxO3a蛋白表达水平的提高可能是其相关的作用机制。

摘要： 为了研究来源于丝素蛋白水解物的神经保护活性多肽SNP-9对于阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)中血脑屏障损伤的作用,使用Aβ_(25-35)损伤脑微血管内皮细胞bEnd.3建立AD损伤模型,并给药干预。通过MTT实验检测SNP-9和Aβ_(25-35)对细胞活力的影响;RT-qPCR法检测SNP-9和Aβ_(25-35)对细胞紧密连接(tightjunctions,TJs)相关的ZO-1、occludin和claudin-5 mRNA水平的影响;Westernblot检测SNP-9和Aβ_(25-35)对细胞TNF-α、磷酸化NF-κB、NF-κB、IκBα和RAGE蛋白水平的影响。实验结果显示,SNP-9给药减少了Aβ_(25-35)诱导的bEnd.3细胞损伤,改善了模型细胞中ZO-1、occludin和claudin-5 mRNA水平的异常情况,缓解了Aβ_(25-35)导致的TNF-α、磷酸化NF-κB、IκBα和RAGE蛋白水平异常。研究结果表明,SNP-9可能通过影响RAGE/NF-κB通路,调控模型细胞炎症因子TNF-α水平,改善TJs相关指标异常,缓解Aβ_(25-35)诱导的bEnd.3细胞损伤。

摘要： 目的:通过神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导对数生长期的大鼠PC12细胞分化为神经元样细胞。方法:以浓度为10μmol/L的β淀粉样蛋白寡聚体Aβ25-35致伤PC12神经元样细胞建立阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)的模型,观察远志皂苷元(SEN)低剂量组和SEN高剂量组细胞存活率、突触可塑性相关蛋白PSD-95mRNA、ERK1/2mRNA、SynmRNA的表达及蛋白表达的变化。结果:SEN低剂量组、SEN高剂量组的PSD-95、Syn、P-ERK1/2等细胞突触可塑性相关蛋白及其mRNA表达明显高于模型组(P<0.01),且SEN高剂量组的表达较SEN低剂量组更为突出(P<0.01)。结论:远志皂苷元对Aβ25-35寡聚体致伤PC12神经元样细胞发挥保护作用并改善突触可塑性,可能与增加PSD-95、Syn、P-ERK1/2的mRNA及蛋白表达有关。

摘要： 目的:探讨环状RNA 0000285(circ_0000285)是否靶向miR-127-5p调控阿尔茨海默病(AD)细胞模型损伤。方法:采用β淀粉样蛋白25-35多肽片段(Aβ25-35)诱导神经细胞瘤细胞SK-N-SH建立AD体外细胞模型。采用实时定量PCR(RT-qPCR)测定circ_0000285和miR-127-5p表达水平。试剂盒测定丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)蛋白表达水平。采用上述方法测定干扰circ_0000285表达或过表达miR-127-5p对AD模型细胞凋亡、损伤的影响。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR用于验证circ_0000285对miR-127-5p的靶向调控作用。结果:Aβ25-35处理显著上调circ_0000285表达及Bax蛋白水平,下调miR-127-5p及Bcl-2蛋白表达水平,增加MDA含量,降低SOD和GSH-Px活性,并提高细胞凋亡率。干扰circ_0000285表达或过表达miR-127-5p可显著下调Bax蛋白水平,上调Bcl-2蛋白表达水平,降低MDA含量,增加SOD和GSHPx活性,并降低细胞凋亡率。circ_0000285靶向负调控miR-127-5p表达。抑制miR-127-5p表达显著减弱了干扰circ_0000285表达对模型细胞凋亡、损伤的影响。结论:干扰circ_0000285表达可通过靶向miR-127-5p减弱Aβ25-35诱导的SK-N-SH细胞损伤。因此,circ_0000285/miR-127-5p途径可能是AD的潜在治疗靶点。

摘要： 目的探讨远志皂苷(Ten)通过调控β淀粉样蛋白(Aβ)转运蛋白的表达发挥阻滞神经细胞周期活化及抑制神经细胞凋亡的作用。方法建立Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Western印迹检测Aβ转运蛋白晚期糖基化终产物(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)1表达水平及细胞周期蛋白p21、细胞周期蛋白(Cyclin)D1及细胞周期相关转录因子(E2F)1表达水平。使用实时荧光定量PCR分析凋亡相关因子B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3及Caspase-8 mRNA表达情况,同时Caspase-3及Caspase-8酶活性用相应试剂盒检测。结果Ten能明显下调RAGE表达,上调LRP1表达,并且促进p21及降低CyclinD1与E2F1等细胞周期蛋白的表达,同时上调Bcl-2、下调Bax表达,抑制caspase-3与caspase-8表达及活性,显著提高Aβ诱导损伤SH-SY5Y细胞的存活率。结论Ten可能通过调控Aβ转运蛋白RAGE和LRP1的表达而加快Aβ的转运清除,从而阻滞Aβ诱导的神经细胞周期活化,抑制神经细胞凋亡,发挥抗Aβ神经毒性和神经保护作用。

摘要： 目的阿尔茨海默病(AD)是以记忆障碍和学习认知损伤为特征的慢性神经退行性疾病。目前为止,AD的确切发病机制并未完全阐明,主要有β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积学说、氧化应激学说、神经炎症学说和细胞凋亡学说等。近年来大量研究发现,神经炎症在AD症的发生发展中起着重要作用,脑内慢性炎症反应是AD的病理特征之一,Aβ沉积激活神经胶质细胞释放促炎因子,如白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)等,进而损伤周围神经元,引起突触丢失和细胞凋亡,最终导致学习记忆功能受损。减轻炎症被认为是改善甚至是治疗AD症的重要途经之一。斯皮诺素(spinosin),属于黄酮类化合物,是酸枣仁(ZiziphiSpinosaeSemen)中主要活性成分之一。本文先在化学角度研究了斯皮诺素对Aβ聚集的影响,又在小鼠海马脑片上探讨了其改善AD的机制。方法和结果37°C孵育96 h产生的Aβ25-35聚集体与新鲜配制的Aβ25-35单体相比,粒径显著增大;斯皮诺素(终浓度为30μmol·L-1)与Aβ单体一起孵育后,粒径明显降低,表明斯皮诺素缓解Aβ25-35的聚集。Aβ25-35(5μmol·L-1)组炎症因子IL-1β和PGE-2含量显著升高;在脑片上预给药斯皮诺素0.5 h(终浓度为30μmol·L-1),该2种炎症因子的含量降低至接近对照组。COX-2蛋白可以降解2-花生四烯酸甘油从而产生PGE-2。本研究检测了各组COX-2蛋白表达。结果显示,斯皮诺素抑制Aβ25-35引起的COX-2蛋白的过表达。随后研究了斯皮诺素对促凋亡蛋白Bax的作用。Aβ25-35处理海马脑片后,上调Bax蛋白表达,增加细胞凋亡;用斯皮诺素预保护后,Bax蛋白表达显著下降,抑制Aβ25-35引起的细胞凋亡。长时程增强(LTP)是反应学习记忆的主要指标之一。采用膜片钳技术,记录兴奋性突触后场电位,研究斯皮诺素对Aβ25-35引起的学习记忆障的改善作用。用斯皮诺素预保护后,LTP比例从Aβ25-35组的108%回升至与对照组的147%,对照组为142%。表明斯皮诺素对Aβ25-35诱导的学习记忆障碍有改善作用。结论斯皮诺素通过抑制COX-2蛋白过表达,减轻炎症,减少细胞凋亡,改善AD症状。

摘要： [目的]研究海带岩藻多糖(Fucoidan)对Aβ25-35(Amyloidβ)诱导原代皮层神经突起萎缩和神经元凋亡的抑制作用.[方法]以Aβ25-35诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)和原代小鼠皮层神经元损伤为模型,采用CCK8法测定细胞存活率,免疫细胞化学法测定岩藻多糖对神经突起再生和神经元的保护作用.[结果]CCK8结果表明,岩藻多糖在0.1～1000μg/mL时对SH-SY5Y细胞无明显毒性作用(P>0.05),在10～1000μg/mL时可显著降低Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡(P<0.05),且呈现浓度依赖性;对该结果在原代小鼠皮层神经元上进行验证,发现岩藻多糖在0.1～1.0 mg/mL浓度时显著降低Aβ25-35诱导的神经元凋亡(P<0.01),同时极显著抑制Aβ25-35造成的神经突起萎缩并促进突起再伸长(P<0.001).[结论]海带岩藻多糖可显著抑制Aβ25-35诱导的神经突起萎缩和神经元凋亡,促进突起再生,提示其可作为阿尔茨海默病药物开发的先导化合物.

摘要： 目的 探究脑衰反应调节蛋白2(CRMP2)过表达及沉默对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的影响.方法 将含CRMP2过表达载体、CRMP2空载体、CRMP2沉默载体及CRMP2扰乱载体的慢病毒感染并筛选SH-SY5Y细胞,分别命名为CRMP2过表达组、空载体组、CRMP2沉默组及扰乱载体组.采用荧光检测和Western blot分别验证感染效率和CRMP2过表达及沉默效果.四组细胞均用终浓度为3μmol/L的Aβ25-35孵育处理24 h诱导细胞损伤,采用MTT实验、LDH实验及Hoechst 33258实验分别检测细胞活性、细胞毒性及细胞凋亡.结果 荧光检测结果显示,各组慢病毒感染效率均达95％以上.Western blot检测结果显示,与扰乱载体组相比,CRMP2沉默组CRMP2蛋白表达减少(P<0.01).与空载体组相比,CRMP2过表达组CRMP2蛋白表达增加(P<0.01).MTT实验、LDH实验及Hoechst 33258实验结果显示,与扰乱载体组相比,CRMP2沉默组细胞活性增加、细胞毒性降低及细胞凋亡减少(均P<0.05);与空载体组相比,CRMP2过表达组细胞活性降低、细胞毒性增加及细胞凋亡增多(均P<0.01).结论 CRMP2过表达对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有促进作用,CRMP2沉默对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有抑制作用.

摘要： 大豆异黄酮是富含于大豆及其制品中的植物雌激素,可与雌激素受体(ER)结合,表现弱雌激素作用。细胞培养发现大豆异黄酮可保护皮质神经元免受β-淀粉样蛋白的毒性作用。而其神经保护作用的在体研究尚未见相关报道,本实验采用Aβ25-35双侧海马注射诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型并予大豆异黄酮干预,观察了体内环境中大豆异黄酮对海马形态结构的影响。

摘要： 大豆异黄酮是富含于大豆及其制品中的植物雌激素,可与雌激素受体(ER)结合,表现弱雌激素作用。细胞培养发现大豆异黄酮可保护皮质神经元免受β-淀粉样蛋白的毒性作用。而其神经保护作用的在体研究尚未见相关报道,本实验采用Aβ25-35双侧海马注射诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型并予大豆异黄酮干预,观察了体内环境中大豆异黄酮对海马形态结构的影响。

摘要： 大豆异黄酮是富含于大豆及其制品中的植物雌激素,可与雌激素受体(ER)结合,表现弱雌激素作用。细胞培养发现大豆异黄酮可保护皮质神经元免受β-淀粉样蛋白的毒性作用。而其神经保护作用的在体研究尚未见相关报道,本实验采用Aβ25-35双侧海马注射诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型并予大豆异黄酮干预,观察了体内环境中大豆异黄酮对海马形态结构的影响。

摘要： 大豆异黄酮是富含于大豆及其制品中的植物雌激素,可与雌激素受体(ER)结合,表现弱雌激素作用。细胞培养发现大豆异黄酮可保护皮质神经元免受β-淀粉样蛋白的毒性作用。而其神经保护作用的在体研究尚未见相关报道,本实验采用Aβ25-35双侧海马注射诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型并予大豆异黄酮干预,观察了体内环境中大豆异黄酮对海马形态结构的影响。

摘要： 大豆异黄酮是富含于大豆及其制品中的植物雌激素,可与雌激素受体(ER)结合,表现弱雌激素作用。细胞培养发现大豆异黄酮可保护皮质神经元免受β-淀粉样蛋白的毒性作用。而其神经保护作用的在体研究尚未见相关报道,本实验采用Aβ25-35双侧海马注射诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型并予大豆异黄酮干预,观察了体内环境中大豆异黄酮对海马形态结构的影响。

摘要： 目的:老年性痴呆(Alsheimer's Disease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,以老年斑和神经纤维缠结为主要病理特征,而老年斑以β-淀粉样肽(β-Amyloid,aβ)沉积为核心,目前认为Aβ神经元毒性定位于Aβ.Ab前体蛋白(b-amyloid protein precursor,APP)是一种具有受体样结构的跨膜糖蛋白,其中APP肽段即APP17肽(APP17-mer peptide),据国外文献报道及本室近近来研究表明,此肽具有促进神经元生长、增强动物学习、记忆功能和改善神经退行性变的作用.本研究目的在于通过观察APP17肽对Aβ引起人神经母细胞瘤株SY5Y毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明老年性痴呆的发病机制和临床治疗提供理论依据.方法:固相法合成APP17肽、Aβ,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ10μmol/L损伤组和Aβ10μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝(thiazoll bull,MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT-3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙子(Ca浓度为观察指标.结果:从接种第6d始,Ab组细胞数明显低于对照组,而APP17肽加Ab组细胞数高于Ab组,两组相比P组LDH漏出率高于对照组,而Ab加APP17加Ab组明显低于Ab组,两组相比P组轴突长度和胞体面积明显小于对照组,而APP17肽加Ab明显大于Ab组.NT-3免疫细胞化学染色结果显示:对照染色强度为0.6104±0.05,9Ab组为0.5372±0.089,两者相比P组染色浅,NT-3表达量少.而APP17EDY LK Ab组染色强度与对照组相似,为0.6226±0.047,明显高于Ab组,两者相比P 浓度测定结果 负载荧光探针的细胞培养液中加入Aβ25μmol·L后可见细胞内Ca荧光强度相对值明显上升,且一直持续6~9min;而预先加入APP17肽20 μmol·L,后再加入Aβ25μmol·L,则未见此变化.但加入Aβ25μmol·L后再加入APP17肽 20 μmol·L,不能使此变化消失.结论:APP17肽具有营养和保护神经元作用,可减轻Ab引起的神经元损伤,此作用可能是通过上调神经营养因子的表达和调节Ca稳态平衡完成的.

摘要： 目的:老年性痴呆(Alsheimer's Disease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,以老年斑和神经纤维缠结为主要病理特征,而老年斑以β-淀粉样肽(β-Amyloid,aβ)沉积为核心,目前认为Aβ神经元毒性定位于Aβ.Ab前体蛋白(b-amyloid protein precursor,APP)是一种具有受体样结构的跨膜糖蛋白,其中APP肽段即APP17肽(APP17-mer peptide),据国外文献报道及本室近近来研究表明,此肽具有促进神经元生长、增强动物学习、记忆功能和改善神经退行性变的作用.本研究目的在于通过观察APP17肽对Aβ引起人神经母细胞瘤株SY5Y毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明老年性痴呆的发病机制和临床治疗提供理论依据.方法:固相法合成APP17肽、Aβ,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ10μmol/L损伤组和Aβ10μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝(thiazoll bull,MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT-3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙子(Ca浓度为观察指标.结果:从接种第6d始,Ab组细胞数明显低于对照组,而APP17肽加Ab组细胞数高于Ab组,两组相比P组LDH漏出率高于对照组,而Ab加APP17加Ab组明显低于Ab组,两组相比P组轴突长度和胞体面积明显小于对照组,而APP17肽加Ab明显大于Ab组.NT-3免疫细胞化学染色结果显示:对照染色强度为0.6104±0.05,9Ab组为0.5372±0.089,两者相比P组染色浅,NT-3表达量少.而APP17EDY LK Ab组染色强度与对照组相似,为0.6226±0.047,明显高于Ab组,两者相比P 浓度测定结果 负载荧光探针的细胞培养液中加入Aβ25μmol·L后可见细胞内Ca荧光强度相对值明显上升,且一直持续6~9min;而预先加入APP17肽20 μmol·L,后再加入Aβ25μmol·L,则未见此变化.但加入Aβ25μmol·L后再加入APP17肽 20 μmol·L,不能使此变化消失.结论:APP17肽具有营养和保护神经元作用,可减轻Ab引起的神经元损伤,此作用可能是通过上调神经营养因子的表达和调节Ca稳态平衡完成的.

摘要： 目的:老年性痴呆(Alsheimer's Disease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,以老年斑和神经纤维缠结为主要病理特征,而老年斑以β-淀粉样肽(β-Amyloid,aβ)沉积为核心,目前认为Aβ神经元毒性定位于Aβ.Ab前体蛋白(b-amyloid protein precursor,APP)是一种具有受体样结构的跨膜糖蛋白,其中APP肽段即APP17肽(APP17-mer peptide),据国外文献报道及本室近近来研究表明,此肽具有促进神经元生长、增强动物学习、记忆功能和改善神经退行性变的作用.本研究目的在于通过观察APP17肽对Aβ引起人神经母细胞瘤株SY5Y毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明老年性痴呆的发病机制和临床治疗提供理论依据.方法:固相法合成APP17肽、Aβ,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ10μmol/L损伤组和Aβ10μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝(thiazoll bull,MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT-3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙子(Ca浓度为观察指标.结果:从接种第6d始,Ab组细胞数明显低于对照组,而APP17肽加Ab组细胞数高于Ab组,两组相比P组LDH漏出率高于对照组,而Ab加APP17加Ab组明显低于Ab组,两组相比P组轴突长度和胞体面积明显小于对照组,而APP17肽加Ab明显大于Ab组.NT-3免疫细胞化学染色结果显示:对照染色强度为0.6104±0.05,9Ab组为0.5372±0.089,两者相比P组染色浅,NT-3表达量少.而APP17EDY LK Ab组染色强度与对照组相似,为0.6226±0.047,明显高于Ab组,两者相比P 浓度测定结果 负载荧光探针的细胞培养液中加入Aβ25μmol·L后可见细胞内Ca荧光强度相对值明显上升,且一直持续6~9min;而预先加入APP17肽20 μmol·L,后再加入Aβ25μmol·L,则未见此变化.但加入Aβ25μmol·L后再加入APP17肽 20 μmol·L,不能使此变化消失.结论:APP17肽具有营养和保护神经元作用,可减轻Ab引起的神经元损伤,此作用可能是通过上调神经营养因子的表达和调节Ca稳态平衡完成的.

摘要： 目的:老年性痴呆(Alsheimer's Disease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,以老年斑和神经纤维缠结为主要病理特征,而老年斑以β-淀粉样肽(β-Amyloid,aβ)沉积为核心,目前认为Aβ神经元毒性定位于Aβ.Ab前体蛋白(b-amyloid protein precursor,APP)是一种具有受体样结构的跨膜糖蛋白,其中APP肽段即APP17肽(APP17-mer peptide),据国外文献报道及本室近近来研究表明,此肽具有促进神经元生长、增强动物学习、记忆功能和改善神经退行性变的作用.本研究目的在于通过观察APP17肽对Aβ引起人神经母细胞瘤株SY5Y毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明老年性痴呆的发病机制和临床治疗提供理论依据.方法:固相法合成APP17肽、Aβ,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ10μmol/L损伤组和Aβ10μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝(thiazoll bull,MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT-3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙子(Ca浓度为观察指标.结果:从接种第6d始,Ab组细胞数明显低于对照组,而APP17肽加Ab组细胞数高于Ab组,两组相比P组LDH漏出率高于对照组,而Ab加APP17加Ab组明显低于Ab组,两组相比P组轴突长度和胞体面积明显小于对照组,而APP17肽加Ab明显大于Ab组.NT-3免疫细胞化学染色结果显示:对照染色强度为0.6104±0.05,9Ab组为0.5372±0.089,两者相比P组染色浅,NT-3表达量少.而APP17EDY LK Ab组染色强度与对照组相似,为0.6226±0.047,明显高于Ab组,两者相比P 浓度测定结果 负载荧光探针的细胞培养液中加入Aβ25μmol·L后可见细胞内Ca荧光强度相对值明显上升,且一直持续6~9min;而预先加入APP17肽20 μmol·L,后再加入Aβ25μmol·L,则未见此变化.但加入Aβ25μmol·L后再加入APP17肽 20 μmol·L,不能使此变化消失.结论:APP17肽具有营养和保护神经元作用,可减轻Ab引起的神经元损伤,此作用可能是通过上调神经营养因子的表达和调节Ca稳态平衡完成的.

摘要： 目的:老年性痴呆(Alsheimer's Disease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,以老年斑和神经纤维缠结为主要病理特征,而老年斑以β-淀粉样肽(β-Amyloid,aβ)沉积为核心,目前认为Aβ神经元毒性定位于Aβ.Ab前体蛋白(b-amyloid protein precursor,APP)是一种具有受体样结构的跨膜糖蛋白,其中APP肽段即APP17肽(APP17-mer peptide),据国外文献报道及本室近近来研究表明,此肽具有促进神经元生长、增强动物学习、记忆功能和改善神经退行性变的作用.本研究目的在于通过观察APP17肽对Aβ引起人神经母细胞瘤株SY5Y毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明老年性痴呆的发病机制和临床治疗提供理论依据.方法:固相法合成APP17肽、Aβ,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ10μmol/L损伤组和Aβ10μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝(thiazoll bull,MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT-3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙子(Ca浓度为观察指标.结果:从接种第6d始,Ab组细胞数明显低于对照组,而APP17肽加Ab组细胞数高于Ab组,两组相比P组LDH漏出率高于对照组,而Ab加APP17加Ab组明显低于Ab组,两组相比P组轴突长度和胞体面积明显小于对照组,而APP17肽加Ab明显大于Ab组.NT-3免疫细胞化学染色结果显示:对照染色强度为0.6104±0.05,9Ab组为0.5372±0.089,两者相比P组染色浅,NT-3表达量少.而APP17EDY LK Ab组染色强度与对照组相似,为0.6226±0.047,明显高于Ab组,两者相比P 浓度测定结果 负载荧光探针的细胞培养液中加入Aβ25μmol·L后可见细胞内Ca荧光强度相对值明显上升,且一直持续6~9min;而预先加入APP17肽20 μmol·L,后再加入Aβ25μmol·L,则未见此变化.但加入Aβ25μmol·L后再加入APP17肽 20 μmol·L,不能使此变化消失.结论:APP17肽具有营养和保护神经元作用,可减轻Ab引起的神经元损伤,此作用可能是通过上调神经营养因子的表达和调节Ca稳态平衡完成的.