改良PCR法を用いた健常成人の肺炎球菌保菌検出と莢膜型同定

摘要

健常者の肺炎球菌保菌調査はこれまで咽頭培養によつて行われてきた.しかし健常者に少数保菌されている肺炎球菌を，alpha溶血を示す多数の常在口腔レンサ球菌の中から検出するのは容易ではなく，保菌頻度が低 く見積もられる恐れがある.近年PCRによる肺炎球菌検出法が報告されているので，我々は健常者咽頭ぬ ぐい液の混合増菌培養液からPCRによって肺炎球菌を検出し，さらに莢膜型を決定する改良法を検討した. 2011?2013年に名古屋市内の40歳以上の健常者110名から咽頭ぬぐい液を採取し，混合増菌培養液から DNAを抽出してPCRにより肺炎球菌特異的遺伝子lytAを検出した.さらにlytA陽性混合培養液からPCR により，23価ワクチンに含まれる莢膜型遺伝子を個別に検出した.その結果110名中36名（32.7%)がlytA 陽性で，肺炎球菌を咽頭に保菌していると考えられた.この結果は従来の培養法による健常者保菌報告と比 ベて高かった.したがってPCR検出法は健常者の肺炎球菌保菌をより高感度に検出すると思われる.さら に，36名のlytA陽性混合培養液から28名の23価莢膜型菌保有者をPCRで決定することができた.検出 された莢膜型の頻度は14型が最も多く，次いで4，18C, 6A/B,の順だった.1，5，10A型菌はそれぞれ 少数検出された.なお，lytA陽性者36名の中でPPV23を接種していたのは5名であり，そのうち4名が 保菌する菌がPPV23に含まれていた.本研究により，PCRによる莢膜型同定は，型血清による莢膜型決定 法が不可能な混合培養菌液でも可能であり，検出感度も良く，再現性に優れていることが明らかとなった.