在大肠杆菌构建5-氨基乙酰丙酸C4生物合成途径的基因及其构建方法

摘要

本发明公开了在大肠杆菌构建5-氨基乙酰丙酸C4生物合成途径的基因及其构建方法，通过分析5-氨基乙酰丙酸C4生物合成途径的限速步骤、中间体供给及产物分泌等问题，克隆Rhodobacter？sphaeroides来源的ALA合成酶基因（hemA）、Propionibacterium？shermanil来源的辅酶A转移酶基因（Cat）以及Escherichia？coli来源的ALA分泌基因（YBi），借助pETDuet-1共表达载体，共表达了合成5-氨基乙酰丙酸的hemA、生成5-氨基乙酰丙酸合成的中间体琥珀酸COA的Cat和促进5-氨基乙酰丙酸的分泌的Ybi，三个基因的共表达加强了5-氨基乙酰丙酸的生物合成，通过本发明所制备的具有C4生物途径的基因，提高了Escherichia？coli的5-氨基乙酰丙酸产量，分泌到细胞外的ALA达到1124？mg/L。