摘要：目的:建立胃食管反流源性哮喘的大鼠模型,研究胃食管反流源性哮喘大鼠呼吸道的炎症变化和可能机制.方法:将60只SD大鼠随机分为6组,分别为单纯胃食管反流组(A组,10只)、胃食管反流食管滴酸组(B组,10只)、胃食管反流食管滴蒸馏水组(C组,10只)、食管滴酸组(D组,10只)、过敏性哮喘组(E组,10只)和正常对照组(F组,10只).以幽门丰结扎+贲门括约肌切断的手术方法制备A组；幽门半结扎+贲门括约肌离新手术后14d,经食管pH监测12h确定存在病理性酸反流后,给予食管下段连续滴酸14d,每次20min制备B组；幽门丰结扎+天门括约肌离断手术后14d,经食管pH监测12h确定存在病理性酸反流后,给予食管下段持续滴蒸馏水14d,每次20min制备C组;D组为健康SD大鼠,经食管下段持续滴酸14d,每次20min制备；E组为卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)经腹腔、皮下注射致敏,雾化吸入OVA连续激发14d,每次20min制备,F组大鼠不作任何处理.分别测定各组大鼠气道呼气相阻力(expiratory resistance,Re)；收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行pH值测定、炎症细胞计数和细胞因子检测；留取气管进行组织中神经肤检测；留取食管、支气管和肺组织分别进行切片、组织学观察.结果:B组和D组在食管酸滴注过程中出现呼吸急促、惊叫、大小便失禁和口唇紫绀,并于滴注结束后10min左右恢复正常；E组在OVA激发过程中出现呼吸急促、惊叫、大小便失禁,并于激发结束后5min左右恢复正常.B组和D组Re较对照组明显增高,差异有显著性(P＜0.05),BALF中炎性细胞以淋巴细胞浸润为主,BALF中白介素4(lnterleukin-4,IL-4)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白介素-8(Interleukin-8,IL-8)的表达水平较对照组明显升高,气管内P物质(substance P,SP)的表达水平较对照组明显升高、B组和F组、D组和F组之间均有显著性差异(p＜0.05),Re 、IL-4、IL-6、IL-8和SP在B组和D组之间比较无显著性差异(p＜0.05).病理变化表现为食管鳞状上皮、支气管纤毛柱状上皮和肺泡上皮增生,肺泡间隔增宽,间质纤维组织增生,毛细血管扩张、充血,血管周围淋巴细胞浸润为主,部分切片可见肺实变和淋巴滤泡生成；A组及C组Re,BALF中IL-4、白介素-5(Interleukin-5,IL-5)、IL-6和IL-8以及气管内SP的表达水平与对照组相比,差异无显著性,但A组和C组中各有2只大鼠Re明显升高,与其肺组织炎症改变相一致,其余8只大鼠肺组织未见明显异常；E组Re较对照组明显升高,BALF中炎性细胞以嗜酸性粒细胞浸润为主,BALF中IL-4、IL-5、IL-6和IL-8以及气管内SP的表达水平较对照组明显升高,差异有显著性(p＜0.05),IL-4、IL-6、IL-8和SP的表达水平与B组和D组无显著差别(p＜0.05),病理变化表现为食管鳞状上皮、支气管纤毛柱状上皮和肺泡上皮增生,肺泡间隔增宽,间质纤维组织增生,毛细血管扩张、充血,血管周围嗜酸性粒细胞浸润为主.各组BALF的pH值和胃蛋白酶的含量无显著性差异.结论:1、在各组反流动物模型中,食管pH监测结果与对照组比较具有显著差异,术前与术后比较亦有显著性差异,食管病理结果也证实有炎症改变；B组和D组在酸反流的基础上肺组织出现炎症改变,其Re与对照组比较具有显著差异,表明本研究中酸反流动物模型和反流源性哮喘模型制备具有科学实用及可行性.2、胃食管反流造成大鼠食管、支气管的黏膜和肺组织的损伤,其中支气管黏膜和肺组织损伤的原理可能是迷走神经反射介导的神经源性炎症.3、反流机制未被证实可能与模型制备时间较短,反流机制未发生,或是气道微吸入时只有极微量进入气道,目前的手段无法检测到,或是胃蛋白酶进入气道后变性失活无法检测有关.4、胃食管反流造成的大鼠支气管黏膜和肺组织的损伤与变态反应造成的损伤在炎性细胞和细胞因子上有区别,胃食管反流源性哮喘大鼠气道炎症细胞以淋巴细胞浸润为主,IL-4、IL-6、IL-8和SP均明显升高,过敏性哮喘大鼠气道炎症细胞以嗜酸性粒细胞浸润为主,IL-4、IL-5、IL-6、IL-8和SP均明显升高,炎性细胞的种类和IL-5表达的水平可能成为鉴别两者的要点.
