IP-10重组腺病毒载体的构建及其病毒制备

摘要

目的 利用细菌内同源重组法构建带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)重组腺病毒载体并制备重组腺病毒.方法 将IP-10编码序列克隆入带有EGFP示踪的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移载体pAdTrack-CMV/IP-10,将其在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd/IP-10;酶切鉴定正确后转染HEK293细胞.收集病毒上清,PCR鉴定正确后,扩增并再次感染HEK293细胞检测病毒感染能力.结果 重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在HEK293细胞中包装成有感染活性的病毒颗粒.结论 成功地构建了表达IP-10蛋白的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒Ad/IP-10,为研究IP-10的蛋白功能提供了一个重要工具.