一种拓宽基因工程酶pH作用范围的方法

摘要

一种拓宽基因工程酶pH作用范围的方法。从GenBank中下载不同pH值作用范围的酶基因A及酶基因B，并进行优化设计，获得在酵母中表达的优化基因。将优化酶基因A的上游5’及下游3’端分别插入XbaI/NdeI/KasI/SnaBI等酶切位点，将酶基因B的上游5’及下游3’端分别插入NsiI/NspI/KpnI/NotI等酶切位点后，分别构建酶基因A、B的克隆载体pUCm-A和pUCm-B。经酶切及测序后构建了融合表达中间载体pPIC9KpP-B，再经酶切及测序后构建融合表达载体pPIC9KpP-AB。将重组质粒线性化后，电击转化酵母宿主细胞。经MD和MM平板筛选及酶活性测定，获得融合酵母阳性菌株。