I1咪唑啉受体的拮抗剂在解除α2-肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用中的应用

摘要

本发明提供I1咪唑啉受体的拮抗剂在制备用于解除由α2‑肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用的解毒剂方面的应用以及一种麻醉‑唤醒药剂盒，其包括介导麻醉作用的α2‑肾上腺素受体激动剂和解除麻醉作用的I1咪唑啉受体的拮抗剂。本发明中的I1咪唑啉受体的拮抗剂通过拮抗咪唑啉受体发挥麻醉解毒剂的作用，能够完全彻底、快速高效地解除α2‑肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用，具有较强的唤醒效果。

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，其涉及I1咪唑啉受体(I1R)的拮抗剂作为麻醉作用的解毒剂的应用，尤其涉及作为α2-肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用的解毒剂的应用。

背景技术

右美托咪啶(DEX)是一种选择性中枢α2-肾上腺素受体激动剂，经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于重症监护和医疗急救镇静、麻醉镇痛的用药。在中国，右美托咪定已于2009年6月获国家食品药品监督管理局批示，应用于临床麻醉以及ICU的镇静。

临床上，在需要进行麻醉或镇静进行手术等操作之后需要及时将患者唤醒，那么就需要能够和右美托咪啶配合使用的有效的麻醉作用解毒剂。

发明内容

在本发明的第一方面，本文提供I1咪唑啉受体的拮抗剂在制备用于解除由α2-肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用的解毒剂方面的应用，其中，在使用α2-肾上腺素受体激动剂进行麻醉并进入麻醉持续状态之后，在需要进行唤醒时给药I1咪唑啉受体的拮抗剂，并且，所述I1咪唑啉受体的拮抗剂的给药剂量与所述α2-肾上腺素受体激动剂的给药剂量的比例为5:6至10:3，在所述I1咪唑啉受体的拮抗剂给药之后10分钟至50分钟解除α2-肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用。所述I1咪唑啉受体的拮抗剂可以是依法克生或其前药。所述α2-肾上腺素受体激动剂可以是右美托咪啶。

在本发明的第一方面的一些实施方式中，所述α2-肾上腺素受体激动剂和所述I1咪唑啉受体拮抗剂通过相同的给药方式或通过不同的给药方式进行给药。所述给药方式选自：口服给药、静脉注射给药、肌肉注射给药、腹膜内给药和腔内给药。例如，可以肌肉注射的方式给药右美托咪啶，在需要进行唤醒时静脉注射依法克生。

在本发明的第二方面，本文提供一种麻醉-唤醒药剂盒，其包括介导麻醉作用的α2-肾上腺素受体激动剂和解除麻醉作用的I1咪唑啉受体的拮抗剂；其中，所述I1咪唑啉受体的拮抗剂是依法克生或其前药，所述α2-肾上腺素受体激动剂是右美托咪啶。

在本发明的第二方面的一些实施方式中，所述药剂盒还包括药学上可接受的稀释剂，其选自：生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖溶液和无菌无热原水。

在本发明的第二方面的一些实施方式中，所述麻醉用药剂盒还包括说明了α2-肾上腺素受体激动剂和I1咪唑啉受体的拮抗剂的给药方式和给药剂量的使用说明书。例如，所述说明书说明以肌肉注射的方式向需要进行麻醉的受治者给药α2-肾上腺素受体激动剂，并且在受治者进入麻醉持续状态之后，在需要唤醒时(例如，麻醉持续了40分钟之后)通过静脉注射的方式给药I1咪唑啉受体的拮抗剂进行唤醒，所述I1咪唑啉受体的拮抗剂的给药剂量与所述α2-肾上腺素受体激动剂的给药剂量的比例为5:6至10:3。例如，所述说明书说明以肌肉注射的方式向需要进行麻醉的受治者给药α2-肾上腺素受体激动剂，并且在受治者进入麻醉持续状态之后，在需要唤醒时(例如，麻醉持续了40分钟之后)通过肌肉注射的方式给药I1咪唑啉受体的拮抗剂进行唤醒，所述I1咪唑啉受体的拮抗剂的给药剂量与所述α2-肾上腺素受体激动剂的给药剂量的比例为10:3。在使用该唤醒-麻醉药剂盒时，在给药I1咪唑啉受体的拮抗剂进行唤醒时，通常给药之后10分钟至20分钟解除α2-肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用。

附图说明

图1A显示了在I1咪唑啉受体敲除的小鼠和野生小鼠接受右美托咪啶进入麻醉状态之后10分钟，通过静脉注射0.5mg/kg依法克生对小鼠进行唤醒(即，解除麻醉作用)所观测并记录的小鼠的自发活动距离。

图1B显示了I1咪唑啉受体敲除的小鼠和野生小鼠自发活动距离减少的比率。

图2A显示了未给药的对照组、给药组和给药阿替美唑的阳性对照组的唤醒时间。

图2B显示了未给药的对照组、给药组和给药阿替美唑的阳性对照组在唤醒之后的自发活动距离。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，以下将结合具体实施例对本发明涉及的各个方面进行详细说明，但这些具体实施例仅用于举例说明本发明，并不对本发明的保护范围和实质内容构成任何限定。

在本发明的实施例中，使用依法克生作为咪唑啉受体拮抗剂的示例性实例，使用右美托咪啶作为介导麻醉作用的药物的示例性实例，观察被右美托咪啶进行麻醉后的小鼠接受了依法克生给药进行唤醒之后的自发活动来证实咪唑啉受体的拮抗剂在作为麻醉作用的解毒剂方面的应用。

本发明中的“唤醒时间”是指：解除麻醉作用所需的时间，例如，在不使用咪唑啉受体的拮抗剂，仅单独使用麻醉剂的情况下，唤醒时间是指麻醉剂的麻醉作用在受治者体内自然代谢之后恢复正常活动所需的时间，即解除麻醉作用所需的时间。例如，在联合使用麻醉药物和咪唑啉受体拮抗剂的情况下，唤醒时间是指在使用麻醉药物使受治者进入麻醉持续状态之后再给药咪唑啉受体拮抗剂之后受治者恢复正常活动所需的时间。

1.实验动物：

1.1：C57小鼠，SPF级，雄性，初始体重18～22g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016～0002。饲养环境(温度：22±2℃，湿度(40±20)％，12小时明暗循环(日光灯照明8:00～20:00)，自由摄食和饮水，使用生长维持颗粒饲料喂养。

1.2：I1咪唑林受体(咪唑啉受体)敲除小鼠，其是以C57BL/6J小鼠为背景，采用基因打靶技术所获得的纯合子小鼠。动物饲养于环境温度为22±2℃、湿度为(40±20)％的SPF级动物房，并保证12小时的昼夜节律和自由进食进水。

所有实验均选用年龄约8～12个月的小鼠，体重约为20～40g。实验方案均通过中国人民解放军军事科学院军事医学研究院实验动物伦理委员会的批准。

上述I1咪唑林受体敲除小鼠和同窝对照的野生小鼠由中国人民解放军军事科学院军事医学研究院构建并繁殖提供。

2.实验试剂：

右美托咪啶，购自山东博洛德生物科技有限公司，使用时用生理盐水稀释成所需浓度；依法克生购自abcam(abcam，美国)，使用时用生理盐水稀释成所需浓度；阿替美唑(Atipamezole，ATI)购自浙江海正药业股份有限公司。

3.实验用仪器：

自发活动箱：安来软件科技有限公司(宁波)；LOC-V01自发活动视频轨迹分析仪器：安来软件科技有限公司(宁波)。

4.实验方法：

自发活动实验：进行正式实验前，所有实验小鼠需要提前两天适应自发活动箱的环境。将小鼠置于活动箱中使其自由活动15min，记录运动时间和运动轨迹。在正式实验中，小鼠给药后记录15min，实验时间在早上9点-13点进行。

5.数据统计分析方法：

小鼠的自发活动运动距离以Mean±S.E.M表示，用GraphPad Prism 6.0软件进行统计分析，多组间的自发活动运动距离的比较采用单因素方差分析结合Bonferroni事后检验。P<0.05表示有统计学差异。

使用一组I1咪唑啉受体敲除的小鼠(KO)和一组野生对照小鼠(WT)(每组9只小鼠)。每只小鼠通过肌肉注射给药150μg/kg右美托咪啶进行麻醉，在小鼠进入麻醉状态之后10分钟，通过静脉注射0.5mg/kg依法克生对小鼠进行唤醒(即，解除麻醉作用)，并观测小鼠的自发活动，记录活动距离。如图1A所示，野生对照小鼠组的自发活动距离远远大于I1咪唑啉受体敲除的小鼠组，这说明依法克生通过拮抗咪唑啉受体发挥麻醉解毒剂的作用，并且依法克生不仅仅解除了麻醉作用而且解除麻醉作用完全彻底，小鼠在唤醒之后能够立即恢复正常运动，具有较强的唤醒效果。

同时，通过如下公式计算了小鼠自发活动距离减少的比率：

自发活动距离减少比率＝(基础活动–给药依法克生解除麻醉之后的自发活动)/基础活动*100％

如图1B所示，I1咪唑啉受体敲除的小鼠组中自发活动距离减少的比率大于野生小鼠组，这也说明了依法克生通过拮抗咪唑啉受体发挥麻醉解毒剂的作用，并且使用依法克生能够完全彻底地解除麻醉作用，使小鼠能够立即恢复到正常的自发活动，具有较强的唤醒效果。

使用野生型小鼠，向每只小鼠均通过肌肉注射给药150μg/kg右美托咪啶进行麻醉，在小鼠进入麻醉状态之后10分钟，将小鼠分成如下5组(每组9只小鼠)：

a.对照组：未给药依法克生，记录其唤醒时间；

b.给药0.125mg/kg依法克生(EFA)组，通过静脉注射给药0.125mg/kg依法克生，记录其唤醒时间，并在唤醒后观测小鼠的自发活动，记录活动距离；

c.给药0.5mg/kg依法克生(EFA)组，通过静脉注射给药0.5mg/kg依法克生，记录其唤醒时间，并在唤醒后观测小鼠的自发活动，记录活动距离；

d.给药0.125mg/kg阿替美唑(ATI)的阳性对照组，通过静脉注射给药0.125mg/kg市售的作为α2肾上腺素受体特异性拮抗剂的阿替美唑，记录其唤醒时间，并在唤醒后观测小鼠的自发活动，记录活动距离；

e.给药0.5mg/kg阿替美唑(ATI)的阳性对照组，通过静脉注射给药0.5mg/kg市售的作为α2肾上腺素受体特异性拮抗剂的阿替美唑，记录其唤醒时间，并在唤醒后观测小鼠的自发活动，记录活动距离。

图2A显示了未给药的对照组、给药组和阳性对照组的唤醒时间。从图2A中可以看出，未给药的对照组，需要经过长达300分钟的时间才能解除麻醉作用，唤醒小鼠，而接受了0.125mg/kg和0.5mg/kg依法克生给药的给药组和阳性对照组仅仅需要几十分钟的时间就可以快速解除麻醉唤醒小鼠。由此可见，依法克生能够快速高效地解除右美托咪啶介导的麻醉作用，能够用作麻醉剂右美托咪啶的解毒剂，并且在唤醒时间方面，依法克生可与目前本领域已知的具有唤醒作用的阿替美唑相媲美。

图2B显示了不同剂量下给药组和阳性对照组小鼠在唤醒之后的自发活动距离。从图2B中可以看出，唤醒后的给药组的自发活动距离是剂量依赖性的，随着给药剂量的增加自发活动距离增加，这说明随着依法克生给药剂量的增加，不仅仅能够解除麻醉作用而且能够完全彻底地解除麻醉作用，使小鼠恢复正常运动。阳性对照组中的自发活动距离也是剂量依赖性的，并且随着给药剂量的增加自发活动距离增加，而且在给药相同的0.5mg/kg剂量的条件下，给药依法克生组的小鼠的自发活动距离高于阳性对照组，这说明在唤醒效果方面，依法克生优于目前本领域已知的具有唤醒作用的阿替美唑的唤醒效果。

通过上述实验可以看出，I1咪唑啉受体的拮抗剂能够快速高效地解除右美托咪啶介导的麻醉作用，唤醒后立即恢复正常活动，具有较强的唤醒效果。I1咪唑啉受体的拮抗剂对α2-肾上腺素受体激动剂介导的麻醉作用的解除作用在临床上具有十分重要的应用价值，在受治者需要在麻醉状态下进行手术治疗之后，医护人员可以选择术后合适的时间通过给药I1咪唑啉受体的拮抗剂来解除麻醉作用，并及时观察唤醒后受治者的状态，而无需等待麻醉作用在体内自发代谢解除，这也在一定程度上能够减少麻醉状态时间过长可能产生的风险以及麻醉时间过长唤醒困难的风险。

以上结合具体实施方式对本发明进行了说明，这些具体实施方式仅仅是示例性的，不能以此限定本发明的保护范围，本领域技术人员在不脱离本发明实质的前提下可以进行各种修改、变化或替换。因此，根据本发明所作的各种等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。