一种双精氨酸途径蛋白质分泌载体的构建方法及其应用

摘要

本发明涉及一种双精氨酸途径蛋白质分泌载体的构建方法及其应用。本发明采用来源于枯草芽孢杆菌的Tat途径信号肽构建了可分泌表达细胞内已折叠蛋白质或非分泌蛋白质的载体pMKSig和pMASig，并以来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热-半乳糖苷酶作为一个目标蛋白质实例来尝试所构建分泌载体的可使用性。对使用这两个载体实现的耐热-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的分泌进行了细胞内外酶活力的对比检测，并通过变性聚丙烯酰胺蛋白质电泳显示出分泌表达的蛋白质条带。本发明有效解决了细胞内已折叠(不可分泌)蛋白质在枯草芽孢杆菌中的分泌，该技术可以推广到其它不可分泌蛋白质的分泌表达中，因而具有良好的应用前景。