高效荧光定量PCR探针的筛选及HBV-DNA检测方法的建立

摘要

目的:筛选一套灵敏度高、特异性强的引物探针,用于建立检测HBV病毒载量的荧光定量PCR方法。方法:通过PCR方法扩增HBV基因组片段,与T载体连接,制备工作标准品,并运用设计的荧光定量PCR对HBV DNA国家标准品进行检测。结果:以pMD18-T-HBc作为标准品,HBcF和HBcR为上下游引物,HBcP为探针所建立的荧光定量PCR检测HBV病毒载量方法的线性范围为109copies/mL到103copies/mL,批内重复性变异系数为0.20%～1.44%,批间重复性变异系数为3.08%～5.63%,检测国家阴阳性标准品的特异性灵敏度为100%,国家线性标准品的检测值与理论值的线性相关系数R为0.998。结论:成功筛选出一套荧光定量PCR检测HBV DNA的引物探针,并已建立了一种特异性灵敏性均非常高的荧光定量PCR检测HBV DNA的方法。